核酸电泳常见问题及解决方案

琼脂糖凝胶电泳常见问题解答

琼脂糖凝胶电泳常见问题解答核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。

琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子，使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。

琼脂糖凝胶电泳操作简单、快速，通过调整其使用浓度，使得分辨率达到大多数实验的要求，因此成为分离、鉴定、纯化核酸分子的常用方法。

但操作过程中仍有不少要注意的问题。

1 凝胶制作1．1 凝胶浓度配制凝胶的浓度据实验需要而变，一般在0．8％～2．0％之间，如果一次配制凝胶100 ml，没用完的凝胶可以再次融化，但随着融化次数的增加，水分丢失也越多，凝胶浓度则会越来越高，导致实验结果不稳定，补水办法：一是在容器上标记煮胶前的刻度，煮胶后补充相应的水分至原刻度；二是在煮胶前称重，煮胶后补充水至原重量。

粗略一点的方法是通过多次较恒定的煮胶条件得出一个经验补水值。

以保证凝胶浓度基本维持在原浓度。

核酸染色剂溴化乙锭(ethidium bromide)可加在融化的琼脂糖中，终浓度为0．5 t*g ／ml；也可在电泳结束后染色。

1、2 梳板的选用一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点样孑L容积较大，用于DNA 片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样孑L容积就较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。

梳板的选择主要是看上样量的多少而定，一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。

另外，每次制胶时都要注意梳齿与底板的距离至少要1 mm，否则，拔梳板时易损坏凝胶孑L底层，导致点样后样品渗漏。

当然，点样孑L的破坏还与拔梳板的时间和方法有关，一般凝胶需冷却30 min以上方可拔梳板，应急的情况下可以将成型的凝胶块放4℃冰箱中冷却15 min 左右，拔梳板的方法是将制胶槽放置在电泳槽中的电泳缓冲液中，然后垂直向上慢慢用力，因为有液体的润滑作用，梳板易拔出且不易损坏点样孑L。

PCR操作中常见问题一览与解决方案

PCR常见问题总汇PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。

假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR 循环条件。

寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。

模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。

⑤模板核酸变性不彻底。

在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。

酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。

需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。

引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。

有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。

②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。

如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。

③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。

④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。

Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。

反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。

或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。

PCR常见问题分析及对策

PCR反应常见问题汇总（转自tiangen）----PCR常见问题分析及对策1.PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。

2.假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR 循环条件。

寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。

模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。

⑤模板核酸变性不彻底。

在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。

酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。

需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。

引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。

有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。

②引物的浓度不仅要看OD 值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。

如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。

③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。

④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。

Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。

反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳中的问题及其解决方法

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种在两个方向上进行电泳分离的技术，通常用于核酸和蛋白质的分析。

