总黄酮含量测定
总黄酮含量测定
附录A（标准的附录）总黄酮含量的测定（分光光度比色法）1 试剂所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。
1.1无水乙醇；1.2硝酸铝溶液（100g/L)：称取AL(NO3)3•9H2O 17.6g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。
1.3 醋酸钾溶液（9.8g/L)：称取KCOOH 9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。
1.4 芦丁标准溶液：1.4.1芦丁对照品储备液（1.0g/L)：精密称取芦丁标准物质50.000mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释定容至50mL。
1.4.2 芦丁对照品工作溶液（0.2g/L)：精密吸取芦丁对照品储备液（1.4.1）10mL,置于50mL容量瓶中，加无水乙醇（1.1）至刻度，摇匀备用。
2 仪器全波长光度计；分析天平（0.000g）；容量瓶等玻璃仪器。
3 分析步骤3.1 标准曲线3.1.1精密吸取芦丁对照品工作液（1.4.2）1mL，2 mL，3mL,4mL，5mL，6mL分别置于50mL容量瓶中。
3.1.2加无水乙醇（1.1）至15mL，然后依次加入硝酸铝溶液（1.2）1.0mL，醋酸钾溶液（1.3）1.0mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，静止1hr。
3.1.3 用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇（V/V）溶液为空白，测定吸光度。
3.1.4 以50mL溶液中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，用线性回归法做标准曲线，（线性范围0.0mg ~1.2mg（以50mL计）。
3.2 空白对照精密吸取待测试样4.0mL，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇14mL,加水稀释至刻度，摇匀。
静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为样品的空白对照。
3.3样品测定3.3.1精密吸取待测样液4.0mL，置于50mL容量瓶中，按3.1.2进行操作。
静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为测定液。
总黄酮含量测定-比色法
总黄酮（Flavonoid）含量(铝盐显色法酶标仪96样)（一）检测原理：总黄酮，即黄酮类化合物，包括黄酮，黄酮醇，黄烷酮，橙酮，异黄酮，黄烷醇，花青素等，是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性（比如抗紫外）和抗病虫害方面有重要作用。
实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定黄酮总含量，即在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。
（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一液体1.6m L×1支4℃保存试剂二液体3m L×1瓶4℃保存试剂三液体12m L×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存做标曲，则用到该试剂（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、粉碎仪、筛子、60%乙醇、离心机、蒸馏水。
（四）总黄酮测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜样本(若水分充足，可增加样本取样质量)；或者称取约0.03g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40-60目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的60%乙醇（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h（若蒸发用60%乙醇定容至1.5mL），25℃×12000rpm，离心10min，取上清待测。
【注】：若样本量较少，可同比例缩减样本量，如取0.02g干样，加入1mL60%乙醇，60℃振荡提取2h。
25℃×12000rpm，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至1mL待测。
②液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长至510nm。
总黄酮测定含量
1 各批次药材含量测定使用已经确定的总黄酮含量检测方法分别进行5个批次原料含量的测定总黄酮含量测定：分别精密称取药材粗粉0.5g，置100ml锥形瓶中，加70%乙醇50ml，称定重量，超声60分钟，放冷，称定，加入70%乙醇补足减失重量，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。
