电泳常见问题及解决方法
电泳常见问题及解决方法
3. 1 滑橇底部油泥污染导致电泳缩孔及其解决办法在车身经手工预清理完后,进行洪流冲洗前,需要将车身承载在滑橇上并锁紧,再装挂在自行葫芦系统的吊架上,然后依次通过电泳涂装各工艺槽。当滑橇第一次通过电泳槽时,滑橇表面会泳涂上一层电泳漆膜,形成绝缘层。而当滑橇承载车身再一次通过电泳槽时,滑橇表面因有绝缘层的存在而不会泳涂上新的电泳漆膜,但会一次次附上一层新的电泳浮漆。由于电泳后的水洗工艺主要是针对车身,而位于车身底部的滑橇不可能被冲洗干净。因此,当附有电泳浮漆的滑橇在电泳后工位(如电泳烤房、电泳烤后存放)的输送链上前行时,滑橇底部的电泳浮漆和已泳涂上的电泳漆膜与输送链上的滚子不断接触、摩擦,就会粘附滚子上的润滑油,形成油泥。由于这些油泥位于滑橇底部,并且有很强的粘附性,即使在通过脱脂和水洗等工艺槽时,也不能完全被清除干净,从而污染磷化槽液、电泳槽液及电泳烤房。油泥污染引起的直接后果就是造成电泳漆膜缩孔。经观察发现,在每次对电泳滑橇通过的输送链加油润滑后,电泳漆膜缩孔明显增加。电泳漆膜缩孔不仅加大了电泳底漆打磨的工作量,也明显影响整车涂膜的质量和抗腐蚀性能。
人工擦除滑橇底部油泥,以避免电泳漆膜缩孔是一种解决办法,但费时费力;在预脱脂槽里增加喷嘴,利用高压脱脂液对滑橇底部油泥进行冲洗也是一种办法,但这样做需要对预脱脂槽进行较大的改造,并且还会加快预脱脂槽液的更新周期,从而造成成本上升;第3 种办法是在车身吊装进槽前的滚床间安装油泥清洗机。清洗机带有一对呈滚轮状的毛刷,通过电机减速驱动毛刷对滑橇底部油泥进行刷洗。该方法简便可行。为加强对油泥的清洗效果,利用该方法并采用3 套清洗机,通过其6 个呈滚轮状、用以粘附滚轮下面清洗液的毛刷对在清洗机上面通过的滑橇底部的油泥进行连续滚刷。清洗机安装调试完毕,经过2 周的试运行后发现,清洗机工作稳定可靠,清洗效果明显提高。
电泳常见问题及处理方法
电泳常见问题及处理方法
1.缩孔
这类缺陷在湿的漆膜上看不见,当烘干后漆膜表面出现直径通常为0.5-3.0mm漏底微孔、不漏底的火山口状的凹陷,称为陷穴、凹洼,露底者为缩孔,中间有颗粒但不刮手的称为“鱼眼”。由于电泳漆湿膜中或表面有尘埃、油渍或与电泳涂料不相容的粒子,成为陷穴中心,因而产生涂膜缺陷。很多情况下这类缺陷还与被涂物的材质有关,如金属底材上存在微裂纹和微孔等。
原因1:外来油污污染电泳漆膜,油污附着在工件表面,使电泳漆成膜受到影响。这种原因引起缩孔的几率较大。
解决方法:可检查输送机构、挂具,防止油滴污染漆膜。从电泳设备制造安装开始就要避免上述物质污染,每一种新零件投入电泳前最好进行相关检验,防止受油、硅油、蜡、脂性碳化物、胶水等污染物对工件,电泳设备及电泳槽液的污染。
原因2:前处理除油不干净,造成润湿性不良,使电泳漆烘干后漆膜有缩孔。
解决方法:加强前处理清洗。
原因3:槽液有油污、异物混入,影响电泳漆膜外观。
解决方法:用吸油纸吸去油污,清除槽液内异物,同时避免异物混入,保持电泳槽液清洁
原因4:加漆时有电泳漆没搅拌均匀,使槽液无完全熟化,引起漆膜不良。
解决方法:确保加入的电泳漆搅拌均匀,加强槽液循环,使槽液完全熟化
原因5:电泳后水洗中含油分或烘干室内不洁净,循环风含油分,使油分附著在漆膜上面烘干后有缩孔。
解决方法:水洗经常更换,烤箱经常清理.烤箱链轨用油可选用耐高温,不会高温挥发为最佳
2.针孔
工件上有露底针状小孔,称为针孔,它与缩孔的区别是孔径小,中心无异物,且四周无漆膜堆积凹起。由漆膜再溶解而引起的针孔,称为再溶解针孔;由电泳过程中产生的气体、湿膜脱泡不良而产生的针孔,称为气体针孔;
DNA电泳常见问题分析
DNA电泳常见问题
