临床酶学检验技术ppt课件
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酶学分析技术PPT课件
酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应速度才能准确代表酶活性。
酶促反应初速度
酶活性
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酶的含量
五、酶促反应底物动力学
中间产物学说：
酶促反应进行时，酶首先与底物结合为中间产物，然后再催 化底物反应生成产物。E + S ES → E + P
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米-曼氏方程：
Vmax〔S〕 v = —————
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第一节 酶活性测定的基本知识
酶活性的概念 酶活性单位 酶活性单位的计算 酶促反应进程 酶促反应底物动力学
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一、酶活性的概念
酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物
的生成量。
v =-d〔S〕/dt 或 v =d〔P〕/dt。
底物浓度为〔S〕,产物浓度为〔P〕,时间为t，反应速度为v
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(三)Vmax的应用
定义 ： Vmax指酶完全被底物分子饱和时的反应速度。
应用：
Vmax可用来计算酶的转化率（TN），即单位时间内每分子 酶可使底物发生化学反应的分子数，单位为分子数/秒。当反 应速度达到最大反应速度时，如果已知酶量，则可计算出酶的 转化率：
TN =底物转化量（mol/s）/酶量（mol）
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三、酶活性测定在临床诊断中的应用
（一）在肝脏疾病诊断中的应用 （二）在急性心肌梗死诊断中的应用 （三）在急性胰腺炎诊断中的应用 （四）在骨骼疾病诊断中的应用 （五）在肌肉疾病诊断中的应用 （六）在前列腺疾病诊断中的应用 （七）在肿瘤诊断中的应用
四、同工酶的诊断价值
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三、酶活性单位的计算
酶促反应初速度
酶活性
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酶的含量
五、酶促反应底物动力学
中间产物学说：
酶促反应进行时，酶首先与底物结合为中间产物，然后再催 化底物反应生成产物。E + S ES → E + P
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米-曼氏方程：
Vmax〔S〕 v = —————
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第一节 酶活性测定的基本知识
酶活性的概念 酶活性单位 酶活性单位的计算 酶促反应进程 酶促反应底物动力学
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一、酶活性的概念
酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物
的生成量。
v =-d〔S〕/dt 或 v =d〔P〕/dt。
底物浓度为〔S〕,产物浓度为〔P〕,时间为t，反应速度为v
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(三)Vmax的应用
定义 ： Vmax指酶完全被底物分子饱和时的反应速度。
应用：
Vmax可用来计算酶的转化率（TN），即单位时间内每分子 酶可使底物发生化学反应的分子数，单位为分子数/秒。当反 应速度达到最大反应速度时，如果已知酶量，则可计算出酶的 转化率：
TN =底物转化量（mol/s）/酶量（mol）
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三、酶活性测定在临床诊断中的应用
（一）在肝脏疾病诊断中的应用 （二）在急性心肌梗死诊断中的应用 （三）在急性胰腺炎诊断中的应用 （四）在骨骼疾病诊断中的应用 （五）在肌肉疾病诊断中的应用 （六）在前列腺疾病诊断中的应用 （七）在肿瘤诊断中的应用
四、同工酶的诊断价值
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三、酶活性单位的计算
酶学检测在临床上的应用ppt课件.ppt
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
本节内容
❖ 一、体液酶测定在临床诊断中的作用 ❖ （一）病变的组织或器官定位 ❖ （二）临床疾病病理过程评估 ❖ （三）组织细胞损伤程度诊断 ❖ （四）临床疾病的诊断 ❖ （五）同一器官内疾病的鉴别诊断 ❖ 二、临床酶学在临床诊断中的应用 ❖ 三、同工酶及其亚型检测的临床意义
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
一、体液酶测定在临床诊断中的 作用
❖ 通过对体液酶的测定，临床上可从中获得许 多有用信息，如样本中酶浓度水平。由于酶 活性水平与多种原因有关，对已获得的信息， 还需经过综合分析和解释，才可为临床诊断 提供依据。
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临床常用的同工酶及其亚型检测的临 床意义
谢谢!
