正相色谱柱的使用
OD-H色谱柱使用注意事项
Q：正相手性色谱柱使用前需要注意什么?A：将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
Q：正相手性色谱柱中保存液是什么?A：正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
Q：新柱CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与原来的大赛璐手性柱有什么区别？A：CHRALPAK IA和CHRALPAK IB是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA和CHRALPAK IB柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA和CHRALPAK IB上得以分开。
Q：CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H四款正相色谱柱的区别是什么？A：区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯；CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。
色谱柱使用手册
正相、反相和极性胶联柱使用手册分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者：LAI | 评论：0 | 阅读：146正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意:此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
正相色谱柱的使用
0.10 mL 0.06 mL 0.03 mL
平衡时间 流速
1.0 mL/min
5 min 3 min 1.5 min 15 min 平2衡5m时i间n 流速 0.2 mL/min5 min 3 min 1.来自 min1.0mL/min
60 sec 36 sec 18 sec
单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 ÷ 流•. 速
•.
附录：色谱柱柱内体积和平衡时间
色谱柱 尺寸 (mm)
4.6 x 50 4.6 x 30 4.6 x 15 4.6 x 150 4色.6谱x柱250 尺寸 (mm)
2.1 x 50 2.1 x 30 2.1 x 15
柱内 体积 (Vm)
0.5 m 0.3 mL 0.15 mL 1.54 mL 2柱.5内7 mL 体积 (Vm)
分离模式的选择
分子量<2000 样品
溶于有机溶剂 溶于水
溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水
溶于四氢呋喃
非离子化
离子化
分子量>2000
溶于有机溶剂 溶于水
•.
用硅胶的正相模式 用键合相的正相模式
用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式
抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式
一些厂家就用纯甲醇封柱。
2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mL·min-1；先 流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先 用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。
•.
氨基柱柱效检测
流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速：1.0mL·min-1 标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯 检测波长：254nm 参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱 柱
正相色谱柱的使用
正相色谱柱的使用首先，正相色谱柱的使用要根据样品性质来选择合适的柱型和填料。
常用的填料有C18、C8等，它们基本为非极性填料。
对于极性物质的分离，可以选择相应的极性色谱柱，如氨基柱。
其次，使用前需要对色谱柱进行开通。
开通的方式通常是用纯溶剂或样品溶液通过色谱柱，去除填料中的杂质和残留溶剂。
开通过程需要注意的是溶液流速不宜过大，以免发生柱堵塞或柱床破裂。
在进行色谱操作时，首先将样品溶液通过进样装置注入色谱柱，然后使用固定相流动相进行洗脱。
流动相的选择要根据样品性质来确定，一般采用有机溶剂与水的混合溶液。
需要注意的是，流动相的组成要提前优化，以获得最佳的分离效果。
在色谱柱操作过程中，需要控制流速和压力，避免流速过快或压力过高造成柱床破裂。
同时，还需注意保持恒定的温度，避免温度变化导致分离效果的不稳定。
在柱床渗透性变差时，需要及时进行柱床再生。
常用的再生方法有反冲洗法和溶剂再生法。
反冲洗法是将一定量的洗脱溶液按反向通入色谱柱，去除堆积在柱床中的杂质。
溶剂再生法是将无机溶剂或有机溶剂按一定比例混合，在一定流速下通过柱床，将堆积在柱床中的杂质溶解出来。
使用结束后，需要对色谱柱进行保存和维护。
首先应用纯溶剂将色谱柱洗净，去除残留样品和溶剂。
然后将色谱柱用纯溶剂封存，防止填料干燥或被污染。