精密量取供试品溶液5ml，置10ml比色管中，加 5％亚硝酸钠溶液0.4ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6 分钟，加2mol/L氢氧化钠溶液3ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法（《中国药典》2010版一部附录Ⅴ B），在504nm 的波长处测定吸收度。
表1 不同批次药材总黄酮含量测定结果批号含量（%）1 2 3 X±S20140516 0.16350.16480.17010.1661±0.003520140516紫外扫描色谱图2 药材总黄酮转移率研究2.1 单个药材转移率研究2.1.1 单个药材的转移率测定同一批次的各药材，分别按照产品生产工艺提取得单个药材的总黄酮浓缩液样品，进行总黄酮含量检测，与“1”项下同批药材的总黄酮含量相比得出单个药材的转移率（如下式），分别进行5批次药材测定。
黄芪、桑叶、黄精、山茱萸：分别取黄芪、桑叶、黄精、山茱萸各100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水12倍量，煎煮2.0h，过滤；第二次加水10倍量，煎煮1.0h，过滤，合并滤液浓缩至100ml，备用。
黄芪不同浓缩程度的考查：取黄芪100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水20倍量，煎煮2.5h，过滤；第二次加水20倍量，煎煮2.0h，过滤，合并滤液，重复试验三次，分别浓缩至50ml、100ml、200ml，备用。
精密量取上述溶液5ml，加乙醇15ml，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。
总黄酮含量测定标准曲线
总黄酮含量测定标准曲线总黄酮含量是衡量植物中抗氧化活性的重要指标，也是评价植物药材质量的重要参数之一。
因此，建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线对于保证植物药材质量的稳定性和可靠性具有重要意义。
本文将介绍总黄酮含量测定标准曲线的建立方法及相关注意事项。
首先，建立总黄酮含量测定标准曲线需要准备一定浓度范围内的标准溶液。
通常可以选择相对纯净的总黄酮标准品，按照一定的比例配制成不同浓度的标准溶液。
在配制标准溶液的过程中，需要注意溶解度、稳定性等因素，以确保标准溶液的准确性和可靠性。
其次，建立总黄酮含量测定标准曲线需要选择合适的测定方法。
常用的方法包括分光光度法、高效液相色谱法等。
在选择测定方法时，需要考虑样品的特性、仪器设备的可用性、实验操作的便捷性等因素，以确保测定结果的准确性和可靠性。
在进行总黄酮含量测定标准曲线的建立过程中，需要注意以下几点：1. 标准曲线的线性范围，需要选择合适的标准溶液浓度范围，确保在该范围内标准曲线呈现良好的线性关系。
2. 标准曲线的斜率和截距，通过线性回归分析，计算标准曲线的斜率和截距，以确定总黄酮含量与测定数值之间的关系。
3. 标准曲线的相关系数，通过计算标准曲线的相关系数，评估标准曲线的拟合度，以确保标准曲线的可靠性和准确性。
4. 标准曲线的验证，建立标准曲线后，需要进行验证实验，验证标准曲线的准确性和可靠性，以确保标准曲线的适用性和稳定性。
总之，建立总黄酮含量测定标准曲线是保证植物药材质量稳定性和可靠性的重要步骤。
在建立标准曲线的过程中，需要选择合适的标准溶液、测定方法，注意标准曲线的线性范围、斜率和截距、相关系数等参数，以确保标准曲线的准确性和可靠性。
建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线，对于推动植物药材质量控制和质量评价具有重要意义。
总黄酮含量测定方案
总黄酮含量测定一样品溶液的制备70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。
取10g样品放入圆底烧瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。
使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。
二芦丁标准品的配置精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。
制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准品溶液。
三显色方法的确定1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。
2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb 。
3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。
4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。
四显色条件的确定五标准曲线的绘制分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。
六精密度实验按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。
次数 1 2 3 4 5吸光度平均值相对标准偏差RSD（%）七重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法主要包括以下几种：
