高效液相色谱样品前处理
高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物
高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物摘要：维生素C(VC)，又称L-抗坏血酸，是一种天然抗氧化剂，抑制皮肤中酪氨酸酶活性，阻断黑色素生成，达到美白效果。
维生素C虽然活性高，但在溶液中不稳定，容易受到光、热、氧等因素的破坏，失去还原能力，限制了其在化妆品中的有效利用率。
关键词：高效液相色谱；维生素Ｃ；抗坏血酸葡糖苷；抗坏血酸磷酸酯镁；抗坏血酸乙基醚；一、样品处理1. 水易分散的样品。
适合化妆水、水乳液等含油脂较少的样品。
准确称取约 0. 500 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 30 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ，转移至 50 ｍＬ容量瓶中，用 0. 02ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0）定容至刻度。
混匀后取 10 ｍＬ溶液于 15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22μｍ滤膜，滤液待测。
2. 水不易分散的样品。
适合面膏等含油脂较高及凝胶类、啫喱类样品。
准确称取约 0. 250 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 1. 0 ｍＬ二氯甲烷，涡旋混合至样品均匀分散后，准确加入 25 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ。
混匀后取 10 ｍＬ溶液于15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22 μｍ滤膜，滤液待测。
被测物含量超过标准曲线的线性范围时可取适量试样滤液用提取溶剂稀释后再测定。
二、样品前处理条件的优化维生素Ｃ和抗坏血酸磷酸酯镁易溶于水，抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸乙基醚是亲油亲水两性物质；维生素Ｃ在碱性和中性条件下不稳定，因此考虑采用酸性溶液作为提取溶剂。
化妆品基本上分为不需要乳化的液体类及需要乳化的膏霜类两大类。
前者含水量高，在水溶剂中容易分散形成均匀体系；后者含有一定的油脂，密度较高，在水溶液中不易分散。
高效液相色谱制样
高效液相色谱制样高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，缩写为HPLC）制样是指在对分离物质进行谱图检测前，将样品中的目标物质通过一系列方法进行富集、精制处理，以达到更好的分离效果。
HPLC是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术，在生产和科研中被广泛使用。
HPLC制样的基本流程主要包括样品的预处理和HPLC分离之前的样品富集处理。
样品预处理是指将样品中可能存在的干扰物质去除，以便于后续的分离和检测。
而HPLC分离前的样品富集处理，则是指将目标物质从复杂的样品基质中富集纯化，以提高检测的灵敏度。
样品预处理主要包括：1. 样品的前处理：如样品的粉碎、研磨、混匀等步骤，以确保样品中的目标物质均匀分布。
2. 样品的净化：如样品的过滤、离心等步骤，以去除杂质物质，确保样品的纯度。
3. 样品的化学转化：如样品的酸碱调节、氧化还原、酶解、蒸馏等步骤，以使目标物质得到更好的稳定性和纯度。
HPLC分离前的样品富集处理主要包括：1. 固相萃取（solid-phase extraction，简称SPE）：将样品溶液通过固相柱，以富集目标物质，去除干扰物质。
2. 液-液萃取（liquid-liquid extraction，简称LLE）：利用样品中组分的亲疏水性差异，采用萃取剂与样品进行混合萃取分离。
3. 气相萃取（gas chromatography，简称GC）：将样品挥发成气态，通过气相柱，以分离目标物质。
4. 薄层色谱（thin-layer chromatography，简称TLC）：利用样品在薄层分离柱中的迁移差异，以分离目标物质。
总之，HPLC制样是HPLC分析中非常关键的步骤，通过对样品的预处理和富集处理，可以最大限度地提高分离和检测的效果，使得检测结果更加准确、可靠。
液相色谱分析纯化样品前处理
4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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样品采集
