南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结
细胞培养基本知识基本技术
– 絮状物：血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成， 这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除，也可不用处理
– 显微镜下“小黑点”：经过热处理过的血清，沉淀物的形成 会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”，常 误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不会影响细胞生 长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批 号的血清
• 原代细胞：从机体取得组织材料，在体外
培养生长，到第一次传代前。
• 传代细胞：当原代细胞持续生长繁殖一段
时间，达到一定的细胞密度后传代的细胞。
培养瓶培养法
方法： 将培养对象直接接种于培养瓶内，再放
入培养箱进行培养。
优点： 1、可以避免培养瓶表面粗糙等原因对培养物 的影响。 2、可以方便地进行显微镜观察、染色等操作， 以及永久保存。 3、增加了培养瓶的培养面积。
• 1943年Earle、Dulbecco等创建单层细胞培 养法，首建长期传代的L-细胞系。
• 1951年Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。
• 从50年代末开始，组织培养技术应用进入 了一个繁盛的阶段，广泛应用于生物学和 医学研究各个领域。
无血清培养
无血清培养基:是不需要添加血清就可以维持细胞在
缺点：体外培养的细胞不能完全等同于体 内的细胞。
应用
• 病毒学：病毒鉴定，病毒抗原作用，疫苗生产…… • 免疫学：杂交瘤-单克隆抗体…… • 遗传学：染色体分析…… • 肿瘤学：筛选重要的抗肿瘤药物…… • 分化及发育：刺激使细胞群体发生改变…… • 细胞毒实验：药效测试…… • 临床医学及生物技术：干细胞培养定向诱导分
化后移植；组织工程软骨损伤修复；试管婴儿……
细胞培养技术总结
细胞的生长特点
体外培养的细胞，按其生长方式可分为贴壁型和 悬浮型。 贴壁细胞的主要代表是成纤维细胞，一般在接种 后24h内贴壁，刚开始时细胞多呈圆形，随贴 壁时间延长，逐渐伸展成梭形或多边形。传代 后的成纤维细胞12h开始贴壁，24h内完全贴壁。 上皮细胞型、游走细胞型和多形型都属于贴壁 型细胞。 悬浮型细胞包括血液白细胞和癌肿瘤细胞，不需 要附着于底物而于悬浮状态下生长良好。
四、细胞的冻存与复苏
• 细胞冻存和复苏的基本原则：慢冻快融， 可以最大限度的保存细胞活力。 • 目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作 保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的 通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分 渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从 而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。 • 冻存的细胞浓度：正常人的成纤维细胞浓 度： 5×106~1×107细胞/ml
细胞生长的三个阶段
• 潜伏期 ：细胞接种后先悬浮在培养液中，此时细胞 质回缩，胞体呈圆球形，继续培养便开始贴壁， 24h内便可长满瓶壁。 • 对数生长期 ：细胞增殖最旺盛的时期，随细胞数量 不断增多，生长空间逐渐减少，最后细胞互相接触 汇成一片。 • 停滞期：细胞数量达到饱和密度之后，停止增殖， 细胞数量不再增加，但仍有代谢活动，因而培养液 中的营养逐渐耗尽，代谢产物积累，此时需要分离 培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变或者 脱落死亡，故传代应在细胞长满瓶壁80%的时候传 代最好。
注：细胞培养液要贮存在4℃冰箱，避免光照， 试验前放入37℃水浴中温热。
加血清的高糖培养液存放期为六个月，期间 谷氨酰胺会分解，若细胞生长不佳，可以 再添加适量谷氨酰胺。 环境条件：95%空气和5%CO2 的气体； 温度：37℃
三、细胞的消化传代
成纤维细胞生长至高密度时，须分殖至新的培养瓶中， 一般稀释比例为1:3 至1:6。 1.PBS缓冲液、0.25%的胰蛋白酶和含10%的DMEM预先 放入37℃水浴中温热； 2.倒掉培养瓶内旧的培养液，加入4~6ml PBS缓冲液洗 涤残留培养液； 3.加入2~3ml胰蛋白酶，放入37℃ CO2孵箱中消化2~3 分钟，镜检观察，如有细胞间隙变大，细胞质回缩 现象，加入培养液终止消化。 4.用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落制成悬液，加入 离心管中，800rpm离心5min； 5.倾去上清液，加少量培养液重悬细胞，计数后调整 细胞浓度为1×107 /ml，在新的或者灭菌好的培养瓶 加入6ml左右新鲜培养液，将调整好浓度的细胞液 滴入培养瓶中，混匀，做好标记，放入37℃ CO2孵 箱培养。隔天换液。