凝胶电泳操作注意事项
1、琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移及荧光背景的强度,应有选择地使用。
2、凝胶的制备:凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致,溶化的凝胶应及时倒入板中,避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡,以免影响电泳结果。
3、电泳缓冲液:为保持电泳所需的离子强度和pH,应经常更新电泳缓冲液。
4、样品加入量:一般情况下,0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA 中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾或弥散,对于较大的DNA此现象更明显。
5、 DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
6、 DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度,迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子,制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以提高分辨率。
7.选择的实验材料要新鲜,处理时间不易过长。
8.在加入细胞裂解缓冲液前,细胞必须均匀分散,以减少DNA团块形成。
9. 提取的DNA不易溶解:不纯,含杂质较多;加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥,也将使溶解变得很困难。
10. 电泳检测时DNA成涂布状:操作不慎;污染核酸酶等。
11.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8;不纯,含有蛋白质等杂质。在这种情况下,应加入SDS至终浓度为0.5%,并重复步骤2~8。
电泳常见问题和解决方法
阴极电泳常见问题及解决方法
一、颗粒
(1)现象
在烘干后的电泳涂膜表面上有手感粗糙的、较硬的粒子,或肉眼可见的细小痱子,往往被涂物的水平面较垂直面严重,这种漆膜病态称为颗粒。
(2)产生原因
①CED槽液PH值偏高,碱性物质混入,造成槽液不稳定,树脂析出或凝聚。
②槽内有沉淀“死角”和裸露金属处。
③电泳后清洗液脏、含漆量过高,过滤不良。
④进入的被涂物面及吊具不洁,磷化后水洗不良。
⑤在烘干过程中落上颗粒状污物。
⑥涂装环境脏。
⑦补给涂料或树脂溶解不良,有颗粒。
(3)防治方法
①将CED槽液的PH值控制在下限,严禁带入碱性物质,加强过滤,加速槽液的更新。
②消除易沉淀的“死角”和产生沉积涂膜的裸露金属件。
③加强过滤,推荐采用精度为25μm的过滤元件,养活泡沫。
④确保被涂面清洁,不应有磷化沉渣,防止二次污染。
⑤清理烘干室和空气过滤器。
⑥保持涂装环境清洁,检查并消除空气的尘埃源。
⑦确保新补涂料溶解良好,色浆细度在标准范围内。
二、缩孔(陷穴)
(1)现象
在湿的电泳涂膜上看不见,当烘干后漆膜表面出现火山口状的凹坑,直径通常为0.5~3.0mm,不露底的称为陷穴、凹洼、露底的称为缩孔,中间有颗粒的称为“鱼眼”。产生这一弊病的主要原因是电泳湿涂膜中或表面有尘埃,油污与电泳涂料不相溶的粒子,成为陷穴中心,使烘干初期的湿漆膜流展能力不均衡,而产生涂膜缺陷。
(2)产生原因
①被涂物前处理脱脂不良或清洗后又落上油污、尘埃。
②槽液中混入油污,漂浮在液面或乳化在槽液中。
