蛋白质活性测定方法
蛋白酶活性的测定方法及原理
6
考X马-光斯胶亮片蓝法法
• 酶的底物明胶涂抹在X-光胶片上，当待测酶液 滴加到X-光胶片上时，酶将X-光胶片上的明胶 水解，用水冲洗胶片，即可看到胶片上明胶被 酶水解的地方，出现透明的圆圈。酶活性的高 低与透明圆圈的面积成正比。测定圆圈的面积 以测定蛋白酶的活性。。
④PH对酶活力的影响：酶在最适PH范围内表现出活性，大于或小于最适PH，都会降低酶活性。 ⑤激活剂对酶活力的影响：某些无机阳离子、阴离子、有机化合物可作为激活剂，能够激活酶，使其表现出催化活性或强化其催化活性。 ⑥抑制剂对酶活力的影响：酶的抑制剂能够减弱、抑制甚至破坏酶的活力，它可降低酶促反应速度。
标准曲线的绘制
L-酪氨酸标准溶液按下表配制
试管0
100μg/ml
酪氨溶液
O
（ ml ）
蒸馏水 （ ml ）
10
酪氨酸实际
浓度
ห้องสมุดไป่ตู้
O
（μg/ml ）
试管1 1 9 10
试管2 2 8 20
试管3 3 7 30
试管4 4 6 40
试管5 5 5 50
分别取上述溶液各1.00ml(须做平行试验)，各加入0.4mol/L碳酸钠溶液5.00ml。福林试剂使用溶 液1.00ml,置于40+0.2℃水浴中显色20min,取出用分光光度计于波长680nm,比色，以不含酪氨酸 的0管为空白管调零点，分别测定其吸光度值，以吸光度值为纵坐标，酪氨酸的浓度为横坐标， 绘制标准曲线或计算回归方程。计算出当OD为1时的酪氨酸的量（μg），即为吸光常数K值，其 K值应在95~100范围内。
蛋白酶活性的测定方法及原理
罗老师
组员
宁陈
陈王
舒丽
简述几种测定蛋白质方法及原理
简述几种测定蛋白质方法及原理蛋白质是生物体内最重要的分子之一，其功能多种多样，涉及到生命的方方面面。
了解蛋白质的性质、结构和功能非常重要。
为了实现这一目标，科学家们开发了多种方法来测定蛋白质的存在和浓度，以及研究其结构和功能。
在本文中，我们将简要介绍几种常见的测定蛋白质方法及其原理。
一、低丰度蛋白质检测方法在复杂样品中，许多蛋白质的浓度很低，因此需要采用高灵敏度的方法进行检测。
以下是两种常见的低丰度蛋白质检测方法。
1. Western blotting方法Western blotting方法是一种常用的蛋白质检测方法，通过将蛋白质转移到固体支持体上，然后使用特异性抗体来探测目标蛋白质的存在。
这个方法的原理是在电泳分离后，将蛋白质转移到聚丙烯腈膜或硝酸纤维素膜上。
样品经过特异性抗体结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗来使目标蛋白质可见。
2. 质谱法质谱法是一种利用质谱仪测定蛋白质质量的方法。
这种方法的原理是将蛋白质分解成肽段，然后通过质谱仪测定这些肽段的物质质量。
质谱法可以提供非常准确和高灵敏度的蛋白质测定结果，适用于分析复杂样本中的低丰度蛋白质。
二、蛋白质浓度测定方法蛋白质的浓度是研究蛋白质的基础，因此准确测定蛋白质浓度非常重要。
以下是两种常见的蛋白质浓度测定方法。
1. 比色法比色法是一种通过测量某种化学试剂与蛋白质之间的化学反应来测定蛋白质浓度的方法。
布拉德福德比色法使用染料染色蛋白质产生吸光度，再根据标准曲线定量测定蛋白质浓度。
这种方法简单、快速且灵敏度较高，适用于大多数蛋白质样品。
2. BCA法BCA法是一种利用受体配合反应来测定蛋白质浓度的方法。
在这种方法中，受体配体（biotin-avidin 或biotin-streptavidin）与蛋白质中的特定残基（如组氨酸等）结合生成复合物，然后通过比色反应测定复合物的吸光度。
BCA法具有高灵敏度和较低的非特异性反应。
三、蛋白质结构分析方法蛋白质的结构直接影响其功能和性质，因此了解蛋白质的结构是非常重要的。
蛋白质测定方法
蛋白质测定方法蛋白质是生物体内重要的有机物质，它们参与了生物体内的许多生命活动，对于研究蛋白质的结构和功能，以及蛋白质在生物体内的定量分析，蛋白质测定方法显得尤为重要。
本文将介绍几种常用的蛋白质测定方法，以供参考。
首先，最常用的蛋白质测定方法之一是比色法。
比色法是通过蛋白质与某些化学试剂反应后产生有色产物，再利用分光光度计测定其吸光度从而确定蛋白质的含量。
这种方法操作简单，灵敏度高，广泛应用于蛋白质的测定中。
其次，还有一种常用的蛋白质测定方法是BCA法。
BCA法是利用蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生还原反应生成紫色螯合物，然后利用分光光度计在562nm波长处测定其吸光度，从而确定蛋白质的含量。
与传统的Lowry法相比，BCA法对于一些干扰物质的敏感度更低，且操作更简便。
另外，还有一种常用的蛋白质测定方法是荧光法。
荧光法是利用蛋白质与荧光素染料结合后发生荧光信号来测定蛋白质的含量。
与比色法相比，荧光法对于一些有色干扰物的影响更小，灵敏度更高，可以用于测定含量较低的蛋白质样品。
此外，还有一种常用的蛋白质测定方法是Western blotting。
Western blotting是一种通过电泳分离蛋白质，然后转膜到膜上，再用特异性抗体结合蛋白质进行检测的方法。
这种方法可以用于确定蛋白质的相对分子质量和定量分析。
总的来说，蛋白质测定方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在选择合适的蛋白质测定方法时，需要根据实验的具体要求和条件来进行选择。
希望本文介绍的几种常用的蛋白质测定方法能够对您有所帮助。
蛋白质测定方法及原理
蛋白质测定方法及原理蛋白质是生物体内组成和调节生命活动的重要基质，因此对蛋白质浓度进行准确的测定具有重要意义。
目前常用的蛋白质测定方法主要有生物学法、光学法和化学方法等。
生物学法是一种常用的蛋白质测定方法，通过测定蛋白质与其他生物体成分之间的相互作用来间接推断蛋白质的浓度。
常见的生物学法包括胱氨酸法、比色法和酶标记法等。
胱氨酸法是一种通过测定蛋白质中胱氨酸的含量来推断蛋白质浓度的方法。
胱氨酸是蛋白质的主要成分之一，它的浓度与蛋白质的浓度呈正相关关系。
因此，可以通过测量胱氨酸的含量来推断蛋白质的浓度。
胱氨酸法的原理是将待测蛋白质与胱氨酸反应生成蛋白胱氨酸络合物，然后用氧化剂将络合物氧化为带有色度的化合物。
根据带色化合物的吸光度，可以推算蛋白质的浓度。
比色法是一种通过测量溶液中蛋白质与试剂之间的染色反应来推测蛋白质浓度的方法。