细胞培养第二版知识点总结
第一章：细胞组织培养的三种类型？原代外植块培养：是从人或动物体内取出一小块组织，模拟体内生理环境，在保证无菌、适宜温度和营养条件下，使之生存和生长并保持其结构和功能的方法。
器官培养：指的是应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基或器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。
细胞培养：是以相似的培养方法体外培养单个细胞或单一细胞群，使其在适宜条件下生长并保持细胞特性。
第二章1.体内体外的环境不一样，细胞之间的粘附是通过什么实现的？细胞的黏附是通过特异的细胞表面受体与细胞外基质分子结合实现的。
在细胞铺展之前，细胞已分泌了细胞外基质蛋白和蛋白聚糖。
细胞外基质先黏着到带电底面上，然后再通过特异的受体附着到基质上。
因此，细胞曾经生长过的玻璃或塑料表面更适合细胞附着，用基质成分，如纤连蛋白、胶原或其衍生物（如明胶）预处理培养器皿，有利于要求复杂培养条件的细胞附着和增殖。
主要有四类跨膜蛋白参与了细胞与细胞、细胞与底物的黏附。
不依赖Ca2+的细胞间黏附分子介导同种或异种细胞与细胞粘附依赖Ca2+的钙黏着蛋白参与同源细胞间的相互作用整合蛋白，介导细胞与基质之间的相互作用，是基质分子跨膜的蛋白聚糖，能和基质成分如其他蛋白聚糖或胶原相互作用，具有稳定、活化和把生长因子转运到高亲和性受体上的作用。
2.细胞外基质成分及作用？细胞外基质（ECM）由胶原、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、透明质酸酶、蛋白多糖及膜结合生长因子（或细胞因子）等各种成分组成。
ECM能提高细胞的生存、增殖和分化能力3.概念，接触抑制：细胞在生长过程中达到相互接触时运动停止，同时细胞质膜褶皱减少，最终细胞分裂停止。
4.诱导细胞分化的条件？有助于诱导细胞分化的条件：细胞密度高细胞与细胞、细胞与基质之间作用强培养基中存在各种分化因子5.细胞信号传递的类型？体内细胞的增殖、迁移、分化、凋亡均受细胞间、细胞与基质间相互作用及营养条件和激素等信号分子的调控。
细胞培养技术总结-重要
细胞培养及检测相关技术小结一、细胞培养基配制以1000ml培养基为例。
1000ml成骨细胞培养基 = 850mlα－MEM培养液 + 150 ml 特级胎牛血清FBS (15%)(1). α－MEM powder: 10.2 g/L ~~~ 8.67 g for 850 ml(2). NaHCO3: 2.2 g/L ~~~ 1.87 g for 850 ml(3). Twice distilled water 850 ml, dissolve the powder in water(4). FBS (15%,v/v) 150 ml(5). Filter to sterilized bottle(6). Label the bottle and store in 4℃.Notes: 4,5 should be operated in the sterile working place. And if necessary, we can add some antibiotics into the medium（usually in primary cell culture）. 二、PBS（10×）NaCl: 80g/LKCl: 2g/LNa2HPO4: 14.4 g/LKH2PO4: 2.4 g/LPH=7.4, with HCl or NaOHToo much PO42-is harmful to cell, so only very little amount is necessary. Get some certain to dilute this 10 times concentration PBS when we need.三、胰蛋白酶Trypsin- EDTA 消化液(10×)This solution is used for cell released from the culture flask。
细胞工程考试总结
细胞工程考试总结细胞工程是近年来兴起的一个研究领域，其涉及分子生物学、细胞生物学、生物化工等多个学科的交叉与融合。
细胞工程在医药、食品、能源等领域有着广泛的应用。
考试是检验学习成果的一个重要方式，通过总结细胞工程考试可以更好地发现自己的不足，提高学习水平。
一、考试形式细胞工程考试通常采用笔试形式，试卷包括选择题、填空题和简答题。
选择题占比较大，通常是单选题和多选题，试题涵盖了细胞工程的基本概念、实验技术和应用等方面。
填空题考察对实验数据的分析和理解能力，而简答题则需要考生掌握基本理论知识并能够结合实际进行分析和解决问题。
二、考试知识点1. 细胞基础知识：细胞生物学基础知识、细胞培养、细胞的生理和代谢等方面。
2. 分子生物学：DNA结构与功能、基因调控、基因克隆等。
3. 技术与方法：基因工程、PCR、蛋白质纯化、细胞流式分析等。
4. 细胞工程应用：生物药物、生物制品、生物能源等。
三、注意事项1. 模拟考试：在考试前可以进行模拟考试，模拟考试可以让我们更好地感受到考试的难度，同时也可以预测自己的得分情况，对知识掌握情况有一个比较清晰的了解。
2. 补充知识：细胞工程的内容比较广泛，考试可能会涉及到一些我们没学过或者没有掌握的知识，那么考试之前需要对一些基础知识进行巩固，同时也可以通过阅读相关的文献、视频或者向老师请教等方式来补充知识。