1. 酸性条件下的比色法：将样品与酸反应生成有色化合物，测定其吸光度。
如盐酸或硫酸与总黄酮反应生成有色化合物，可通过紫外可见光谱测定吸光度，进而计算总黄酮的含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)：使用高效液相色谱仪进行分离和测定。
通过采用特定的色谱柱和流动相，分离出总黄酮，并通过检测器测定其峰面积或峰高值，并与已知标准品进行比较，计算样品中总黄酮的含量。
3. 薄层色谱法：将总黄酮的样品与色谱载体共同涂布在薄层板上，通过色谱柱法进行有效分离。
然后，利用染色剂，如硼酸或铝酸盐等，在紫外或可见光下观察或测定样品斑点的强度，从而计算总黄酮的含量。
4. 毛细管电泳法：通过毛细管电泳仪将总黄酮进行分离，并通过测定峰面积或峰高值，配合已知标准曲线，计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同样品中总黄酮的化学结构和含量可能存在差异，因此在选择测定方法时应根据具体的样品特性和仪器设备的可用性做出选择。
黄酮含量测定
一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。
2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。
然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。
以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。
3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。
加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。
4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。
加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。
以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。
带入标准曲线中，计算黄酮含量。
总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。
二、矿质元素的测定每份需0.2g。
总黄酮含量测试试剂盒 分光光度计法
总黄酮含量测试试剂盒（C002-96T 分光光度计法）一、测定原理黄酮中处于相邻位的羰基、羟基可以共同络合金属而显色。
在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯和物，加入碱溶液后显红橙色，在510nm处有最大吸收峰。
芦丁是公认的黄酮类化合物，常被用作标准品。
二、试剂组成试剂一：无色液体50mL ×1瓶试剂二：无色液体50mL ×1瓶试剂三：显色液 200mL ×1瓶试剂四：1.0mg/mL芦丁标准溶液 5mL×1瓶三、储存条件及有效期试剂一、试剂二4℃保存，试剂三-20℃保存，可保存3个月。
四、试剂的配制试剂四应用液：取2mL试剂四，加入18mL双蒸水，稀释至20mL，得到100μg/mL的芦丁标准液，分别采用移液管移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL试剂四于空试管中，加入4.0，3.0，2.0，1.0，0mL双蒸水，得到20，40，60，80，100 μg/mL芦丁标准液。
五、操作步骤充分混匀，室温静置6min。
充分混匀，室温静置6min。
充分混匀，室温静置15min，以试剂空白调零，分光光度计510nm处测吸光值。
1必须做标准管，以绘制标准曲线；2一般样品建议做空白管，以消除误差；3试剂三有腐蚀性，请务必戴手套操作，如不慎接触皮肤，参照碱烧伤的方法用流水冲洗，如有条件可用硼酸处理。
六、计算方法1.绘制标准曲线以芦丁应用液浓度0，20，40，60，80，100μg/mL为横坐标，以分光光度计测得的吸光值为纵坐标，在坐标纸上或利用EXCEL绘制标准曲线。
2.计算样品浓度对于坐标纸上绘制的标准曲线，请直接根据坐标求得样品浓度。
对于采用EXCEL计算的，根据方程求得样品浓度。
样品浓度表示为μg/mL总黄酮，也可根据测试溶液浓度计算出样品粉末中含量，表示为mg/g。
七、注意事项1. 试剂可能会有沉淀，请放置至室温后摇匀使用；八、应用举例小明提取得到了一种中草药的粗提物，并将其冻干得到粉末，配制成5mg/mL的溶液，分析其总黄酮含量。
总黄酮测定方法
总黄酮测定（紫外分光光度法，以柚皮苷计）[26]
1）标准曲线
精密称取柚皮苷对照品10mg ，以无水乙醇溶解并定容至50mL ，得0.2mg/mL 柚皮苷溶液。
分别取此浓度0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL ，以无水乙醇定容至5mL ，在284nm 处测定吸光度。
从图1-2中，得回归方程：A=0.0067c-0.0033，R 2=0.9993（n=3）。
式中：c —测定用样品液中的总黄酮含量，μg
A —吸光度
图1-2 总黄酮标准曲线
Fig.1-2 The calibrate curve of flavonoids
2） 样品中总黄酮含量的测定
准确称取试样，以乙醇溶解定容，按标准曲线方法测定[26]。
