病毒检验技术课件
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计算机病毒的检测方法(共19张PPT)
1.4 比较法
比较法是用原始的或正常的文件与被检测的文件 进行比较。
长度比较法
一般对磁盘进行病毒检测时，要求内存中不带病毒，因为某些计算机病毒会向检测者报告假情况。
内容比较法 如果检索5000种病毒，必须对5000个病毒特征代码逐一检查。
例如4096病毒在内存中时，查看被它感染的文件长度时，不会发现该文件的长度已发生变化，而当在内存中没有病毒时，才会发现文件长度已 经增加了4096字节。
计算机病毒的检测方法
计算机病毒进行传染，必然会留下痕迹
。检测计算机病毒，就是要到病毒寄生场 所去检查，发现异常情况，并进而验明“ 正身”，确认计算机病毒的存在。病毒静 态时存储于磁盘中，激活时驻留在内存中 。
因此对计算机病毒的检测分为对内存的检 测和对磁盘的检测。
一般对磁盘进行病毒检测时，要求内存中不带病毒 ，因为某些计算机病毒会向检测者报告假情况。
可以发现那些尚不能被现有的查病毒程序发
现的计算机病毒。因为病毒传播得很快，新病
毒层出不穷，由于目前还没有做出通用的能查
出一切病毒，或通过代码分析，可以判定某个 一般对磁盘进行病毒检测时，要求内存中不带病毒，因为某些计算机病毒会向检测者报告假情况。
可以发现那些尚不能被现有的查病毒程序发现的计算机病毒。
缺点
不能识非文件内容改变的惟一的排 他性原因，文件内容的改变有可能是正常程序引起的 ，所以校验和法常常误报警。
会影响文件的运行速度
当已有软件版本更新、变更口令或修改运行参数时，校 验和法都会误报警。
校验和法对隐蔽性病毒无效:
隐蔽性病毒进驻内存后，会自动剥去染毒程序中的 病毒代码，使校验和法受骗，对一个有毒文件算出正 常校验和。
有的特征搜集在一个病毒码资料库中，简称“病毒库”
《病毒的检测》课件
病毒的危害
病毒可以引起各种疾病， 包括感冒、流感、艾滋病 等，对人类和动物健康造 成威胁。
病毒的分类
DNA病毒
DNA病毒以DNA为遗传物质， 感染宿主细胞后，将其DNA 插入宿主细胞的染色体中。
RNA病毒
RNA病毒以RNA为遗传物质， 感染宿主细胞后，将其RNA 整合到宿主细胞的核酸中。
逆转录病毒
快速检测法
快速检测法通过对病毒的核酸、蛋白 质或特定抗原的特异性检测，快速确 定样本中是否存在病毒。
病毒检测实验
1 实验前准备
准备实验室材料、培养 细胞、制备病毒样本， 并按照实验方案进行实 验。
2 病毒检测实验步骤
将病毒样本加入培养细 胞中，观察细胞的形态 和行为变化，以确定是 否存在病毒感染。
未来病毒检测将更加快速、准确和便捷，为疾病的预防和治疗提欢迎大家来到《病毒的检测》PPT课件。在这个课程中，我们将介绍病毒的 特征、分类和检测方法，以及进行病毒检测实验的步骤和结果分析。
概述
什么是病毒
病毒是一种微生物，由蛋 白质和核酸构成，无法独 立进行自我复制，需要感 染宿主细胞。
病毒的特征
病毒具有很小的体积和简 单的结构，可以感染各种 生物，包括人类、动物和 植物。
3 实验结果分析
根据细胞的形态和行为 变化，判断样本中是否 存在病毒，并分析病毒 的类型和浓度。
结语
病毒检测的意义
病毒检测可以帮助我们了解病毒的传播途径和危害，为疾病的预防和治疗提供依据。
病毒检测在防控疫情中的作用
病毒检测可以快速发现感染者，控制疫情的扩散，保护公共卫生安全。
未来病毒检测的发展方向
逆转录病毒包含逆转录酶， 能将自己的RNA转录成DNA， 然后将其插入宿主细胞的染 色体。
病毒—病毒感染的检测方法(动物微生物课件)
某些病毒的血凝素纤突,能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种 凝集红细胞的现象称为血凝（hemagglutination，HA）,也称直接血凝 反应（红细胞不流淌）,利用这种特性设计的试验称血凝试验。
病
毒
红
颗
细
粒
胞
（二）血凝抑制试验（HI）原理：
当病毒悬液（抗原）中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗 粒的血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触 。这时红细胞的凝集就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血 凝抑制反应。
（1）免疫凝集电镜技术
抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成 团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确 定病毒的血清学性质。
（2）免疫电镜定位技术