在进行这种电泳过程中，可能会遇到一些问题。

以下是一些常见问题及其可能的解决方法：
1.电泳带模糊或不清晰：
-可能原因：
-样品质量不纯。

-缓冲液配制有问题。

-电场均匀性差。

-解决方法：
-使用纯净的、高质量的核酸或蛋白质样品。

-重新配置新鲜的缓冲液。

-检查电场均匀性，确保电场平均分布。

2.电泳速度过快或过慢：
-可能原因：
-电流设置不当。

-缓冲液浓度不正确。

-解决方法：
-调整电流，确保在设备规定的范围内。

-检查并重新配置适当浓度的缓冲液。

3.电泳带变形或扭曲：
-可能原因：
-样品加载不均匀。

-凝胶浓度选择不当。

-解决方法：
-确保样品加载均匀，使用适当的体积和加载方法。

-重新制备适当浓度的凝胶。

4.电泳凝胶干燥或开裂：
-可能原因：
-凝胶聚合物浓度太高。

-电泳室湿度不足。

-解决方法：
-降低凝胶聚合物的浓度。

-提高电泳室的湿度，可以考虑使用湿度控制设备。

5.样品负载量过多或过少：
-可能原因：
-样品量测量错误。

-样品浓度过低。

-解决方法：
-确保准确测量样品量。

-调整样品的浓度，确保在电泳中可以产生明显的带。

在实验过程中，及时记录实验条件和参数，有助于更容易地识别和解决问题。

如果问题持续存在，建议向实验室同事、导师或相关领域的专家寻求帮助。

电泳常见问题及处理方法

电泳常见问题及处理方法电泳是一种常用于分离生物分子的实验技术，但在实验过程中常常会遇到一些问题。

以下是电泳实验中常见问题及相应的处理方法：**1. ** 电流不稳定或电流为零：- **可能原因：** 电源故障、电极接触不良、电极泄露或电极材料老化。

- **处理方法：**-检查电源设备，确保其正常工作。

-检查电极接触情况，确保良好接触。

-替换老化的电极材料。

**2. ** 样品移动过快或过慢：- **可能原因：** 缓冲液浓度、电场强度、电泳时间等因素影响。

- **处理方法：**-调整缓冲液的浓度，确保适当的离子浓度。

-调整电场强度。

-控制电泳时间，确保合适的分离时间。

**3. ** 电泳带模糊或扩散：- **可能原因：** 样品浓度过高、电场强度过大、电极材料老化等。

- **处理方法：**-减少样品浓度。

-降低电场强度。

-更新电极材料。

**4. ** 电泳带畸变：- **可能原因：** 缓冲液PH值不合适、电极材料污染、样品准备不当等。

- **处理方法：**-调整缓冲液PH值。

-清理电极材料。

-重新准备样品。

**5. ** 电泳槽泄露：- **可能原因：** 电泳槽密封不良、槽体老化等。

- **处理方法：**-检查槽体密封情况。

-更换老化的槽体。

**6. ** 电泳带粘在电极上：- **可能原因：** 电极表面污染、电场强度过大等。

- **处理方法：**-清理电极表面。

-降低电场强度。

**7. ** 电泳结束后凝胶上有色斑：- **可能原因：** 染色不充分、凝胶中存在异物等。

- **处理方法：**-加强染色过程。

-小心操作，避免在凝胶中引入异物。

**8. ** 凝胶破裂：- **可能原因：** 凝胶制备不当、电场强度过大等。

- **处理方法：**-仔细制备凝胶，确保无气泡。

-降低电场强度。

电泳实验中出现问题时，及时采取正确的处理方法是确保实验成功的关键。

通过检查设备、调整实验条件和注意样品制备，可以有效避免或解决电泳过程中的常见问题。

电泳常见问题

Marker参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。

新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。

也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?参考见解：DNA带模糊??：1、DNA降解??避免核酸酶污染。

2、DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。

3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。

6、DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。

好象没跑出来，是怎么回事？参考见解：1、根据目的条带长度来调整凝胶浓度，一般1.5％左右，也不一定。

2、紫外灯下没见带，不一定没有出孔，而是量少看不到，可以测一下浓度看一下，或直接试跑一下PCR。

3、最好加一个marker孔，尤其你第一次跑胶时。

4、电泳时间可能过长，一般75v×30min左右，但是具体看溴酚蓝的离孔距离和目的条带离孔距离。

怎样根据目测条带亮度来判断DNA浓度？参考见解：1、跑胶时候marker 可以加成定量marker，如1kb、100bp等marker，按说明书的量上样电泳，如加500ng量的DNA marker，电泳完毕后，就可将目的DNA条带和MARKER 条带的亮度做个大致的比较，找出两者最接近亮度的条带。

因为marker的各条带都已知所含的DNA浓度（说明书中详细注明），因此根据条带的亮度、大小大致就可推测目的DNA的浓度。

2、在通过目测DNA浓度的时候，最好要把加样量设一个梯度，比如从0。

DNA电泳常见问题分析

D N A电泳常见问题分析The final revision was on November 23, 2020DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。

2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。

倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。

3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。

4、样品加入量：一般情况下，宽的梳子可加μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。

5、DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。

6、DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。

采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。

小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。

7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。

8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。

9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。

沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。

10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。

11.分光光度分析DNA的A280/A260小于；不纯，含有蛋白质等杂质。

在这种情况下，应加入SDS至终浓度为%，并重复步骤2～8。

12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵胶聚时间很长如何解决过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。

[指南]核酸电泳的注意事项

核酸电泳的注意事项1. 琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。

2. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。

倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。

3. 电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应常更新电泳缓冲液。

4. 样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定。

当加样孔大时，样品上样量应相应加大，否则会造成条带浅甚至辩认不清；反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。

5. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。

DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。

采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。

小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。

回收率低或为零1. 漂洗缓冲液中没加入乙醇.在使用前应确保乙醇已加入漂洗液PW中。

2. 吸附材料上有乙醇残留.洗脱时硅胶膜或硅胶树脂上有漂洗缓冲液残留，因含乙醇会降低洗脱效率。

在洗脱前可通过再次离心或置于50℃烤箱中5-10分钟，彻底去除漂洗缓冲液。

3. 洗脱缓冲液pH值偏低.DNA只在低盐buffer中才能被洗脱，如洗脱缓冲液EB (10 mM Tris·Cl, pH 8.5)或水。

洗脱效率取决于pH值。

最大洗脱效率在pH7.0-8.5间。

当用水洗脱时确保其pH值在此范围内。

4. 洗脱液加入位置不正确.洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面，达到最大洗脱效率。

DNA质量不好洗脱产物含有乙醇残留.洗脱时硅胶膜或硅胶树脂上有漂洗缓冲液残留，会使洗脱产物中含有乙醇，影响下游操作。

核酸凝胶电泳与检测技术

EB替代品
SYBR Gold是一种新型极敏感染料的商品名称。其与DNA结合的亲和力高，并且结合后，能够极大增强荧光信号。
sybr-green、sybrgold ---- 不稳定，毒性也很大
goldview ----宣称无毒,不灵敏,回收连接不好,荧光易猝灭。对于大片段DNA的染色效果还凑合，但是在对于500bp以下的片段效果不是很好。
2、加样量的多少决定于加样孔最大容积。加入样品的体积应略少于加样孔容积。
5.常见问题与对策
DNA带很淡或无带
DNA带拖尾
6.DNA浓度和纯度的测定
紫外吸收法、定磷法（1）目测条带亮度来判断DNA浓度
跑胶时候marker 按说明书的量上样电泳，电泳完毕后，就可将目的DNA条带和marker 条带的亮度做个大致的比较。
（5）离子强度
缓冲液中无离子时, DNA几乎不移动。而在高离子强度下，导电性极高,带电颗粒泳动很快,并产生大量的热,有时甚至熔化凝胶或使DNA变性。
电泳缓冲液TAE TBE TPE三者区别（1）缓冲容量：TAE的缓冲容量最低，如长时间电泳会
被消耗，此时凝胶的阳极一侧将发生酸性化。 TBE和TPE比TAE花费贵，但有高得多的缓冲容量。（2）迁移速度：双链线状DNA片段中TAE中比在TBE或 TPE中迁移快10%，（3）分辨率：对于高分子质量的DNA，TAE的分辨率略高于TBE或TPE，对于低分子质量的DNA，TAE要差些。超螺旋DNA在TAE中的电泳分辨率要好于TBE。
根据标准DNA相对迁移距离推测待测定的DNA片段的大小
如何提高核酸电泳的分辨率？
（4）凝胶电泳的分辨力与凝胶的类型和密度相关一、凝胶类型 1.琼脂糖凝胶的分辨力在0.2～50Kb之间(＜20kb);可