• 气体样品的采集
– 直接采集和富集采集
• 液体样品与固体样品的采集 • 样品采集的注意事项
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SPME实验过程
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SPME装置
萃取模式的选择 直接SPME模式 顶空SPME模式
通过装在注射器内石英纤维萃取 头表面的高分子涂层，对样品中的 有机物进行选择性萃取和预富集， 然后将富集了分析物的涂层立即插 入气相色谱进样口热解吸进样。
• 大部分的原始样品不适合直接分析，需要对其 进行前处理
• 样品前处理的情况将影响定性和定量结果的准 确性
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样品前处理的原则
• 收集的样品必须具有代表性 • 采样方法必须与分析目的保持一致，并且采集到
• 特殊样品制备 • 应用实例分析
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样品处理概况
• 根据所需采集的原始样品和样品基体的性质、 所要获得的信息( 分析测试的目的)、允许的分 析时间和色谱仪器对所分析样品的要求等，决 定样品的采集和制备方法及其程序。
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液相色谱中样品前处理技术
液相色谱中样品前处理技术综述在复杂基体中低浓度甚至是痕量的有机化合物的分离和测定是分析化学所面临的一个挑战。
在样品前处理方面,现代色谱分析样品制备技术的发展趋势是使处理样品的过程要简单、处理速度快、使用装置小、引进的误差小,对欲测组分的选择性和回收率高。
目前国际上液相色谱通常采用的样品处理技术有:固相萃取(MXPD)、超临界萃取(SFE)、固相微萃取技术。
而我国目前主要采用传统的溶剂萃取,液液分配、柱层析净化,前处理方法自动化程度低,提取净化的效率不高,速度慢,环境污染严重。
新开发的前处理技术其目的和结果就是要实现快速、有效、简单和自动化的完成分析样品制备过程。
下以就简单介绍几个主要的样品处理技术:1.溶剂萃取在色谱分析样品制备中,溶剂萃取方法主要有液-液萃取、液-固萃取和液-气萃取,它们都是属于两相间的传质过程,即物质从一相转入另一相的过程。
溶剂萃取技术在我们液相色谱分析的样品制备过程中,是用到最为广泛的一种技术。
关于其原理和方法,在此不再赘述。
在液-液萃取中非常重要的操作是急速的振动样品,这样可以确保两相的完全接触,有助于质量传递。
由于物质剧烈的振动,使得乳化现象经常发生,特别是那些含有表面活性剂和脂肪的样品。
为了防止乳化形成,常采用加热或加盐的方法破乳。
通过改变K D值,改变溶剂或化学平衡作用的添加剂,如使用缓冲剂调节PH,盐调节离子强度等。
常用于破乳的技术有:(1)加盐;(2)使用加热-冷却萃取容器;(3)通过玻璃棉塞过滤乳化液样品;(4)通过相过滤纸过滤乳化液样品(5)通过离心作用;(6)加少量的不同的有机溶剂。
溶剂萃取的方式在现代水产品检测技中应用十分广泛,因其实验器材简便,经济,容易操作。
在鱼体的孔雀石绿,环丙沙星等药物残留的检测中,都有用到溶剂萃取的方式。
在孔雀石绿残留的检测中,为了防止乳化现象的产生,也用到了二甘醇这进行破乳。
2.固相萃取(solid phase extraction SPE)1固相萃取(SPE)是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离。
高效液相色谱样品预处理步骤
高效液相色谱样品预处理步骤1. 样品准备在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。
因此，在样品准备过程中需要注意以下几点：（1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化；（2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡；（3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。
2. 样品过滤在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。
通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。
3. 样品衍生化在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。
衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。