特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标 记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察 到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。
++：约有半数红细胞凝集，凝集的红细胞在孔壁上铺成薄膜，面积较 小；未凝集的红细胞（约50%）沉积在孔底中心聚成小圆点。如第一排 第9孔。 +：只有少数红细胞凝集；未凝集的红细胞（约75%）沉积在孔底中心聚 集形成小圆盘状，凝集的红细胞在此小圆盘周围。如第一排第10孔。 -：红细胞不凝集，沉积于孔底，形成一圆盘状或钮扣状，边缘整齐。 如第12孔、11孔。
死体积 液样
活塞 套筒
吸嘴（一次性）
外置活塞式移液器
外置活塞式移液器
这种移液器是采用外置式活塞，活塞设计在吸 头内部，直接与液体接触，活塞与液体之间没 有空气段。
三、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电 子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非 常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者 接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微 镜检查，直接观察病毒粒子。
病
毒
红
颗
细
粒
胞
（二）血凝抑制试验（HI）原理：
当病毒悬液（抗原）中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗 粒的血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触 。这时红细胞的凝集就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血 凝抑制反应。
（1）免疫凝集电镜技术
抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成 团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确 定病毒的血清学性质。
（2）免疫电镜定位技术
特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标 记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察 到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。
++：约有半数红细胞凝集，凝集的红细胞在孔壁上铺成薄膜，面积较 小；未凝集的红细胞（约50%）沉积在孔底中心聚成小圆点。如第一排 第9孔。 +：只有少数红细胞凝集；未凝集的红细胞（约75%）沉积在孔底中心聚 集形成小圆盘状，凝集的红细胞在此小圆盘周围。如第一排第10孔。 -：红细胞不凝集，沉积于孔底，形成一圆盘状或钮扣状，边缘整齐。 如第12孔、11孔。
死体积 液样
活塞 套筒
吸嘴（一次性）
外置活塞式移液器
外置活塞式移液器
这种移液器是采用外置式活塞，活塞设计在吸 头内部，直接与液体接触，活塞与液体之间没 有空气段。
三、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电 子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非 常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者 接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微 镜检查，直接观察病毒粒子。
流感病毒实验室PCR检测技术课件
引物设计
根据流感病毒基因组的特点，设计特 异性引物，用于扩增病毒基因片段。
引物选择
选择高特异性、高灵敏度的引物，确 保PCR检测的准确性。
反应体系与反应条件
反应体系
根据所选引物和试剂盒的要求，建立适当的PCR反应体系。
反应条件
设置PCR反应的温度循环条件，包增数百万至数十 亿倍的DNA片段。
应用广泛
在遗传病诊断、基因克隆、流 行病学调查等领域广泛应用。
03
流感病毒的PCR检测方法
样本采集和处理
样本采集
采集疑似流感病毒感染者的咽拭 子、鼻拭子或支气管灌洗液等样 本。
样本处理
将采集的样本进行灭活处理，以 去除病毒活性，同时提取病毒核 酸。
引物设计与选择
产物检测
采用凝胶电泳或荧光定量PCR等方法检测扩增产物。
结果分析