常见的比色试剂有布拉德福德试剂、联苯胺蓝试剂和阿氏试剂等。
比色试剂与蛋白质之间发生染色反应后，可以测量溶液的吸光度，并通过标准曲线法来推算蛋白质的浓度。
酶标记法是一种通过酶标记的反应来测定蛋白质浓度的方法。
其原理是将酶与蛋白质反应生成酶标记的复合物，然后用底物与酶反应，使酶催化底物生成可检测的产物。
通过测量产物的光吸光度或荧光强度，可以推断蛋白质的浓度。
光学法是一种通过测量蛋白质溶液对光的吸收或散射来推断蛋白质浓度的方法。
其中，紫外可见光吸收法是一种常用的光学法。
蛋白质溶液对特定波长的光具有吸收作用，且吸收作用与蛋白质浓度成正比。
因此，通过测量蛋白质溶液对光的吸收，可以推算蛋白质的浓度。
化学方法是一种通过化学反应来测定蛋白质浓度的方法。
常用的化学方法包括低里氏法、尿素硝酮反应法和近红外光谱法等。
这些方法通过测量蛋白质与特定试剂之间的化学反应产物的吸光度、荧光强度或反应物质的浓度，来推断蛋白质的浓度。
总之，蛋白质的测定方法多种多样，根据具体的实验要求和条件选择合适的方法是准确测定蛋白质浓度的关键。
蛋白质的测定
4、蛋白质分析的重要性
生物活性测定 功能性质调查 营养标签
总蛋白质含量 氨基酸组成 蛋白质的 Nhomakorabea养价值5、蛋白质的测定方法
利用蛋白质共性的方法 利用特定氨基酸残基法
凯氏定氮法 杜马斯法 福林酚法 染色法
第二节 蛋白质的定性测定
一、蛋白质的一般显色反应 电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并 变色。书中列举了 5 种染料。 二、复合蛋白质的显色反应 （一）糖蛋白的显色（3种方法） （二）脂蛋白的显色（2种方法）
A540
取两组测定的A540值的平均值，即A540为纵坐标，蛋 白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定
取4支试管分成两组，按下表平行操作：
0
1
样品稀释液/ml
0.5
蒸馏水/ml
1.0
0.5
双缩脲试剂/ml
4.0
4.0
A540
3、计算
取两组测定的平均值计算：
固体样品蛋白质的含量(%) Y N 100% c
有干扰
杜马斯
福林-酚
总氮量
蛋白氮
高温装置、GC 分光光度计
不需要
福林-酚试剂
3min 高
简单快速 高
较小
酸类及柠檬 酸类
其他方法
染色法 紫外 吸收法
水杨酸比色法
采用凯氏定氮法测一样品的粗蛋白含量，根据下 列记录的数据计算：
水份含量=8.0%，1 号样品重量=1.015g，2号样 品重量=1.025g，用于滴定的标准HCl浓度 =0.1142mol/L，1号样品所用的HCl溶液的毫升数 =22.0mL，2号样品的HCl溶液的毫升数=22.5mL， 空白的HCl溶液的毫升数=0.2mL，分别以样品的干 基和湿基计算粗蛋白质含量，假定该蛋白质含有 17.5%的氮。
蛋白质的测定方法有哪些
蛋白质的测定方法有哪些蛋白质测定是一个重要的生物化学实验，用于确定样品中蛋白质的含量和纯度。
目前常用的蛋白质测定方法主要有生物化学方法、光谱法、免疫学方法和质谱法等。
下面将详细介绍这些方法。
1. 生物化学方法：生物化学方法是一种常用的蛋白质测定方法，主要包括低里氏法、比色法和滴定法等。
低里氏法基于酵素反应测定蛋白质含量，其中最常用的是双维小麦胚芽过氧化物酶法。
比色法是通过染色剂和蛋白质的反应来测定蛋白质浓度，常用的比色剂有考马斯亮蓝G-250和布拉德福棕色R-250等。
滴定法是通过滴加蛋白质溶液的滴定剂，如硝酸银溶液和碘溶液等，来测定蛋白质的含量。
2. 光谱法：光谱法是利用蛋白质在特定波长下吸收光线的特性来测定蛋白质的含量和纯度。
UV-Vis吸收光谱法是最常用的光谱法之一，根据蛋白质在280 nm处吸收的特性来测定蛋白质浓度。
近红外光谱法也可以用于蛋白质浓度的测定，因为蛋白质的结构可以在近红外区域引起光的散射和吸收。
3. 免疫学方法：免疫学方法是利用抗体与特定蛋白质发生特异性反应来测定蛋白质的含量和纯度。
常用的免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫印迹法（Western blotting）和免疫沉淀法等。
ELISA是一种高灵敏度的蛋白质测定方法，通过抗原与特异性抗体在单克隆板上的特异性结合来测定蛋白质的含量。
Western blotting是一种常用于检测特定蛋白质的方法，通过电泳分离蛋白质，然后用特异性抗体检测目标蛋白质。
免疫沉淀法利用特异性抗体与目标蛋白质结合，然后通过共沉淀或差速离心的方式将目标蛋白质从混合物中分离出来。
4. 质谱法：质谱法是一种高分辨率的蛋白质测定方法，主要有质谱光查法（MS）和质谱对比法（MS/MS）两种。
质谱光查法通过蛋白质在质谱仪中的分子离子质量和电荷比来确定蛋白质的分子量和浓度。
质谱对比法则是将待测蛋白质与已知质量的蛋白质进行比较，从而确定样品中蛋白质的含量和纯度。
实验设计：卵清蛋白
实验注意事项
1 2 3
蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉，分离效果不好。 • 蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率较低。一 般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。
蛋白质提取过程中须注意温度的控制，一般在20℃ 以下进行
调节等电点一定要准确，在本实验中，球蛋白和卵 清蛋白的等电点相差较小，若不准确，会导致蛋白 质不纯。
9 提取液
1.0 3.0
0 4.0 0
0.5 3.5 0.125
1.0 3.0 0.25
1.5 2.5 0.375
2.0 2.0 0.50
2.5 1.5 0.625
3.0 1.0 0.75
4.0 0 1.0
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质 溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测 蛋白质的浓度。 排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的 吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下 测得的光吸收值）
.