3. 做好笔记：在学习过程中，应尽可能的记录下自己的笔记，对于一些重要的知识点、公式、实验名称等也要做好标注，这有助于我们在考试时快速找到相关知识点，减少遗漏。
4. 做好时间规划：在考试时，应该根据试卷题目难易程度、所占分值大小、自己的掌握程度来做好时间规划，尽可能地把握好答题时间，并避免在最后没有时间答题的情况出现。
总之，细胞工程考试虽然难度较大，但只要我们掌握好基本知识并紧密结合实践，认真备考，制定好合理的考试策略，突破自我，就可以取得优良的成绩。
细胞培养重点
4细胞培养研究的内容
⑴ 细胞内的活动：例如，能量的代谢、DNA转录、凋亡、蛋白质合成等。
⑵细胞内部与细胞外界之间的作用：例如， 细胞对外界刺激的反应、药物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等
⑶细胞与细胞之间的相互作用：例如，形态的改变、细胞与细胞之间的粘着作用、接触抑制、密度抑制等。
1体外培养（in vitro culture）：是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。
体外培养的三个层次：细胞培养，组织培养，器官培养
2细胞培养(Cell Culture)：是指从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。
（2）培养室和超净工作台的消毒
（3）洗手和着装：原则上须彻底洗手并按外科手术要求着装
（4）无菌培养操作
18无菌室的消毒：①紫外线照射1-2h /日（使用前）；
②甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸2h / 周；
③新洁尔灭擦拭地面和墙壁1次 / 月。
实际工作中，要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。
（2) 成纤维细胞型：细胞的形态类似于在体内生长的成纤维细胞。
A, 来源 ：凡由中胚层的组织细胞，如纤维结缔组织、心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。
B,细胞形态：成纤维细胞形态为，具有长短不等的数个细胞突起，因而多成梭形、不规则三角形或扇形，核为卵圆形位于靠近胞质的中央。
C，细胞生长特点：细胞一般并不紧靠相连成片，而是排列为旋涡状、放射状或似栅栏状。
⑶无菌操作间 — 专用于无菌操作、细胞培养
①大小要适当，其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；②墙壁光滑无死角以便清洁和消毒；
细胞培养考试重点整理 南方医科大学
细胞培养cell culture:从活体中取出细胞活其它建系细胞，在体外使之能继续生存﹑生长甚至增值的一种方法。
细胞融合：指两个或两个以上的细胞合并成为双核或多核细胞的过程。
细胞系cell line:原代培养物经首次传代成功后形成的。
细胞株cell strain:通过筛选或克隆化，具有特殊性质或特异标记的细胞且这些特异在以后的培养中必须持续存在。
原代培养primary culture:从机体取得材料细胞组织或器官，在培养瓶内培养到第一次传代前，即为原代培养或初代培养。
传代培养passage:将细胞从一个培养瓶容器移植到另一培养容器中培养。
贴壁依赖性：细胞培养过程中的特性，有大部分细胞在生长过程中都是贴壁生长的就是要附着在培养用的器皿上。
细胞对培养用器皿的附着能里的不同就是细胞贴壁性能代表了细胞的活力。
贴壁率seeding effifiency:在一定时间内，接种细胞贴附于培养器皿表面的百分率，但应当说明培养时的培养条件。
体外转化in vitro transformation:细胞在体外培养过程上中发生与原代细胞形态﹑抗原﹑增殖或其他特性的可遗传的变化。
细胞周期：细胞每一次增殖所经历的全过程称为细胞的增殖周期，理论上，细胞每经过一个增值周期，在数量上就增加一倍。
1.细胞冻存与复苏的原则？慢冻快融，以最大限度的保存细胞活力。
慢冻，主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶，对细胞造成损害，加DMSO也是这个原理。
快融。
主要是防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用，快速使细胞进入复苏和生长状态。
分别经过4度，-20度，-80度和液氮的依次过程进行冻存；经过37度水浴1分钟之内解冻细胞冻存液进行复苏。
2. 玻璃器皿的清洗（新买的和用过的）玻璃器材清洗要领有煮沸﹑刷洗﹑冲洗﹑酸泡和浸泡步骤如下a.刷洗：热水浸泡过用软毛刷带热刷洗瓶内外和盖子使用面；b.冲洗：流水振荡冲洗15-20次；c酸泡：器材50度烤干后清洁液（高锰酸钾﹑重铬酸钾﹑去离子水）酸泡24h；d.浸泡：酸泡器材冲洗沥水后用去离子水浸泡2次每次24h。
大学《细胞工程》期末考试复习重点、考点总结
细胞工程期末复习（必考）细胞工程：研究真核细胞的核—质关系以及细胞器、细胞质基因转移的技术。
组织工程：研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。
染色体工程：是按照一定的设计，有计划的消减添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。