4. 样品稀释在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。
过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。
通常使用的的是溶剂或水进行稀释。
5. 样品进样在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。
在进行进样时，需要注意以下几点：（1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载；（2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。
6. 样品分离在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。
通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。
在进行分离时，需要注意以下几点：（1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离；（2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。
7. 检测器检测在分离后的各个化合物通过色谱柱流出时，需要使用检测器进行检测。
常见的检测器有紫外可见光检测器、电导检测器、荧光检测器等。
检测器可以提供样品的信号，并记录下各个化合物的在色谱图中的保留时间。
8. 数据处理在检测器检测完成后，需要对数据进行处理。
岛津高效液相色谱仪LC-2030操作规程
一、分析前准备1.1 流动相前处理将流动相（色谱纯级别的甲醇、乙腈或去离子水）经过0.45um的微孔滤膜过滤后，倒入流动相瓶中，放入超声波清洗器内震荡排气20分钟左右（注意将瓶盖轻轻盖上防灰）1.2 流动相安装将处理好的流动相放在储液托盘上，将对应通道的洗液管路分别放入流动相瓶中，盖好瓶盖并记好对应通道的流动相种类。
1.3 样品记录将样品处理稀释后使用注射器过滤头过滤后装入1.5ml样品瓶中（大约三分之二），放入自动进样器的样品架上，并记录样品瓶位置以便设置批处理文件。
1.4 色谱柱安装打开柱温箱门，将色谱柱的出口端安装在色谱柱夹具上，在色谱柱上连接配管，在色谱柱出口端连接检测器入口端的蓝色PEEK管。
1.5 检查清洗液在RINSE通道内放置50%甲醇：水溶液；含有两根管路的通道内放置10%异丙醇：水溶液。
（清洗液建议至少一月更换一次）二、开始分析2.1仪器开机打开仪器左方的电源开关，待自检完成后，使用触屏笔输入登录通行ID Number （默认值为“00000”），按下OK进入初始窗口2.2 启动LabSolutions双击桌面的LabSolutions图标在登录菜单里，正确输入用户名和密码（默认用户名为“admin”，密码不填），点击确定，进入LabSolutions主项目LabSolutions主项目包含4个子项目，“仪器”为在线采集项目；“处理工具”为离线处理数据项目；“管理工具”为软件管理属性设置项目；“手册”为软件在线使用手册。
2.3 进入在线采集双击图标，正常连接能听到“滴”的连接提示音，如硬件不匹配提示，请参考附录，重新做系统配置2.4 进入数据采集界面进入数据采集界面后，看到以下画面2.5 选择（新建或打开）方法文件点击主项目下的进入数据采集项目，点击工具栏中的新建或打开快捷键新建或者打开一个方法文件。
在“仪器参数”界面设置数据采集所需参数，主要包括：泵（模式：四元低压梯度；流速；各通道流动相比例和压力上限）；检测器波长、检测池温度；数据采集结束时间；柱温箱温度以及自动排气等。
FL2200仪器操作说明
福立FL2200-2高效液相色谱操作流程1.样品前处理。
请严格配制流动相、标样和样品溶液，具体注意事项看仪器使用说明书2.打开电脑电源，打开FL2200反控色谱工作站3.打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器电源开关，仪器自动自检4.仪器自检完毕后直接进入工作界面，此时工作站上相应图标变得可操作5.设定泵A的流量为1mL/min，点击A【泵启动】，如果使用梯度泵，则先填写梯度程序。