弃上清液
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法 （1）标准曲线的绘制 按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各 管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂 标准蛋白溶液 /mL 蒸馏水/mL 蛋白质浓度 /mg/mL A280 1 2 3 4 5 6 7 8
蛋白定量的方法
蛋白定量的方法
蛋白定量是指检测样本中蛋白质含量的一种方法，也可以称为“蛋白测定”或“蛋白质测定”。
蛋白定量方法主要分为生物化学法、免疫分析法、流式细胞仪分析法和电泳分析法四大类。
1、生物化学法：生物化学法是目前最常用的蛋白定量方法，主要通过测定蛋白质的酶促反应来实现，如可用葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等蛋白质的特异酶作为指标，测量不同样本中的酶活性差异来实现蛋白定量。
2、免疫分析法：免疫分析法主要分为免疫印迹法（Western blotting）、免疫沉淀法（Immunoprecipitation）和ELISA三种，它们均利用特异的抗体对特定的蛋白质进行测定，以此来实现蛋白的定量。
3、流式细胞仪分析法：流式细胞仪分析法是一种基于细胞的分析方法，主要利用特定的抗体标记特定蛋白质，通过细胞分析仪分析细胞中标记蛋白质的数量，从而实现蛋白定量。
4、电泳分析法：电泳分析法是一种快速、灵敏的蛋白定量方法，其原理是利用电泳将多种不同种类的蛋白质分
子按大小和性质电泳分离出来，然后通过试剂盒进行叠加反应，使相应的蛋白分子变得可见，从而可以实现蛋白的定量。
食品中蛋白质的测定方法
食品中蛋白质的测定方法食品中蛋白质的测定是一项重要的分析工作，因为蛋白质是构成生物体的重要组成部分，具有多种生理功能。
在食品分析中，蛋白质的测定可以帮助确定食品的营养价值、质量和安全性。
目前常用的食品中蛋白质测定方法主要包括化学方法、生物方法和光谱法等。
化学方法是常用的测定蛋白质含量的方法之一。
常见的化学方法有碱式溴酸法、Lowry法、比色法和生物素-亲和素ELISA法等。
碱式溴酸法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，其原理是根据蛋白质与碱式溴酸反应产生溴化物，通过溴离子与物质之间的比色测定来确定蛋白质的含量。
此方法操作简便、操作范围较宽，但其并不是选择性很高的方法，也不能区分不同的蛋白质。
Lowry法是一种常用的反应性蛋白质测定方法，其基本原理是根据酚与蛋白质或肽链中的酰化基团的反应，在碱性条件下生成一种可变色的络合物，并使用多肽键和酰化基团的浓度作为测定蛋白质含量的依据。
该方法具有较高的选择性和灵敏度，广泛应用于食品中蛋白质含量的测定。
比色法是一种常用的定量分析方法，可以通过测定浓度与溶液的吸光度之间的关系来确定溶液中蛋白质的含量。
其中一种常用的比色法是布拉德福德法，原理是将蛋白质与染料交换的方式，根据染料与蛋白质之间的作用力来测定蛋白质的含量。
这种方法需要一定量的标准蛋白质作为参照物，但是不同的蛋白质可能对染料的亲和力不同，因此需要根据具体情况进行一定的修正。
生物素-亲和素ELISA法是近年来发展起来的一种新的测定蛋白质含量的方法，其原理是利用免疫学的方法来检测样品中的蛋白质含量。
这种方法需要特异性抗体与特定蛋白质结合，然后用辣根过氧化物酶二抗体与结合的抗体结合，最后根据酶的活性来测定蛋白质的含量。
这种方法可以用于测定食品中特定蛋白质的含量，并且具有较高的选择性和敏感性，但需要较长的实验时间和昂贵的试剂。
除了化学方法外，生物方法也可以用于食品蛋白质的测定。
生物方法主要指的是生物学指标法，根据生物体内生物学分子的活性来测定样品中物质的含量。
蛋白质测定方法
蛋白质测定方法蛋白质是生物体内一种重要的有机物质，对于生物体的生长、发育和代谢具有重要作用。
因此，蛋白质的测定方法显得尤为重要。
本文将介绍常见的蛋白质测定方法，希望能够为相关研究和实验提供帮助。
一、Lowry法。
Lowry法是一种常用的蛋白质定量方法，其原理是利用蛋白质与铜离子和碱性试剂在碱性条件下发生的还原反应，生成紫色络合物，通过比色测定蛋白质含量。
该方法具有灵敏度高、线性范围广、稳定性好的特点，适用于多种类型的蛋白质样品。
二、BCA法。
BCA法是一种基于铜离子的蛋白质测定方法，原理是蛋白质与试剂中的碱性铜离子在碱性条件下发生蓝色产物，通过比色测定蛋白质含量。
相比于Lowry法，BCA法具有操作简便、快速、灵敏度高的特点，适用于高通量的蛋白质测定。
三、Bradford法。
Bradford法是一种基于染料结合的蛋白质测定方法，原理是蛋白质与染料结合后产生颜色变化，通过比色测定蛋白质含量。
该方法具有操作简便、快速、灵敏度高的特点，对于一些含有胶体物质或其他干扰物质的样品，Bradford法的选择性更好。
四、UV吸收法。
UV吸收法是一种常用的蛋白质测定方法，原理是利用蛋白质特有的氨基酸在紫外光区域的吸收特性，通过测定蛋白质在280nm处的吸光度来定量测定蛋白质含量。
该方法操作简便、快速，适用于纯化后的蛋白质样品的测定。
五、荧光法。