细胞连接：使细胞间的联系结构。
细胞表面的特化结构或特化区域，是细胞间建立长期组织上联系的结构基础。
涉及细胞外基质蛋白、跨膜蛋白、胞质溶胶蛋白、细胞骨架蛋白等。
细胞全能性：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体成长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。
包括时间和空间上的分化。
脱分化：又称去分化，指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。
即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。
再分化：是指在离体条件下，无序生长的脱分化细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。
细胞培养：指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌适当的条件使其生长繁殖的技术。
人工种子：又称合成种子或体细胞种子，指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。
植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
试管受精：指在无菌条件下离体培养未受精子房或胚珠和花粉萌发产生的花粉管进入胚珠从而完成受精过程。
细胞核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。
体外受精：指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。
胚胎移植:指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵但为配种的受体母畜输卵管或子宫的技术。
人工受精：指将采集的精子注入人发情处理的母体内完成受精过程。
试管婴儿：指将卵子与精子取出在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回母体子宫内发育出生的婴儿，也就是采用体外受惊联合胚胎移植技术培育的婴儿。
细胞培养技术考试重点
细胞培养技术考试重点名词解释：1.群体倍增时间：细胞指数增长期时，细胞群倍增所需的时间。
是由于表示群体细胞指数生长期内细胞分裂活动的程度，是判断细胞生长是否旺盛的重要指标。
2.接触抑制（contact inhibition）：细胞相互接触后失去运动的现象。
3.密度抑制（density inhibition）：由于细胞密度过大，培养液营养耗尽，代谢产物过多和生存空间消失所引起的细胞增殖的抑制现象。
4.肿瘤干细胞(tu mor stem cells，TSC)表现为一种特殊类型的干细胞，具备高度增殖能力与自我更新能力，也具备多向分化的潜能。
TSC增殖过程中，通过不均一分裂，一个TSC分裂形成一个新的TSC 和另一个可最终分化为包括肿瘤细胞在内的各种细胞的子细胞，其结果是维持TSC数目稳定并产生肿瘤。
5.细胞汇合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。
6.饱和密度(Saturation density)：在特殊培养条件下，每平方厘米(单层培养)或每毫升细胞悬液内可达到的最大细胞数。
7.二倍体细胞系或株(Diploid cell line or strain)：具有二倍体染色体数的细胞系或株。
8.二倍体(Diploid)：指双倍数的染色体数或具有此数的细胞系。
9.组织工程：是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
10.细胞融合(Cell fusion)：指两个独立的细胞借媒介物(PEG等)融合成杂种细胞的过程。
11.细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。
12.三维培养：把细胞悬液接种在一定立体形态的支架上，使细胞生长在三维环境中的培养方法。
13.平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS）：简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生量盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体。
南方医科大学 《细胞生物学》习题及解答
《细胞生物学》习题及解答第一章绪论本章要点：本章重点阐述细胞生物学的形成、发展及目前的现状和前景展望。
要求重点掌握细胞生物学研究的主要内容和当前的研究热点或重点研究领域，重点掌握细胞生物学形成与发展过程中的主要重大事件及代表人物，了解细胞生物学发展过程的不同阶段及其特点。
一、名词解释1、细胞生物学cell biology2、显微结构microscopic structure3、亚显微结构submicroscopic structure4、细胞学cytology5、分子细胞生物学molecular cell biology二、填空题1、细胞生物学是研究细胞基本规律的科学，是在、和三个不同层次上，以研究细胞的、、、和等为主要内容的一门科学。