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（一）病变的组织或器官定位
❖ 组织或器官的损伤定位可采用组织特异性酶 的检测、同工酶的分析、与症状相适应的酶 的形式的评价等方法进行诊断。这里所说的 组织特异性酶是指仅在特定组织中出现或在 特定组织内有极高的活性的酶。当这些酶释 入血液中增加时，表明有特定组织损害。通 过对同工酶（例如淀粉酶、CK-MB、LD1） 的分析，可以更明确地知道增加的酶由来自 何种组织或器官。
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酶学分析技术课件优秀课件
·L·V标
实际保温时间
四、酶促反应进程
酶促反应进程曲线
酶量的测定：
通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确 测定酶量，应使酶浓度（〔E〕）与酶促反应速度成 正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。 能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速 度，即酶促反应初速度。
酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应 速度才能准确代表酶活性。
(四)Km和Vmax的测定
1．Linweaver-Burk作图法,又称为双倒数作图法
1 Km +〔S〕 Km 1
1
—— = ————— = ——— · —— + ———
v Vmax〔S〕 Vmax 〔S〕 Vmax
2．Cornish-Bowden作图法 又称为直线线性作图法。
第二节 酶活性测定方法及酶学分析的类型
酶促反应初速度
酶活性
酶的含量
五、酶促反应底物动力学
中间产物学说：
酶促反应进行时，酶首先与底物结合为中间产物，然后再催
化底物反应生成产物。E + S ES → E + P
米-曼氏方程：
Vmax〔S〕 v = —————
〔S〕+ Km
上式中v代表反应速度，Vmax代表最大反应速度， 〔S〕代表底物浓度，Km称为米氏常数。
特点： 优点是简单。 缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。
注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般以30～60分 钟为宜。
（二）连续监测法
定义：测定底物或产物随时间的变化量，又称为速率法。
原理：
该方法每隔一定时间（10s～60s）测定一次底物或产 物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对时间作图 ，绘制反应速度曲线。
生物化学检验中酶测定PPT课件
心脑血管疾病酶测定
要点一
总结词
心脑血管疾病酶测定有助于评估心脑血管系统的健康状况 。
要点二
详细描述
心脑血管疾病酶测定包括肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶 （CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）等指标的检测，这些酶在 心肌和骨骼肌中有特定的生理功能，当心脑血管系统受损时， 酶的活性会发生变化，通过测定这些酶的活性，可以判断心 脑血管系统的健康状况，对于心脑血管疾病的诊断和治疗具 有重要的意义。
04
酶测定在临床诊断中的应用
肝病酶测定
总结词
肝病酶测定是生物化学检验中的重要部分，用于评估肝功能状况。
详细描述
肝病酶测定包括谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）等指标的检测，这些酶 在肝脏中有特定的生理功能，当肝脏受损时，酶的活性会发生变化，通过测定这些酶的活性，可以判断肝 脏的功能状况，对于肝病的诊断和治疗具有重要的意义。
酶测定的重要性
酶是生物体内重要的生物催化剂，参与生物体的代谢和调控过程 。通过酶测定可以了解酶的活性、含量以及性质，进而了解生物 体的代谢状态和生理功能，为疾病诊断、治疗和药物研发提供科 学依据。
酶测定在生物化学检验中的应用
01 02
临床诊断
酶测定在临床诊断中广泛应用，如肝功、肾功、心肌酶谱等检测项目， 通过对特定酶的活性检测，可以判断相应器官的功能状态，辅助医生进 行疾病诊断。
详细描述
比色法是一种通过测量酶催化 反应后生成物的颜色变化来计 算酶活性的方法。该方法操作 简便，设备简单，适合大批量 样本检测，因此在生物化学检 验中广泛应用。
总结词
对试剂要求高、误差较大
详细描述
比色法对试剂的质量和浓度要 求较高，否则会影响检测结果 的准确性和可靠性。同时，由 于不同颜色的生成与酶活性之 间可能存在非线性关系，因此 该方法可能存在较大的误差。
《酶学分析技术》课件
04 酶学分析技术的应用实例
在生物工程领域的应用
通过酶学分析技术，可以深入了解生物分子的 结构和功能，为生物工程领域的研究提供有力
支持。
在生物工程领域中，酶学分析技术对于新药研发、疫 苗生产、生物制品质量控制等方面也具有重要意义。