此时泵图标由白色变成蓝色，表示泵工作6.设置柱温箱温度，点击【柱箱开】，柱箱自动升到设定温度7.设置检测器波长为实际分析样品所需波长8.设置自动进样器参数，自动进样器的位置参数在出厂时已经设置好，在此只需要设置与样品相关的参数即可9. 待基线稳定，进行进样操作，点击自动进样器启动，自动进样器根据我们实际设定值进行自动进样10. 做样结束，进行清洗A、仪器系统的清洗，如有必要，再执行以下清洗仪器做样完毕后，关闭检测器→停泵→把吸滤头放于甲醇：水=10：90的溶液中→打开“放空阀”→点击“清洗”→清洗2~5分钟→停泵→关闭“放空阀”→调节流量为1.00ml/min→启动泵→清洗系统30min（具体视柱子在冲洗时压力是否正常，如一般10%甲醇水清洗稳定的压力在10~11之间，要求色谱柱为[C18 4.6*250mm 5um]，如果大于该值，说明冲洗不完全，请继续清洗）→压力正常→把吸滤头放于纯甲醇中→冲洗30min（具体视柱子在冲洗时压力是否正常，如一般甲醇清洗稳定的压力在5~7之间，要求色谱柱为[C184.6*250mm 5um]，如果大于该值，说明冲洗不完全，请继续清洗）→清洗完毕→关闭泵电源。
B、清洗进样针、进样器做样完毕后，请及时清洗自动进样器进样针、进样器。
C、清洗柱塞杆做样结束后，定时间清柱塞杆，清洗柱塞杆一般用10%甲醇水溶液清洗30ml 11. 清洗完毕，关掉仪器和电脑的电源开关。
液相色谱样品前处理流程
液相色谱样品前处理流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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高效液相色谱的使用方法
高效液相色谱的使用方法高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种用于分离、分析和测定混合物中组分的技术。
以下是高效液相色谱的使用方法：1. 样品制备：根据需要，样品可以通过溶解、浸提、纯化等方法进行前处理。
确保样品是均匀的，并且符合HPLC分析要求。
2. 选择合适的色谱柱：根据分析目标，选择合适的色谱柱，包括固定相（C18、C8、氨基、芳基等）和柱型（反相、离子交换、排除等）。
色谱柱质量对分离和分析结果至关重要。
3. 准备移动相：根据色谱柱要求和分析目标，选择合适的移动相。
移动相通常由溶剂和缓冲液组成，可以通过改变溶剂的组成和比例来调节色谱条件。
4. 设定色谱条件：根据需要，设定合适的色谱条件，包括流动相速度、柱温、检测波长等。
这些条件将直接影响分离的效果和分析的准确性。
5. 校准仪器：在开始分析之前，校准色谱仪和检测器，确保其准确性和稳定性。
校准通常包括检测器灵敏度、波长、流速等参数。
6. 注样和运行：将样品注入色谱柱，启动色谱仪，使移动相通过柱子，分离出样品中的各组分。
根据需要，通过改变运行时间、流速等参数，调节分离和分析的效果。
7. 数据分析：通过检测器检测样品中各组分的吸光度或荧光强度，并记录数据。
可以使用特定的色谱软件对数据进行处理和解析，以获得准确的分析结果。
8. 数据解释：根据分析结果，对样品中的各组分进行定量或定性的解释。
可以使用标准品进行定量分析，或者与已知数据进行比对，以确认各组分的身份和浓度。
9. 清洗和维护：在完成分析后，及时清洗色谱柱和仪器，以保持其性能和寿命。
根据需要，使用适当的溶剂进行清洗，并使仪器处于良好的工作状态。
总之，高效液相色谱的使用方法包括样品制备、色谱柱选择、移动相准备、色谱条件设定、校准仪器、注样和运行、数据分析、数据解释以及清洗和维护等步骤。
熟练掌握这些方法能够有效地进行高效液相色谱的分离和分析。
高效液相色谱样品前处理
高效液相色谱样品前处理1.高效液相色谱法分析样品为什么要进行样品前处理(1)样品浓度调节：某些待测组分在样品中的浓度过低或过高，造成仪器检测困难，因此需要提前对样品进行浓缩或稀释。
(2)避免污染，保护仪器：某些样品的酸碱度、离子强度等易造成系统污染和缩短仪器使用寿命(3)消除干扰：基体或共存物质的干扰(4)介质置换：样品介质不适合后续的分离和检测，需要提前进行介质置换。
2.高效液相色谱法分析样品前处理的遵循原则(1)去除基体杂质，消除干扰因素；(2)完整保留待测组分，处理过程中尽可能避免待测组分发生化学反应或被污染；(3)方法简单易行、重现性好、成本低。
3.高效液相色谱法分析样品前处理技术干扰物质，然后用洗脱液将待测组分分离出来。
染分析微波辅助萃取利用高频电磁波的作用，使样品中待测组分从胞内释放出来，并在低温下溶解于萃取溶剂中，过滤，达到分离的目的。
天然药物、农药残留、有机金属化合物等物质的提取超声波辅助萃取利用超声波的机械效应、空化作用以及热效应等，破坏样品细胞组织，加大细胞内的传质效率，从而促进待测组分的释放和提取。
蛋白质、多糖、烟碱等物质的提取超临界流体萃取采用二氧化碳作为流体，在超临界条件下，二氧化碳使样品的各组分依次萃取出来，当恢复常温和常压时，溶解在二氧化碳中的待测组分立即以液体状态与气态流体分离。
多用于天然物质的提取迪信泰检测平台以液相/气相为依托，采用HPLC/GC及LC-MS等检测平台，致力于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供生物、食品、药物、环境等多领域的物质检测服务。