2、年英国学者第一次观察到细胞并命名为cell；后来第一次真正观察到活细胞有机体的科学家是。
3、1838—1839年，和共同提出：一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物的。
4、19世纪自然科学的三大发现是、和。
5、1858年德国病理学家魏尔肖提出的观点，通常被认为是对细胞学说的一个重要补充。
6、人们通常将1838—1839年和确立的；1859年确立的；1866年确立的，称为现代生物学的三大基石。
7、细胞生物学的发展历史大致可分为、、、和分子细胞生物学几个时期。
三、选择题1、第一个观察到活细胞有机体的是（ B ）。
a、Robert Hookeb、Leeuwen Hoekc、Grewd、Virchow2、细胞学说是由（ C ）提出来的。
a、Robert Hooke和Leeuwen Hoekb、Crick和Watsonc、Schleiden和Schwannd、Sichold和Virchow3、细胞学的经典时期是指（ C ）。
a、1665年以后的25年b、1838—1858细胞学说的建立c、19世纪的最后25年d、20世纪50年代电子显微镜的发明4、（ D ）技术为细胞生物学学科早期的形成奠定了良好的基础。
细胞学实验考试总结
名词解释1.渗透压：水从低渗溶液穿过半透膜进入高渗溶液时产生的压力。
水分子通过半透膜向溶液扩散的现象称为渗透现象，简称渗透；溶液促使膜外水分子向内渗透的力量即为渗透压。
2.高渗：体内的渗透压高于体外，水由环境中向体内扩散，体内的盐分向外扩散。
通过排泄作用排出多余的水，盐分通过食物和组织摄入。
3.低渗：体内的渗透压低于体外，水由体内向环境中扩散，环境中的盐分向内扩散。
水和钠同时缺失，但缺水少于缺钠，血清钠低于正常范围，细胞外液呈低渗状态4.凝集素：是一类含糖的并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
5.差速离心：利用不同物质沉降速率的差异，在不同离心速度下分离和收集不同颗粒的离心技术。
常用于分离细胞匀浆中的各种细胞器。
6.荧光：某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光，这种光成为荧光。
7.自发荧光：有些生物体内的物质受激发光照射后可直接发出荧光，成为自发荧光。
8.次生荧光：有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光材料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光。
9.活体染色：是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无害的一种染色方法。
分为体内染色和体外染色（超活染色）。
10.细胞培养：在实验室中用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养，使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
11.组织培养：从机体分离出的组织或细胞在体外人工条件下培养生长的技术。
12.原代细胞培养：是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直接到第一次传代为止。
13.传代细胞培养：是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移接种到另一培养瓶的培养。
细胞培养考试重点整理
细胞培养考试重点整理第一章绪论体外培养（IN VITRO CULTURE）：是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或活体器官等）甚或活的个体从体或其寄生体取出，模拟体的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下使之存活和生长发育的方法。
按照体外培养的结构成分，可将体外培养人为分为：组织培养（tissue culture）指从生物体取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。
细胞培养（cell culture）指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。
器官培养（organ culture）指从生物体取出活的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或者器官原基在体外进行培养的方法。
单一化现象组织培养过程中，培养组织不能在体外长期维持其结构和功能，培养的时间长，经过反复传代，细胞出现单一化现象——趋向单一类型的细胞——最终成为细胞培养。
体培养（IN VIVO CULTURE)：将活体结构成分（如活体组织、活体细胞、活体器官等）甚至活的个体从体或其寄生体取出，放在其他生物体让其生长和发育的方法。
最常见的体培养方式就是移植（trans-plantation）。
体外培养技术创立代表性的人或者实验H ARRISON的工作，较为完善地建立了体外培养活体组织的培养体系，第一次较为系统地观察了体外培养活体组织的结果。
被公认为是体外培养技术的的开始。