③电泳后冲洗液混入油污。
④烘干室内不净,循环风内含油分。
⑤槽液的颜基比失调,颜料含量低的易产生缩孔。
电泳常见问题及解决方法
一、颗粒
(1)现象
在烘干后的电泳涂膜表面上有手感粗糙的、较硬的粒子,或肉眼可见的细小痱子,往往被涂物的水平面较垂直面严重,这种漆膜病态称为颗粒。
(2)产生原因
①CED槽液PH值偏高,碱性物质混入,造成槽液不稳定,树脂析出或凝聚。
②槽内有沉淀“死角”和裸露金属处。
③电泳后清洗液脏、含漆量过高,过滤不良。
④进入的被涂物面及吊具不洁,磷化后水洗不良。
⑤在烘干过程中落上颗粒状污物。
⑥涂装环境脏。
⑦补给涂料或树脂溶解不良,有颗粒。
(3)防治方法
①将CED槽液的PH值控制在下限,严禁带入碱性物质,加强过滤,加速槽液的更新。
②消除易沉淀的“死角”和产生沉积涂膜的裸露金属件。
③加强过滤,推荐采用精度为25μm的过滤元件,养活泡沫。
④确保被涂面清洁,不应有磷化沉渣,防止二次污染。
⑤清理烘干室和空气过滤器。
⑥保持涂装环境清洁,检查并消除空气的尘埃源。
⑦确保新补涂料溶解良好,色浆细度在标准范围内。
二、缩孔(陷穴)
(1)现象
在湿的电泳涂膜上看不见,当烘干后漆膜表面出现火山口状的凹坑,直径通常为~,不露底的称为陷穴、凹洼、露底的称为缩孔,中间有颗粒的称为“鱼眼”。产生这一弊病的主要原因是电泳湿涂膜中或表面有尘埃,油污与电泳涂料不相溶的粒子,成为陷穴中心,使烘干初期的湿漆膜流展能力不均衡,而产生涂膜缺陷。
(2)产生原因
①被涂物前处理脱脂不良或清洗后又落上油污、尘埃。
②槽液中混入油污,漂浮在液面或乳化在槽液中。
③电泳后冲洗液混入油污。
④烘干室内不净,循环风内含油分。
⑤槽液的颜基比失调,颜料含量低的易产生缩孔。
⑥涂装环境脏、空气可能含有油雾、漆雾,含有机硅物质等污染被涂物或湿涂膜。
电泳常见问题及处理方法
电泳常见问题及处理方法
电泳是一种常用于分离生物分子的实验技术,但在实验过程中常常会遇到一些问题。以下是电泳实验中常见问题及相应的处理方法:
**1. ** 电流不稳定或电流为零:
- **可能原因:** 电源故障、电极接触不良、电极泄露或电极材料老化。
- **处理方法:**
-检查电源设备,确保其正常工作。
-检查电极接触情况,确保良好接触。
-替换老化的电极材料。
**2. ** 样品移动过快或过慢:
- **可能原因:** 缓冲液浓度、电场强度、电泳时间等因素影响。
- **处理方法:**
-调整缓冲液的浓度,确保适当的离子浓度。
-调整电场强度。
-控制电泳时间,确保合适的分离时间。
**3. ** 电泳带模糊或扩散:
- **可能原因:** 样品浓度过高、电场强度过大、电极材料老化等。
- **处理方法:**
-减少样品浓度。
-降低电场强度。
-更新电极材料。
**4. ** 电泳带畸变:
- **可能原因:** 缓冲液PH值不合适、电极材料污染、样品准备不当等。
- **处理方法:**
-调整缓冲液PH值。
-清理电极材料。
-重新准备样品。
**5. ** 电泳槽泄露:
- **可能原因:** 电泳槽密封不良、槽体老化等。
- **处理方法:**
-检查槽体密封情况。
-更换老化的槽体。
**6. ** 电泳带粘在电极上:
- **可能原因:** 电极表面污染、电场强度过大等。
- **处理方法:**
-清理电极表面。
-降低电场强度。
**7. ** 电泳结束后凝胶上有色斑:
- **可能原因:** 染色不充分、凝胶中存在异物等。
- **处理方法:**
电泳过程中常见的问题及解决的方法
电泳过程中常见的问题及解决的方法
电泳施工中常见漆膜缺陷及防止办法