在下次使用前，需要将色谱柱再次开通，确保柱床的洁净程度。
总结起来，正相色谱柱的使用需要根据样品性质选择合适的柱型和填料，并进行适当的开通。
在色谱操作过程中，需要控制流速、压力和温度，以获得最佳分离效果。
柱床渗透性变差时需要进行柱床再生，使用结束后要进行适当的保存和维护。
通过正确的使用方法和注意事项，正相色谱柱能够有效地帮助实验人员进行样品的分离和纯化。
色谱柱的使用说明
1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
正相色谱柱的使用方法
正相色谱柱的使用方法正相色谱柱是化学分析领域中常用的分离技术之一，常用于化学试剂、生化制剂、化妆品等领域的研究工作中。
正因为其分离效果好、分离速度快、易于操作等特点，所以被广泛应用于科研、生产以及质量控制等方面。
在正相色谱柱的使用方面，有以下注意事项和使用方法。
注意事项选择柱子的密度首先，在购买正相色谱柱的时候，应该注意柱子的密度，密度高的柱子用于分离效果好的样品，密度低的柱子用于分离效果较差的样品。
同时，需要根据待分离的样品选择柱子的尺寸，以确保样品能完全覆盖柱子，从而获得更好的分离效果。
洗涤和保护正相色谱柱在使用之前和之后需要进行洗涤和保护工作，以保证柱子的稳定性和使用寿命。
洗涤方法基本都是相同的，主要采用纯水、乙醇、乙醚等有机溶剂进行清洗，在保证安全的情况下可以适当增加清洗强度，如采用强酸和强碱进行清洗。
在使用过程中，应该尽量避免高温和酸碱性物质的接触，这样可以有效地延长柱子的使用寿命。
储存方法正相色谱柱在存储过程中需要注意防潮、防晒，同时避免跌落和挤压等情况的发生。
储存的环境应该稳定，通风良好，温度在4-30℃之间，相对湿度不超过60%。
使用方法样品制备在使用正相色谱柱进行分离操作之前，需要对待分离的样品进行制备。
首先应该将样品溶解于合适的溶剂中，然后进行过滤和净化工作，以保证样品的纯度和稳定性。
实验条件设置在对样品进行分离的过程中，需要根据不同的实验目的和样品特性，分别设计不同的实验条件。
这些条件包括上样量、流速、温度、溶剂性质和比例等方面。
柱色调节在正相色谱柱使用的过程中，柱色的调节也是非常重要的一环。
根据柱子的类型和实验需要，可以通过调整柱子的机械位置或者采用外接装置，对流速、温度和压力等进行控制和调整。
数据分析在实验完成之后，需要对得到的数据进行分析和处理，评价分离的效果和柱子的稳定性。
数据处理方面需要恰当地选择评价指标和数据处理方法，以减少实验误差，提高分析的准确性和可靠性。
总结正相色谱柱在使用前和使用后需要进行洗涤和保护工作，在存储过程中需要注意防潮、防晒，同时避免跌落和挤压等情况的发生。
大赛璐手性柱AD-H、OD-H操作常见问题及解决办法
大赛璐手性柱AD-H 、OD-H 操作常见问题及解决办法1. 正相手性色谱柱AD-H 、OD-H 使用前需要注意什么?将正相手性色谱柱AD-H 、AS-H 、OD-H 、OJ-H 接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v) 。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路(包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等)，然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC 系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
2.正相手性色谱柱中保存液是什么?正相手性色谱柱AD-H 、AS-H 、OD-H 、OJ-H 中的保存液是正己烷/ 异丙醇=90/10(v/v) 。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
3■新柱CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 与原来的大赛璐手性柱有什么区别？CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 上得以分开。
4. CHIRALPAK AD-H 、CHIRALPAK AS-H 、CHIRALCEL OD-H 、CHIRALCEL OJ-H 四款正相色谱柱的区别是什么？区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H 、AS-H 的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H 、OJ-H 的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
大赛璐手性柱AD-H、OD-H操作常见问题及解决办法
大赛璐手性柱AD-H、OD-H操作常见问题及解决办法1.正相手性色谱柱AD-H、OD-H使用前需要注意什么?将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
2.正相手性色谱柱中保存液是什么?正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
3.新柱CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与原来的大赛璐手性柱有什么区别？CHRALPAK IA和CHRALPAK IB是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA和CHRALPAK IB柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA和CHRALPAK IB上得以分开。