对扩增产物进行分析，判断是否存在流感病毒核酸，并对其序列进行比对，以 确定病毒的亚型。
04
实验操作注意事项
实验前的准备事项
01
02
03
实验人员资质
确保实验人员具备PCR检 测技术资质，熟悉实验操 作流程和注意事项。
实验器材准备
根据实验需求，准备足够 的PCR仪、扩增管、吸头 、缓冲液等实验器材，确 保其性能良好。
流感病毒实验室PCR检测技 术课件
汇报人：
202X-12-25
• 流感病毒概述 • PCR技术原理 • 流感病毒的PCR检测方法 • 实验操作注意事项 • 实验结果解读与报告
01
流感病毒概述
流感病毒的特性
流感病毒属于正粘病毒科，是一种有 包膜的RNA病毒。
根据核蛋白和基质蛋白的不同，流感 病毒可分为A、B、C三型，其中A型 流感病毒经常发生变异，是引起大流 行的主要病毒。
根据流感病毒基因组的特点，设计特 异性引物，用于扩增病毒基因片段。
引物选择
选择高特异性、高灵敏度的引物，确 保PCR检测的准确性。
反应体系与反应条件
反应体系
根据所选引物和试剂盒的要求，建立适当的PCR反应体系。
反应条件
设置PCR反应的温度循环条件，包增数百万至数十 亿倍的DNA片段。
应用广泛
在遗传病诊断、基因克隆、流 行病学调查等领域广泛应用。
03
流感病毒的PCR检测方法
样本采集和处理
样本采集
采集疑似流感病毒感染者的咽拭 子、鼻拭子或支气管灌洗液等样 本。
样本处理
将采集的样本进行灭活处理，以 去除病毒活性，同时提取病毒核 酸。
引物设计与选择
产物检测
采用凝胶电泳或荧光定量PCR等方法检测扩增产物。
结果分析
对扩增产物进行分析，判断是否存在流感病毒核酸，并对其序列进行比对，以 确定病毒的亚型。
04
实验操作注意事项
实验前的准备事项
01
02
03
实验人员资质
确保实验人员具备PCR检 测技术资质，熟悉实验操 作流程和注意事项。
实验器材准备
根据实验需求，准备足够 的PCR仪、扩增管、吸头 、缓冲液等实验器材，确 保其性能良好。
流感病毒实验室PCR检测技 术课件
汇报人：
202X-12-25
• 流感病毒概述 • PCR技术原理 • 流感病毒的PCR检测方法 • 实验操作注意事项 • 实验结果解读与报告
01
流感病毒概述
流感病毒的特性
流感病毒属于正粘病毒科，是一种有 包膜的RNA病毒。
根据核蛋白和基质蛋白的不同，流感 病毒可分为A、B、C三型，其中A型 流感病毒经常发生变异，是引起大流 行的主要病毒。
病毒检测PPT课件
胶体金结构
• 由一个基础金核（原子 金Au）及包围在外的 双离子层构成，紧连在 金核表面的是内层负离 子（AuCl2-），外层离 子层H+则分散在胶体 间溶液中，以维持胶体 金游离于溶胶间的悬液 状态。
胶体金性质
• 染色—不同粒径，不同颜色 2~5nm：橙色、10~20nm：酒红色、 30~80nm：紫红色 • 胶体的特性—充分的溶解性，良好的流动性 • 吸附能力—在不改变蛋白性质的情况下，稳 定迅速的吸附蛋白
• 快速，定性：10min中以内就可以得到 检测结果。 • 无需设备：一根检测条就能完成检测。 • 准确，灵敏：灵敏度可达到10-9数量级
胶体金免疫层析试纸条的构成
GICA反应模式
A 双抗体夹心法测抗原
B.竞争法测抗原
C.间接法测抗体（反流免疫层析法）
胶体金免疫层析技术应用
梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)
包被抗体
固相载体
牛血清白蛋白
ELISA的酶应符合以下要求：
纯度高； 催化反应的转化率高； 专一性强； 性质稳定； 来源丰富； 价格低廉； 制备成酶结合物后仍继续保留活性和催化能力； 在受检标本中不存在相同的酶； 相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定。
胶体金颗粒对蛋 白质有很强的吸附能 力，而不破坏其生物 活性，可以与蛋白质 （葡萄球菌 A 蛋白， 免疫球蛋白）等非共 价结合，形成胶体金 标记物。
胶体金免疫层析技术
以胶体金为显色媒介，利用免疫学中 抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过 程中完成这一反应，从而达到检测的目的。
胶体金免疫层析技术特点
梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）
原理：用超声裂解的梅毒螺旋体为抗 原，致敏经醛化、鞣化的羊或禽类红细胞， 此致敏红细胞与人血清或血浆中的梅毒螺 旋体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反 应。
病毒感染的检查方法与防治原则ppt课件
52
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2006 "for their discovery of RNA interference - gene silencing