酶学分析技术在生物工程领域中有着广泛的应 用，如蛋白质组学研究、基因表达分析、代谢 组学研究等。
《酶学分析技术》PPT课件
目录
• 酶学分析技术概述 • 酶的分类与特性 • 酶学分析技术的基本原理 • 酶学分析技术的应用实例 • 酶学分析技术的未来展望
01 酶学分析技术概述
酶学分析技术的定义与特点
总结词
酶学分析技术是一种利用酶的催化特性进行物质检测和分析的方法，具有高特异性、高灵敏度和高选择性等特点 。
详细描述
通过改进酶的提取和纯化技术、酶的固定化 技术、酶反应动力学研究等手段，可以提高 酶学分析技术的准确性和灵敏度。同时，创 新性的酶学分析方法和技术也将不断涌现， 例如酶联免疫分析、酶传感器、酶反应动力
学分析等。
酶学分析技术在其他领域的应用拓展
总结词
随着酶学分析技术的不断发展和完善，其应用领域将 不断拓展，为其他领域的发展提供有力支持。
详细描述
酶学分析技术是利用酶的生物催化作用，通过测量反应产物或底物浓度变化来推算酶活性或酶含量的技术。由于 酶具有高特异性、高灵敏度和高选择性等优点，因此酶学分析技术在生物、医学、农业、工业等领域具有广泛的 应用价值。
酶学分析技术的应用领域
总结词
酶学分析技术广泛应用于生物、医学、农业、工业等领域，如临床生化检验、食品安全 检测、环境保护等。
详细描述
酶学分析技术不仅在生物工程、制药、环保等领域有 广泛应用，还可以应用于食品安全检测、农业残留检 测、生物安全等领域。随着技术的进步和应用需求的 增加，酶学分析技术的应用领域将进一步扩大。
酶学检测技术-精品医学课件
Katal单位：1979年国际生化协会为了使酶活性单
位与国际单位制（SI）的反应速率相一致，推荐用 Katal单位。即在规定条件下，每s时间内催化转 化1摩尔底物的酶量。1 katal=1 mol·s-1。
我国法定计量单位制中的酶催化活性单位katal，其 对血清中酶量而言显然过大，故常用单位为 μkatal或 nkatal。1 katal=60×106 U，1 U=1 μmol·min-1=16.67 nmol·s-1=16.67 nkatal。
ALTs, ALTm ASTs, ASTm GP-BB, GP-LL, GP-MM (GP1,GP2,GP3)
心梗、肌病、颅脑损伤、肿瘤
心梗、肌病、肺梗死、肝病、 肿瘤
肝胆疾病、骨病、妊娠、结肠 炎、肿瘤
前列腺癌、血液病、骨肿瘤 肝癌、梗阻性黄疸 心梗、肝病 心梗、肝病
心梗、脑损伤、肾病、肌病
转氨酶及其同工酶 AST ：按含量多少顺序为心、肝、骨骼肌 和肾等。肝中70%存在于肝细胞线粒体中。 AST有两种同工酶ASTs 和ASTm，分别存 在于可溶性的细胞质和线粒体。血清AST 活性升高，多来自心肌或肝脏损伤。
按检测方法分类——底物或产物浓度的检测
测定项目 胆碱酯酶 脂肪酶
淀粉酶 丙氨酸氨基转移酶 丙氨酸氨基转移酶 丙氨酸氨基转移酶
方法原理 氯化乙酰胆碱做底物产生乙酸根
三油酸甘油酯悬乳液做底物，生成油酸甘油一 酯，浊度下降
淀粉做底物，一定时间后，剩余的淀粉不足以 使碘呈兰色
赖氏法 IFCC推荐法
固定化谷氨酸氧化酶膜生成过氧化氢，利用过 氧化氢电极
2.特点
主要优点 设备简单，操 作方便，检测过程中无需 恒温设备，用分光光度计 即可测定，也不用考虑显 色剂对酶活性的影响，是 早期常用方法。
诊断酶学的临床应用ppt课件
10
3 细胞酶
来源： （1）大部分可来自于各种组织
无器官专一性。 （2）小部分则来源于特定组织
有器官专一性。
11
3 细胞酶
主要的酶 （１） 一般代谢酶：
这些酶广泛分布于全身各种器官或组 织尤以心肌.肝脏.肾脏和骨骼肌等的含量 特别丰富，它们在血清中的浓度与其来 源细胞的更新速度有关。
12
3 细胞酶
它们和血浆蛋白一样，是肝脏合成蛋白 质功能的指标。 ②血清ChE和LCAT在各种肝病时的活力是 降低的。
43
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用
ChE： SchE—— 存 在 血 清 中 ， 又 称 非 特 异 性 胆 碱 脂 酸
（假胆碱脂酶，酰基胆碱酯分解酶） AchE——存在RBC内，又称乙酰胆碱脂酶（真胆
碱脂酶，细胞胆碱脂酶） 是农药有机磷中毒的指标
SchE下降快，恢复的也快，存有机磷中毒 时，同时做血清和全血的胆碱脂酶，可进行诊 断有机磷中毒的程度。
44
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用 中毒的程度： 危险警报：SchE轻度下降 AchE正常 中度中毒：SchE下降 AchE下降40% 重度中毒：SchE下降 AchE下降60%
35
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用
2．异柠檬酸脱氢酶 ICD 极度升高：急性病毒性肝炎↑10-40倍 一般升高：血清性及中毒性肝炎↑3-8倍 中度升高：慢性肝炎，肝癌，胆道梗阻， 肝硬变。 突然上升：妊娠时发生胎盘病变时。 不 增 高： 心肌梗塞时
因此ICD特异性略优于转氨酶
36
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用
21
二 血清酶的单位及生理差异.