虽然电泳涂装是大量操作变量的动态平衡,操作人员不时地对电泳涂装工艺的控制参数进行监控和调整,就可以获得良好的外观、膜厚和物理特性。因此,当检测出漆膜缺陷时,就应对它进行一系列准确、可靠的分析,然后及时提出解决办法
1 )纯水水质要求在电导率<5μs/cm
2 )槽液液温控制在25 -30℃(冷热循环控制)
3 )进槽要清洗干净,不要将酸碱带入槽中
问题原因解决对策
膜厚不足固体份低提高固体份电压低提高电压温度低提高温度
漆膜过厚工作周围循环不好通常因泵,过滤器及喷嘴阻塞所致固体份高降低固体份
温度高降低温度
电导率高提高超滤液排放量
电压高降低电压
水迹沌水不干净换纯水温度过高降低湿度固体份过低加漆
起泡工作表所不洁净充分水洗
漆膜外观不丰满颜色基比过高减少颜料补加,增加树脂含量
槽液有泡沫进气漏气检查管道和泵是否泄漏溢流槽液体过低提出高液体高度
涂膜粗糙颜料份高减少色浆,增加树脂电导率高超滤,降低电导率
针孔槽液温度低升高槽液温度电导率过高超滤降低电导率
漆膜不均匀,破裂槽液温度高降低温度
电压高降低电压
电导率高超滤降低电导率
斑纹地图斑痕底材表面污染检查金属表面漆迹清洗不够增加清洗
凹孔,缩孔杂质污染清除工件上杂质颜料份低补加色浆
硬度烘烤时间延长,严格按工艺操作烘烤温度升温
不够流平加溶剂
麻点液温低升温溶剂少加溶剂浓度低加漆
条纹表面外观不佳电压升高快溶剂含量低槽液固含量低
常见故障及其纠正方法
故障产生原因纠正方法
桔皮或表面粗糙电压过高降低电压
溶液温度高降低温度
电泳常见问题
六、表面发乌
产生原因: 产生原因:
解决办法: 解决办法:
七、花纹
产生原因: 产生原因:
解决办法: 解决办法:
电泳产品常见表面质量问题的原因及解决方法
一、水印
产生原因: 产生原因:
解决办法: 解决办法:
Leabharlann Baidu
二、渣子
产生原因: 产生原因:
解决办法: 解决办法:
三、漏漆
产生原因: 产生原因:
解决办法: 解决办法:
四、麻面
产生原因: 产生原因:
解决办法: 解决办法:
五、划痕
产生原因: 产生原因:
解决办法: 解决办法:
电泳常见问题及解决方法
阳极电泳罕睹问题及办理要领之阳早格格创做
一、颗粒
(1)局里
正在烘搞后的电泳涂膜表面上有脚感细糙的、较硬的粒子,大概肉眼可睹的细小痱子,往往被涂物的火仄里较笔曲里宽重,那种漆膜病态称为颗粒.
(2)爆收本果
①CED槽液PH值偏偏下,碱性物量混进,制成槽液没有宁静,树脂析出大概凝结.
②槽内有重淀“死角”战裸露金属处.
③电泳后荡涤液净、含漆量过下,过滤没有良.
④加进的被涂物里及吊具没有净,磷化后火洗没有良.
⑤正在烘搞历程中降上颗粒状污物.
⑥涂拆环境净.
⑦补给涂料大概树脂溶解没有良,有颗粒.
(3)防治要领
①将CED槽液的PH值统制正在下限,宽禁戴进碱性物量,加强过滤,加速槽液的革新.
②与消易重淀的“死角”战爆收重积涂膜的裸露金属件.
③加强过滤,推荐采与细度为25μm的过滤元件,养活泡沫.
④保证被涂里浑净,没有该有磷化重渣,预防两次传染.
⑤浑理烘搞室战气氛过滤器.
⑥脆持涂拆环境浑净,查看并与消气氛的灰尘源.
⑦保证新补涂料溶解劣良,色浆细度正在尺度范畴内. 两、缩孔(陷穴)
(1)局里
正在干的电泳涂膜上瞅没有睹,当烘搞后漆膜表面出现火山心状的凸坑,曲径常常为0.5~3.0mm,没有露底的称为陷穴、凸洼、露底的称为缩孔,中间有颗粒的称为“鱼眼”.爆收那一毛病的主要本果是电泳干涂膜中大概表面有灰尘,油污与电泳涂料没有相溶的粒子,成为陷穴核心,使烘搞初期的干漆膜流展本领没有均衡,而爆收涂膜缺陷.
(2)爆收本果
①被涂物前处理脱脂没有良大概荡涤后又降上油污、灰尘.
②槽液中混进油污,漂浮正在液里大概乳化正在槽液中.
