徒手切片制作方法
徒手切片的基本要求
、目的与要求1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。
2、学习徒手切片技术。
3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。
二、材料和用品1、自备材料：解剖器（镊子、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。
2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。
三、实验内容1、临时装片的制作方法2、徒手切片方法四、实验方法要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制成各种制片，放在显微镜下才能观察。
制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。
1、临时装片的制作方法临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。
这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。
此法一般多做为临时观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。
临时装片的制作方法和步骤如下：（1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。
注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏破。
（2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵……），放在载玻片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。
（3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡，盖盖玻片时，应该以大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边缘接触，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。
显微制片中一些实用的小技巧
青
鸡
箱
冠
子
花
种
子
皮
种
表
皮
皮
表
细
皮
胞
细
胞
同等条件下 拍摄，大小 明显有区别。 但不是十分 稳定。
青葙子
鸡冠花子
在金相显微镜下放大到500倍
青葙子
鸡冠花子
再用电脑放大到1000倍的微性状，青葙子表皮细胞垂周壁呈 节节样，鸡冠花子表皮细胞垂周壁光滑，沟槽明显。
降香
又名：花梨木、降 香黄檀，来源：豆 科黄檀属植物降香 檀Dalbergia odorifera 心材
中药微性状观察方法的一些新的进展：
一、放大倍数更大从100倍到500倍，主要是利用金 相显微镜的内置光源的功能。 二、景深合成不用转到PHOTOSHOP，可以在显微 镜观察的过程中一步合成。
这是某型号的金相显微镜(包括普通和偏光)
这个“在Z轴的延伸”就是指 景深合成
速度明显 加快了
不同批次的鸡冠花子
最后一点的泡 沫可不切下， 让切片积在其 中和刀片上。
如果叶子小或 窄，可片叠在 一起夹着切。
叶子先泡软， 切成条，卷叠 起来夹着切。
用一稍粗一点的 棍扎一个洞，把植 物的茎塞进去（也 可把花、叶子等卷 成个棍形），可多 塞几根。
也可用打 洞法夹片
酸枣仁可塞可夹
怕切到手的同仁们，硬 的材料可以夹着刮。 北五味子这样切方便
这样的方法，有助于对药材显微的科学研究，也十分有助于 我们在检定工作中迅速找到我们需要看到的特征。
如果想要细粉，可用这一类细钢锉。
最后强调一下，清理锉的锈和残渣，最好用钢丝刷。
四、如何进行叶表面制片——磨片法
在叶、花、果实的表面显微观察时，往往最困难的 是如何获得足够薄的表面制片。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告篇一实验教师：xxx所在学校：xxx中学目的要求：1练习徒手切片2认识叶片的结构3画叶片的表皮细胞和保卫细胞材料用具：新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。