(二) 血清酶活力的正常差异 2.年龄 酶的活力常随年龄而变化。 如AKP.ACP.LDH.CPK等儿童显著 高于成人。
3 细胞酶
来源： （1）大部分可来自于各种组织
无器官专一性。 （2）小部分则来源于特定组织
有器官专一性。
11
3 细胞酶
主要的酶 （１） 一般代谢酶：
这些酶广泛分布于全身各种器官或组 织尤以心肌.肝脏.肾脏和骨骼肌等的含量 特别丰富，它们在血清中的浓度与其来 源细胞的更新速度有关。
12
3 细胞酶
它们和血浆蛋白一样，是肝脏合成蛋白 质功能的指标。 ②血清ChE和LCAT在各种肝病时的活力是 降低的。
43
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用
ChE： SchE—— 存 在 血 清 中 ， 又 称 非 特 异 性 胆 碱 脂 酸
（假胆碱脂酶，酰基胆碱酯分解酶） AchE——存在RBC内，又称乙酰胆碱脂酶（真胆
碱脂酶，细胞胆碱脂酶） 是农药有机磷中毒的指标
SchE下降快，恢复的也快，存有机磷中毒 时，同时做血清和全血的胆碱脂酶，可进行诊 断有机磷中毒的程度。
44
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用 中毒的程度： 危险警报：SchE轻度下降 AchE正常 中度中毒：SchE下降 AchE下降40% 重度中毒：SchE下降 AchE下降60%
35
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用
2．异柠檬酸脱氢酶 ICD 极度升高：急性病毒性肝炎↑10-40倍 一般升高：血清性及中毒性肝炎↑3-8倍 中度升高：慢性肝炎，肝癌，胆道梗阻， 肝硬变。 突然上升：妊娠时发生胎盘病变时。 不 增 高： 心肌梗塞时
因此ICD特异性略优于转氨酶
36
第二节 血清酶测定在临床诊断中的应用
21
二 血清酶的单位及生理差异.
(二) 血清酶活力的正常差异 2.年龄 酶的活力常随年龄而变化。 如AKP.ACP.LDH.CPK等儿童显著 高于成人。
临床生物化学检验：第6章 临床酶学检验技术
• 理想缓冲液应具备的条件（1）有足够的缓冲容量。（2）纯度 高，不含抑制酶活性的杂质。（3）温度依赖性小。（4）对酶 活性有促进作用。（5）对酶有稳定作用。
• 2.最适pH 在一系列不同pH的反应体系中，酶促反应速度达 到最大时的pH称为最适pH。它不是酶的特征性常数。
• 3.离子强度 离子强度也影响酶的活性，一般选择与生理环 境的体液比较接近的离子强度。离子强度过高或过低均会 使酶活性下降。
• Km 酶的一个基本特征常数，它包含了酶与底物结合和解离 的性质。 Km与底物浓度、酶浓度无关，与pH、温度、离子 强度等因素有关。对于每一个酶促反应，在一定条件下都 有其特定的Km值，因此可用于鉴别酶。
❖米氏方程
米氏方程
v
V maxS Km S
改写为
v
dS
dt
Vm Km
axS S
dS(Km S) V maxS
IFCC推荐法测定ALT的反应进程
• 方法学原理： ALT
• L－丙氨酸+α－酮戊二酸 → 丙酮酸+L－谷氨酸 LDH
• 丙酮酸+NADH+H＋ → L－乳酸+NAD+ • 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中ALT酶活性呈
正比，在340nm波长监测吸光度的下降速率，计算出ALT的 活性单位。
dt
d
S
(
V
Km
maxS
V
1) max
dt
积分得：
t
2.303 Km V max
lg
S0 St
S0
V
St
max
[S0] 初始浓度， [St] 反应t时间后的浓度。
（二）酶促反应进程
• 2.最适pH 在一系列不同pH的反应体系中，酶促反应速度达 到最大时的pH称为最适pH。它不是酶的特征性常数。
• 3.离子强度 离子强度也影响酶的活性，一般选择与生理环 境的体液比较接近的离子强度。离子强度过高或过低均会 使酶活性下降。
• Km 酶的一个基本特征常数，它包含了酶与底物结合和解离 的性质。 Km与底物浓度、酶浓度无关，与pH、温度、离子 强度等因素有关。对于每一个酶促反应，在一定条件下都 有其特定的Km值，因此可用于鉴别酶。
❖米氏方程
米氏方程
v
V maxS Km S
改写为
v
dS
dt
Vm Km
axS S
dS(Km S) V maxS
IFCC推荐法测定ALT的反应进程
• 方法学原理： ALT
• L－丙氨酸+α－酮戊二酸 → 丙酮酸+L－谷氨酸 LDH
• 丙酮酸+NADH+H＋ → L－乳酸+NAD+ • 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中ALT酶活性呈
正比，在340nm波长监测吸光度的下降速率，计算出ALT的 活性单位。
dt
d
S
(
V
Km
maxS
V
1) max
dt
积分得：
t
2.303 Km V max
lg
S0 St
S0
V
St
max
[S0] 初始浓度， [St] 反应t时间后的浓度。
（二）酶促反应进程
《临床酶学检验技术》课件
临床诊断
酶学检验技术可用于检测疾 病标志物、酶活性和酶相关 疾病，促进早期诊断和治疗。
食品工业
酶学在食品加工中应用广泛， 如面包发酵、啤酒酿造和乳 制品制造等。
环境保护
酶学技术可以应用于废水处 理、生物降解和环境修复等 方面，有助于减少对环境的 污染。
酶学检验技术的分类
1 基础测定方法
通过测定酶的活性和底物浓度等指标来评估酶的功能和活性水平。
3
光信号检测
荧光检测仪器测量反应的光信号强度。
酶联免疫吸附实验的基础
酶联免疫吸附实验通过酶标记的抗体或抗原与目标分子结合，再通过酶催化 反应产生的信号来检测目标分子的存在或浓度。
3 环境污染监测
用于检测水、土壤和大气中的污染物，评估环境质量。
酶化学发光技术的原理
酶化学发光技术利用化学反应的能量转化为光信号，通过荧光检测仪器进行 定量分析，具有高灵敏度和宽动态范围等优点。
酶化学发光技术的检验过程
1
底物与酶结合
底物结合至酶表面，形成底物-酶复合物。
2
催化反应触发
催化反应激活底物，产生化学发光反应。
2 动力学测定方法
研究酶催化反应的速率和底物浓度之间的关系，揭示酶的动力学特性。
3 免疫学检验技术