琼脂糖核酸电泳中的疑难问题及其解决方案

琼脂糖核酸电泳中的疑难问题及其解决方案一、分辨率问题问题描述：琼脂糖核酸电泳中，条带分辨不清，无法准确区分不同的DNA 片段。

解决方案：1.调整琼脂糖浓度：增加琼脂糖浓度可以提高分辨率。

2.调整缓冲液浓度：降低缓冲液浓度可以提高分辨率。

3.增加电压：适当增加电压可以提高迁移速率，从而提高分辨率。

二、迁移速率不均一问题描述：琼脂糖核酸电泳中，不同DNA片段的迁移速率不一致，导致条带不整齐。

解决方案：1.调整缓冲液浓度：适当增加缓冲液浓度可以提高迁移速率的一致性。

2.控制温度：保持恒温可以减少温度对迁移速率的影响。

3.更换电泳槽：电泳槽老化或污染可能导致迁移速率不均一，需要更换新的电泳槽。

三、拖尾现象问题描述：琼脂糖核酸电泳中，某些DNA片段出现拖尾现象，影响条带分析。

解决方案：1.调整琼脂糖浓度：适当增加琼脂糖浓度可以减少拖尾现象。

2.控制温度：保持恒温可以减少温度对DNA片段的影响，从而减少拖尾现象。

3.检查缓冲液：缓冲液不纯或被污染可能导致拖尾现象，需要更换新的缓冲液。

四、条带弥散问题描述：琼脂糖核酸电泳中，某些条带出现弥散现象，影响分辨率。

解决方案：1.调整琼脂糖浓度：适当增加琼脂糖浓度可以减少弥散现象。

2.控制温度：保持恒温可以减少温度对DNA片段的影响，从而减少弥散现象。

3.检查缓冲液：缓冲液不纯或被污染可能导致弥散现象，需要更换新的缓冲液。

五、背景问题问题描述：琼脂糖核酸电泳中，背景较深，影响条带分析。

解决方案：1.调整缓冲液浓度：适当降低缓冲液浓度可以减少背景问题。

2.控制温度：保持恒温可以减少温度对背景的影响。

3.检查电泳槽：电泳槽老化或污染可能导致背景问题，需要更换新的电泳槽。

六、染色不均一问题描述：琼脂糖核酸电泳后，某些条带染色不均一，影响分析结果。

解决方案：1.调整染色时间：适当延长染色时间可以提高染色效果。

2.更换染色剂：染色剂不纯或被污染可能导致染色不均一，需要更换新的染色剂。

DNA电泳常见问题分析

D N A电泳常见问题分析 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。

2、?凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。

倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。

3、?电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。

4、?样品加入量：一般情况下，宽的梳子可加μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。

5、?DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。

6、?DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。

采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。

小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。

7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。

8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。

9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。

沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。

10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。

11.分光光度分析DNA的A280/A260小于；不纯，含有蛋白质等杂质。

在这种情况下，应加入SDS至终浓度为%，并重复步骤2～8。

12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1? 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵胶聚时间很长如何解决过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。

核酸电泳常见问题及解决方案

核酸电泳常见问题及解决方案问题可能原因解决方法
DNA Marker降解核酸酶污染每次吸取时更换灭菌枪保存不当4°C 或-20°C保存，避
DNA Marker无法琼脂糖质量差使用质量可靠的琼脂糖电泳缓冲液多次使更换缓冲液
条带黯淡核酸浓度过低增加上样量
核酸降解使用不含核酸酶的试剂DNA条带被示踪染提高上样量；避免使用
条带模糊或弥散电泳缓冲液多次使更换缓冲液
核酸部分降解使用不含核酸酶的试剂核酸样品纯度差，酚/仿抽提或乙醇沉淀去电压过低，电泳时根据凝胶大小和电泳缓染色时间过长或拍电泳结束后及时观察、
条带缺失DNA条带分子量过使用脉冲凝胶电泳
分子量接近的DNA选择适当的凝胶浓度进电泳缓冲液使用不SD和TBE缓冲液适于电泳时间过长或电缩短电泳时间，调整电电极插反，DNA走正确连接电极方向
条带大小不正确核酸降解或形成聚加热处理或重新制备样λ DNA酶切Marker电泳前65°C加热5分相同分子量的DNA判断DNA分子是否有特梳子变形，点样孔使用完好的梳子制胶
带型异常不同样本的上样条选用相同的上样缓冲
上样量过大或过小选择合适大小的上样
核酸样品纯度差，酚/仿抽提或乙醇沉淀去电泳缓冲液未完全上样和电泳时，确保缓电压过高或电泳时根据凝胶大小和电泳缓
凝胶中加入EB造成加入EB时充分混匀或电凝胶中有气泡或污使用纯水和洁净容器制点样孔质量差待凝胶完全凝聚后再取。