by double-stranded RNA"
53
思考题
1. 分离病毒的标本和做血清学诊断的标本 各有何要求？
细胞种类
原代细胞（primary cell）
二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）
8
病毒的细胞培养
细胞培养瓶
单层细胞
9
1.细胞培养
(1)原代和次代细胞培养
组织 剪碎
蛋白酶
组织块
分散的单个细胞
培养基
单层细胞 (原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
28
3.病毒血清学鉴定
鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination
inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定
病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验/血凝效价） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集
（血凝抑制试验）
29
30
3.病毒血清学鉴定
(2)免疫标记法（FIA、EIA/ELISA、 RIA） ——多种病毒鉴定
(3)凝胶免疫扩散试验(gel immunodiffusion test) ——多种病毒鉴定
31
4.病毒分子生物学鉴定
抗原变异 病毒基因的鉴定
核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序
32
（三）病毒数量与感染性测定
1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2006 "for their discovery of RNA interference - gene silencing
by double-stranded RNA"
53
思考题
1. 分离病毒的标本和做血清学诊断的标本 各有何要求？
细胞种类
原代细胞（primary cell）
二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）
8
病毒的细胞培养
细胞培养瓶
单层细胞
9
1.细胞培养
(1)原代和次代细胞培养
组织 剪碎
蛋白酶
组织块
分散的单个细胞
培养基
单层细胞 (原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
28
3.病毒血清学鉴定
鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination
inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定
病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验/血凝效价） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集
（血凝抑制试验）
29
30
3.病毒血清学鉴定
(2)免疫标记法（FIA、EIA/ELISA、 RIA） ——多种病毒鉴定
(3)凝胶免疫扩散试验(gel immunodiffusion test) ——多种病毒鉴定
31
4.病毒分子生物学鉴定
抗原变异 病毒基因的鉴定
核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序
32
（三）病毒数量与感染性测定
1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）
病毒学-病毒的检验-医学课件
病毒的进化与变异
02
病毒检验的基本原理与方法
病毒检验是指通过实验室技术和方法，对病毒进行分离、鉴定、检测和计数等操作，以提供关于病毒的种类、数量、毒力等信息的过程。
病毒检验的定义
病毒检验对于诊断病毒感染、研究病毒感染的机制、流行病学调查以及疫苗研发等方面都具有非常重要的意义。
病毒检验的重要性
病毒检验的定义与重要性
谢谢您的观看
THANKS
病毒分类
病毒的定义与分类
宿主范围
每种病毒都有特定的宿主范围，包括动物、植物和微生物等。
致病性
病毒的致病性取决于其侵袭宿主细胞和免疫反应的能力，不同的病毒可以引起不同的疾病症状。
病毒的宿主范围与致病性
病毒进化
病毒在传播和繁殖过程中会发生基因突变和基因重组等进化现象。
病毒变异
病毒变异可以导致病毒的抗原性改变、毒力增强或传播途径多样化等。
要点三
预防措施