标志着体外培养技术的创立，标志着盖玻片悬滴培养法的建立，标志着神经组织体外培养的开始，也标志着神经突起是由神经细胞长出的这一重论的诞生。
C ARREL对体外培养的贡献：◆将无菌操作观念引入体外培养过程中。
◆将培养组织包埋技术、营养供应以及继续培养（也称传代或继代培养）等许多重要的培养条件和方法引入盖玻片悬滴培养系统，从而完善了Harrison的方法。
◆发现鸡胚浸液能明显地促进多种细胞的体外生长。
◆设计卡氏培养瓶减少了污染，扩大了细胞生存空间。
现在一般认为体外培养技术是从Harrison和Carrel真正开始的。
细胞培养学笔记(2)
细胞培养学笔记（2）一、组织培养的基本操作和培养技术1.培养操作基本要领和要求（1）无菌操作:防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。
(2)培养前准备:a.操作野消毒: 室内及台面紫外消毒,主要用于消毒台面上用品。
紫外灯照射期间,在操作台面上勿置培养细胞和培养用液等物,以免受射线影响必要时可用纸张覆盖。
物品相互遮挡射线,会降低消毒效果。
b.洗手和着装:利用净化台需着白服；在无菌室内工作需着消毒衣帽。
c.火焰消毒:在无菌环境进行培养或做其它无菌操作时,首先要点燃酒精灯。
以后一切操作,如安装吸管帽、启开或封闭瓶口等,都需经过火焰烧灼进行。
注意:金属器械不能在火焰中烧的时间过长,以防退火。
烧过的金属镊等要待冷却后才能挟取组织,以免造成组织损伤。
已吸取过营养液的吸管不能再用火焰烧灼,因吸管头中残留营养液能烧焦形成炭膜,再用时会把有害物带入培养液中。
(3)培养操作:动作准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染机会。
不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒触及部,如不便消毒时,应取备品更换。
为便于拿送用品,工作台面上的用品要有合理的布局,酒精灯置于中央。
要保持一定顺序性,组织或细胞未做处理之前,勿过早暴露在空气中,培养液未用前,不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用,应立即封闭瓶口。
吸取营养液、BSS、细胞悬液及其它各种用液时,均应分别使用吸管,不能混用,以防扩大污染或导致细胞交叉污染。
工作中不能面向操作野讲话或咳嗽,以免发生污染。
2.基本培养操作技术(1)取材:a.取鸡胚组织:方法与前述取鸡胎汁法相同。
b.取鼠胚组织:引颈法杀死动物; 浸入盛有75%酒精的烧杯中,置2-3秒钟后,取出,使体表灭菌,置入碟皿中,在动物躯干中部用尖剪刀环行切开皮肤,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾两端,把动物躯体翻包起来,暴露出胸腹部,剖腹取出鼠胚或其它组织,置无菌碟皿中备用。
注意:小鼠在酒精中浸泡时间不能过长,以免酒精从口或其它孔道侵入体内影响组织活性。
细胞工程知识点及重点难点总结
第一章绪论1、细胞工程的概念，广义的细胞工程，狭义的细胞工程，细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。
广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。
2、细胞工程的研究内容（研究生物类型，实验操作对象）根据研究生物类型不同，细胞工程可分为动物细胞工程、植物细胞工程、微生物细胞工程。
动物细胞工程包括：细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；细胞融合技术；胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等）；克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。
植物细胞工程包括：植物组织、器官培养技术；细胞培养技术；原生质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。
3、细胞工程的重要应用（植物、动物）植物细胞工程的应用：脱毒和快速繁殖细胞工程育种：利用培养变异，筛选优良突变体利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植株，克服其杂交不亲和性利用细胞融合技术，克服远缘杂交不亲和性倍性育种离体种质保存细胞培养生产有用物质动物细胞工程的应用动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体）新品种培育试管动物与婴儿组织工程珍稀动物资源的保存与保护细胞工程基础1、细胞分化：个体细胞发育过程中，后代细胞在形态、结构和生理功能上发生差异的过程。
2、发育潜能：指细胞分化能力的强弱。
3、细胞全能性：指细胞具有发育成完整个体的潜能。
4、细胞多能性：指随着胚胎发育，有的体细胞失去全能性，具有分化出多种组织的潜能。
5、去分化：又称脱分化，指某些条件下分化细胞不稳定，又回到未分化状态的这一过程6、愈伤组织：脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为愈伤组织。
愈伤组织的种类胚性愈伤组织（Embryoneniccallus）：表面光滑、组织结构紧凑、细胞小、再生力强。