核酸电泳常见问题及解决方案

酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂质
电泳缓冲液未完全浸没凝胶
上样和电泳时，确保缓冲液始终能完全覆盖凝胶
电压过高或电泳时间过长致使凝胶过热和DNA变性
根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当的电压进行电泳
凝胶中加入EB造成染色不均
加入EB时充分混匀或电泳结束后再染色
凝胶中有气泡或污染物
使用纯水和洁净容器制胶；缓慢灌胶，并赶除气泡
判断DNA分子是否有特殊结构，如缺口、超螺旋、二聚体等；富含AT碱基的DNA迁移率比同分子量富含GC碱基的
DNA片段慢
梳子变形，点样孔不在同一水平线上
使用完好的梳子制胶
带型异常
不同样本的上样条件不同
选用相同的上样缓冲液，Hale Waihona Puke 样量尽可能接近上样量过大或过小
选择合适大小的上样孔，样品应完全覆盖点样孔底部
核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份
问题
可能原因
解决方法
DNA Marker降解
核酸酶污染
每次吸取时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液带入管中；用后密闭4°C保存
保存不当
4°C或-20°C保存，避免多次反复冻融；不可加热
DNA Marker无法正确分离
琼脂糖质量差
使用质量可靠的琼脂糖制胶
电泳缓冲液多次使用后失效
更换缓冲液
条带黯淡
核酸浓度过低
电泳时间过长或电压过高，DNA走出凝胶
缩短电泳时间，调整电压
电极插反，DNA走出凝胶
正确连接电极方向
条带大小不正确
核酸降解或形成聚合物
加热处理或重新制备样品
λ DNA酶切Marker的cos位点复性
电泳前65°C加热5分钟，冰上冷却5分钟以后再上样

核酸电泳常见问题及解决方案

点样孔质量差
待凝胶完全凝聚后再取出梳子；
电泳时间过长或电压过高，DNA走出凝胶
缩短电泳时间，调整电压
电极插反，DNA走出凝胶
正确连接电极方向
条带大小不正确
核酸降解或形成聚合物
加热处理或重新制备样品
λ DNA酶切Marker的cos位点复性
电泳前65°C加热5分钟，冰上冷却5分钟以后再上样
相同分子量的DNA片段由于结构或序列的差异而有不同的迁移率
酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂质
电泳缓冲液未完全浸没凝胶
上样和电泳时，确保缓冲液始终能完全覆盖凝胶
电压过高或电泳时间过长致使凝胶过热和DNA变性
根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当的电压进行电泳
凝胶中加入EB造成染色不均
加入EB时充分混匀或电泳结束后再染色
凝胶中有气泡或污染物
使用纯水和洁净容器制胶；缓慢灌胶，并赶除气泡
判断DNA分子是否有特殊结构，如缺口、超螺旋、二聚体等；富含AT碱基的DNA迁移率比同分子量富含GC碱基的DNA片段慢
梳子变形，点样孔不在同一水平线上
使用完好的梳子制胶
带型异常
不同样本的上样条件不同
选用相同的上样缓冲液，上样量尽可能接近
上样量过大或过小
选择合适大小的上样孔，样品应完全覆盖点样孔底部
核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份
增加上样量
核酸降解
使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱDNA条带被示踪染料掩盖
提高上样量；避免使用与目的片段迁移率相同的示踪染料
条带模糊或弥散
电泳缓冲液多次使用后失效
更换缓冲液
核酸部分降解
使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品

核酸电泳的实验步骤及注意事项

核酸电泳是一种常用的实验方法，用于检测 DNA 或 RNA 的大小、纯度和浓度等信息。

以下是核酸电泳的实验步骤和注意事项：
实验步骤：
1. 准备样品：将待检测的 DNA 或 RNA 样品加入 DNA 或 RNA Load Buffer 中，并彻底混合
2. 加载样品：取一个空的凝胶孔，用微量移液器等工具将混合好的 DNA 或 RNA 样品加载到凝胶孔中。