4.CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H四款正相色谱柱的区别是什么？区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
正相手性色谱柱使用说明
正相手性色谱柱（AD-H.OD-H）使用说明警告：（1）将色谱柱接到色谱仪之前，必须先用合适的溶剂冲洗流路（包括流通阀和定量环）。
如之前是反相系统，先用水把系统中可能含有的盐冲洗干净，再用异丙醇以2ml/min冲洗1小时左右，再接色谱柱。
（四根管路同时冲洗）（2）有些溶剂（比如丙酮、氯仿、DMF、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF）会破坏手性固定相，应禁用。
（3）如果使用的是自动进样器，进样间隔的冲洗液也必须更换成合适的溶剂。
操作限制:对于150 x 4.6 mm ID，250 x 4.6 mm ID分析柱：（1）流动相方向：参照色谱柱标签上的箭头（2）典型流速：0.5~1.0 ml/min，不能超过 1.5 ml/min。
最大流速也和流动相粘度（流动相成分）有关，必须小心不能超过柱压上限。
（3）柱压范围：< 50 Bar (约700 psi)，最高不能超过100 Bar (约1400 psi)。
（4）温度范围：0~40°C色谱条件：（1）流动相组成流动相条件：正己烷/异丙醇=100/0-0/100(V/V)正己烷/乙醇=100/0-0/100(V/V)*流动相中异丙醇换成乙醇，样品的保留时间缩短。
*流动相中醇含量增加，样品的保留时间缩短。
（2）如果分离碱性或者酸性化合物，可能需要在流动相加入少量添加剂碱性样品需要添加碱性添加剂，一般为二乙胺，比例一般为0.1%酸性样品需要添加酸性添加剂，一般为三氟乙酸，比例一般为0.1%色谱柱保养及注意事项：（1）样品检测前需仔细询问送样人员样品中可能含有的溶剂，如果工艺中用到丙酮、氯仿、DMF、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF，则需尽量烘干。
样品尽量溶解在流动相中，并用0.45μm滤膜过滤。
不能使用强碱性物质作为流动相添加剂或者溶解样品，因为这样会损坏填料中的硅胶成分。
（2）如果系统中或者色谱柱中含较高浓度的异丙醇或者乙醇时，由于他们的粘度比较大，平衡色谱柱时需特别注意压力变化，可采用低流速平衡，当柱压下降后再逐渐升高至要求的流速。
正相色谱柱的使用方法
正相色谱柱的使用方法正相色谱柱是一种广泛应用于分析领域的色谱柱类型。
它适用于水溶性化合物的分离和分析。
正相色谱柱的使用方法可以分为样品准备、溶液制备、色谱仪参数设置和结果解读等几个方面。
下面详细介绍正相色谱柱的使用方法。
一、样品准备1.确定分析目标：先确定要分析的目标化合物是何种成分，确定目标有助于选择合适的正相色谱柱。
2.样品制备：将要分析的样品溶解在适当的溶剂中，以获得合适浓度的样品溶液。
如果样品有固体颗粒，则需通过过滤或离心等方法去除杂质。
二、溶液制备1.选择合适的溶剂：根据样品的性质和分析目标，选择合适的溶剂。
一般来说，正相色谱柱适用于水溶性化合物的分析，常用的溶剂包括水、甲醇、乙醇等。
2.溶液pH调节：如果需要分析酸、碱性物质，则可以通过加入酸或碱溶液调节溶液的pH值。
注意要避免溶液的pH值过高或过低，以免对色谱柱产生损害。
3.溶液浓度调节：根据样品的浓度和分析目标的要求，适当调节溶液的浓度。
在实验中，可以通过稀释样品或者加入溶剂来调节溶液的浓度。
三、色谱仪参数设置1.选择合适的色谱柱：根据分析目标和样品特性，选择合适的正相色谱柱。
一般来说，正相色谱柱的主要特点是对极性物质有较好的分离能力。
2.设定流速：根据分析目标和样品性质，选择合适的流速。
流速的选择要兼顾分离效果和分离时间。
3.设定检测器波长：根据目标化合物的特征吸收波长，设定合适的检测器波长。
4.设置进样量：根据样品浓度和分析目标要求，设置合适的进样量。
进样量过大会影响分离效果，进样量过小则可能导致信号弱。
四、样品进样和数据采集1.样品进样：将样品溶液注入进样口，并确保样品与色谱柱充分接触。
2.数据采集：打开色谱仪软件，设置采集参数，开始数据采集。
可以选择记录色谱图和峰面积，用于结果分析和定量计算。
五、结果解读1.色谱图分析：根据色谱图，观察各峰的形状、峰高、保留时间等信息，以判断分离效果和目标物质是否达到要求。
2.峰面积计算：根据峰面积，可以计算出目标物质的含量，通过比较不同样品的峰面积，可以进行定量分析。
常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程
目的：规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
范围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。
责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。
内容：1.定义1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。
常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。