样品中总黄酮提取率计算公式为：
10010
V m K V c %)P(621⨯⨯⨯⨯⨯= 式中：p: 样品中总黄酮提取率，%;
c ：从标准回归曲线中计算得到的样液的总黄酮含量，μg;
V 1：样品提取液总体积，mL ；
V 2: 测定用体积，mL ；
K ：稀释倍数;
m: 样品的投料量，g。
总黄酮含量测定的原理
总黄酮含量测定的原理
总黄酮含量测定的原理：总黄酮是指一类具有共同结构特点的化合物，其特征是在分子结构中含有两个苯环，各自连接在不同的位置上。
总黄酮是植物中常见的次级代谢产物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
测定总黄酮含量的方法主要分为化学法和光度法两种。
其中化学法又分为铝盐法和硼酸法。
铝盐法是通过总黄酮在酸性条件下与铝离子形成黄色络合物，进而测定其含量。
首先将样品提取得到总黄酮的可溶性物质，然后在酸性条件下加入铝离子，总黄酮与铝离子会形成黄色络合物，通过比色法测定络合物的吸光度，进而计算出总黄酮的含量。
硼酸法是利用总黄酮与硼酸形成可溶性络合物，再通过比色法测定络合物的吸光度来测定总黄酮的含量。
该方法相较于铝盐法，测定结果更为准确，且操作相对简单。
总之，通过化学反应或络合物的形成，再利用比色法或光度法测定络合物的吸光度，从而间接测定出样品中总黄酮的含量。
总黄酮测定
1.总黄酮含量测定（回流）对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。
精密量取20ml，置50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外一可见分光光度法，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取样品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。
取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
精密量取2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H3006)计，不得少于7.0%。
2.总黄酮含量测定（天南星）对照品溶液的制备取芹菜素对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每1ml含12ug的溶液，即得。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液Iml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，各加60%乙醇至5ml，加1%三乙胺溶液至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光光度法，在400nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本品粉末（过四号筛）约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
药典中总黄酮测定方法
药典中总黄酮测定方法
总黄酮是一类具有类黄酮结构和作用的化合物，广泛存在于植物中。
药典中常用的总黄酮测定方法包括以下几种：
1. 显色法：将含总黄酮样品与乙醇-水混合溶液及磷酸钠溶液混合后，加入硼酸试液，产生紫色或蓝色显色反应，通过比色法测定总黄酮含量。
2. 二苯基丙烯酸法：将含总黄酮样品与二苯基丙烯酸溶液混合后，利用紫外可见光谱法测定吸光度，通过标准曲线计算总黄酮含量。
3. 铝试剂法：将含总黄酮样品与铝试剂溶液混合后，加入氢氧化钠溶液，经酸化处理后用紫外可见光谱法测定吸光度，计算总黄酮含量。
4. 比色法：将含总黄酮样品与乙醇-氢氧化钾溶液混合后加入稀硫酸溶液，以黄烷酮为对照品，经比色法测定吸光度，计算总黄酮含量。
以上是比较常用的药典中总黄酮测定方法，选择不同的方法需考虑到样品类型、检测精度等实际问题。
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定呀，有几种常见方法呢。
紫外- 可见分光光度法。
先得把样品处理好，就像给食材做前期准备一样。
把含有总黄酮的样品进行提取，提取液要纯净呀，不能有太多杂质干扰，杂质多了就像炒菜的时候锅没洗干净，那肯定做不出好菜。
然后在特定波长下测定吸光度，这个波长就像一把专门开总黄酮这把锁的钥匙，得找对喽。
这方法安全性挺高的，只要按照正常操作流程，不会有啥危险情况，稳定性也不错呢，只要仪器正常工作，数据偏差不会太大。
在食品、药品检测领域应用可广泛了，能快速知道产品里总黄酮的大概含量。
我知道一家小型制药厂，想检测新研发的药品里总黄酮含量，就用这个方法，快速得到结果，他们高兴得不得了，就像挖到宝藏一样。
还有高效液相色谱法。
这得把样品制成合适的溶液，溶液就像一支整齐有序的队伍，不能乱哄哄的。
然后注入色谱仪，色谱仪就像一个超级严格的裁判，把不同成分分得清清楚楚。
测定过程中要保证仪器的清洁和稳定，这可不能马虎呀，不然数据就乱套了。
这个方法安全性也还好，就是操作要细心些。
在科研中用得很多，能精确测定总黄酮含量，优势就是精准度高呀。
有个科研团队研究植物中的总黄酮含量，用这个方法得到准确数据，他们兴奋地说这简直是找到了解开谜团的密码。
我觉得这些总黄酮含量测定方法各有各的好，在合适的场景下都能发挥大作用，就像不同的工具在不同的工作里都能大显身手。