加强宣传教育，提高公众对病毒感染的防护意识；加强场所卫生管理，做好消毒和隔离措施；控制疫情传播途径，如封闭疫区、限制人员流动等。
要点一
要点二
临床治疗
病毒感染尚无特效药物，以对症治疗和支持治疗为主，同时针对不同病毒感染的特点进行特殊治疗。
疫苗接种
针对部分病毒感染，如流感病毒，接种疫苗可有效降低感染风险和减轻病情。
xx年xx月xx日
病毒学-病毒的检验-医学课件
CATALOGUE
目录
病毒学概述病毒检验的基本原理与方法病毒学应用病毒感染的诊断与防控病毒学研究的发展趋势与挑战
01
病毒学概述
病毒是一种微生物，具有遗传物质（DNA或RNA）和蛋白质外壳，通过感染宿主细胞进行复制和传播。
病毒学-病毒的检验PPT
分子生物学检验
基因测序
对病毒基因组进行测序分析，可精确 鉴定病毒种类和变异情况，为病毒溯 源和防控提供重要依据。
基因芯片技术
利用芯片上固化的探针与病毒核酸进 行杂交，实现对病毒基因组的快速检 测和分型。
免疫学检验
血清学试验
通过检测血清中的病毒抗体，了解机体对病毒的免疫应答和病毒感染状态，如抗 体效价检测、中和试验等。
病毒的纯化与鉴定
纯化方法
采用物理、化学或免疫学方法对病毒 进行纯化，以去除杂质。
鉴定方法
纯化与鉴定注意事项
确保纯化的病毒具有代表性，且无交 叉污染，同时要选择适当的鉴定方法， 以保证结果的准确性和可靠性。
通过电镜观察、免疫学检测、分子生 物学等方法对病毒进行鉴定。
04 病毒的基因组与蛋白质组 研究
免疫荧光技术
利用荧光物质标记抗体或抗原，与细胞或组织中的相应抗原或抗体结合，通过荧 光显微镜观察实现病毒的定位和定性检测。
03 病毒的分离与培养
病毒的分离
01
02
03
分离方法
根据病毒的特性，选择合 适的分离方法，如细胞培 养、鸡胚接种、动物接种 等。
分离过程
将病毒从感染的细胞、组 织或动物中分离出来，并 进行初步的纯化。
病毒基因组的结构与功能
病毒基因组的结构
病毒基因组通常由单链或双链DNA或RNA构成，具有特定的 基因排列顺序。
病毒基因组的功能
病毒基因组通过编码蛋白质和调控蛋白来行使复制、转录、 翻译等功能，以实现病毒的增殖和感染过程。
病毒蛋白质的结构与功能
病毒蛋白质的结构
病毒蛋白质具有特定的空间构象和氨 基酸序列，决定了其生物学功能。
病毒培养
将病毒接种在敏感细胞或动物中 ，观察病毒的繁殖过程和细胞病 变，是形态学检验的重要手段。
病毒检验技术—病毒的培养技术(微生物检验课件)
原代细胞再用胰蛋白酶或EDTA等消化后加营养液继续培
养，称次代细胞。
4
(2)二倍体细胞株：原代细胞体外分裂50代仍于病毒分离和疫苗制备。
(3)传代细胞株：来于肿瘤细胞，染色体特征类似肿瘤细胞。 常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、人喉上皮癌细胞(Hep2)。
繁殖快，易于传代保存。只能用于病毒分离，不能用于
接种部位:静脉、鼻咽腔、腹腔、脑内、皮内、皮下等。
发病情况观察:食欲、活动及粪便情况；局部和全身变化;神经 系统感染可出现震颤、松毛，软弱、不安、弓背、抽死亡；呼 吸系统病毒可出现咳嗽、呼吸加快、少食等。不死，解剖后查 病毒抗原，死亡，取病变组织传代和鉴定。
11
疫苗制备。
5
常用于病毒分离的细胞
细胞种类 原代细胞 非洲绿猴肾细胞 人单核细胞 人胚肾、肺细胞 恒河猴猕猴肾细胞
二倍体细胞株 人胚肺成纤维细胞株 WI-38、MRC—5
可分离的病毒
HSV、RSV、VZV、腮腺炎病毒、风疹病毒 HIV、HTLV、HHV-6 腮腺炎病毒、腺病毒 ECHO、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A、B组、RSV
操作简便；通常是无菌的；对接种病毒不产生抗体。
缺点:卵黄中含有抗家禽病原的抗体；可带有某些病毒
如鸡白血病病毒；饲料中的抗生素也能传递给鸡胚。
8
鸡胚的接种方法
❖ 卵黄囊接种 ❖ 羊膜腔接种 ❖ 尿囊腔接种 ❖ 绒毛尿囊膜接种 ❖ 脑内接种 ❖ 胚体接种
9
10
3．动物接种
常用动物:动物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用 于分离病毒。
CMV、VZV、鼻病毒 腮腺炎病毒、腺病毒
传代细胞系
Hela Hep-2 Vero
柯萨奇A、B组、RSV
病毒感染的检查方法PPT课件
病毒感染的检查方法
汇报人：可编辑 2024-01-11
目录
• 病毒感染概述 • 病毒感染的检查方法 • 病毒感染的预防与控制 • 病毒感染的治疗 • 病毒感染的案例分析
01
病毒感染概述
病毒感染的定义与分类
定义
病毒感染是指病毒通过宿主细胞 进行复制，引起宿主细胞结构和 功能改变，导致疾病的发生。
空气传播
病毒通过飞沫、气溶胶 等形式在空气中传播， 如流感病毒、SARS病毒
等。
接触传播