2.液相色谱柱的使用及保养2.1普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
正相色谱柱和反相色谱柱的区别
正相色谱柱和反相色谱柱的区别
本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
以下是详细说明：
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
正相柱还是反相柱
正相柱反相柱的使用特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，翻开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。
此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。
此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。
如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱.假设固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱.在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相.正相色谱用的固定相通常为硅胶〔Silica〕以及其他具有极性官能团胺基团，如〔NH2，APS〕和氰基团〔，CPS〕的键合相填料。
这种填料做成的柱子就称为正相柱.反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，外表键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18〔ODS〕、C8〔MOS〕、C4〔Butyl〕、C6H5〔Phenyl〕等.这种填料做成的柱子就称为反相柱.正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的比照。
假设固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。
通常为反相柱应用较多。
所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。
现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。
正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于别离强极性物质。
反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于别离弱极性物质。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶〔Silica〕以及其他具有极性官能团胺基团，如〔NH2，APS〕和氰基团〔，CPS〕的键合相填料。
Spherisorb色谱柱维护和使用手册说明书
目录Ⅰ 入门指南 A. 色谱柱的安装1.反相色谱柱2.正相色谱柱B ．色谱柱的平衡1.反相色谱柱2.正相色谱柱C ．测试色谱柱的柱效 Ⅱ 色谱柱的使用A.保护柱B.样品前处理C.PH 使用范围D.溶剂E.压力F.温度Ⅲ 扩大/缩小等度的方法 Ⅳ 故障排除Ⅴ 色谱柱的清洗再生和保存 A. 清洗和再生1.反相色谱柱2.正相色谱柱B. 保存1.反相色谱柱2.正相色谱柱Ⅵ 将色谱柱连接到HPLC 系统1.色谱柱的连接和系统管的选择2.谱带扩展最小化3.测量系统的谱带扩展体积和系统偏差4.测量系统体积Ⅶ 其他信息 A. 使用窄径柱 . MM 内径 B. 系统谱带扩展对 . MM 内径色谱柱的影响 C. 非优化与优化LC/MS/MS 系统对比： 系统配置更改建议 D. 保护柱和柱组件Spherisorb 色谱柱非常感谢您选择Spherisorb 色谱柱。
Spherisorb 分析柱耐用、柱效高，出现在数千篇色谱参考文献中。
色谱柱长度和直径范围广，在优化方法和减少溶剂消耗方面为您提供了极大的灵活性。
按照本手册中的指导，从您的分析色谱柱和保护柱中获得最佳性能、再现性和耐用性。
Silica 球形3,5 and 10802200.50n/a n/a ODS2(C 18)-完全封端球形3,5 and 10802200.5011.5是ODS1(C 18)-部分封端球形3,5 and 10802200.50 6.2否ODSB(C 18)球形5802200.5011.5是*C 8球形3,5 and 10802200.50 5.8是C 6球形3,5 and 10802200.50 4.7是C 1球形3,5 and 10802200.50 2.2否Nitrile(CN)球形3,5 and 10802200.50 3.1否Amion(NH 2)球形3,5 and 10802200.50 1.9否Phenyl 球形3,5 and 10802200.50 2.5否OD/CN 球形5802200.50 5.0是SAX 球形3,5 and 10802200.50 4.0否SCX球形3,5 and 10802200.504.0否表1. Spherisorb 色谱柱物理特性。
常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程
目的：规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