利用抗体与酶结合反应的原理，检测特定抗原或抗体，用于疾病诊断和药物监测。
酶的工作原理
底物结合
酶与底物结合形成酶-底物复合 物。
催化反应
酶通过降低活化能，加速底物 转化成产物的反应速率。
产物释放
酶将产物释放，继续催化更多 底物转化。
酶标记技术的种类和优缺点
过氧化物酶标记
优点：灵敏度高、信号稳定；缺点：染色反应 耗时。
临床检验免疫学酶免疫技术课件
常用的供氢体(底物）： 邻苯二胺（O-phenylenediamine, OPD）:反应显橙黄
色，应避光，致癌性 四甲基联苯胺（3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, TMB）:
反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性，但水溶性差 ABTS (2,2'-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)
反应后，结合与固相载体上复合物中被测定的 酶标Ag（Ab）的量（酶活性）与样品中非标记 Ag（Ab）的浓度成反比
四）捕获法(capture ELISA )：
主要用于 血清中某种抗体亚型成分的测定 检测IgM抗体最常用方法
原理：
（三) 结果分析：
1、定性
• 间接法与夹心法：正相关 竞争法：反相关
4℃过夜
弃包被液，PBS清洗
保存备用。
三）封闭(blocking)
1、定义：包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被 的过程
2、常用的封闭剂：1％～5％牛血清白蛋白
二、酶免疫技术分类
Ag-E + Ab E-Ag Ab + Ag-E
EE
E
E
三、酶联免疫吸附试验
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
待测抗原或抗体量与产物量呈负相关
基本原理
测定抗原:
测定抗体
特点：
用于抗原和半抗原的定性、定量测定，也可对 抗体进行测定
酶标Ag（Ab）与样品或标准品中的非标记Ag （Ab）具有相同的与固相Ab(Ag)结合的能力
反应体系中，固相Ab（Ag）和酶标Ag（Ab）是 固定限量的，且前者的结合位点少于酶标记与 非标记Ag（Ab）的分子数量和
色，应避光，致癌性 四甲基联苯胺（3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, TMB）:
反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性，但水溶性差 ABTS (2,2'-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)
反应后，结合与固相载体上复合物中被测定的 酶标Ag（Ab）的量（酶活性）与样品中非标记 Ag（Ab）的浓度成反比
四）捕获法(capture ELISA )：
主要用于 血清中某种抗体亚型成分的测定 检测IgM抗体最常用方法
原理：
（三) 结果分析：
1、定性
• 间接法与夹心法：正相关 竞争法：反相关
4℃过夜
弃包被液，PBS清洗
保存备用。
三）封闭(blocking)
1、定义：包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被 的过程
2、常用的封闭剂：1％～5％牛血清白蛋白
二、酶免疫技术分类
Ag-E + Ab E-Ag Ab + Ag-E
EE
E
E
三、酶联免疫吸附试验
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
待测抗原或抗体量与产物量呈负相关
基本原理
测定抗原:
测定抗体
特点：
用于抗原和半抗原的定性、定量测定，也可对 抗体进行测定
酶标Ag（Ab）与样品或标准品中的非标记Ag （Ab）具有相同的与固相Ab(Ag)结合的能力
反应体系中，固相Ab（Ag）和酶标Ag（Ab）是 固定限量的，且前者的结合位点少于酶标记与 非标记Ag（Ab）的分子数量和
临床酶学检验技术 ppt课件
PPT课件
27
第五节 药物浓度测定常用技术及评价
色谱法
气相色谱法（gas chromatograph,GC）和高效 液相色谱法（HPLC）在TDM中得到广泛应用。 HPLC 和GC 相比，不需对检测组分高温气化， 一般都不必进行衍生处理；且HPLC的固定相种 类较多，流动相的组成和比例更是千变万化，二 者适当组合，可对绝大多数有机化合物药物进行 分离测定。因此，HPLC为TDM的推荐方法，并 常用作评估其他方法的参考方法。 GC-质谱(MC)和HPLC-MC联机检测，更使这类 分析方法性能极大提高。
第三章 临床酶学检验技术
PPT课件
1
教学目标与要求
掌握酶活性的国际单位定义；酶活性测定的方 法；以NAD（P）H为指示系统和色素原底物在 酶活性测定中的应用；最适条件的概念和意义； 同工酶的概念；IFCC推荐法测定临床常用诊断酶 的测定原理和评价。 熟悉酶活性浓度和正常上限升高倍数的表示方 法；酶活性测定的影响因素；各种酶活性测定条 件的确定原则；免疫抑制法测定同工酶的原理。 了解酶蛋白质量测定的优点；电泳法测定同工 酶的特点；定时法测定临床常用诊断酶的原理和 评价。
PPT课件
26
第五节 药物浓度测定常用技术及评价
荧光法测定奎尼丁
方法学评价:线性l~15μg/ml；浓度在l.8μg/ml时, 变异系数为11%；灵敏度0.06μg/ml。 药代动力学:口服吸收快，1~3hr可达血药浓度的 峰值。成人20~30hr达稳态。 生物利用度:个体差异大，Ｆ约为72~87%。进入 血液与蛋白质的结合率为80~90%。 有效血药浓度:为2~5μg/ml（6.2~15.4mmol/L）超 过6~8μg/ml即为中毒浓度。 消除半衰期:为4~7hr。
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三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶 正磷酸单酯磷酸水解酶
临床酶学分析中常用酶的名称与编号
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6
