SSI高效液相的标准操作规程

SSI高效液相的标准操作规程

适用于所有使用此仪器者

1.流动相的处理

1.1过滤溶剂

溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。本实验室有水溶性和有机性两种过滤膜供选择，过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1-2ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

1.2保持储液瓶的清洁

用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

1.3保证溶剂的质量

一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

1.4 故障及解决方法

1.4.1 流动相脱气不充分

流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。

1.4.2 流动相供给不畅

流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。输液管上装溶剂滤头，既可使输液管沉至瓶底，又可过滤流动相，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

溶剂滤头阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。溶剂滤头被微粒所阻塞或长霉，去掉溶剂滤头后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的溶剂滤头则可。有时候换上新的溶剂滤头仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的溶剂滤头。不管如何，流动相都需要重新过滤。

流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于溶剂滤头孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。如果流速大于10ml/min，常会出现这种现象。使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的溶剂滤头；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用溶剂滤头，但流动相一定要先过滤；

（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。应松开盖子或留有1mm的缝隙；（7）进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等，都能引起供液不正常。

1.4.3 流动相和储液器被污染

由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造成的。新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。

脏的储液器会污染清洁的流动相。每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。

流动相污染来自这几个方面：试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制流动相时操作不当等。因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂。玻璃器皿按规定清洗干净。为防止微生物生长，每天要用甲醇清洗系统。怀疑系统内生长了微生物，可用稀硝酸冲洗既可（注意不要损坏柱和管道系统），真空脱气时防止泵油带入流动相。用清洁的惰性塞子、搅棒、溶剂滤头和玻璃器皿配制流动相。已经污染的流动相一定要废弃掉。

2. 仪器组成及电源

2.1 仪器组成

本系统由SeriesⅢ泵，7725i 进样器，Model 500型紫外/可见光检测器，柱温箱（可选件），数据处理系统一套。

2.2 电源

仪器使用时按泵、检测器、打印机和计算机的顺序，依次接通电源。

3. SeriesⅢ泵的操作

3.1操作环境要求

室内应保持环境清净、无尘，并且有恒温和恒湿设备。一般实验室的温度应保持在20~30℃之间，相对湿度保持在20%~90%之间。

3.2 溶剂使用注意事项

除使用PEEK™泵头以外，Series III泵里面跟溶剂接触的所有部件的制造材料为316L不锈钢、蓝宝石、红宝石或聚合物材料。这里面有一些材质对酸（包括路易斯酸）和卤化酰基非常敏感。应避免使用以下溶剂：王水、溴、无水氯、

氯化铜、氯化铁、氯化亚铁、氟利昂、胍、氢溴酸、盐酸、氢氟酸、过氧化氢、碘、氯化汞等。

注意，三氯甲烷和四氯化碳会缓慢分解，产生游离的氯化氢（盐酸），会腐蚀不锈钢流路系统，应尽量避免使用。

3.3前面板介绍

3.3.1 Prime/Purge阀：

这是一个高效的空气排放阀，当打开阀时，液体将从此出口排出，而该阀完全关闭时，液体将从Filter/Outlet出口排出，并进入系统。当泵或者流动相入口管路有气泡时，打开这个阀，用一个大注射器插在阀口抽液，或者按泵前控制面板上的“Prime”键。一般抽出20~30ml溶液即可。（注意：当您拧开这个阀的时候，系统压力一定要在100psi以下）

3.3.1.1 Filter/Outlet

这是泵出口，内置一个高压在线过滤器（0.5um），该接口设计连接管路为1/16’’外径管（分析型泵）。

3.4控制面板介绍

3位数字液晶显示器可以显示泵的流速，系统压力或者是用户设置的最高/低压力保护限，显示模式可通过按“MODE“键进行选择。

3.4.1 键盘

：启动/停止键

：数字增加键（设置时用）

：数字减少键

Prime（排气键）：按下这个键，泵将在最大流速下运行，按任意键停

止。（注意：在按下这个键时，必须确认“Prime/Purge”阀是完全打

开的）

Mode（功能键）：按下这个键，可以循环选择四个显示模式：“流速、

压力、最高压力限、最低压力限”。

3.4.2 LED状态灯介绍

ML/MIN（流速显示）：当这个灯亮时，显示的是当前的流速（ml/min），

”进行调整

PSI（压力显示）：当这个灯亮时，显示的是当前系统的压力（psi）

HI PRESS（高压限）：当这个灯亮时，显示的是最高压力保护限，用

户可进行调整

LOW PRESS（低压限）：当这个灯亮时，显示的是最低压力保护限，

用户可进行调整

PUMP RUN（泵启动显示）：当这个灯亮时，泵正在运行中

FAULT（错误提示）：当这个灯亮时，说明系统有错误产生，泵将停止

运行。您可以在查清错误原因后，按任意键跳过错误检查并重新启动泵。

3.5运行泵

调节好所需的流速后，按“RUN”键启动泵，泵工作时可使用它的自清洗功能，用自清洗液（水）在线清洗泵头。

3.6 实验结束后关闭电源开关。

4. 进样

4.1 进样阀

采用7725i手动进样器，进样环（loop）体积为20μl，上样量在10~20μl 时，进样体积必须大于loop体积的3-5倍，才能得到好的重现性，上样量小于10μl时，可以用10μl的微量进样器直接进样。进样后，快速旋转进样器的把柄，直接把样品进到色谱柱的柱头。

4.2 标准曲线

在做标准曲线时，进样浓度应由低到高。

5. 信号检测及数据处理