高效液相色谱仪操作规程-U3000(已打印)
戴安中国有限公司液相色谱操作规程-U3000一、操作前准备：1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机：2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4选择开始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或双击屏幕右下角快捷图标,出现对话界面后点击Ｓtart启动,等Dongle序号出来以后（表示Sever Monitor程序运行正常）可以点击Close来关闭界面。
2.5打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌面上的Chromeleon图标（工作站主程序）打开HPLC软件系统主界面。
2.6 在左窗口中单击根目录，此时会在右边的窗口中出现一个“hplc.pan”文件，双击此文件打开HPLC控制面板程序。
2.7在控制面板“Pump”控制框中选中“connect”选框，Purge流路中气泡，设置总流速为适当的数值（建议要由0.2ml/min逐渐增加到适当的流速）后并按回车键（“Enter”）以示确定。
此时泵自动会以设置的流速进行运行。
hplc操作流程
hplc操作流程高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，它能够对化合物进行快速、高效、精确的分离和定量分析。
在实验室中，HPLC操作流程的规范性和准确性对于保证实验结果的可靠性至关重要。
下面将介绍HPLC操作流程的具体步骤，希望能够对大家有所帮助。
1. 样品处理。
首先，对待测样品进行处理。
通常情况下，样品需要通过溶解、过滤等步骤进行前处理，以确保样品的纯度和稳定性。
在处理过程中，需要注意避免样品受到外界污染或损害。
2. 色谱柱装填。
接下来是色谱柱的装填。
在进行色谱柱装填之前，需要根据待测化合物的性质选择合适的色谱柱和填料。
在装填过程中，要确保色谱柱的完整性和稳定性，避免气泡和漏液的产生。
3. 流动相配置。
根据待测样品的特性和分析要求，配置合适的流动相。
流动相的选择和配置对于分离和分析的效果具有重要影响，需要根据实际情况进行调整和优化。
4. 仪器参数设置。
在进行HPLC分析之前，需要对色谱仪进行参数设置。
包括流速、检测波长、温度等参数的设定，以确保分析的准确性和稳定性。
5. 样品进样。
将处理好的样品注入到进样装置中，进行自动或手动进样。
在此过程中，需要保证样品的进样量和速度均匀稳定，避免产生进样峰。
6. 色谱条件优化。
在进行分析之前，可以通过调整色谱条件来优化分离效果。
包括流速、温度、梯度程序等参数的调整，以获得最佳的分离效果和分析结果。
7. 数据采集和分析。
在分析过程中，需要对数据进行实时采集和记录。
通过色谱软件进行数据处理和分析，得到分析结果并进行解释和评价。
8. 仪器维护。
分析结束后，需要对色谱仪进行清洗和维护。
包括色谱柱的冲洗、流动相的更换、仪器的保养等工作，以确保仪器的正常运行和延长使用寿命。
以上就是HPLC操作流程的基本步骤，希望能够对大家在实验中的操作有所帮助。
在进行HPLC分析时，需要严格按照操作流程进行，确保实验的准确性和可靠性。
同时也要注意安全操作，避免发生意外事故。
祝大家实验顺利，取得理想的分析结果！。
高效液相色谱法测定食品中山梨酸
高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。
方法不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。
结果该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%~100%之间。
结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。
高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。
各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。
因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。
并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。
1 材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1 仪器戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。