电泳常见问题分析和解决方案
电泳操作要点
1 )纯水水质要求在电导率< 5μs/cm
2 )槽液液温控制在 25 -30℃ (冷热循环控制)
3 )进槽要清洗干净,不要将酸碱带入槽中
4 )电泳漆要晾于然后进烘箱,烤温时不要升温太快
电泳常见问题及解决方案
问题原因解决对策
膜厚不足固体份低提高固体份
电压低提高电压
温度低提高温度
漆膜过厚工作周围循环不好通常因泵,过滤器及喷嘴阻塞
所致
固体份高降低固体份
温度高降低温度
电导率高提高超滤液排放量
电压高降低电压
水迹沌水不干净换纯水
温度过高降低湿度
固体份过低加漆
起泡工作表所不洁净充分水洗
漆膜外观不丰满颜色基比过高减少颜料补加,增加树脂含量槽液有泡沫进气漏气检查管道和泵是否泄漏
溢流槽液体过低提出高液体高度
涂膜粗糙颜料份高减少色浆,增加树脂
电导率高超滤,降低电导率
针孔槽液温度低升高槽液温度
电导率过高超滤降低电导率漆膜不均匀,破裂槽液温度高降低温度
电压高降低电压
电导率高超滤降低电导率
斑纹地图斑痕底材表面污染检查金属表面
漆迹清洗不够增加清洗
凹孔,缩孔杂质污染清除工件上杂质
颜料份低补加色浆
硬度烘烤时间延长,严格按工艺操作
烘烤温度升温
不够流平加溶剂
麻点液温低升温
溶剂少加溶剂
浓度低加漆
条纹表面外观不佳电压升高快
溶剂含量低槽液固含量低
常见故障及其纠正方法
故障产生原因纠正方法
桔皮或表面粗糙电压过高降低电压
溶液温度高降低温度
固体分过高稀释溶液
极距太近加大极距
烘烤加温太快压缩空气吹干后再烘烤
PH 值过高用有机酸调整
针孔或麻点固体分过低调整至工艺范围
PH 值过低降低溶液酸度
清洗水不干净换清洗水
溶液电导率太高超滤去掉杂质离子
电泳涂装常见问题汇总
电泳涂装常见问题汇总
电泳涂装常见问题及解决方法一
现象
可能产生的原因
对策
膜厚不足
固体份低
提高固体份
溶剂量少
补加溶剂
电压低
提高电压
温度低
提高温度
水迹
纯水不干净
换纯水
温度过高
降低湿度
固体份过低
加漆
溶剂含量高
适量超滤降低溶剂量
起泡
工作表所不洁净
充分水洗
漆膜外观不丰满
颜基比过高
减少颜料补加,增加树脂含量
补加溶剂
槽液有泡沫
进气漏气
检查管道和泵是否泄漏
溢流槽液体过低
提出高液体高度
固体份过高,槽液粘度太大降低固体份涂膜粗糙
颜料份高
减少色浆,增加树脂
电导率高
超滤,降低电导率
针孔
槽液温度低
升高槽液温度
电导率过高
超滤降低电导率
漆膜不均匀,破裂
槽液温度高
降低温度
电压高
降低电压
电导率高
超滤降低电导率
斑纹地图斑痕
基材表面污染
检查金属表面
漆迹
清洗不够
凹孔,缩孔
杂质污染
清除工件上杂质
颜料份低
补加色浆
硬度
烘烤时间
延长烘烤时间
烘烤温度低
升高温度
不够流平
加溶剂
麻点
液温低
升温
溶剂少
加溶剂
浓度低
加漆
条纹
表面外观不佳
电压升高快
溶剂含量低
槽液固含量低
电泳漆膜常见故障及其纠正方法故障
产生原因
纠正方法
桔皮或表面粗糙
降低电压
溶液温度高
降低温度
固体分过高
加水稀释槽液
极距太近
加大极距
烘烤加温太快
压缩空气吹干后再烘烤PH 值过高
用醋酸或乳酸调整
针孔或麻点
固体分过低
调整至工艺范围
PH 值过低
降低溶液酸度
清洗水不干净
换清洗水
溶液电导率太高
超滤去掉杂质离子
膜厚太薄
增加电泳电压或时间电镀表面针孔
压缩空气吹干后再烘烤火山口或油点
工件上附有油
加强除油工序
槽液面有油渍
防止槽液被油污染
加强循环过滤和超滤
电压高膜层厚
降低电泳电压和时间
彩虹
膜层太薄
增加电泳电压提高膜厚
SDS-PAGE电泳过程中常见问题以与解决方法
SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解
决方法
几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进展,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS-PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进展一些讨论:
Q:SDS-PAGE电泳的根本原理?