三、酶促反应动力学
（一）酶促反应 方程
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7
（二）酶促反应进程
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8
（三）酶动力学参数
1．反应速度
(1)初速度 指在反应最初阶段底物的消耗量很小 （一 般在50%以内）时的反应速度 (2)最大反应速度 指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应 速度
临床生物化学检验
临床酶学检验技术
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1
第一节 酶学基本知识
● 酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸
和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。
● 酶的特性---极高的催化效率、高度的特异性
(specificity)以及催化作用的可调节性
● 酶的结构与功能
单纯酶
酶蛋白(apoenzyme)
2.6.1.1
（谷草转氨酶） (GOT)
丙氨酸氨基转移酶 ALT
2.6.1.2
（谷丙转氨酶） (GPT)
肌酸激酶
CK
2.7.3.2
碱性磷酸酶
ALP(AKP) 3.1.3.1
系统名
L乳酸：NAD+氧化还原酶 单胺：氧化还原酶 γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰转移酶 L-门冬氨酸：α-酮戊二酸氨基转移酶
L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基转移酶
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二、测定条件的影响与最适条件的确定
（一）底物种类和浓度 （二）缓冲液种类、pH和离子强度 （三）反应温度 （四）辅助因子和激活剂 （五）抑制剂 （六）酶偶联法中的辅助酶和指示酶 （七）延滞期与线性期的确定 （八）样品与试剂比例
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三、其他因素对测定结果的影响
（一）仪器 （二）校准物 （三）实验参数 （四）副反应
亚基以非共价键连接的酶
● 多酶体系(multienzyme system)---由几种不同功能
的酶彼此聚合而成的多酶复合物
● 酶的必需基团(essential group)---与酶的活性密
切相关的基团
● 酶的活性中心(active center)---组成具有能与底
物结合并起催化反应的特定空间结构区域 编辑版ppt
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第六节 同工酶检测技术
一、电泳法 二、抑制法 三、其他方法
（一）热变性 （二）亲和层析法
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免疫抑制法 利用同工酶的一种亚基与相应的抗 体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后 样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。
不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50％CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性×2：CK-MB活性；
是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限
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二、酶蛋白质量浓度表示法
测定酶蛋白质量浓度优点 ：
①灵敏度高 ②特异性高 ③可测定无活性的酶 ④与酶活性测定一起，计算免疫比活性 ⑤在同工酶测定中更有价值
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第四节 酶催化活性浓度测定的理论基础 一、定时法 二、连续监测法
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二、血清酶变化的生理病理机制
（一）血清酶的生理差异 1．性别 2．年龄 3．饮食 4．运动 5．妊娠
（二）血清酶变化的病理机制 1．酶合成异常 2．细胞内酶的渗漏 3．酶进入血液的方式 4．其他血管内的抑制作用、清除速度
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第三节 酶含量的表示方法
一、酶活性浓度表示法
● 酶的编号---用4个数字加以系统编号
第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类，
第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。
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4
习惯用名
英文缩写 EC编号
乳酸脱氢酶
LD（LDH） 1.1.1.27
单胺氧化酶
MAO
1.4.3.4
γ-谷氨酰转移酶 γ-GT/GGT 2.3.2.2
门冬氨酸氨基转移酶 AST
结合酶
辅酶(coenzyme)Leabharlann 辅因子(cofactor)
编辑辅版pp基t (prosthetic group)2
● 酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具
有四级结构。
● 单体酶(monomeric enzyme)---只由一条多肽链构 成
● 寡聚酶 (oligomeric enzyme)---由多个相同或不同
所测CK-MM和CK-MB之总活性－CK-MB活性＝CK-MM活 性。