方法步骤方法与步骤要点注意事项（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片1将新鲜的叶片平放在小木板上。
2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。
3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。
要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。
4用毛笔蘸出较薄的一片，制成临时切片。
叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。
刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。
为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得较薄的一片用来观察。
（二）观察叶片的结构1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。
2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。
仔细观察上、下表皮细胞的`区别（三）观察叶片的下表皮1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。
2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。
注意观察气孔的结构。
（四）画图在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。
画图时，要真实、实事求是。
讨论与交流1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？细胞生物学实验报告篇二一、实验目的1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。
2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。
二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。
实验二徒手切片法和临时装片的制作方法以及植物细胞和组织观察
实验二临时装片的制作方法和徒手切片法以及植物细胞、组织观察一、实验目的1、掌握临时装片的制片方法、掌握徒手切片的方法2、了解植物细胞结构。
二、实验材料显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、培养皿、毛笔、滴管、纱布、0.9%的NaCl溶液；洋葱、马铃薯、芹菜、番茄三、实验内容和实验方法（一）临时装片的制作1、擦净载玻片和盖玻片（1）擦载玻片用左手的拇指和食指捏信载玻片的边缘，右手用纱布将载玻片上下两面包住，然后反复擦拭，擦好后放在干净处备用。
（2）擦盖玻片先用左手拇指和食指轻轻捏住盖玻片的一角，再将右手拇指和食指用纱布把盖玻片包住，然后从上下两面隔着纱布慢慢地进行擦试。
2、取样用滴管滴一点水或其他溶液（根据需要）于载玻片的中央，把观察物放于载玻片上的液滴中，展开或摇匀。
3、盖盖玻片右手持镊子，轻轻夹住盖玻片的一角，使盖玻片的边缘与液滴的边缘接触，然后慢慢倾斜下落，最后平放于载玻片上，避免气泡的产生。
如盖玻片下的液体过多，可用吸水纸将多余的液体吸掉。
（二）徒手切片法徒手切片法不需要任何的机械设备，只需要一把锋利的刀片就可以完成切片的制作，方法简单，也容易保持物的生活状态，有很大的实用价值。
1、选材选择软适度的材料，先截成适当的段块。
一般直径大小以3~5mm、长度以20~30mm为宜。
若材料太软，如幼叶等，不能直接拿在手中进行切片，可用适当大小的马铃薯块茎或萝卜块根等作支持物，将材料夹入其中，一起切片。
2、切片用左手拇指、食品指和中指夹住材料，使其稍突出在手指之上，拇指略低于食指，以免刀口损伤手指。
材料和刀刃上蘸水，使其湿润。
右手拇指和食指横向平握刀片，刀片要与材料断面平行，刀刃放在材料左前方稍低于材料断面的位置，以均匀的力量和平稳的动作从左前方向向右后方拉切。
切片时要用臂力而不用腕力，手腕不要动，靠肘、肩关节的屈伸来切片，拉切要快，中途不要停顿，更不能用拉锯方式进行切片。