荧光法是一种基于蛋白质荧光特性的测定方法，原理是蛋白质在特定激发波长下产生荧光信号，通过测定荧光强度来定量测定蛋白质含量。
该方法具有灵敏度高、选择性好的特点，适用于高通量的蛋白质测定。
六、总蛋白法。
总蛋白法是一种常用的蛋白质测定方法，原理是利用蛋白质与试剂中的染料结合后产生颜色变化，通过比色测定蛋白质含量。
该方法操作简便、快速，适用于多种类型的蛋白质样品。
总结。
蛋白质的测定方法多种多样，选择合适的方法需要根据样品的特性、实验的目的和仪器设备的条件来综合考虑。
希望本文介绍的蛋白质测定方法能够为相关研究和实验提供参考，促进科研工作的开展。
测定蛋白质常用方法
测定蛋白质常用方法印迹法是一种常见的定性分析方法，主要是通过利用电致沉淀效应，将蛋白质物质在电场中集中，形成一个凝胶层，以提取出蛋白质。
在实验中，先制备一个有活性、有保留度和有稳定性的蛋白质样品，然后将其放入体外，在受到电场作用下，蛋白质物质会被电致沉淀，形成一个凝胶层，从而获得蛋白质。
该方法的特点是准确度高，样品消耗量少，可以高效地完成蛋白质的测定，但对于那些含有非蛋白质物质的样品，其测定效果不理想。
（二）酶探针法酶探针法是一种定性分析，利用一种特殊酶和一种特殊探针，运用其特异性以及特殊的结构，来测定蛋白质的特殊部位。
实验中，首先选择一种酶，如DNase I、DNase II、RNase A，然后将其与相应的探针（如荧光标记的核酸或多肽）相结合，这样结合的物质会与蛋白质产生特异性的结合作用，从而可以测定蛋白质的特定位点。
优点是准确度高，可以测定蛋白质的特定位点，但由于其方法复杂，在一定程度上增加了实验技术难度。
二、定量分析（一）荧光法荧光法是一种常用的定量分析方法，主要利用某种荧光探针和荧光激发光，以及荧光探针的特异性与蛋白质的特异性，激发一定的荧光，从而测定蛋白质的含量。
实验过程中，首先将荧光探针结合到蛋白质上，然后把探针/蛋白质混合物放入荧光仪中，将一定强度的荧光激发光照射到探针/蛋白质混合物上，从而发生特定的荧光反应，通过记录荧光发射强度，就可以测定蛋白质的含量。
优点是准确度较高，可以在不同范围内快速地进行测定，而且样品消耗量少，但该方法的应用范围较窄，只能用于测定那些可以与荧光探针发生特异性结合的蛋白质。
（二）比色法比色法是一种定量分析方法，它利用蛋白质与一定比例的钠稀释液发生相互作用，产生稳定的色谱，从而测定蛋白质的含量。
实验过程中，先将蛋白质样品与钠稀释液做混合，然后在420nm的色谱仪上测定色谱，测定出其颜色深浅，然后利用已知的标准曲线，计算出蛋白质的含量。
比色法的优点是灵敏度高，可以在较低消耗的样品情况下完成蛋白质的测定，而且在实验中只需要使用普通的外设，操作简便，但是存在一定的滞后度，不能测定出瞬时变化的蛋白质含量。
列举几种常用的蛋白质定量测定的方法
列举几种常用的蛋白质定量测定的方法常用的蛋白质定量测定方法如下：
1. Bradford法
Bradford法是一种基于蛋白质与染料之间的化学反应进行测定的方法。
该方法操作简单，灵敏度高，可用于各种类型的蛋白质含量测定。
2. BCA法
BCA法是一种基于铜离子与蛋白质产生化学反应，从而生成紫色物质
的方法。
该方法适用于各种类型的蛋白质测定，具有灵敏度高、稳定
性好等特点。
3. Lowry法
Lowry法是一种基于蛋白质与染料之间的氧化还原反应进行测定的方法。
该方法操作简单，灵敏度高、稳定性好，适用于不同类型的蛋白
质含量测定。
4. UV吸光度法
UV吸光度法是一种基于蛋白质带有吸收紫外线的物理性质进行测定的
方法。
该方法操作简单、快速，并且适用于大多数类型的蛋白质测定。
5. 酰荧光素改良法
酰荧光素改良法是一种基于蛋白质分解后产生的荧光物质进行测定的
方法。
该方法灵敏度高、稳定性好，且能够测定低浓度的蛋白质。
以上是常用的蛋白质定量测定方法，不同的方法适用于不同类型的蛋
白质及其含量测定。
选择合适的方法能够提高测定的灵敏度和准确性，为后续的研究提供可靠的数据。
蛋白活性的检测原理和方法
蛋白活性的检测原理和方法蛋白活性是指蛋白质分子在生物体内发挥其生物学功能时所具有的活性特征。
蛋白活性的检测是生命科学和生物技术研究中的一个重要内容，可以帮助科研人员了解蛋白质的结构和功能，并为蛋白质的研究、开发和应用提供有价值的参考。
在蛋白活性检测中，常用的原理和方法包括理化性质法、酶活性法、配体结合法、抗原抗体相互作用法、细胞功能法等。
下面将对这几种常用方法进行详细介绍。
1. 理化性质法理化性质法是一种通过测定蛋白质的物理化学性质来评估蛋白活性的方法。
其中包括紫外吸收光谱、荧光光谱、圆二色光谱、静态光散射、动态光散射等技术。
这些方法可以通过测量蛋白质在不同波长的光吸收或发射光强度来确定其构象、稳定性、聚合状态等物理化学特性，进而推断蛋白质的活性。
2. 酶活性法酶活性法是通过测定蛋白质酶活性的方法来评估其活性。
常用的酶活性检测方法包括酶促反应动力学法、酶电极法、酶标记法等。
其中，酶促反应动力学法是通过测定酶底物的转化速率来评估酶的活性；酶电极法是通过测量酶底物和产物间的电势差或电流变化来评估酶的活性；酶标记法是通过将蛋白质与酶标记物结合，然后测定酶标记物的信号来评估蛋白质的活性。
3. 配体结合法配体结合法是一种通过测定蛋白质与配体之间的相互作用来评估蛋白活性的方法。
其中包括荧光标记法、放射性标记法、表面等温滴定法等技术。