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第七节 目前常用诊断酶的酶活性测定
一、丙氨酸氨基转移酶与门冬氨酸氨基转移酶的测定
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试剂1
试剂2
L-丙氨酸 ＋ α-酮戊二酸 ALT（样品）α-丙酮酸 ＋ L-谷氨酸
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（三）连续监测法的方法设计
1．以人工合成色素原做底物的连续监测 2．NAD( P)H的连续监测 3．以Trinder反应做指示反应的连续监测 4．特殊反应类型的连续监测
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第五节 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定
一、方法因素的影响
（一）正向反应与逆向反应 （二）检测底物或检测产物 （三）底物启动模式与样品启动模式
2．米氏常数
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(四)酶偶联反应
Ex
Ea
Ei
ABCD
Ei——指示酶
Ea——辅助 酶
工具酶
酶学分析中作为试剂用于测定 化合物浓度或酶活性浓度的酶
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第二节 血清酶变化的生理病理机制
一、血清酶的来源与去路 （一）血清酶的来源 1．血浆固有酶 2．非血浆固有酶 ①外分泌酶 ②细胞酶 （二）血清酶的去路 1．肾小球滤过从尿液中排出 2．网状内皮系统清除 3．血管内失活或灭活
3
酶的命名、分类与编号
● 酶的命名---习惯命名法、系统命名法
● 酶的分类---可分为六大类
氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶 (transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂 合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连接 酶)(synthetases或ligases)
(一)酶活性单位
1．惯用单位 2．国际单位---在特定的条件下，一分钟内使底
物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。 3．Katal单位---在规定条件下，每秒钟催化转化
一摩尔底物的酶量。1katal＝60×106U
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（二）酶活性浓度
指单位体积样品中的酶活性单位
（三）正常上限升高倍数（ULN)
临床酶学分析中常用酶的名称与编号
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三、酶促反应动力学
（一）酶促反应 方程
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（二）酶促反应进程
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（三）酶动力学参数
1．反应速度
(1)初速度 指在反应最初阶段底物的消耗量很小 （一 般在50%以内）时的反应速度 (2)最大反应速度 指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应 速度
临床生物化学检验
临床酶学检验技术
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第一节 酶学基本知识
● 酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸
和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。
● 酶的特性---极高的催化效率、高度的特异性
(specificity)以及催化作用的可调节性
● 酶的结构与功能
单纯酶
酶蛋白(apoenzyme)
2.6.1.1
（谷草转氨酶） (GOT)
丙氨酸氨基转移酶 ALT
2.6.1.2
（谷丙转氨酶） (GPT)
肌酸激酶
CK
2.7.3.2
碱性磷酸酶
ALP(AKP) 3.1.3.1
系统名
L乳酸：NAD+氧化还原酶 单胺：氧化还原酶 γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰转移酶 L-门冬氨酸：α-酮戊二酸氨基转移酶
L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基转移酶
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二、测定条件的影响与最适条件的确定
（一）底物种类和浓度 （二）缓冲液种类、pH和离子强度 （三）反应温度 （四）辅助因子和激活剂 （五）抑制剂 （六）酶偶联法中的辅助酶和指示酶 （七）延滞期与线性期的确定 （八）样品与试剂比例
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三、其他因素对测定结果的影响
（一）仪器 （二）校准物 （三）实验参数 （四）副反应
亚基以非共价键连接的酶
● 多酶体系(multienzyme system)---由几种不同功能
的酶彼此聚合而成的多酶复合物
● 酶的必需基团(essential group)---与酶的活性密
切相关的基团
● 酶的活性中心(active center)---组成具有能与底
物结合并起催化反应的特定空间结构区域 编辑版ppt
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第六节 同工酶检测技术
一、电泳法 二、抑制法 三、其他方法
（一）热变性 （二）亲和层析法