每切2~3片就要把刀片上的薄片用湿毛笔移入盛有清水的培养皿中暂存备用。
石大生药学实验指导14显微标本片的制作方法
二、显微标本片的制作方法生药的显微鉴定是使用显微镜检查药材内部构造特征,因此必须将药材制作成适当的显微标本片，才能在显微镜下进行观察。
显在鉴别根据观察对象、目的、要求的不同，制作不同的标本片，一般可分为徒手切片、石蜡切片、表面装片、粉末制片、组织解离片等。
一、徒手切片徒手切片法可以直接而又准确地观察和了解药材组织的本来面目，其设备简单、操作方便，不需经过复杂的处理，但是，此法对微小、柔软、硬型或水分过多及肉质药材不易切成薄片以供观察。
］、基本操作⑴取材：选取材料时要注意有一定的坚韧性，材料不宜太硬或太软。
⑵切片：先将材料的断面削平，用左手的姆指和食指夹住材料，材料上端伸出1〜2111111的长度，右手执刀，刀口向里（刀片可用单面刀片或剃刀），刀口与材料的断面平行，切时自左方向右方斜滑，亦可自内向外切，同时挥刀要快，用力要均匀，不可拉锯样切割。
每切1〜2片，用毛笔蘸水取下切片放于水中或50〜70%乙醇中，同时用水湿润材料的切面和刀口，不可使之干燥。
如材料较薄或较小，可用萝卜或向日葵茎等解剖一切口将材料在切口内夹住再切。
选取较好的切片备用或直接放置在载玻片上，在显微镜下观察。
2、制片临时观察的切片，可自水或乙醇中取出切片，放置在载玻片上，加一滴水或甘油或先滴水或甘油，再放入材料，盖上盖玻片，置显微镜下观察。
二、永久制片法（略）三、粉末标本片粉末标本片主要用作粉末、丸、散、膏、丹等成药材料的观察，所用材料不宜有粗颗粒混入，否则可将盖玻片顶起，不便观察，故须将材料用三号筛（60目）筛筛过。
1、临时性粉末标本片用解剖针尖挑取少量粉末药材放置在载玻片的中央偏右一些，根据需要加入适宜的试液1~2滴，用解剖针或细玻棒（试液为酸或碱时）轻轻搅匀，然后用小镣子（或盖片镒）夹住盖玻片的一边，使相对一边与液面接触，将盖玻片轻轻放下（注意放盖玻片时动作要轻而慢，以免产生气泡或使材料溢出），盖玻片放好后，若有液体溢出，可用滤纸吸去溢出的液体，最后在载玻片左端做上标记。
玉米茎秆徒手切片制作方法
玉米茎秆徒手切片制作
材料：玉米植株开花期地上第三茎节
仪器：光学显微镜
方法：
（1）固定材料：取材料材料固定于由无水乙醇与冰醋酸组成的固定液（无水乙醇:冰醋酸=3:1）中固定10h，后转移于70%乙醇保存。
（2）材料洗涤：将材料依次在梯度乙醇溶液（70%、50%、30%、10%）中洗涤各1h，后在清水中洗涤材料2-3h。
（3）切片：用双面刀片徒手切茎秆横截面，制茎秆新鲜切片约20μm厚，放于清水中，在显微镜下观察，选择细胞结构完整、厚度均匀的切片进行试验。
（4）染色：用1%番红液染色30min，后将材料置于清水中洗涤，然后将材料置于固绿中染色30s，后将材料在清水中洗涤。
注意：蕃红染料最好用配制半年以上的溶液
（5）观察和分析：将切片置于载玻片中央赶上盖玻片，在光学显微镜下观察茎秆解剖结构，比较茎秆表皮厚壁细胞厚度及维管束差异。
实验一 组织制片技术(一)
实验一组织制片技术（一）【实验原理】显微鉴定法就是利用显微镜、显微技术及显微化学方法等对中药进行分析鉴定的方法。
可以确定中药的真伪、纯度、品质以及建立鉴别标准。
目前多数用于品种鉴定，部分用于定量分析。
在鉴定过程中，以采用显微镜观察动、植物的组织构造、细胞形状、内含物的特征以及矿物的光学特性等为主要内容。
按照鉴定的方法可分为组织鉴定、粉末鉴定、显微常数测定和显微定量等。
组织鉴定是粉末鉴定的基础，以粉末鉴定应用最为广泛。
显微鉴定是一项专门技术，需要有植物(动物)解剖学、矿物学的晶体光学、植物显微化学等基本知识，并掌握显微制片、显微观察和描述、显微摄影和绘图、显微测量等基本技术。
显微鉴定的主要仪器有各类光学显微镜和电子显微镜等，通常使用光学显微镜。
【目的要求】1.掌握显微制片方法2.掌握显微测量的方法和放大倍数的使用3.掌握显微特征的观察与描述方法和显微绘图技术4.熟悉掌握显微测定尺的使用方法5.了解显微摄影技术与方法【仪器、试剂、材料】1.仪器生物显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，显微描绘器，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，酒精灯，单面刀片，粉碎机，绘图板，铅笔等。