注意不要将样品液体超过凝胶孔的容积。

3. 运行凝胶：将凝胶盒放入电泳槽中，并加入足够的 TBE 或 TAE 缓冲液，直到凝胶完全浸泡。

连接电源，设置适当的电压和时间，运行电泳。

4. 取出凝胶：电泳结束后，断开电源，小心地取出凝胶，放入凝胶成像仪或紫外线透射仪中进行可视化。

注意事项：
1. 操作过程中要戴手套，避免接触到有害物质，如致癌物质乙酰胺。

2. 加载样品时要注意不要将液体超过凝胶孔的容积，否则会影响电泳效果。

3. 在电泳前要检查电泳槽和电极是否清洁，避免样品受到杂质污染。

4. 运行电泳时要根据样品的大小和预期分离效果来选择适当的电压和运行时间。

5. 在运行电泳时要注意缓冲液的 pH 值和浓度，以及电泳槽内的温度，这些因素会影响电泳效果。

6. 取出凝胶时要小心，避免损坏凝胶。

7. 在凝胶成像时，应注意避免暴露在紫外线下，以保护自己的健康。

核酸电泳条带扩散

核酸电泳条带扩散
核酸电泳条带扩散可能由多种原因引起，以下是一些可能的原因和解决办法：
1. 琼脂糖溶解不充分或凝胶时间过短导致胶未完全凝固。

这种情况下，核酸电泳速度不均匀，可能出现抹带现象。

解决办法是确保琼脂糖充分溶解，并适当延长凝胶时间。

2. 胶孔大小不均匀。

如果胶孔大小不一致，可能导致样品在电泳过程中扩散不均匀。

解决办法是使用合适的梳子制作胶孔，并确保梳子干净、无杂质。

3. 电泳缓冲液浓度不正确或过期。

电泳缓冲液的浓度对电泳效果有很大影响，如果浓度不正确或过期，可能导致条带扩散。

解决办法是检查电泳缓冲液的浓度和有效期，确保使用正确的缓冲液。

4. 电压过高或电泳时间过长。

电压过高或电泳时间过长可能导致条带扩散。

解决办法是适当降低电压或缩短电泳时间，根据具体的实验条件和样品类型进行优化。

5. 样品浓度过高或体积过大。

如果样品浓度过高或体积过大，可能导致条带扩散。

解决办法是适当稀释样品或减小样品体积，以减少条带扩散的可能性。

总之，要解决核酸电泳条带扩散的问题，需要根据具体
情况分析原因，并采取相应的解决办法。

同时，注意实验操作的细节和规范，确保实验结果的准确性和可靠性。

核酸电泳的实验步骤及注意事项

核酸电泳的实验步骤及注意事项核酸电泳是一种常用的分离和分析DNA和RNA的方法，广泛应用于生物学、遗传学、分子生物学等领域。

下面我将详细介绍核酸电泳的实验步骤及注意事项。

实验步骤：1.样品准备：a.根据实验需求，提取目标DNA或RNA样品。

可以使用柱式提取试剂盒、酚-氯仿法等常用的提取方法。

b.样品提取后，使用紫外吸收光谱仪测定DNA或RNA的浓度和纯度。

2.样品处理：a.根据实验需求，可以进行样品的加热、冷却、剪切等处理。

这些处理可以影响样品的表现形式和电泳结果。

3.准备电泳缓冲液：a.根据实验需求，选择适当的电泳缓冲液。

常用的缓冲液有TAE缓冲液（三羟基甲基氨基乙烷三乙酸缓冲液）、TBE缓冲液（三赔二硼酸缓冲液）等。

根据实验需求和目标DNA/RNA的大小，可以选择不同的缓冲液。

b.使用无菌去离子水配制电泳缓冲液，并调整pH值到适宜范围（通常为8.0-8.5）。

4.准备琼脂糖凝胶：a.根据实验要求和目标DNA/RNA的大小，选择适当的琼脂糖浓度和凝胶浓度。

通常，琼脂糖浓度为0.5%-2.0%，凝胶浓度为0.5%-2.0%。

b.在电泳缓冲液中加入适量琼脂糖，然后加热溶解（通常在微波炉中加热）。

c.完全溶解后，冷却至约50℃，然后向电泳槽中倒入凝胶。

5.加载样品：a. 将样品与DNA测量标记物或RNA转运缓冲液混合。

常用的DNA测量标记物有DNA分子量标记物，如pUC19/HaeIII线性DNA，常用的RNA 转运缓冲液为37%甲醇。