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免疫抑制法 利用同工酶的一种亚基与相应的抗 体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后 样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。
不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50％CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性×2：CK-MB活性；
是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限
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二、酶蛋白质量浓度表示法
测定酶蛋白质量浓度优点 ：
①灵敏度高 ②特异性高 ③可测定无活性的酶 ④与酶活性测定一起，计算免疫比活性 ⑤在同工酶测定中更有价值
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第四节 酶催化活性浓度测定的理论基础 一、定时法 二、连续监测法
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二、血清酶变化的生理病理机制
（一）血清酶的生理差异 1．性别 2．年龄 3．饮食 4．运动 5．妊娠
（二）血清酶变化的病理机制 1．酶合成异常 2．细胞内酶的渗漏 3．酶进入血液的方式 4．其他血管内的抑制作用、清除速度
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第三节 酶含量的表示方法
一、酶活性浓度表示法
● 酶的编号---用4个数字加以系统编号
第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类，
第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。
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习惯用名
英文缩写 EC编号
乳酸脱氢酶
LD（LDH） 1.1.1.27
单胺氧化酶
MAO
1.4.3.4
γ-谷氨酰转移酶 γ-GT/GGT 2.3.2.2
门冬氨酸氨基转移酶 AST
结合酶
辅酶(coenzyme)Leabharlann 辅因子(cofactor)
编辑辅版pp基t (prosthetic group)2
● 酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具
有四级结构。
● 单体酶(monomeric enzyme)---只由一条多肽链构 成
● 寡聚酶 (oligomeric enzyme)---由多个相同或不同
所测CK-MM和CK-MB之总活性－CK-MB活性＝CK-MM活 性。
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第七节 目前常用诊断酶的酶活性测定
一、丙氨酸氨基转移酶与门冬氨酸氨基转移酶的测定
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试剂1
试剂2
L-丙氨酸 ＋ α-酮戊二酸 ALT（样品）α-丙酮酸 ＋ L-谷氨酸
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（三）连续监测法的方法设计
1．以人工合成色素原做底物的连续监测 2．NAD( P)H的连续监测 3．以Trinder反应做指示反应的连续监测 4．特殊反应类型的连续监测
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第五节 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定
一、方法因素的影响
（一）正向反应与逆向反应 （二）检测底物或检测产物 （三）底物启动模式与样品启动模式
2．米氏常数
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(四)酶偶联反应
Ex
Ea
Ei
ABCD
Ei——指示酶
Ea——辅助 酶
工具酶
酶学分析中作为试剂用于测定 化合物浓度或酶活性浓度的酶
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第二节 血清酶变化的生理病理机制
一、血清酶的来源与去路 （一）血清酶的来源 1．血浆固有酶 2．非血浆固有酶 ①外分泌酶 ②细胞酶 （二）血清酶的去路 1．肾小球滤过从尿液中排出 2．网状内皮系统清除 3．血管内失活或灭活
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酶的命名、分类与编号
● 酶的命名---习惯命名法、系统命名法
● 酶的分类---可分为六大类
氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶 (transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂 合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连接 酶)(synthetases或ligases)
(一)酶活性单位
1．惯用单位 2．国际单位---在特定的条件下，一分钟内使底
物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。 3．Katal单位---在规定条件下，每秒钟催化转化
一摩尔底物的酶量。1katal＝60×106U
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（二）酶活性浓度
指单位体积样品中的酶活性单位
（三）正常上限升高倍数（ULN)