1.1.2 试剂色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6％亚铁氰化钾；22％乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。
1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液(国家标准物质中心)。
1.1.3 色谱条件色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30℃；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL 。
1.2 前处理方法汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0 g于50ml容量瓶中，加入20～30ml纯水后超声脱气10 min，用1+1氨水调pH=7，稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤后上机。
[1，2]配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热出去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至50.0ml，经0.45μm滤膜过滤后上机。
简述下高效液相色谱仪的操作全流程
高效液相色谱仪的操作全流程一、实验准备阶段1. 配置流动相：高效液相色谱仪的操作首先需要配置好所需的流动相。
流动相是液相色谱中推动样品组分在色谱柱上移动并分离的溶剂或溶剂混合物。
配置流动相时，应注意所使用的溶剂不能对实验或设备造成影响或损害，如堵塞或腐蚀。
同时，流动相必须经过滤和脱气处理，以避免气泡对实验结果的影响。
在更换流动相时，还需要保证两种溶剂的互溶性，如不互溶，则需要使用一种中间溶剂进行过渡。
2. 冲洗和平衡色谱柱及仪器：在配置好流动相后，需要对仪器及色谱柱进行冲洗和平衡。
这是为了确保仪器压力正常，基线稳定，以及色谱柱的填料处于最佳状态。
冲洗和平衡的过程中，应使用与实验流动相相同的溶剂，并设定适当的流速和压力。
3. 样品处理：在进样前，样品需要经过必要的净化处理。
这包括通过0.45um以下的微孔滤膜过滤，确保样品是澄清溶液。
过滤后的样品应装入合适的液相色谱样品瓶中待用。
二、样品运行阶段1. 设置方法参数：根据实验需要，在仪器的控制软件中设置或调用相应的参数。
这些参数包括流速、流动相组成、进样量、柱温、检测波长等。
这些参数的设定将直接影响色谱分离的效果和实验结果的准确性。
2. 编辑进样序列表：根据样品信息，编辑进样序列表。
进样序列表应包含每个样品的名称、进样量、进样次数等信息。
编辑完成后，保存并运行序列方法以分析样品并得到数据。
三、数据分析阶段色谱得到的原始数据为色谱图，色谱图上的每个峰代表一个组分。
需要对色谱峰进行积分处理，获得峰面积。
峰面积的大小与组分的浓度成正比，因此可以用来定量计算组分的浓度。
根据实验需要，可以使用不同的方法进行定量计算，如外标法、内标法、面积百分比法等。
此外，仪器还可以得到光谱或质谱信息，通过这些信息可以获得定性信息，如组分的结构、分子式等。
四、实验结束阶段1. 冲洗色谱柱：在实验结束后，应使用高有机相/水相冲洗柱子以清除残留的样品和杂质。
冲洗时，应注意纯相的比例不要超过95%，以避免对色谱柱造成损害。
高效液相色谱法测定人血清中维生素E
高效液相色谱法测定人血清中维生素E实验目的：1.了解高效液相色谱的结构、原理及其应用范围。
2. 掌握仪器分析的研究方法和基本操作实验耗材与仪器：实验仪器：Agilent高效液相色谱仪1260系列实验设备：MX-F漩涡混合器、TGL-16G高速离心机，BF2000氮气吹干仪实验试剂：无水乙醇（分析纯）、正己烷（色谱纯）、甲醇（色谱纯）超净水、异丙醇（分析纯）实验步骤：一、样品前处理：1. 准确吸取血清0.1mL于2mL朔料离心管中，加入1μg/mL内标液（δ-VE）0.2mL。
2. 加入无水乙醇0.3mL，盖塞，用漩涡混合器充分混匀2min。
3. 加入正己烷0.6mL，盖塞，用漩涡混合器充分混匀2min。
4. 样品取出后立即离心（3000r/min，5mim），去上层（正己烷层）于另外的朔料管中（一定不要取下层）。
5. 对下层溶液重复提取2次。
6. 氮气吹干正己烷7. 立刻加入200μL无水乙醇，用漩涡器充分混合，使提取物完全溶解于无水乙醇中。
取溶解物100μL至带内衬管的进样瓶中待测。
二、标准曲线配置1.分别取γ-VE10μg/mL、α-VE20μg/mL、和内标δ-VE10μg/mL的标准工作液，用无水乙醇配置成1μg/mL的单标工作液。