病毒通过接触被感染的 物体或表面传播，如肠 道病毒、疱疹病毒等。
血液传播
病毒通过血液或血液制 品传播，如HIV病毒、
乙型肝炎病毒等。
性传播
某些病毒通过性接触传 播，如生殖器疱疹病毒
、人乳头瘤病毒等。
02
病毒感染的检查方法
血液检查
பைடு நூலகம்血常规检查
通过检测白细胞计数和分类，初步判断是否存在病毒感染。白细胞计数升高或 降低可能提示病毒感染。
病毒抗体检测
通过检测血液中是否存在病毒抗体，如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病 病毒等，有助于确诊病毒感染。
尿液检查
尿常规检查
检查尿液中的成分，如蛋白质、糖、酮体等，判断是否存在与病毒感染相关的肾 脏疾病或泌尿系统感染。
毒复制。
支持性治疗
休息与护理
保证充足的休息，提供舒适的 环境，密切观察病情变化。
对症治疗
针对发热、咳嗽等症状采取适 当的对症治疗，如解热镇痛药 、止咳药等。
营养支持
提供足够的营养，保证机体正 常代谢，增强机体抵抗力。
心理支持
对患者的心理状态进行评估和 干预，提供必要的心理支持。
中医中药治疗
汇报人：可编辑 2024-01-11
目录
• 病毒感染概述 • 病毒感染的检查方法 • 病毒感染的预防与控制 • 病毒感染的治疗 • 病毒感染的案例分析
01
病毒感染概述
病毒感染的定义与分类
定义
病毒感染是指病毒通过宿主细胞 进行复制，引起宿主细胞结构和 功能改变，导致疾病的发生。
空气传播
病毒通过飞沫、气溶胶 等形式在空气中传播， 如流感病毒、SARS病毒
等。
接触传播
病毒通过接触被感染的 物体或表面传播，如肠 道病毒、疱疹病毒等。
血液传播
病毒通过血液或血液制 品传播，如HIV病毒、
乙型肝炎病毒等。
性传播
某些病毒通过性接触传 播，如生殖器疱疹病毒
、人乳头瘤病毒等。
02
病毒感染的检查方法
血液检查
பைடு நூலகம்血常规检查
通过检测白细胞计数和分类，初步判断是否存在病毒感染。白细胞计数升高或 降低可能提示病毒感染。
病毒抗体检测
通过检测血液中是否存在病毒抗体，如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病 病毒等，有助于确诊病毒感染。
尿液检查
尿常规检查
检查尿液中的成分，如蛋白质、糖、酮体等，判断是否存在与病毒感染相关的肾 脏疾病或泌尿系统感染。
毒复制。
支持性治疗
休息与护理
保证充足的休息，提供舒适的 环境，密切观察病情变化。
对症治疗
针对发热、咳嗽等症状采取适 当的对症治疗，如解热镇痛药 、止咳药等。
营养支持
提供足够的营养，保证机体正 常代谢，增强机体抵抗力。
心理支持
对患者的心理状态进行评估和 干预，提供必要的心理支持。
中医中药治疗
病毒检验技术—病毒的形态检验技术(微生物检验课件)
6
3
Negri body in a neuron
4
2．电子显微镜检查
❖ 负染色法、免疫电镜、超薄切片电镜技术 (1)负染色法：早期病毒的HAV， 疱疹病毒的疱疹液，HBV患者血清，均可观察到特征性 病毒颗粒。 （2）超薄切片法
5
(3)免疫电镜检查：在标本中加入抗体。使病毒聚集 成块负染观察，更易发现病毒体，灵敏度可提高 100倍。
病毒形态学检验技术
1
通过测定病毒的特异标志成分，如特殊形态、 特异的抗原成分及病毒的核酸，早期确认病毒 的感染，是病毒学诊断的重大发展。
2
一、形态学检查
1．光学显微镜：查包涵体。
狂犬病病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或椭圆形包涵 体，称为内基小体。
巨细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出现周围绕有一轮 晕似“猫头鹰眼”样大型嗜酸性包涵体。
3
Negri body in a neuron
4
2．电子显微镜检查
❖ 负染色法、免疫电镜、超薄切片电镜技术 (1)负染色法：早期病毒的HAV， 疱疹病毒的疱疹液，HBV患者血清，均可观察到特征性 病毒颗粒。 （2）超薄切片法
5
(3)免疫电镜检查：在标本中加入抗体。使病毒聚集 成块负染观察，更易发现病毒体，灵敏度可提高 100倍。
病毒形态学检验技术
1
通过测定病毒的特异标志成分，如特殊形态、 特异的抗原成分及病毒的核酸，早期确认病毒 的感染，是病毒学诊断的重大发展。
2
一、形态学检查
1．光学显微镜：查包涵体。
狂犬病病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或椭圆形包涵 体，称为内基小体。
巨细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出现周围绕有一轮 晕似“猫头鹰眼”样大型嗜酸性包涵体。
