病毒检验技术课件

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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
不同病毒在鸡胚的 不同部位的生长特 性差异很大
选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键
常用的主要有： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
常用接种途径： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种
2.二倍体细胞
是指原代细胞在体外分裂50代以后仍能保持其二倍染色体 数目。二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织，主要用于培 养病毒制备疫苗等。
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3.传代细胞
传代细胞来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程中变异的细胞 称为传代细胞，它们能在体外无限期地传代。大多是肿瘤 细胞或突变的二倍体细胞。
常用的传代细胞株有Hela细胞（人宫颈癌细胞），Hep-2 （人喉上皮癌细胞）、Vero（非洲绿猴肾细胞）等。
可加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防
病毒失活
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第二节 病毒的分离与鉴定
不同的病毒分离时采用不同的分离方法,这主 要取决于目的病毒的生物学特性。
主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种 法等,而对细胞、鸡胚不敏感,又没有合适动 物模型的病毒,可采用基因克隆的方法。
检验程序包括标本的采集、分离培养鉴定、快速诊断。
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第一节 标本的采集、处理与运 送
一、标本的采集与处理
1. 采集时间：发病早期或急性期尽快采集。
很多急性病毒感染，症状出现前病毒已经开始释放，症状初期病 毒量即迅速达到峰值，之后平缓下降至疾病痊愈，不过也有例外。
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第二节 病毒的分离与鉴定
一、 病毒的分离培养
组织细胞培养 2.鸡鸡胚胚培培养养
原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞
羊膜腔接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种
是将离体活组织块或 分散的组织细胞加以 培养的技术总称，为 病毒分离鉴定中的最 常用的基本方法。
动物接种
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第二节 病毒的分离与鉴定
（一）组织细胞培养
细胞培养瓶
鸡成纤维细胞
Vero细胞
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Hep-2细胞
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1.原代细胞
原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞的 培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培 养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时 的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然 保留二倍体数。
尿
囊
羊
腔
膜
腔
尿囊腔接种
常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒 和新城疫病毒的适应和传代培养
羊膜腔接种 常用于临床流感病毒初次分离
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
羊膜腔
人工气室
气室
尿囊腔
卵
绒毛尿囊膜
黄
囊
卵白
绒毛尿囊膜
卵黄囊接种
主要用于虫媒病毒、衣原体及立 克次体的分离和繁殖。
绒毛尿囊膜接种
本章重点：
★病毒标本采集和运送原则。
★病毒学诊断及鉴定常用方法。
★病毒培养的基本操作。
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病毒学检验技术是用实验室检验方法对临床和流行病学现场送 检的标本（如人或宿主的血液、组织、尿、粪便和组织液等） 进行病毒学的定性和定量分析，为病毒感染和病毒性疾病的诊 断、治疗和预防提供科学依据。
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第一节 标本的采集、处理与运 送
一、标本的采集与处理
2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。 从病原体入侵部位取材 从病原体感染的靶器官取材 根据病原体的排泄途径取材 从环境中采集标本
如：流感病毒感染------鼻咽拭子 乙型脑炎病毒感染------脑脊液 轮状病毒感染------粪便 乙型肝炎病毒感染------血液
（二）病毒数量及病毒感染性测定 1．血凝试验 2．中和试验 3．空斑形成试验 4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50）
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第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 （1） 细胞病变效应（cytophathic effect，CPE）
第十七章 病毒检验技术
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本章内容
1 第一节 标本的采集、处理与运送 2 第二节 病毒的分离与鉴定 3 第三节 病毒学检测及诊断
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学习目标及重点
学习目标：
掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技 术
熟悉病毒血清学诊断常用的方法
了解病毒感染的实验室快速诊断
学会病毒的培养基本操作
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第一节 标本的采集、处理与运 送
一、标本的采集与处理
3.采集方法与处理 提高病毒的分离率，防止标本污染。
采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌
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第一节 标本的采集、处理与运送
二、标本的运送与保存
1.标本的运送
尽快送检
冷冻、冷藏运输
防漏、专人、标记
2.标本的保存
-70℃可较长时间保存
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种 培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒 力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
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Байду номын сангаас
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
一般选用9～14d的鸡胚
优点：
来源充足、 组织分化程度低、 本身很少携带病毒和细菌、 对接种病毒不产生抗体及 病毒较易增殖等
常用于牛痘病毒、天花病 毒、单纯疱疹病毒的分离
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第二节 病毒的分离与鉴定
3.动物接种
• 常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等 • 常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及
脑内接种等方式
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第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 2．红细胞吸附 3．细胞培养液pH值改变
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第二节 病毒的分离与鉴定
是指某些病毒特别是无包膜的病毒感染组织细胞后，正常生 长的梭形细胞变圆、变性、坏死、溶解及从培养瓶壁脱落， 细胞堆积形成葡萄状
正常细胞
病变细胞
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第二节 病毒的分离与鉴定
1．细胞形态的改变 （2）多核巨细胞
多见于有包膜的病毒， 如呼吸道合胞病毒、麻 疹病毒等，由感染细胞 融合而成多核巨细胞