A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS 〔十二烷基硫酸钠〕, SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在到达饱和的状态下,每克多肽可与1.4g去污剂结合。当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-b*,式中:MW为分子量,*为迁移率,k、b均为常数,假设将分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在一样条件下进展电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
Q:配胶缓冲液系统对电泳的影响?
A:在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,别离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris -甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两
者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入别离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于别离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进展别离。所以,pH对整个反响体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素。
电泳常见问题解答
1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响?
在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素。2. 样品如何处理?
根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。
1)还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta 巯基乙醇)后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理,样品稀释适当浓度,加入上样Buffer,离心,沸水煮5min,再离心加样。
2)带有烷基化作用的还原SDS处理:碘乙酸胺的烷基化作用
可以很好的并经久牢固的保护SH基团,得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT,而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul 20%的碘乙酸胺,并在室温保温30min。
凝胶电泳问题
凝胶电泳问题
凝胶电泳是一种常见的生物学实验技术,用于分离和检测DNA、RNA和蛋白质等生物大分子的方法。在使用凝胶电泳时,可能会遇到以下一些常见问题:
1. 凝胶溶液凝固不均匀:可能是因为搅拌不均匀导致,解决方法是在配制凝胶溶液前彻底搅拌混合。
2. 凝胶电泳速度过快或过慢:速度过快可能是电压设置过高,速度过慢可能是电压设置过低。解决方法是调整电压使其达到合适的电泳速度。
3. 凝胶溶液漏出:可能是凝胶支架或腔室密封不好,解决方法是检查密封性并进行修复。
4. 杂散电流影响结果:可能是电泳槽中存在污染物导致的,解决方法是彻底清洗电泳槽和电极。
5. 电泳结果模糊或不清晰:可能是取样量不足或带电物质浓度过高,解决方法是调整取样量或稀释样品。
6. 凝胶溶胀或收缩:可能是凝胶制备过程中的化学物质失衡导致的,解决方法是检查凝胶制备过程中的化学物质配方和试剂质量。
如果遇到以上问题可以根据具体情况逐一排查,寻找解决方法。
另外,凝胶电泳是一项常见的实验技术,也可以向实验室的同事或专家咨询,以获取更准确的解决方案。
电泳仪的使用注意事项与维护和修理保养及解决方案
电泳仪的使用注意事项与维护和修理保养及
解决方案
电泳仪于1937年研发,常用支持物体有滤纸、醋酸纤维薄膜等。电泳技术是分子生物学讨论不可缺少的紧要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。