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第二节 病毒的分离与鉴定
是指某些病毒特别是无包膜的病毒感染组织细胞后，正常生 长的梭形细胞变圆、变性、坏死、溶解及从培养瓶壁脱落， 细胞堆积形成葡萄状
正常细胞
病变细胞
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第二节 病毒的分离与鉴定
1．细胞形态的改变 （2）多核巨细胞
多见于有包膜的病毒， 如呼吸道合胞病毒、麻 疹病毒等，由感染细胞 融合而成多核巨细胞
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
不同病毒在鸡胚的 不同部位的生长特 性差异很大
选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键
常用的主要有： 尿囊7
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
常用接种途径： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种
常用于牛痘病毒、天花病 毒、单纯疱疹病毒的分离
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第二节 病毒的分离与鉴定
3.动物接种
• 常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等 • 常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及
脑内接种等方式
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第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 2．红细胞吸附 3．细胞培养液pH值改变
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第一节 标本的采集、处理与运 送
一、标本的采集与处理
3.采集方法与处理 提高病毒的分离率，防止标本污染。
采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌
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第一节 标本的采集、处理与运送
二、标本的运送与保存
1.标本的运送
尽快送检
冷冻、冷藏运输
防漏、专人、标记
2.标本的保存
-70℃可较长时间保存
第十七章 病毒检验技术
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本章内容
1 第一节 标本的采集、处理与运送 2 第二节 病毒的分离与鉴定 3 第三节 病毒学检测及诊断
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学习目标及重点
学习目标：
掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技 术
熟悉病毒血清学诊断常用的方法
了解病毒感染的实验室快速诊断
学会病毒的培养基本操作
可加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防
病毒失活
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第二节 病毒的分离与鉴定
不同的病毒分离时采用不同的分离方法,这主 要取决于目的病毒的生物学特性。
主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种 法等,而对细胞、鸡胚不敏感,又没有合适动 物模型的病毒,可采用基因克隆的方法。
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第二节 病毒的分离与鉴定
一、 病毒的分离培养
组织细胞培养 2.鸡鸡胚胚培培养养
原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞
羊膜腔接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种
是将离体活组织块或 分散的组织细胞加以 培养的技术总称，为 病毒分离鉴定中的最 常用的基本方法。
动物接种
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种 培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒 力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