南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结
一. 细胞培养技术的概念,简史在体外对细胞培养并进行研究的技术, 也叫细胞克隆技术. 细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养技术主要包括二大方面内容:1.微生物细胞培养技术2.动, 植物细胞培养技术：1) 器官培养技术 2) 组织培养技术 3) 细胞培养技术二. 细胞培养的优点1.得到的是活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动2.可控制：（1）可控制-选择对象：类型：上皮？间质？性质：正常？肿瘤？（2）可控制-调节条件：各种因素:物理、化学、生物等因素（3）可控制-利用方法。
采用各种研究技术、记录方法：研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记--记录：摄影照片、缩时电影、电视--3. 应用广（1）学科多：（2）对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类；一种动物：不同年龄；不同组织: 正常或异常（肿瘤）4.较经济：花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象5. 不易污染环境三、细胞培养的缺点1. 现人工无法完全模拟体内环境：a. 失去彼邻关系b.失去神经体液的调节和细胞相互间的影响2. 细胞趋向单一化3.失去原有组织结构和细胞形态4.分化减弱或不显：要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。
5. 某些类型细胞还很难培养6.大规模培养难度大四. 体外细胞培养的方式1.粘附型培养: 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
粘附是大多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式2.悬浮型培养: 不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。
来源:来自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以.特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团优点 : 生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态.缺点:观察不方便, 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)五.体外培养细胞的生长形态分类根据形态大致的不同，主要2类：1.上皮样：来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物, 消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状2.成纤维细胞样：培养中形态与成纤维细胞类似。
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一. 细胞培养技术的概念,简史在体外对细胞培养并进行研究的技术, 也叫细胞克隆技术. 细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养技术主要包括二大方面内容: 1.微生物细胞培养技术 2.动, 植物细胞培养技术：1) 器官培养技术 2) 组织培养技术 3) 细胞培养技术二. 细胞培养的优点 1.得到的是活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动 2.可控制：（1）可控制-选择对象：类型：上皮？间质？性质：正常？肿瘤？（2）可控制-调节条件：各种因素:物理、化学、生物等因素（3）可控制-利用方法。
采用各种研究技术、记录方法：研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记-- 记录：摄影照片、缩时电影、电视-- 3. 应用广（1）学科多：（2）对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类；一种动物：不同年龄；不同组织: 正常或异常（肿瘤）4.较经济：花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象 5. 不易污染环境三、细胞培养的缺点 1. 现人工无法完全模拟体内环境： a. 失去彼邻关系b.失去神经体液的调节和细胞相互间的影响 2. 细胞趋向单一化 3.失去原有组织结构和细胞形态 4.分化减弱或不显：要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。
5. 某些类型细胞还很难培养 6.大规模培养难度大四. 体外细胞培养的方式 1.粘附型培养: 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
粘附是大
多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式 2.悬浮型培养: 不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。