一、电泳仪的使用注意事项:
1、电泳仪/电泳槽通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要
应先断电,以免触电。同时要求仪器必需有良好接地端,以防漏电。
2、仪器通电后,不要临时加添或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3、由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至尽头所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4、在总电流不超过仪器额定电流时(zui大电流范围),可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则简单影响仪器寿命。
5、某些特别情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必需先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,简单造成不必要的人为机器损坏。
6、电泳仪/电泳槽使用过程中发觉异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立刻切断电源,进行检修,以免发生意外事故。
二、电泳仪常见问题及其解决方法:
1、电泳仪的输出达不到设定值
答:电泳仪的输出值状态遵“循欧姆定律”:电压U=电流I (电泳槽)电阻R,电阻R相对不变的情况下,U、I、P(功率P=电流I电压U)中任意1个参数恒定,其他参数也随之恒定;而任意1个参数变化,其他参数也随之正比变化。假如电泳仪的输出电压U 达不到预置值,应首先察看I或P是否已经恒定,或者已经达到电泳仪所规定的zui大I或P(JY电泳仪均有明确指示灯标志)。假如尚未达到极限值,将已经恒定I或P的设置调大(有必要的话限值),才能够提高电压输出。假如电泳仪的电流I达不到预置值,可调整电压U或功率P。假如电泳仪的功率P达不到预置值,可调整电压U或电流I。
聚丙烯酰胺凝胶电泳 常遇到的问题
聚丙烯酰胺凝胶电泳常遇到的问题
在使用聚丙烯酰胺凝胶电泳时,常遇到的问题可能包括:
1. 凝胶聚合不完全或凝胶反应失败:这可能是由于聚合物配制或反应条件不正确引起的。解决方法可以是重新制备凝胶或调整反应条件。
2. 凝胶致密度不一致:这可能是由于凝胶配制不均匀或注射不均匀引起的。解决方法可以是确保凝胶配制均匀,并使用均匀的注射装置。
3. 凝胶断裂或脱离支架:这可能是由于凝胶制备过程中操作不当或支架等部件损坏引起的。解决方法可以是重新制备凝胶,注意操作细节,并确保使用良好的支架。
4. 电流过大或过小:这可能是由于电流设置不正确或电泳条件不合适引起的。解决方法可以是调整电流设置或优化电泳条件。
5. 样品加载和分离不理想:这可能是由于样品加载量不恰当或主动力和分辨率不合适引起的。解决方法可以是调整样品加载量,优化主动力和分辨率条件。
6. 染色结果不清晰或不均匀:这可能是由于染色时间不足或染色剂使用不当引起的。解决方法可以是延长染色时间或重新选择染色剂。
7. 结果重复性差:这可能是由于实验过程中存在误差或操作不
一致引起的。解决方法可以是标准化实验流程,注意操作细节,并进行必要的质量控制。
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阴极电泳常见问题及解决方法
一、颗粒
(1)现象
在烘干后的电泳涂膜表面上有手感粗糙的、较硬的粒子,或肉眼可见的细小痱子,往往被涂物的水平面较垂直面严重,这种漆膜病态称为颗粒。
(2)产生原因
①CED槽液PH值偏高,碱性物质混入,造成槽液不稳定,树脂析出或凝聚。
②槽内有沉淀“死角”和裸露金属处。
③电泳后清洗液脏、含漆量过高,过滤不良。
④进入的被涂物面及吊具不洁,磷化后水洗不良。
⑤在烘干过程中落上颗粒状污物。
⑥涂装环境脏。
⑦补给涂料或树脂溶解不良,有颗粒。
(3)防治方法
①将CED槽液的PH值控制在下限,严禁带入碱性物质,加强过滤,加速槽液的更新。
②消除易沉淀的“死角”和产生沉积涂膜的裸露金属件。
③加强过滤,推荐采用精度为25μm的过滤元件,养活泡沫。
④确保被涂面清洁,不应有磷化沉渣,防止二次污染。
⑤清理烘干室和空气过滤器。
⑥保持涂装环境清洁,检查并消除空气的尘埃源。
⑦确保新补涂料溶解良好,色浆细度在标准范围内。