一般选用9～14d的鸡胚
优点：
来源充足、 组织分化程度低、 本身很少携带病毒和细菌、 对接种病毒不产生抗体及 病毒较易增殖等
检验程序包括标本的采集、分离培养鉴定、快速诊断。
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第一节 标本的采集、处理与运 送
一、标本的采集与处理
1. 采集时间：发病早期或急性期尽快采集。
很多急性病毒感染，症状出现前病毒已经开始释放，症状初期病 毒量即迅速达到峰值，之后平缓下降至疾病痊愈，不过也有例外。
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第一节 标本的采集、处理与运 送
一、标本的采集与处理
2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。 从病原体入侵部位取材 从病原体感染的靶器官取材 根据病原体的排泄途径取材 从环境中采集标本
如：流感病毒感染------鼻咽拭子 乙型脑炎病毒感染------脑脊液 轮状病毒感染------粪便 乙型肝炎病毒感染------血液
尿
囊
羊
腔
膜
腔
尿囊腔接种
常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒 和新城疫病毒的适应和传代培养
羊膜腔接种 常用于临床流感病毒初次分离
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第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
羊膜腔
人工气室
气室
尿囊腔
卵
绒毛尿囊膜
黄
囊
卵白
绒毛尿囊膜
卵黄囊接种
主要用于虫媒病毒、衣原体及立 克次体的分离和繁殖。
绒毛尿囊膜接种
（二）病毒数量及病毒感染性测定 1．血凝试验 2．中和试验 3．空斑形成试验 4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50）
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第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 （1） 细胞病变效应（cytophathic effect，CPE）
本章重点：
★病毒标本采集和运送原则。
★病毒学诊断及鉴定常用方法。
★病毒培养的基本操作。
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病毒学检验技术是用实验室检验方法对临床和流行病学现场送 检的标本（如人或宿主的血液、组织、尿、粪便和组织液等） 进行病毒学的定性和定量分析，为病毒感染和病毒性疾病的诊 断、治疗和预防提供科学依据。
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第二节 病毒的分离与鉴定
（一）组织细胞培养
细胞培养瓶
鸡成纤维细胞
Vero细胞
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Hep-2细胞
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1.原代细胞
原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞的 培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培 养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时 的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然 保留二倍体数。
2.二倍体细胞
是指原代细胞在体外分裂50代以后仍能保持其二倍染色体 数目。二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织，主要用于培 养病毒制备疫苗等。
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3.传代细胞
传代细胞来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程中变异的细胞 称为传代细胞，它们能在体外无限期地传代。大多是肿瘤 细胞或突变的二倍体细胞。
常用的传代细胞株有Hela细胞（人宫颈癌细胞），Hep-2 （人喉上皮癌细胞）、Vero（非洲绿猴肾细胞）等。