实验——总黄酮含量的测定
《有机分析实验讲义》植物中总黄酮的提取与测定黄酮类化合物主要指以2—苯基色原酮为基核的化合物，主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、花色素、查尔酮等以及它们的衍生物。
其主要结构式如图。
图黄酮类化合物分子结构式黄酮类化合物主要结构类型见表。
表黄酮类化合物主要结构类型原理黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。
用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
仪器与试剂新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。
60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。
芦丁标准溶液的配制称量13.2mg 芦丁，用60%乙醇定容到25ml 容量瓶作为标准溶液。
标准曲线的制作准确吸取0， 0.4， 0.8， 1.2， 1.6，2.0 ml 芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml 的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml 摇匀，放置6min ；加入10%硝酸铝溶液0.5ml ，放置6min 后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml ，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min ；（扫描找到最大吸收）在510nm 处测定吸光度。
用0.0ml 作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
3.6.4 总黄酮提取与测定和计算称取0.6—0.8g 样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml 圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min 。
过滤、定容于100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml ，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml ；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml 摇匀，放置6min ；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml ，放置6min 后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml ，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min ；在510nm 处测定吸光度。
总黄酮含量的测定
总黄酮成分提取取苦菜和蒲公英地上部分，洗净烘干，粉碎成粉，过0.6 mm筛，置于棕色瓶内储藏备用。
分别称取苦菜和蒲公英粉1.000 g于三角瓶中溶解，共9份，放入超声波清洗器中（超声功率120 W，温度为50℃）提取，过滤定容至100 mL。
为快速提取苦菜和蒲公英中的总黄酮成分，采用正交试验确定提取的最佳条件。
选择乙醇浓度、料液比和提取时间3个水平进行试验(见表1) 。
表1 正交试验因素及水平Table 1 Factors and level of orthogonal test处理Treatment因素FactorsA 乙醇浓度/%EthanolconcentrationB 料液比/g·mL-1Solid-liquid ratioC 提取时间/hExtraction time1 50 1:10 0.52 60 1:20 1总黄酮含量测定（1）芦丁标准溶液的制备：将芦丁标准品于120℃下干燥30min，称取干燥后样品20 mg，用30%乙醇溶解，定容到100 mL，配制成浓度为0.2 mg·mL-1的芦丁标准溶液。
（2）标准曲线的制作：分别吸取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL芦丁标准溶液，置于50 mL比色管中，加入2.0 mL 5%的NaNO2溶液，混匀后放置5 min，再加入2.0 mL 10%的Al(NO3)3溶液，摇匀后放置5 min，加入10 mL 4%的NaOH溶液，最后用30%乙醇定容至50 mL，摇匀后放置10 min，在510 nm下用紫外分光光度计测定各样品吸光值。
以吸光度A值为纵坐标( Y)，以标准样品浓度为横坐标( X) ，绘制标准曲线，计算线性回归方程。
得到的线性回归方程为: Y =0. 017X-0.0124，相关系数R2 = 0.994。
即在0~0.02 mg ·mL-1范围内，芦丁标准样品浓度与吸光度的线性关系良好。
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法总黄酮是指一类在植物中广泛存在的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗菌、抗炎等作用。