这些方法利用配体与蛋白质结合后形成的复合物具有不同的性质，如荧光强度、放射性强度等，通过测定这些性质的变化来评估蛋白质的活性。
4. 抗原抗体相互作用法抗原抗体相互作用法是一种通过测定蛋白质与抗体之间的结合来评估蛋白活性的方法。
最常用的技术是酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA），该方法通过将抗原与抗体结合后，用酶标记的二抗对抗体进行检测，通过测定酶标记物的信号来评估蛋白质的活性。
5. 细胞功能法细胞功能法是一种通过测定蛋白质所调控的细胞功能来评估其活性的方法。
蛋白质含量测定方法汇总
蛋白质含量测定方法汇总在生物技术药物研发中，蛋白质含量测定是其质量控制的重要指标之一，蛋白质含量测定的准确性对产品规格、分装量具有指导意义，是比活性计算、残留杂质的限量控制以及其他理化特性测定的基础，也是临床前安全和有效性评价研究中有效剂量、毒性剂量设置以及临床方案制订的重要依据。
常见的蛋白质含量测定方法主要有双缩脲（Biuret 法）、Lowry法、BCA法、紫外吸收法、凯氏定氮法、ELISA法和HPLC法等等。
（1）双缩脲（Biuret 法）双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。
该方法适用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
生物技术药物作为医药领域研究的重要成果和本世纪最具发展潜力的高新技术产业,已为人类的疾病防治带来更多的手段。
蛋白质的纯度检查是重组蛋白质类药物的重要指标之一。
美迪西生物技术药物生物分析部提供全面符合FDA/CFDA GLP标准的专业技术服务，以支持蛋白药物、抗体药物、疫苗和生物标记物的筛选与开发，及其临床前研究和临床研究。
（2）Lowry法Lowry 法测定蛋白质含量的原理是蛋白质在碱性溶液中肽键与Cu2+鳌合，形成蛋白质-铜复合物，还原酚磷钼酸，产生蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质浓度呈线性关系，在一定条件下，蓝色深度与蛋白量成正比。
过去此法是应用最广泛的一种方法，近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
（3）BCA法BCA检测法是Lowry测定法的一种改进方法，是近年来广泛应用的蛋白质定量方法。
蛋白质酶活力的测定
蛋白质酶活力的测定蛋白质酶活力的测定是生物化学实验中很重要的一项实验。
酶是一种催化剂，能够加速反应的速率而不参与反应本身。
蛋白质酶最显著的特点是具有酶活力，也就是能够催化特定的蛋白质分子降解为较小的分子。
测定蛋白质酶活力的目的是为了确定酶的催化效率，提高酶的纯度和测定酶的反应条件等方面提供依据。
一、实验原理蛋白质酶催化降解蛋白质分子时，会产生对应的氨基酸，这些氨基酸可以与试剂发生反应。
蛋白质酶的酶活力大小可以通过反应中产生的氨基酸数量来表示。
常用的测定方法有以下两种：1.二肽基(p-nitroaniline)法该方法的原理是利用蛋白质酶在一定的反应条件下（如适宜温度、pH值等）催化蛋白质水解生成相应的氨基酸，进而与试剂p-nitroaniline反应，生成黄色的产物p-nitroaniline，根据产生的p-nitroaniline的吸光度可以测定蛋白质酶的活力。
该方法具有操作简单、结果可靠、灵敏度高等优点。
但该方法并不适用所有类型的蛋白质酶，且试剂p-nitroaniline有毒性，需要避免吸入和接触。
2.钠二氢茚三硫酸法该方法的原理是利用蛋白质酶催化蛋白质水解产生的氨基酸与酚类试剂钠二氢茚三硫酸（TNBS）反应，生成黄色的产物，根据产生的色谱法或比色法来测定酶的活性。
该方法操作较复杂且对反应体系条件较为苛刻，但适用于大多数蛋白质酶。
二、实验步骤1.制备酶样溶液：取少量蛋白质酶，加入足量的缓冲液，并在适宜的催化条件下(如pH、温度等)，静置30分钟左右。
2.制备底物溶液：将p-nitroaniline溶于缓冲液中，制备一定浓度的p-nitroaniline底物溶液。
3.将相应的底物溶液加入到酶样液中，保持一定的条件，如时间、温度、摇床等，反应20-30分钟。
4.添加止反应液，阻止反应继续进行。
5.测定反应液中产生的p-nitroaniline的吸光度，计算蛋白质酶的酶活力。
2.制备底物溶液：将相应的血红蛋白等蛋白质溶解于缓冲液中，制备一定浓度的蛋白质底物溶液。
蛋白酶活性的测定方法
结果分析
酶活性计算
根据实验数据，计算蛋白酶的活性，包括比活力和米氏常数等参 数。
显著性检验
通过t检验、方差分析等方法，对实验组和对照组之间的差异进行 显著性检验，确定实验结果是否具有统计学意义。
可重复性评估
评估实验结果的重复性，判断实验方法的可靠性和稳定性。
误差分析
误差来源
分析实验过程中可能存在的误差来源，如试剂不纯、 操作误差、仪器误差等。
电化学法
总结词
电化学法是一种快速、简便的蛋白酶活性测定方法，通过电化学信号的变化来检 测酶的活性。
详细描述
电化学法利用电化学探针或电极检测酶反应过程中产生的电化学信号，如电流、 电位等，通过分析这些信号的变化可以计算酶的活性。该方法具有快速、简便和 实时监测等优点。
核磁共振法
总结词
核磁共振法是一种高分辨率、高灵敏度的蛋白酶活性测定方法，通过检测核自旋磁矩的变化来计算酶的活性。