2.试剂水合氯醛试剂，苏丹Ⅲ试液，稀甘油试剂，盐酸，硝酸，碘化铋钾试剂，氯化锌碘试液，硫酸，α-萘酚浓硫酸试液，碘试液，间苯三酚试液，钌红试液，硝酸汞试液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，α-萘酚乙醇溶液，稀盐酸，稀醋酸等。
3.药材样品：牛膝、薄荷4.药材粉末：大黄、肉桂、山药【实验内容】一、显微鉴定1.组织鉴定组织鉴定是通过观察中药的组织构造特征来达到鉴定目的，主要用于个体较小的完整药材鉴别。
通常用以鉴别药材性状特征不明显或外形相似而组织构造不同的类似品、混淆品、代用品、伪品，或用于多来源药材的对比鉴别，也可用于确定某种化学成分的存在部位，以考查质量。
一般地说，组织鉴定对不同科属来源的药材鉴别比较容易，对于相同科属来源的药材鉴别比较困难。
2021年山西省太原市中考生物真题(解析版)
2021年山西省太原市中考生物试卷一、选择题（每小题2分,共30分。
每小题只有一个选项符合题意。
）1．下列各种生产实践活动中，与植物蒸腾作用有关的是（）A．中耕松土、及时排涝B．冬天在蔬菜大棚内燃烧煤球C．合理密植、间作套种D．移栽植物时，去除部分叶片2．在制作叶片横切面临时切片时，应从多次切割所得到的薄片中选取（）A．最大的一片B．最整齐的一片C．最薄的一片D．颜色最深的一片3．小丽用显微镜观察人血永久涂片时，看到如图所示状态。
其中的①②依次是（）A．红细胞、血小板B．红细胞、白细胞C．白细胞、红细胞D．白细胞、血小板4．在“观察蚯蚓”实验中，要经常用浸水的湿棉球轻擦蚯蚓体表，主要目的是（）A．防止蚯蚓窒息死亡B．有利于蚯蚓的运动C．保持蚯蚓身体的柔韧性D．防止蚯蚓体壁干裂5．在“观察酵母菌”实验中，用碘液对酵母菌染色是为了更清楚地观察（）A．细胞壁和细胞膜B．细胞核和细胞膜C．细胞核和淀粉粒D．细胞质和细胞壁6．人体肾单位的部分结构如图所示，其中对血液起过滤作用的是（）A．①和②B．③和④C．①和③D．②和④7．生物社团同学们把如图所示实验装置放在黑暗处24小时后移至光下照射几小时，然后采用一定的方法检验两装置中的叶片是否遇碘变蓝色（注：氢氧化钠溶液能够吸收二氧化碳）。
你认为同学们探究的问题是光合作用（）A．是否产生了氧气B．是否需要光C．是否需要二氧化碳D．是否分解了有机物8．在如图所示探究种子呼吸作用的演示实验中，可得出的结论是种子进行呼吸作用（）A．利用了氧B．释放了热量C．生成了水D．释放了二氧化碳9．在显微镜下观察小鱼尾鳍内血液的流动时，寻找小动脉最简便而准确的方法是（）A．寻找血液含氧量高、颜色鲜红的血管B．寻找其中血液来自心脏的血管C．寻找其中的血液流向分支的血管D．寻找血液流速较快的血管10．如图为光合作用和呼吸作用关系概念图，图中①、②、③处应依次填写（）A．叶绿体、线粒体、有机物和氧气B．线粒体、叶绿体、有机物和氧气C．线粒体、叶绿体、二氧化碳和水D．叶绿体、线粒体、二氧化碳和水11．如图是人体心脏各腔及相连血管示意图，图中血管a的名称及其中流动的血液分别是（）A．肺动脉，鲜红色的动脉血B．肺动脉，暗红色的静脉血C．肺静脉，鲜红色的动脉血D．肺静脉，暗红色的静脉血12．人体内形成尿的过程中，当原尿流经肾小管时（）A．全部葡萄糖、大部分水和部分无机盐被重新吸收B．全部水、大部分葡萄糖和无机盐被重新吸收C．全部的水和无机盐、大部分葡萄糖被重新吸收D．全部的葡萄糖、无机盐和水被重新吸收13．如图为家鸽的呼吸系统结构示意图，下列相关描述正确的是（）A．①是气囊，②是肺B．①和②之间是不相通的C．①和②都能进行气体交换D．②可辅助①进行呼吸14．2021年入侵中国12省的红火蚁（如图）是全球公认的百种最危险入侵物种之一，被咬会有火灼感，严重者可能丧命。
实验一 徒手切片的制作
实验分组
每个桌面坐7个人，2或3个人为一小组， 7个人为一大组。
实验报告要求
1、实验前认真预习实验内容，毋须写预习报 告，合理安排好实验时间。 2、实验完成后，根据实验内容写一份真实的 实验报告。下一次实验时以班级为单位上 交上一次的实验报告。 3、请假者，请及时上交实验报告。
选 片
用毛笔挑选透明的薄片，制临时 装片。
临时装片技术
首先将载玻片、盖玻片用纱布拭擦干净，拭擦玻 片动作要轻，手指用力要均匀，否则易拭破。在载玻 片中央，滴加一、二滴清水，然后用毛笔取培养皿中 切好的材料置于载玻片上，将盖玻片轻轻盖上，盖盖 玻片时，用镊子夹起盖玻片，使载玻片一边先放下， 接触一边水，然后再轻轻放平，以免水中产生气泡， 影响观察。如仍有气泡，可用镊子轻轻加压盖玻片， 将气泡赶出。如水分过多，可用滤纸条将水吸干，如 水分不足，可在盖玻片边沿用滴管加水少许。使材料 浸没水中，盖玻片紧贴载玻片，这样装片制成。