范围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。
责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。
内容：1.定义液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。
常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。
2.液相色谱柱的使用及保养普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
色谱柱的安装,设置,老化和维护
色谱柱的安装,设置,老化和维护液相色谱柱的使用方法：1、色谱柱的使用说明：（1）、色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）、流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）、样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）、反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）、长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
正相手性色谱柱常见问题
Q：正相手性色谱柱使用前需要注意什么?A：将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
Q：正相手性色谱柱中保存液是什么?A：正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
Q：新柱CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与原来的大赛璐手性柱有什么区别？A：CHRALPAK IA和CHRALPAK IB是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA和CHRALPAK IB柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA和CHRALPAK IB上得以分开。
CHIRALPAK®IA是将淀粉-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µm），相应的涂敷型色谱柱是CHIRALPAK®ADCHIRALPAK®AD-H）；CHIRALPAK®IB是将纤维素-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）, 相应的涂敷型色谱柱是CHIRALCEL®OD （CHIRALCEL®OD-H）；CHIRALPAK®IC将纤维素-3,5-二氯苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）（注意：相应的涂敷型色谱柱没有商品化）。
正相手性色谱柱使用说明
正相手性色谱柱使用说明正相色谱柱是一种用于分离和分析非极性化合物的色谱柱。
正相色谱柱通常由具有非极性性质的填料和极性固定相组成。
这种色谱柱可以用于分离各种化合物，例如有机物、药物、天然产物和杂质等。
正相色谱柱的使用方法如下：1.准备工作：选择合适的正相色谱柱：可以根据目标化合物的性质和分离需求选择合适的色谱柱。
常见的正相柱填料包括C18、C8、C4等。
色谱柱的保养：在使用之前，检查色谱柱是否完好无损，并根据生产商提供的说明进行必要的保养和预处理。
样品的准备：样品应尽量纯净，不含杂质和杂质浓度较低。
如果样品不能直接溶于流动相中，则需进行溶解、稀释或提取等预处理操作。
流动相的准备：根据实验需求和目标化合物的性质，选择和配置合适的流动相。
常见的流动相可以是有机溶剂和水的混合物，其浓度可以根据目标化合物的亲水性来调整。
2.设置色谱仪的条件：流速和温度：根据样品的复杂程度和分析要求，选择合适的流速和温度。
检测波长：选择一个适当的检测波长，以确保目标化合物能够被检测到。
常见的检测波长为254 nm和280 nm。
注射体积：根据样品的浓度和分析要求，选择合适的注射体积。
3.进行样品分析：装载样品：使用合适的装载器将样品注入色谱柱中。
进行分离：样品在柱中通过时，根据化合物的亲水性和极性来调整流动相的浓度和比例，以实现目标化合物的分离。
数据记录和分析：通过色谱仪记录分离结果，并使用相应的数据分析软件对分离峰进行分析和解释。
4.色谱柱的保养：流动相的准备：每次使用前，应检查并准备新鲜的流动相，以确保色谱柱的稳定性和性能。
柱子的清洗：使用适当的溶剂对色谱柱进行清洗，以去除吸附在柱内的杂质和残留物。
柱子的保存：使用完毕后，将色谱柱用保护盖密封，并存放在干燥、避光和温度适宜的地方。
这是正相色谱柱的基本使用说明。
根据具体的实验需求和目标化合物的性质，可能需要做出一些适当的调整和优化。
在使用正相色谱柱进行实验时，必须遵守实验室的安全操作规程，并注意对实验材料的储存和处理，以确保实验的顺利进行和结果的准确性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
色谱柱的分类
按固定相 作用性质
分类
高效反相液相色谱柱 高效正相液相色谱柱 高效亲水液相色谱柱 高效离子交换液相色谱柱 InnovationTM高效多功能液相色谱柱 高效手性液相色谱柱 高效GPC凝胶液相色谱柱
高效Hilic液相色谱柱
.
色谱柱的rO2柱等
.