酶液的保存
选择适当的保存条件，如温度、pH值和添加稳定 剂等，以确保酶液的活性。
反应条件优化
温度对酶活性的影响
通过在不同温度下测定酶活性，找到最适温度范围，确保酶活性 的最大化。
pH对酶活性的影响
在不同pH条件下测定酶活性，找到最适pH值，确保酶活性的最大 化。
底物浓度对酶活性的影响
通过改变底物浓度，观察酶活性的变化，找到最佳底物浓度。
在测定过程中，可能存 在异常值、缺失值或重 复数据，需要进行数据 清洗，确保数据准确性 和可靠性。
图表绘制
通过绘制图表，如柱状 图、折线图或散点图， 可以直观地展示蛋白酶 活性随时间、温度、pH 等参数的变化趋势。
数据转换
根据需要，对数据进行 适当的数学转换，如对 数转换或归一化处理， 以便更好地分析数据。
蛋白质质量的评定方法
蛋白质质量的评定方法蛋白质是构成细胞的主要成分之一，对于生物体的生长、发育和功能的维持起着重要作用。
在进行蛋白质研究时，评定蛋白质质量是一个至关重要的环节。
蛋白质质量评定的方法有很多，本文将介绍其中的一些常用方法。
一、蛋白质含量的测定方法蛋白质含量是评定蛋白质质量的一个重要指标，常用的测定方法有：1. Lowry法：利用氨基酸特异性和多肽的碱性性质，与测定液中的氢氧化钠反应，形成紫色物质，通过分光光度计检测吸收光谱，从而测定蛋白质含量。
2.BCA法：利用蛋白质的两个相邻的二硫键，将其还原为自由硅酸二钠，与BCA试剂反应生成紫色物质，通过分光光度计检测吸收光谱，从而测定蛋白质含量。
3. Bradford法：使用Bradford染料与蛋白质发生强吸附反应，在酸性条件下，生成蓝色染色物，通过分光光度计检测吸收光谱，从而测定蛋白质含量。
4.UV吸收法：利用蛋白质分子中芳香族氨基酸（如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸）在紫外光区域的吸光特性，通过分光光度计检测蛋白质的吸收光谱，从而测定蛋白质含量。
这些方法各有优缺点，选择适合的方法根据实际需求和条件来确定。
二、蛋白质纯度的评定方法评定蛋白质纯度是评定蛋白质质量的另一个重要指标，常用的方法有：1. SDS-：一维或二维凝胶电泳是常用的蛋白质分离和纯化技术。
在聚丙烯酰胺凝胶中，根据不同蛋白质的分子量，通过电泳将蛋白质分离出来，并通过染色或Western blot等方法来检测目标蛋白质的存在。
2.HPLC：高压液相色谱是一种高效的蛋白质纯化技术。
通过根据蛋白质的特性选择适当的分离柱和流动相，实现对蛋白质的高效分离和纯化，检测纯度可以通过色谱峰的整体形状和紫外吸收峰的强度来评估。
3.质谱分析：质谱是一种高分辨率和高灵敏度的蛋白质分析技术。
通过对蛋白质分子的裂解和质量/电荷比的分析，可以确定蛋白质的氨基酸序列，从而评估蛋白质的纯度。
以上方法可以结合使用，以获得更准确的蛋白质纯度评估结果。
蛋白质的测定还有哪些方法
蛋白质的测定还有哪些方法蛋白质是生物体内重要的组成部分，对于蛋白质的精确测定对于研究生物学，医学以及食品科学等领域具有重要的意义。
除了传统的质量测定方法外，还有许多其他的方法可以对蛋白质进行测定。
接下来，我将介绍一些常见的蛋白质测定方法。
1. 比色法比色法是一种最常见也是最简单的测定蛋白质的方法。
其基本原理是利用蛋白质与某种化学试剂之间的反应来产生颜色，从而通过测定颜色的强度来间接测定蛋白质的浓度。
常见的比色法包括布拉德福德法、洛儿酚蓝法和伯胺黑法等。
2. 紫外光谱法紫外光谱法采用紫外光线的吸收特性来测定蛋白质的浓度。
蛋白质中含有芳香族氨基酸如苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，它们能够吸收特定波长的紫外光。
通过测量蛋白质在特定波长处的吸光度，可以间接测定蛋白质的浓度。
3. 生物分子传感器法生物分子传感器法是一种新兴的蛋白质测定方法，它利用生物分子间的特异性相互作用来测定蛋白质的浓度。
常见的生物分子传感器包括荧光探针、酶标记和表面等离子共振等。
这些传感器能够识别特定的蛋白质结构或产生特定的信号，从而实现对蛋白质浓度的测定。
4. 凝胶电泳法凝胶电泳法是一种常用的测定蛋白质的方法。
根据蛋白质在凝胶电场中的迁移速率和形态特征，可以测定蛋白质的大小、电荷和组成。
常见的凝胶电泳法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、薄层凝胶电泳和等电聚焦等。
5. 质谱法质谱法是一种高灵敏度和高分辨率的蛋白质测定方法。
质谱法通过将蛋白质分子离子化并通过质谱仪进行分析，从而得到蛋白质的分子质量和结构信息。
常见的质谱法包括质子化电喷雾质谱和飞行时间质谱等。
除了上述方法外，还有一些其他的蛋白质测定方法，如氨基酸分析法、酶活性测定法和生物感应法等。
这些方法在不同的使用场景中具有各自的优势和适用性。
通过综合应用这些方法，可以实现对蛋白质的全面和精确的测定。
总结起来，蛋白质的测定方法繁多，涵盖了比色法、紫外光谱法、生物分子传感器法、凝胶电泳法和质谱法等多种方法。
简述几种测定蛋白质方法及原理
一、引言蛋白质是生物体内最重要的大分子有机化合物之一，其作用和功能十分广泛。
对蛋白质的测定方法及原理的研究具有重要的意义。
本文将简述几种测定蛋白质方法及其原理，帮助读者更加全面地了解这一领域的知识。