因此，总黄酮含量的测定方法对于评估植物中潜在的药用价值具有重要意义。
以下是一种常用的总黄酮含量测定方法。
一、试剂与设备准备：1. 酸性乙醇溶液：加入浓盐酸（HCl）和乙醇（C2H5OH）（体积比为1:95）。
2. 铝试管。
3. DNA分光光度计或分光光度计。
4. 普鲁士蓝试液。
二、样品处理：1. 将待测样品（如草药材）洗净并晾干。
2. 将样品研磨成细粉末，通过筛网过筛以去除杂质。
3. 取一定质量的样品，加入酸性乙醇溶液中，浸泡4-6小时，以增加黄酮化合物的浸提效果。
4. 使用离心机离心加速提取，收取上清液并保存备用。
三、测定操作：1. 取适量的上清液，放入铝试管中。
2. 加入1 mL的酸性乙醇溶液，并摇匀，待样品溶解。
3. 将铝试管放入水浴中加热，加热温度为80C，保持10分钟。
4. 待样品冷却后，加入3 mL的普鲁士蓝试液，摇匀。
5. 使用DNA分光光度计或普通分光光度计，设置波长为595 nm，测定吸光度值。
四、数据处理与计算：1. 使用酸性乙醇溶液作为空白试剂进行校正。
2. 通过空白试剂的吸光度值，减去样品吸光度值，获得净吸光度值。
3. 根据普鲁士蓝的吸光度与黄酮的浓度之间的线性关系，计算样品中黄酮的含量。
以上就是一种常用的总黄酮含量测定方法，通过酸性乙醇提取样品中的黄酮化合物，并使用普鲁士蓝试液测定吸光度值，可以获得样品中总黄酮的含量。
为了提高测定结果的准确性，可以多次重复实验，并计算平均值。
此外，还可以使用其他方法进行总黄酮的测定，如高效液相色谱（HPLC）法和分光光度法等，根据实际需求选择合适的方法进行测定。
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1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。
1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。
具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。
1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。
常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。
1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。
而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。
1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。
在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。
如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。
2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。
银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。
2．2 对心血管系统的作用2．2．1 对抗心肌损伤的保护作用: 李乐等［5］研究发现绞股蓝总黄酮能减轻犬心肌梗死时的心肌缺血程度，降低缺血范围和心肌酶学指标的活性，可保护缺血心肌。
广枣总黄酮( TFCA)对阿霉素( ADR) 引起大鼠心肌过氧化损伤具有保护作用。
水杉总黄酮可在不明显降低血压的情况下，防止肾性高血压大鼠左心室肥厚的发生。
银杏叶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注血管内皮损伤有保护作用，对抗心肌缺血所引起的心肌电生理的变化，从而预防心肌缺血所致的心律失常的发生。
蒲黄总黄酮对实验性心肌缺血犬心肌具有保护作用［6］。
黄蜀葵花总黄酮药理性预适应可通过抑制心肌脂质过氧化、抑制心肌炎症反应，对缺血; 再灌注损伤的心肌具有保护作用; 显著降低心脑组织中丙二醛和NO 含量，提示黄蜀葵花总黄酮对心脑缺氧有显著保护作用; 对小鼠急性心肌缺血、缺氧损伤具有保护作用［7］。
2．2．2 抗心率失常作用: 苦参总黄酮能明显对抗乌头碱、哇巴因及氯仿诱发的心率失常。
黄芩茎叶总黄酮对实验性心率失常有显著拮抗作用。
2．2．3 降血脂: 银杏叶总黄酮具有降低甘油三酯和胆固醇，升高高密度脂蛋白胆固醇和降低低密度胆固醇的作用。
抗动脉粥样硬化作用实验显示麦胚总黄酮类提取物( FEWG) 能显著提高实验性高脂血症大鼠血高密度脂蛋白胆固醇含量，同时显著降低血清总胆固醇和三酰甘油含量［6］。
荞麦种子总黄酮能抑制喂饲固醇和高脂食物大鼠血清总胆固醇和三酰甘油的升高，抑制肝脏脂质过氧化。
山楂总黄酮对氧化型低密度脂蛋白( oxLDL) 诱导的人内皮细胞损伤具有显著的拮抗作用，对氧化型低密度脂蛋白促MC-EC 黏附作用有显著的抑制性，降低动脉粥样硬化发生的危险性，起到预防动脉粥样硬化发生发展的作用。
2．2．4 抗高血压、血管壁扩张作用: 银杏叶总黄酮其对血管紧张素转化酶活性具有明显的抑制作用。
并对轻、中、重度妊娠高血压患者的血压均有下降，内皮素活性及NO 含量降低，尿蛋白减少［8］。
淫羊藿总黄酮对大鼠血清中内皮素有抑制作用，一氧化碳含量明显降低，提示淫羊藿总黄酮扩张血管。