b.将混合物称量到空载样品井中。

每个样品的体积通常为1-10μl。

6.进行电泳：a.将电泳槽放入电泳仪中，并将电极缓冲液注入到电泳槽中，使其覆盖琼脂糖凝胶。

b.将样品加入凝胶上（通常在每个样品井上加载1-10μl样品），然后快速锁定电泳槽。

7.设置电泳条件：a.根据实验需要和目标DNA/RNA的大小，设置合适的电压、电流和电泳时间。

通常，电压为80-150V，电流为5-10mA，电泳时间根据目标DNA/RNA的大小和迁移速率决定。

dna凝胶电泳核酸降解

dna凝胶电泳核酸降解
DNA凝胶电泳是一种用于检测DNA分子大小和纯度的技术。

在凝胶电泳中，DNA 分子通过电场作用在凝胶中移动。

由于DNA分子的大小和形状不同，它们的移动速度也不同，因此可以通过比较不同位置上的条带来确定DNA分子的大小。

然而，在进行DNA凝胶电泳时，有时会遇到核酸降解的问题。

核酸降解是指DNA 分子在电泳过程中被分解成更小的片段。

这可能是由于DNA分子本身的不稳定性、电场强度过高、温度过高或凝胶质量不好等原因引起的。

当核酸降解发生时，电泳结果可能会出现异常的条带或没有条带。

这可能会影响对DNA分子大小的准确判断，并可能导致错误的结论。

为了避免核酸降解的发生，可以采取一些措施。

例如，在提取和纯化DNA时，要使用高质量的试剂和材料，并遵循正确的操作步骤。

在电泳过程中，要控制电场强度和温度，并使用高质量的凝胶。

此外，在电泳结束后，要及时观察结果并记录数据，以便及时发现问题并进行处理。

总之，在进行DNA凝胶电泳时，要注意避免核酸降解的发生。

如果发现核酸降解的问题，要及时采取措施进行处理，以确保实验结果的准确性和可靠性。

刚跑出来的核酸琼脂糖凝胶,有没有老师帮忙看看什么原因？

刚跑出来的核酸琼脂糖凝胶，有没有老师帮忙看看什么原因？核酸琼脂糖凝胶电泳是分离核酸的一种常用方法，它可以根据DNA或RNA的分子量和电荷大小将核酸分离出来。

但在实验中，我们可能会遇到核酸琼脂糖凝胶出现异常的情况，比如说出现模糊带、偏移、断裂等现象，这些问题可能是由于实验操作不当或实验条件不合适所导致的。

下面我们来分析一下可能的原因和解决方法。

一、核酸琼脂糖凝胶出现模糊带模糊带通常是由于核酸样品中存在多个长度相似的DNA或RNA分子，或者是核酸样品中存在多个不同的DNA或RNA分子，但它们的电荷大小相似。

这种情况下，这些分子在电泳过程中会一起移动，形成一个模糊的带。

解决这个问题的方法是优化核酸样品的制备过程，保证核酸样品的纯度和完整性，或者使用其他分离方法，比如PCR或RNA纯化。

二、核酸琼脂糖凝胶出现偏移核酸琼脂糖凝胶出现偏移可能是由于核酸样品的pH值或盐浓度不合适，或者是电泳缓冲液的pH值或盐浓度不合适。

这种情况下，需要重新调整核酸样品和电泳缓冲液的pH 值和盐浓度，保证它们之间的一致性。

三、核酸琼脂糖凝胶出现断裂核酸琼脂糖凝胶出现断裂可能是由于琼脂糖的浓度过高或过低，或者是电泳缓冲液的盐浓度过高或过低。

这种情况下，需要重新制备琼脂糖凝胶和电泳缓冲液，保证它们的浓度和盐浓度在合适的范围内。

核酸琼脂糖凝胶电泳是一种重要的分离方法，但在实验中可能会遇到各种问题。

为了保证实验结果的准确性和可靠性，我们需要仔细分析问题的原因，并采取合适的措施来解决这些问题。

通过对核酸琼脂糖凝胶电泳出现异常现象的分析，我们可以看出，实验操作和实验条件对实验结果的影响是非常大的。

在进行核酸琼脂糖凝胶电泳实验时，我们需要仔细控制实验条件，保证核酸样品的纯度和完整性，以及琼脂糖凝胶和电泳缓冲液的浓度和盐浓度在合适的范围内。

只有这样，我们才能获得准确可靠的实验结果，为科学研究和医学诊断提供有力的支持。