注意事项
1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。 2、夹持物上端要保持表面平整。
3、切片时，双手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身
体或实验台。
4、用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。
5、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的
完整。速度要快，才能切得又薄又平。
握夹持物和持刀
用左手的拇指和食指捏紧夹有叶片 的夹持物，并使其劈缝与自己本身平行， 拇指要稍低于食指，以免被刀割破。夹 持物上端要略高于手指，但勿过高，以 防切割时夹持物和刀摇动。 右手拿刀将刀片平稳地放在左手食指 上，与材料切面平行。
42.3徒手切片法制作植物临时装片
一、材料准备
2
二、徒手切片
用左手大拇指、食指和中指捏住材料，拇指略低于中指，使材 料突出于手指之上，以免刀口损伤手指。右手平稳地拿住刀片，将 刀片平放在左手的食指第一指节的皮肤上，与材料切面平行，然后 以均匀的力量，自左前方向右后方拉，注意要用臂力而不是腕力。
切片时要湿润材料和刀面，使之滑润，且动作要快，一刀切下， 切忌中途停顿或前后作“拉锯”式切割。
一、材料准备
徒手切片一般运用于软硬适度的植物根、茎、叶等材料。 先准备一个盛有清水的培养皿，准备好毛笔，滴管和刀片等用 具和待切的材料。将待切的材料截成2-3cm长的小段便于手持，削 平切面。 若为质地较软而薄的材料，可将其夹在支持物中一同切片。支 持物通常为萝卜、胡萝卜、马铃薯等。先将支持物切成高3~5cm、 长、宽0.5cm的立方体小块，将其中部纵切形成一缝，然后将修整 好的材料夹在其中。
连续多切几片，转移至盛有清水的培养皿中，然后用毛笔将较 薄切片挑取至滴有清水的载玻片上，制成临时装片进行观察。
3
二、徒手切片
左手拿材料，右手切片挥臂来自续切片将切片放入盛水的培养皿
4
植物切片制作
植物组织制片技术是随着显微镜的出现而发展起来的技术，是人们认识植物体结构的有效手段，已成为植物生物学的重要组成部分。
植物制片技术已建立了许多方法，现简要介绍如下几种最常见的制片技术：徒手切片法、滑走切片法、离析法、压片法、石蜡制片法和冰冻切片法。
徒手切片法徒手切片法是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，所作的切片通常不经染色或经简单染色后，制成临时的水装片用于观察，亦可以通过脱水与染色制成永久制片。
优点：简单、方便，不需要复杂的设备，不经过化学药物的处理，基本上保留了植物活体的状态。
用品与材料显微镜、载（盖）玻片、刀片、毛笔、培养皿、吸水滤纸、滴管、ddH2O或清水、1%番红水溶液、菜叶、胡萝卜、马铃薯实验材料对于软硬适中，便于手持的材料，可将实验材料截成适当小块，一般以长2~3cm，切片断面不超过3~5mm2为宜。
对于过于柔嫩的器官（如叶片等），一般可选用胡萝卜根、土豆块茎等作为支撑物，包被住材料后再进行切片。
有时也可将叶片卷成圆筒后再进行切片。
实验步骤1、在小培养皿中放入ddH2O或清水。
2、用左手拇指、食指和中指拿住材料，拇指略低于食指与中指，并使材料略为突出在指尖上面。
3、右手持刀，将刀片平稳地放在左手食指之上，与材料切面平行，然后以均匀的动作，自左前方向右后方，斜着向后拉切，切时用臂力而不用腕力。
4、切下许多薄片后，用湿毛笔将这些薄片放人培养皿中。
用毛笔挑选透明的薄片，放在载玻片上，用吸管滴一滴水在载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片进行观察。
注意事项1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。
2、切片时，两只手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身体或实验台，且用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。
3、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的完整。