2．3 抗凝血作用银杏黄酮、蚓激素酶均具有很好的抗凝作用，但凝激酶溶栓效果优于银杏黄酮，两者合用后溶血作用无加强，但具有较好的抗凝效果［9］。
水杉总黄酮有抗血小板聚集活性，改善血液流变性的作用，穿心莲黄酮可明显抑制二磷酸腺苷，花生四烯酸和肾上腺素诱导的血小板聚集，明显降低凝血酶诱导的GMP-140 水平，抑制AA 诱导的血小板TXB2 的释放，并可明显升高血小板内cAMP 的含量。
2．4 利胆及肝脏保护作用各种黄酮类化合物对化学性肝损伤、药物性肝损伤、免疫性肝损伤、酒精性肝损伤、缺血/再灌注性肝损伤等实验性肝损伤均有不同程度的保护作用［10］。
知母总黄酮对溴酸钾诱发的小鼠肝损伤具有一定的保护作用，可以明显降低因溴酸钾引起的小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶水平，保护因溴酸钾诱发的肝损伤其作用机制可能部分来自于清除自由基和抑制脂质过氧化过程［11］。
苦菜总黄酮对四氯化碳、乙醇所致肝损伤有明显保护作用，提示可能与苦菜总黄酮减少肝脏谷胱甘肽耗竭，抑制肝脂质过氧化作用有关。
2．5 抗氧化、清除氧自由基作用黄欣等［12］研究发现枸杞总黄酮能明显延长小鼠力竭游泳运动时间，抑制丙二醛的产生及提高小鼠体内抗氧化酶活性，说明枸杞总黄酮具有提高小鼠运动耐力及清除活性氧的作用。
苦荞麦麸皮类黄酮与天然超氧化物歧化酶在清除氧自由基方面有着相同的作用一枝蒿总黄酮对的作用表现高浓度清除，低浓度增强的双向作用; 对( ·OH) 自由基的作用始终表现为浓度依赖性地清除作用，而且清除作用很强［13］。
另有研究发现竹叶的总黄酮含量及其清除活性氧自由基的能力均与银杏叶具有可比性。
黄芪总黄酮在实验中对( ·OH) 及( O2) 均有较强的清除作用，且清除能力与浓度呈明显的显效关系。
2． 6 抗肿瘤作用黄酮类化合物抗肿瘤作用的靶点包括细胞周期蛋白依赖性激酶、硫氧还蛋白还原酶、基质金属蛋白酶、丝裂原激活的蛋白激酶等。
肿瘤细胞凋亡研究依据: ( 1) 黄酮类化合物抑制细胞增殖，主要是使细胞周期停止，对肿瘤细胞有细胞毒作用，而对正常细胞无毒性和致突变作用，反而有抗氧化和正向的免疫调节作用; ( 2) 黄酮类化合物促进肿瘤细胞凋亡; ( 3) 黄酮类化合物能抑制细胞信号转导过程中的酪氨酸蛋白激酶、蛋白激酶C、磷脂酰肌醇3 激酶活性; ( 4) 黄酮类化合物具有抗炎、抗氧化压力和促进抑癌基因表达而抑制癌基因表达的作用。
汉黄芩素是从中药黄芩中提取分离得到的一个化合物，研究表明其能促进鬼臼毒甙诱导的HL260、Jurkat 和肺癌细胞的凋亡。
芫花根总黄酮对小鼠S180 肿瘤生长有显著的抑制作用，其抗肿瘤活性是通过选择性杀死肿瘤细胞和提高外周血淋巴细胞数量、促进淋巴细胞的增殖和提高NK 细胞的杀伤活性来实现的［14］。
木犀草素具有很强的诱导肝癌细胞凋亡活性。
2．7 对脑血管疾病的作用李晓红等［15］银杏叶总黄酮对局部缺血再灌注脑组织中NR1mRNA 的表达增强，与细胞凋亡密切相关，银杏叶制剂可以明显抑制NR1mRNA 的表达，减轻细胞凋亡。
文继月等［16］黄蜀葵花总黄酮预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤具有缺血预适应样的保护作用; 其机制可能与促进NO 合成及抑制前列腺素E2产生有关。
山楂叶总黄酮可抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，其机制可能与抑制线粒体细胞色素C 通路的凋亡有关［8］。
2．8 其他2．8．1 对神经系统的作用: 黄酮对M-胆碱能抑制樟柳碱所致小鼠脑记忆获得障碍、蛋白生物合成抑制剂环己酰亚胺致小鼠脑记忆巩固障碍、中枢抑制剂乙醇致小鼠脑记忆再现障碍、小鼠脑缺血再灌注致学习记忆功能障碍，均有明显的改善作用，能显著提高小鼠的近期记忆和长期记忆功能。
2．8．2 延缓衰老作用: 淫羊藿总黄酮对于皮质酮大鼠T 细胞过度凋亡均有明显下调作用，并能对促凋亡及抗凋亡基因群进行适度地调控。
蜂胶黄酮既能明显提高脑组织抗氧化酶的活性，又同时显著降低脑组织NO 含量，提示蜂胶黄酮可以抑制NO 的细胞毒作用，达到延缓衰老之目的。
2．8．3 对骨科方面的作用: 淫羊藿总黄酮具有促进体外成骨细胞增殖及分化成熟的作用，还可提高去势大鼠骨密度，对骨质疏松起防治作用。
杜仲总黄酮能直接促进体外成骨细胞的增殖。
野菊花总黄酮可恢复大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器形态，降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能。
2．8．4 对免疫方面的作用: 淫羊藿总黄酮对免疫功能低下小鼠有良好免疫促进作用。
黄芩茎叶总黄酮对小鼠的特异性和非特异性免疫功能皆有一定的影响。
2．8．5 改善肾功能作用: 黄蜀葵花抑制肾内髓ATP 酶活性，从而减少肾小管对钠的重吸收，发挥利钠利水效应。
2．8．6 抗乙型肝炎病毒( hepatitis Bvirus，HBV) 作用: 黄蜀葵花总黄酮中提取的金丝桃苷在体内外均有抗HBV 的作用，且呈剂量依赖性。
2．8．7 修复口腔黏膜作用: 黄蜀葵花中的多种黄酮类成分具有抑菌、镇痛及抗炎消肿的作用，能治疗口腔溃疡，对疼痛也有较好的缓解作用。
沙棘叶总黄酮对细菌有较强的抑制作用，在相同时间内，总黄酮提取液的浓度越大，抑菌率越大。
同一浓度的沙棘叶总黄酮的作用时间越长，其抑菌率也越大［17］。
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