二、缩孔(陷穴)
(1)现象
在湿的电泳涂膜上看不见,当烘干后漆膜表面出现火山口状的凹坑,直径通常为0.5~3.0mm,不露底的称为陷穴、凹洼、露底的称为缩孔,中间有颗粒的称为“鱼眼”。产生这一弊病的主要原因是电泳湿涂膜中或表面有尘埃,油污与电泳涂料不相溶的粒子,成为陷穴中心,使烘干初期的湿漆膜流展能力不均衡,而产生涂膜缺陷。
(2)产生原因
①被涂物前处理脱脂不良或清洗后又落上油污、尘埃。
②槽液中混入油污,漂浮在液面或乳化在槽液中。
③电泳后冲洗液混入油污。
④烘干室内不净,循环风内含油分。
⑤槽液的颜基比失调,颜料含量低的易产生缩孔。
⑥涂装环境脏、空气可能含有油雾、漆雾,含有机硅物质等污染被涂物或湿涂膜。
⑦补给涂料有缩孔或其中树脂溶解不良,中和不好。
(3)防治方法
①加强被涂物的脱脂工序,确保磷化膜不被二次污染。
②在槽液循环系统设除油过滤袋,同时查清油污源,严禁油污带入槽中。
③提高后清洗水质,加强过滤。
④保持烘干室和循环热风的清洁。
⑤调整槽液的颜基比,适当加色浆提高颜料含量。
⑥保持涂装环境洁净,清除对涂装有害物质源,尤其是有机硅物质源。
⑦加强补给涂料的管理,不合格的不能添加入槽中,确保补给涂料溶解、中和、过滤好。
三、针孔
(1)现象电泳涂膜在烘干后产生针尖状的小凹坑或小孔,这种涂膜弊病称为针孔,它与缩孔(麻坑)的区别是孔径小、中心无异物、四周无漆膜堆积凸起。根据产生的原因针孔有下列几种:
①由湿涂膜再溶解耐引起的针孔,称为再溶解针孔。
②电泳过程中,由于电解反应激烈,产生气泡过多、脱泡不良或因槽液温度偏低或搅拌不充分,造成被漆膜包裹,在烘干过程中气泡破裂而产生的针孔,称为气泡针孔。
③带电入槽阶梯针孔:发生在带电入槽阶梯弊病程度严重的场合下,针孔是沿入槽斜线露出底板,另外,由于槽液对物体表面润湿不良,使一些气泡被封闭在漆膜内或是槽液表面的泡沫附着在工件表面上形成气泡针孔,一般产生在被涂物的下部。
(2)产生原因
①电泳涂装后被涂物出槽清洗不及时,湿涂膜产生再溶解。
②槽液中杂质离子含量过高,电解反应剧烈,被涂物表面产生过多气体。
③磷化膜孔隙率高,也易含量气泡。
④槽液温度偏低或搅拌不充分,使湿膜脱泡不良。
⑤工件带电入槽时运输链速度过慢。
⑥被涂物入槽端槽液面流速低,有泡沫堆积。
(3)防治方法
①被涂物离开槽液应立即用UF液或纯水冲洗,时间不超过1min。
②排放UF液、加纯水,降低杂质离子的含量。
③调整磷化配方及工艺,使磷化膜结晶致密化。
④加强槽液搅拌,确保槽液温度在28~30℃下运行。
⑤在链速过慢的场合,不宜选用带电入槽方式的电泳涂装工艺,改用入槽后通电。
⑥使槽液面流速大于0.2m/s,消除堆积的泡沫。
四、再溶解
(1)现象
泳涂沉积在被涂物上的湿涂膜,被槽液或UF清洗液再次溶解,产生涂膜变薄、失光、针孔、露底等现象。
(2)产生原因
①电泳后的被涂件在电泳槽液或UF液中停留(接触)时间过长。
②槽液和UF液的PH值偏低,溶剂含量偏高,后冲洗压力过高,清洗时间过长。
③设备故障,造成停链。
(3)防治方法
①断电后工件立即出槽,出槽后至后清洗间隔时间和在UF液中停留时间不宜超过1min。
②将槽液和UF液的PH值和溶剂含量严格控制在工艺规定范围内,每次UF液清洗时间应控制在20s左右,冲洗压力不应超过0。12MPa。
③应及时排除设备故障。
五、泳涂有膜厚偏薄
(1)现象被涂物泳后表面的干涂膜厚度不足,低于工艺规定的膜厚。主要是工艺参数执行不严,槽液老化、失调、导电不良和再溶解造成的。
(2)产生原因
①槽液固体分偏低。
②泳涂电压低,泳涂时间不足。
③槽液温度低于工艺规定的范围。
④槽液电导率低。
⑥槽液老化,更新期长,使湿漆膜电阻过高,槽液电导变低。
⑦极板连接不良和被腐蚀损失,极液电导低,极罩隔膜堵塞。
⑧被涂物通电不良。
⑨UF液后冲洗时间过长,产生再溶解。
⑩阴极电泳槽液的PH值偏低。
(3)防治方法
①提高槽液固体分,按工艺规定控制在通常情况下±0.5%以内。
②提高泳涂电压,延长泳涂时间。
③将槽液温度控制在工艺规范的上限。
④减少UF液的损失。
⑤补加UF液的损失。
⑥加速槽液更新,添加增厚调整剂。
⑦检查极板、极罩和极液系统,定期清理或更新,使其导电良好。
⑧清理挂具,使被涂物通电良好。
⑨缩短UF液冲洗时间。
⑩加速阳极液的排放,或添加低中和度涂料,使槽液的PH值升到工艺规定的要求。
六、泳涂的漆膜过厚
(1)现象被涂物表面的膜厚度超过工艺规定的膜厚,如果漆膜外观仍很好,一般不是弊病,主要是涂料消耗增大,成本增高。