简单的组织化学染色经徒手切片法切下的薄片，可以进行简单的组织化学染色，这样更容易分辨细胞的结构，同时可以观察到细胞各部分的化学成分。
植物学实验三切片法及根形态
** 封片：染色后，加水封片。（或制成永久标本）
** 观察：去多余液体后，显微镜下观察。
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滑走切片：
----利用滑走切片机切片；切片不连续、较厚；多用 于木本茎的切片。
一般步骤：
** 取材：选择用于切片的茎，将其切成小段。
** 软化：用软化剂将材料软化。
方法：A、沸水中煮2小时。
B、50%乙醇/甘油（1：1）浸1-2周。
----以塑料作为包埋剂，在超薄切片机上切片。
切片不连续，薄1 um。
一般步骤：P教材18-23
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植物根的形态结构
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10
根系：
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根尖分区：
成熟区（根毛区）
伸长区
分生区
根冠区
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小麦根尖分区的观察：
** 载玻片上滴一滴水； ** 取一段小麦根尖（1cm）于载玻片的水中； ** 盖上盖玻片压片后观察。 ** 加碘液后再观察。
5、初生木质部；6、髓
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双子叶植物次生根
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2
1、表皮
2、皮层
3
3、中柱
4、内皮层
4
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单子叶植物根
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侧根的形成
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根瘤
菌菌 根 可编辑ppt
菌
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1、徒手切片法的学习 ----芹菜叶柄
（观看录像）
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20
2、根的徒手切片方法
1）取一段植物根（成熟区）1cm于载玻片上； 2）加一滴番红染色1分钟，加水清洗后备用； 3）取萝卜块按要求修整， 4）将根夹在萝卜块中按徒手切片法进行切片， 5）选择好的切片不进行染色处理直接装片观察。
《中药鉴定学》实验指导
全国中医药高职高专卫生部规划教材(供中药等专业用)《中药鉴定学》实训指导书主编彭志芬副主编王小平周铁文编者彭志芬王小平周铁文陈文吴卫江西中医药高等专科学校2007年7月前言《中药鉴定学》是阐述中药鉴定基本理论和技能的一门学科，为中药学、医药营销、中药制药技术、中药材栽培技术等专业的一门重要专业课，在中药学各专业学科中占有极为重要的地位。
根据卫生部教材办公室《全国中医药高职高专卫生部规划教材编写要求》、七院校教材编写委员会《全国中医药高职高专教材编写基本原则》和《中药鉴定学》教学大纲的要求，本实训指导书在编写过程中，以就业为导向，以培养技术应用能力为主线，力求与专业培养目标相一致，与国家药品标准、中药现代化要求相统一，与《药用植物学》、《中药化学》、《中药制剂分析》等相关学科的内容相衔接，注重吸收中药鉴定发展的最新研究成果，注重教材整体内容的优化，力求内容充实、简明扼要、重点突出。
全书内容包括总论、植物药类、动物药类、矿物药类、中成药类的实验指导5大篇，共40项实验。
由于编写时间仓促，业务水平有限，不足之处在所难免，希望广大师生在使用过程中提出宝贵意见，以便修订和完善。
《中药鉴定学》编写组2007.7《中药鉴定学》实验指导实验一显微镜的使用和组织制片【实验时数】2学时【实验地点】中药鉴定学实验室【实验器具准备】显微镜、培养皿、毛笔、刀片等；稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液。