二、紫外吸收光谱法紫外吸收光谱法是一种常用的蛋白质测定方法，其原理是利用蛋白质中所含的芳香族氨基酸（如苯丙氨酸和酪氨酸）在紫外光波长区域呈现吸收峰的特性。
通过测定蛋白质在特定波长下的吸光度，可以计算出蛋白质的浓度。
这种方法简单、快速，并且需要的试剂和设备较少，因此被广泛应用于生命科学领域。
三、比色法比色法是通过比较试剂与蛋白质形成的色素溶液与标准物质的吸收率来测定蛋白质浓度的方法。
常用的试剂有美罗芬试剂和布拉德福试剂等。
这种方法灵敏度较高，适用于测定低浓度的蛋白质样品。
但需要注意的是，不同的蛋白质可能对试剂的反应性不同，因此在选择试剂和测定条件时需要谨慎。
四、BCA法BCA法是一种以铜离子为氧化剂，利用蛋白质中的还原型氨基酸和BCA试剂在碱性条件下发生的氧化还原反应而测定蛋白质浓度的方法。
BCA法对于共轭蛋白质和含有还原剂的试样有较好的适用性，测定结果准确可靠。
然而，对于某些特定的蛋白质样品，可能会出现干扰，因此在实际应用中需要进行验证和控制。
五、总结与展望本文简述了几种测定蛋白质方法及其原理，包括紫外吸收光谱法、比色法和BCA法。
这些方法各具特点，可以根据实验需求进行选择。
在今后的研究中，可以进一步探索新的测定方法，提高测定的准确性和灵敏度，为蛋白质研究提供更加全面的支持。
六、个人观点蛋白质测定是生物学领域中非常重要的研究内容，不同的测定方法能够提供不同的信息和结果。
作为一名科研人员，我认为对蛋白质测定方法的理解和熟练掌握，能够为蛋白质研究的深入开展提供有力支持。
希望未来能有更多的新方法和新技术出现，为蛋白质研究领域注入新的活力。
通过本文的介绍，相信读者已经对测定蛋白质方法有了初步的了解。
希望我们的文章写作能够给您的学术研究和科研生活带来一定的帮助。
蛋白质活性测定方法
核糖核酸酶（RNase）的活性测定（1）溶液的配制：①0.1 mol/L pH 5.0的乙酸缓冲溶液：称取5.78 g CH3COONa, 加入1.7 mL CH3COOH, 用蒸馏水稀释至500 mL。
② 0.05 % RNase酵母溶液：称0.05 g RNase酵母，用0.1 mol/L pH 5.0的乙酸缓冲溶液溶解并稀释至100 mL。
测活方法：（2）用移液管移取已配制好的0.05 %的核糖核酸酵母溶液2.5 ml于比色皿中，加入一定量的样品RNase A溶液，迅速摇匀，以蒸馏水为参比，在300 nm波长下每隔30秒测一次吸光值，共读3分钟，得到一组对应于时间t(min)的At值。
当样品管反应3小时后再测定300 nm处的吸光值A f, A f为最终的光吸收，分别求得一组对应于t的log(A t-A f), 以log(A t-A f)对时间t作图应得到线性关系，画出直线。
求出直线斜率的数值S，将S带入标准曲线，求得活性回收率。
将S带入下列公式中，可求出酶的活力。
单位/ mg = S × (-2.3) ×4 / (样品管中含酶的数量)胰凝乳蛋白酶（α-Chy）活性测定用胡梅尔(Hummel)法测定α-胰凝乳蛋白酶[2]：(1) 原理：α-胰凝乳蛋白酶优先催化水解结合有氨基酸（如酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的L-异构体）的肽键。
我们可以通过在256 nm处测定吸光度增大值的办法来测定反应的速度。
苯甲酰-L-酪氨酸乙酯的水解反应引起吸光度的增大。
(2) 定义：一个凝乳蛋白酶单位相当于在pH值为7.8，温度为25 ℃时，每分钟水解1 μmol苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(BTEE)所需的酶量。
(3) 试剂配置方法：Tris缓冲液(pH: 7.8)取0.969 g三（羟甲基）氨基甲烷和1.47 mg二水氯化钙溶于80 mL蒸馏水中，用1 N的盐酸将pH值调至7.8，并定容至100 mL。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
核糖核酸酶（RNase）的活性测定
（1）溶液的配制：
①0.1 mol/L pH 5.0的乙酸缓冲溶液：称取5.78 g CH3COONa, 加入1.7 mL CH3COOH, 用蒸馏水稀释至500 mL。
② 0.05 % RNase酵母溶液：称0.05 g RNase酵母，用0.1 mol/L pH 5.0的乙酸缓冲溶液溶解并稀释至100 mL。
测活方法：
（2）用移液管移取已配制好的0.05 %的核糖核酸酵母溶液2.5 ml于比色皿中，加入一定量的样品RNase A溶液，迅速摇匀，以蒸馏水为参比，在300 nm波长下每隔30秒测一次吸光值，共读3分钟，得到一组对应于时间t(min)的At值。
当样品管反应3小时后再测定300 nm处的吸光值A f, A f为最终的光吸收，分别求得一组对应于t的log(A t-A f), 以log(A t-A f)对时间t作图应得到线性关系，画出直线。
求出直线斜率的数值S，将S带入标准曲线，求得活性回收率。
将S带入下列公式中，可求出酶的活力。
单位/ mg = S × (-2.3) ×4 / (样品管中含酶的数量)
胰凝乳蛋白酶（α-Chy）活性测定
用胡梅尔(Hummel)法测定α-胰凝乳蛋白酶[2]：