来源:来自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以. 特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团优点: 生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态. 缺点:观察不方便, 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞) 五.体外培养细胞的生长形态分类根据形态大致的不同，主要2类： 1.上皮样：来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物, 消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状 2.成纤维细胞样：培养中形态与成纤维细胞类似。
来源：中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。
3.其它，不定型
六. 常用术语1.细胞系（cell line）：原代培养物首次传代后，就可以称细胞系。
不能或有限传代下去称有限细胞系。
能连续传代的称连续细胞系。
2.细胞株：某类细胞经传代克隆并保持了该类细胞理化特征的细胞群体。
3.原代培养：直接取自生物体的组织细胞并进行培养 4.传代培养：将细胞从一个培养物内分散到另一个培养物的过程。
5.转染（transfection）：将某个基
因转移到培养细胞核内。
6.lipofection：常用细胞转染剂（脂质体），它搭载基因（DNA）后形成复合物可转染到动物细胞。
第二章细胞培养的条件及设备一、细胞培养室二、常用设备1. 超净工作台； 6. CO2培养箱(孵箱)； 11. 显微镜 2. 纯水装置；
7. 液氮生物容器； 12. 过滤装置 3. 抽气泵； 8. 冰箱； 13. 空调4. 消毒装置； 9. 离心机 14. 酸度计 5. 干燥装置； 10. 天平 15. 干燥器三、常用消耗器材1.培养瓶及各种相关玻璃用品、塑料用品和棉制品 2.手术器材四、培养用液 1.天然培养基（液）：血清、鸡胚浸出液、鼠尾胶 2.人工合成培养液：合成培养基、平衡盐溶液、缓冲液、蒸馏水、消化液和抗菌素等五、消耗性器皿的清洗、包装及消毒
第三章细胞培养基本技术一、原代培养基本技术：取材→漂洗→剪切→消化→计数→接种二、传代培养技术：去旧换新液→消化→分装三、细胞冻存及复苏技术
培养液高度：2.5~3.0mm 第四章每代细胞基本的生长过程一. 游离期：细胞接种后最初一段时间, 细胞在培养基中呈悬浮状, 胞体圆形二. 贴壁期：细胞附着于支持物上三. 潜伏期：四. 指数增长期影响因素 1. 细胞种类 (附着最强)巨噬细胞(30’)一成纤维细胞——上皮细胞——血细胞(最弱) 2. 生物因素血清、培养液中的促附着因子 3. 机械，物理等离心：促进附着流动：培养液流动可阻止细胞附着低温：可抑制附着增加细胞粘附的措施（因素） 1.增加支持物粘附性 a. 赖氨酸
类 b. 血清 c. 某些生物活性物质,纤维性物质 d. 减少接种时细胞悬液的量待细胞粘附和贴壁之后，再补充足够的培养液 e. 减少培养液中血清的含量使培养液黏度降低 f. 培养液中离子成分及其浓度如，培养液中的Ca含量过低时不利于细胞的粘附、贴壁和铺展g. 培养液的温度低温会减低细胞的活动，妨碍黏附和贴壁伸展过程细胞悬浮在培养液中时，近似球体形状当接触坚硬平面即铺展于底物上，扁平状与底物形成很多接触点
伸展分几个阶段 (1)开始阶段开始附着铺开细胞附着于底物球形的细胞，下方表面与底物接触成扁但尚未形成新的伪足(2)放射状铺展阶段在球形细胞体的周围形成很多伪足隆起伪足形状主要柱形丝状: 直径0.2-0.5um 长10-20 扁平片状: 厚0.1-0.5 宽2-5 尚有: 小泡状叶状: 直径1-2 开始时: 絲状多以后片状增加许多伪足形成薄的胞质小片牢固贴于底物胞体中央部分扁整亇细胞扁平 (3) 极化阶段细胞最后伸展附着的情况实验：用多种细胞，以显微操作及缩时电影定位细胞附着于玻璃和聚苯乙烯情况检测--显微针头—结果：附着规律附着点：附着规律几乎未见于细胞的中央区 (如不在核之下) 总在边缘，边缘”摆动”活动的部位凸的边缘在薄的边缘附着区：约为细胞下面表面的15-35％附着、伸展的条件底物细胞能在很多固体表面附着最终铺展的程度，取决于底物的性质
影响因素：活性物质(贴附、伸展因子):血清、培养液中，或细胞分泌的生物活性物质被底物吸附后可利于细胞的铺展细胞借助这些分子,可附着于各种”非特异性”的底物上如Fn，胶原，聚赖氨酸机械，物理因素三. 潜伏期
细胞活着但无分裂. 细胞株6—24h 原代24—四. 指数(对数)增长期细胞增殖旺盛, 数量成倍增多, 最适合实验研究. 3—5d以后来到判断方法细胞群体倍增时间细胞分裂指数五. 停止期(衰退期细胞长满瓶壁, 有活力, 不增殖, 能存活一段时间. 如传代进入下一循环. 传代培养到一定的代数时，细胞的生命活动明显减弱。
即使及时传代也无效表明培养物已经进入衰退期，再向前发展，只有退化、死亡接触抑制和密度依赖性生长仰制增殖的密度抑制实验方法：3T3细胞，接种105于6cm培养皿，5d细胞计数于加入10％、20％、30％牛血清的培养液中，结果：。