【实验要求】掌握显微镜的使用方法，掌握徒手制片的制作和永久制片的制作过程，注意事项【实验内容】熟练显微镜的使用，采用徒手切片法制作药材的横切片或纵切片，操作简便，迅速，制成的切片能保持其细胞内含物的固有形态，便于进行各种显微化学反应。
熟悉永久制片的制作过程【实验内容方法】（一）徒手切片法徒手切片法主要用于临时制片，制片迅速，更为重要的是制片过程中没有复杂的化学处理，可以观察到植物的天然色彩，真实地反映植物细胞组织的本来面目，也利于显微化学的观察，因而必须熟练掌握。
《徒手制作叶片横切的临时切片》
• 选切叶片 用镊子取一片新鲜的植物 叶片，平展在载玻片上。
• 切取材料 用左手压住材料一端，右手 捏紧两个并排的双面刀片，从另一端 沿和主叶脉垂直方向，迅速切割载玻 片上的叶片。
• 每切一次刀片要沾水一次，以便将切 下的叶片薄片放入盛有清水的培养皿 中。
• 选材制片 用毛笔蘸取最薄的一片， 将切面展放在滴有清水的载玻片上， 盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余水 分，制成临时切片。
徒手制作叶片横切的临时切片
齐齐哈尔阳光学校
王Hale Waihona Puke 珠目的要求:1.练习徒手切片的制作；
2.尝试用徒手切片的方法制作临时 玻片
材料用具 ： 新鲜叶片（菠菜、蚕豆叶或槐树叶）、 双面刀片（两片，并排在一起，一侧 用胶布粘牢）、载玻片、盖玻片、镊 子、胶头滴管、吸水纸、毛笔、纱布、 盛有清水的培养皿等。
实验步骤
观察叶片结构
上表皮
叶肉 叶 脉
下表皮
在显微镜下观察到较完整清晰的叶片横切面结构
玻片标本的制作技术
（3）、使组织细胞不同的结构部分对光产生不同的 折射率造成光学上的差异，增强光学观察质量。 （4）、使组织变成适当的硬度，以便于后面的处理。 只因如此，生物样品的固定是石蜡切片制作技 术中一个非常重要的步骤，根据不同质地的样品要 用不同的固定液对其进行固定，只有这样才能获得 较好的实验研究结果。 2、固定剂的选择标准（条件） 用作固定剂的化学物质必须具有凝固或沉淀蛋 白质、脂肪等成分的作用；渗入组织的速度和能力 要强；渗透力弱的要和渗透力强的固定剂混合使用， 以取长补短成为较完善的固定液。总之，一种优良 的固定剂应具备以下条件：
（4）、对时间要求严格的样品，一定要掌握好 正确的取材时间。 （5）、需要取对比样品时，一定要取相同一致 的部位，如昆虫的触角的节段。 二、组织的固定 通过固定剂的作用，将组织、细胞的生 活状态时的结构完全保存下来的过程叫固定 1、固定的目的 肪、糖、酶等各 种成分沉淀并保存下来。
一、样品的取材 取材就是指从动物或植物体上以及其他载体上获 取研究和实验材料的过程叫取材。 在石蜡切片中，取材是很重要的步骤，所取的动、 植物材料必须新鲜而又要有代表性。不新鲜的或已腐 败的材料制成的切片，不能反映材料的真实情况。 1、取材的方法 （ 1 ）、动物及离体培养细胞的取材：根据需要用锋利 的刀片从动物的相应部位切取一块组织，如表面有污 物需用生理盐水稍加清洗，放入固定液中。组织块的 大小要适中，动物组织块的厚度一般不超过3mm；离体 培养的细胞可通过离心的办法收集细胞沉积团，然后 放入固定液中。
（2）、植物组织的取材：根据实验的要求，用利刀 切取植物的根、茎或叶片，然后再切成适当的大小 放入固定液中固定。 2、取材的注意事项： （1）、取材的动作要快，要在较短的时间内将取得 的组织或细胞放入固定液中。 （2）、取材过程中要尽量避免切割、夹持、挤压对 组织、细胞造成的机械损伤，所以在切割时要采取 一刀切断的办法，不能用拉锯式切割的方法。 （3）、取材的部位必须准确，不需要的组织要尽量 去除干净。
实验植物细胞切片的制作
3）下降至70%酒精（水）：分别经400 ml纯酒精、95%、85%、70%酒精割 400 ml（50%及30%酒精下降至蒸馏 水），并回收各液。 4）番红复染色：400 ml 1%番红酒精（水 液）再染色2h。回收染液， 并用自来水 洗去多余的染液。 5）继续脱水：用30%、50%和70%酒精 400 ml各处理30s～1 min，并回收各液。 6）固绿复染：用0.1%固绿的95%酒精 400 ml复染10～30s，回收染液。
二、实验用品和材料
1、显微镜、尖嘴镊子、刀片、载玻片、 盖玻片、吸水纸、解剖针、纱布、碘 液。 2、蚕豆（芹菜）茎和叶 3、洋葱或玉米根尖纵切永久制片 4、南瓜或向日葵茎横、纵切永久制片 .