附录：色谱柱柱内体积和平衡时间
色谱柱 尺寸 (mm)
4.6 x 50 4.6 x 30 4.6 x 15 4.6 x 150 4色.6谱x柱250 尺寸 (mm)
2.1 x 50 2.1 x 30 2.1 x 15
柱内 体积 (Vm)
0.5 m 0.3 mL 0.15 mL 1.54 mL 2柱.5内7 mL 体积 (Vm)
0.10 mL 0.06 mL 0.03 mL
平衡时间 流速
1.0 mL/min
5 min 3 min 1.5 min 15 min 平2衡5m时i间n 流速 0.2 mL/min
5 min 3 min 1.5 min
1.0mL/min
60 sec 36 sec 18 sec
单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 ÷ 流. 速
抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式
用硅胶的正相模式 离子交换模式 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱
大孔填料的离子交换模式 用大孔填料的反相模式
正相色谱
正相吸附色谱
极性:固定相 > 流动相
固定相 - 极性 流动相(己烷, 庚烷)- 非极性 极性物质后出峰
.
正相色谱柱的特点
正相色谱比反相色谱柱压低 使用的溶剂容易旋蒸除去 吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有 机化合物在B型球形硅胶, Diol和PEG 正相液相色谱柱上的峰形。
.
色谱柱再生（除水再生）
诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归 因除于水方固案定：相用的含改2变.5，%但二是甲填氧料基可丙能烷还（是di完me好th的ox。yp这ro是pa因ne 为参）正数和相，2色.5大谱%部固冰分定醋溶相酸剂的的都水正内分己含含烷有量冲小常洗部常色分是谱的个柱溶影3解0响个水选柱分择体性，积的柱，关子可键在以 长去期除使色用谱后柱吸中附水的分水并分恢使复柱色效谱下柱降原，来此或时所应需除要水的使选柱择效性恢 复。
正相液相色谱柱的使用与维护
色谱柱分类 正相色谱柱活化
色谱柱冲洗与再生
.
分离模式的选择
分子量<2000 样品
溶于有机溶剂 溶于水
溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水
溶于四氢呋喃
非离子化
离子化
分子量>2000
溶于有机溶剂 溶于水
.
用硅胶的正相模式 用键合相的正相模式
用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式
.
氰基柱的使用
氰基柱作反相色谱，操作和维护和C18柱完全相同 ， 氰但基是柱与用氨于基正柱相一使样用，时反没相什使么用问时题-，NH当2与柱-子CN使会用水一解定。 时尤间其后，pH柱在效1.下5-7降.0，范老围化以，外这可种按极如端下酸清性洗或方碱法性恢条复件柱下 性柱能寿。命清会洗下时降依很次快用，10使倍用柱时体应积注的意下。列溶液冲洗：氯 仿、异丙醇、二氯甲烷再走流动相即可。
一些厂家就用纯甲醇封柱。
2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mL·min-1；先 流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先 用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。
.
氨基柱柱效检测
流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速：1.0mL·min-1 标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯 检测波长：254nm 参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱 柱
.
.
色谱柱的分类
按柱子尺 寸分类
毛细管柱 微柱 窄径柱 常规柱 半制备柱 制备柱
.
正相液相色谱柱
1、氨基柱 2、硅胶柱 3、氰基柱 4、Diol柱
正反相使 用均可
绝不可沾 水
.
正相色谱柱的活化
活化注意要点： 1、保存溶剂：一般正相新柱出厂是用95%的正己烷：5%乙
醇或纯异丙醇或正己烷保存； 例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱，
此方法同时适用氰 基柱、硅胶柱
.
氨基柱使用后冲洗
正相条件适用后： 首先50倍柱体积异丙醇（注意低流速） 其次50倍柱体积甲醇 最后异丙醇过渡到正相流动相条件
柱子长期不用的情况下，冲洗干净后用异丙醇或者 正己烷保存。
.
色谱柱再生
柱子使用一定时间后：柱效下降、老 化，可以用以下方法清洗柱子恢复柱 性能
方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷 、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以 0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动 相
.
色谱柱再生
方案2：清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲 洗：95％水/5％乙腈 THF四氢呋喃 95％乙腈/5 ％水 再走流动相即可
若反相使用后柱效下降再生冲洗方法同上过程，并保 持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min 过夜冲洗