2. 用α、γ-VE标准工作液配制工作曲线，使每个混合标准液中含有内标（δ-VE）1μg/mL，并用无水乙醇补足至1mL。
见下表1标准曲线配置工作表（直接配置于进样瓶）表1 标准曲线配置浓度与取样量三、用高效液相色谱法测定vit-E1. 过滤流动相2. 上机测定a)测定δ、γ、α-VE、和内标单标，保留时间定性b）测定α、γ-VE标准曲线，用他们与δ-VE内标的峰高比或面积比定量。
c）测定未知样品3. 仪器分析条件色谱柱：ZORBAX SB-Aa 5μm250*4.6mm流动相：甲醇：水=90：10流速：1.0μg/mL紫外线检测波长：295nm荧光激发波长：295nm，发射波长350nm进样量：20μL柱温：35℃实验结果与数据分析1. 定性保留时间见表2。
高效液相色谱使用方法
高效液相色谱使用方法一、流动相准备将流动相按比例混合，注意混合的流动相必须相互溶解，最好能将流动相混合在一起，若相互溶解性不好，可分成两种。
流动相配好后，将管路放入，注意不要将瓶口密封。
二、开机首先将真空泵打开，待泵的指示灯由黄变绿打；打开600泵开关，按Direct键，进入操作菜单。
三、抽气抽取管路A液体：先将注射器旋转插入，将旋钮由Run转至 Draw,抽液，完成后将旋钮由Draw至Run，再将注射器旋转取下，反复1-2次，抽至管路内无气泡。
抽取管路B液体：在泵操作菜单上将B设为100%，给0.2ml/min的流速，听到泵转换的声音后，将流速设为0，以抽取管路A的步骤进行抽气。
四、调节流动相比例与流速在泵操作菜单上设定流动相比例，并以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml/min的速度逐步升高流速，每次间隔3-5分钟。
五、2410示差检测器的使用1、打开2410示差检测器开关2、调整检测器内、外温度3、实验前一天晚上，使用“purge”状态平衡过夜，若第二天还要做实验，结束工作后不关机，节省第二天的平衡时间，保持0.2ml/min的流速。
六、2487紫外检测器的使用1、打开2487示差检测器开关，机器自动进入自检过程，约需7分钟。
2、设置检测波长3、预热30分钟左右，即可注样测定。
试验四、番茄内源激素高效液相色谱法测定一、样品准备取新鲜番茄根、茎、叶5克左右，液氮冷冻，放入冰箱储存。
配80％甲醇，冰箱冷冻。
二、提取样品放入预冷研钵，加l0ml 80％的冰冻甲醇研磨至匀浆，转入小烧杯中，再用甲醇清洗研钵2次，每次l0ml，转入小烧杯中。
小烧杯放入冰箱(0～4℃)冷藏14小时以上。
三、过滤取出用漏斗滤纸过滤，并用10m180％甲醇清洗残渣，合并滤液；如果提取液中沉淀物或色素多，则用10000g离心l0~12min，上清液转入冻干瓶中。
四、浓缩将冻干瓶中的液体用减压蒸干机蒸干(至瓶中液体结冰)，然后用2m1 80％的甲醇冲洗，如果有浑浊物，再次用离心机12000g离心l0min，倒入带有刻度的试管中，为保证试管中的液体有5ml左右，将不足5ml的试管中再加入一些甲醇。
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高效液相色谱样品前处理
1.高效液相色谱法分析样品为什么要进行样品前处理
(1)样品浓度调节：某些待测组分在样品中的浓度过低或过高，造成仪器检测困
难，因此需要提前对样品进行浓缩或稀释。
(2)避免污染，保护仪器：某些样品的酸碱度、离子强度等易造成系统污染和缩
短仪器使用寿命
(3)消除干扰：基体或共存物质的干扰
(4)介质置换：样品介质不适合后续的分离和检测，需要提前进行介质置换。
2.高效液相色谱法分析样品前处理的遵循原则
(1)去除基体杂质，消除干扰因素；
(2)完整保留待测组分，处理过程中尽可能避免待测组分发生化学反应或被污
染；
(3)方法简单易行、重现性好、成本低。
3.高效液相色谱法分析样品前处理技术
干扰物质，然后用洗脱液将待测组分
分离出来。
染分析
微波辅助萃取利用高频电磁波的作用，使样品中待
测组分从胞内释放出来，并在低温下
溶解于萃取溶剂中，过滤，达到分离
的目的。
天然药物、农药残留、有
机金属化合物等物质的提
取
超声波辅助萃取利用超声波的机械效应、空化作用以
及热效应等，破坏样品细胞组织，加
大细胞内的传质效率，从而促进待测
组分的释放和提取。
蛋白质、多糖、烟碱等物
质的提取
超临界流体萃取采用二氧化碳作为流体，在超临界条
件下，二氧化碳使样品的各组分依次
萃取出来，当恢复常温和常压时，溶
解在二氧化碳中的待测组分立即以液
体状态与气态流体分离。
多用于天然物质的提取
迪信泰检测平台以液相/气相为依托，采用HPLC/GC及LC-MS等检测平台，致力
于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供生物、食品、药物、环境等多领域的物质检测服务。