(1) 原理：α-胰凝乳蛋白酶优先催化水解结合有氨基酸（如酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的L-异构体）的肽键。
我们可以通过在256 nm处测定吸光度增大值的办法来测定反应的速度。
苯甲酰-L-酪氨酸乙酯的水解反应引起吸光度的增大。
(2) 定义：一个凝乳蛋白酶单位相当于在pH值为7.8，温度为25 ℃时，每分钟水解1 μmol苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(BTEE)所需的酶量。
(3) 试剂配置方法：
Tris缓冲液(pH: 7.8)取0.969 g三（羟甲基）氨基甲烷和1.47 mg二水氯化钙溶于
80 mL蒸馏水中，用1 N的盐酸将pH值调至7.8，并定容至100 mL。
①盐酸(HCl): 0.001 moL/L
②酶溶液：先用盐酸溶解酶，使溶液浓度达到1 mg/mL，然后再用盐酸稀释，使最终浓度达到0.5～1.0 U/mL。
③底物溶液：取33.5 mg苯甲酰-L-酪氨酸乙酯溶于50 %的甲醇(63 mL甲醇与50
mL 蒸馏水混合)，定容至100 mL 。
（4）操作步骤：用移液管将1.5 mL Tris 缓冲液和1.4 mL 底物溶液滴入一只1 cm 比色皿，并加热至25℃，加0.10 mL 酶溶液，摇匀。
用分光光度计(256 nm)测定反应混合物的吸光度，在约5.0 min 内每隔1.0 min 读取吸光度一次，直到每分钟吸光度的增大值达到稳定为止。
（5）计算
用以下公式计算酶的活性：
U/mg 3E 0.964E w 256=⨯⨯
式中：Ｅ256—在256 nm 处测得的每分钟内吸光度的增大值
Ｅw —每0.10 mL 所用酶液中含酶的重量(mg)
0.964—1 μmol BTEE 的吸光度(256 nm 处)
3—反应液的总体积
胰蛋白酶（Trypsin ）的活性测定
用施韦尔特-竹中（Schwert & Takenaka ）法测定胰蛋白酶[3]：
(1)原理：胰蛋白酶将N-苯酰基-L-精氨酸从BAEE 中释放出来，用分光光度计于253 nm 处跟踪测定由该反应引起的吸光度增大情况。
(2)定义：一个胰蛋白酶单位相当于在规定条件下每分钟使吸光度增大0.001时所需的酶量。
(3)试剂配置方法：
①底物溶液：取30.9 mg BAEE ，280 mg 二水氯化钙和566 mg 三羟甲基甲烷溶于70 mL 蒸馏水中，将pH 值调至7.6。
定容至100 mL 。
②盐酸（HCl ）：0.001 mol/L
③酶溶液：酶用0.001 N 盐酸溶解。
1.0 mL 配制酶溶液中应含有150 U 左右。
(4) 操作步骤：用移液管将2.8 mL 底物溶液滴入1 cm 比色皿，调温至25 ℃。
添加0.20 mL 酶溶液，混合。
用分光光度计于253 nm 处以蒸馏水为参比测定吸光度，直至每分钟吸光度增大值达到恒定为止。
(5) 计算：
用以下公式计算活性:
U/mg E 0.001E w 253=⨯
式中 Ｅ253—每分钟内253 nm 处吸光度的增大值
0.001—一个酶单位每分钟使吸光度增大0.001
E w —0.2 mL 所用的酶溶液中含酶的重量(mg)
Lys 活性的测定
取溶壁球菌干菌粉少许，加入少量0.067 mol/L 的磷酸缓冲液(pH=6.2)，用玻璃棒研磨匀浆，再加入磷酸缓冲液至OD 值为0.6-0.8即可。
用移液管移取3.0 mL 配置好的溶壁球菌菌液于比色皿中，加入一定量的Lys 溶液(酶量在100 ug 左右)，迅速摇匀，以蒸馏水为参比，在450 nm 的波长下每隔30秒测一次吸光值，共读3分钟，以吸光度对时间作图，取最初线性部分，其斜率即为吸光度值的变化率。
在以吸光度值的变化率对加入标准蛋白的质量作图，用同样的方法测定样品的吸光度值的变化率，依据标准曲线求得蛋白的绝对量或浓度，与同时对照的标准蛋白活性绝对值或浓度比较，便可计算出活性回收率。
中国生物制品标准化委员会编. 中国生物制品规程[M]. 北京: 化学工业出版社, α-Amy 活性的测定
（1）溶液的配制：
①0.02mol/L 磷酸缓冲液（PH7.0）：称取1.8g 磷酸氢二钠和1.0g 磷酸二氢钾，用水溶解后定容至1L 。
②0.1%淀粉溶液：称取100mg 可溶性淀粉与50mL 烧杯中，加少量蒸馏水制成糊状，然后转移到盛有80mL0.01mol/L 氢氧化钠的150mL 烧杯中煮沸，冷却后倾入100mL 容量瓶中，用0.01mol/L 氢氧化钠稀释至刻度。
③0.005mol/L 碘液:称取3g 碘化钾和1.3g 碘用水溶解后，稀释至0.05mol/L 碘液，然后再稀释10倍。
④标准酶液：准确称取1.0mg 高纯度α-Amy 于离心管中，加入1mL 水，溶解后，于12000RPM 离心5分钟，上清液转移到另一离心管中备用。
用时稀释100倍。
（2）活性测定
取7支比色管，用移液管准确加入3.0mL0.1%淀粉溶液，5.0mL 磷酸缓冲液，然后分别加入稀释标准酶液0.0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6mL ，在37度温热15分钟后取
出立即冷却，于每个比色管中各加入0.4mL0.005mol/L碘液，用水稀释至刻度，摇匀，以蒸馏水为参比，在波长580nm条件下，用分光光度计测量吸光度，在一定范围内，吸光度减弱的程度与酶活力大小成比例。