三、内容与方法
（一）临时切片制作
１、徒手切片法（重点）
２、整体装片 适合于植物体形小而扁
平的材料。如菌丝、孢子束、藓类。
2、蜡块制取
1）逐级脱水
将上述经软化的材料转入 250ml已洗净的输液瓶中加入40ml，70%酒 精脱水24h。分别加入各级酒精40ml，70% 酒精脱水24h，85%酒精脱水12h，95%酒 精脱水2h，无水酒精脱水1h。同时回收各 级酒精。 番红酒精染液染色（1g番红溶于 100ml 50%酒精中，纱布过滤）染色24h。
;
2）放在载玻片上作临时水装片，然 后置于显微镜下观察；
3）如果结构能被清晰地显示出来，
石 蜡 切 片 机
（二）永久装片的制作
1、材料预处理
将材料装在25ml规格的小指管， 加入甘油—酒精软化剂（甘油1份， 70%酒精1份）8ml封盖后在电热恒 温水浴锅50℃18h，第二天升成的光滑的硬纸（10.0×1.0×1.0㎝）制成 的纸盒中制取蜡块，在恒温箱门的低坎处 摆好纸盒，并写上名称，使其一面紧贴恒 温箱的受热金属板，纸盒底面紧贴恒温箱 底面金属板，倒入溶化石蜡0.2～0.3㎝厚的 薄层，2min后待薄层稍有凝固时将材料依 次排列于其上，再倒入溶化石蜡，并用烧 热的解剖针刺破其中的气泡，提着纸盒两 端预留的盒耳将纸盒浸入盛有冷水的盆中 冷却制成石蜡块。
徒手切片制作方法
一、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。
二、材料、用品1、用品显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液（或50%酒精溶液），%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤1、选材所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。
使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。
2、切片（1）盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。
（2）右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。
(6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存，可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。
显微制片技巧
中药显微鉴定知识总结中药鉴定常用的鉴定方法有：（原植物、动物和矿物）鉴定法、性状鉴定法、显微鉴定法及理化鉴定法等。
显微鉴定法是利用显微技术对中药进行显微分析，以确定其品种和质量的一种鉴定方法。
显微鉴定主要包括组织鉴定和粉末鉴定，利用显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状及内含物的特征、矿物的光学特性，和用显微化学方法，确定细胞壁及细胞内含物的性质或某些品种有效成分在组织中的分布等，用以鉴别药材的真伪与纯度甚至品质。
（一）显微制片方法显微鉴定时可根据检品的不同情况制作相应的制片，包括横切片或纵切片、表面制片、粉末制片、解离组织片、花粉粒与孢子制片、磨片制片、含粉末药材的制剂显微纸片等。
制作解离组织片时，解离液选择原则为：如样品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，可用氢氧化钾法；如果样品坚硬，木化组织较多或集成较大群束，可用硝铬酸法或氯酸钾法。
（二）植物细胞壁和内含物的鉴别（1）细胞壁性质的鉴别：①木质化细胞壁加间苯三酚试液显红色或紫红色。
②木栓化或角质化细胞壁加苏丹Ш显橘红色至红色。
③纤堆素细胞壁加氯化锌碘试液显蓝色或紫色。
④硅质化细胞壁加硫酸无变化。
（2）细胞内含物性质的鉴别：①淀粉拉加碘试液显蓝色或紫色。
②糊粉粒加碘试液显棕色或黄棕色。
加硝酸汞试液显砖红色。
③脂肪油、挥发油或树脂加苏丹Ш试液显橘红色、红色或紫红色。
④菊糖加10%α-萘酚乙醇溶液，再加硫酸显紫红色并很快溶解。
⑤黏液加钌红试液显红色。
⑥草酸钙结晶加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。
加硫酸逐渐溶解，析出结晶。
⑦碳酸钙结晶（钟乳体）加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。
⑧硅质加硫酸不溶解。
（四）显微临时制片常用封藏试液显微鉴定所用试剂包括水、稀甘油、甘油醋酸试液及水合氯醛试液。
（五）扫描电子显微镜和偏光显微镜的应用扫描电镜已广泛应用于生物样品表面及其断面立体形貌的观察。
偏光显微镜主要用于观察和分析矿物类中药的光学性质。
（六）1、细胞壁性质的鉴别：木质化细胞壁：间苯三酚，显红色或紫红色;木栓化(角质化)细胞壁：苏丹Ⅲ号，加热后显红色;纤维素细胞壁：氯化锌碘试液，显蓝色或紫色;硅质化细胞壁：硫酸无变化 2、细胞内含物的鉴定淀粉粒：加碘试液，蓝色或紫色。
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一、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。
二、材料、用品
1、用品
显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤
1 、选材所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5〜6毫米，长1〜1.5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。
使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷
成筒状再切
2 、切片
(1) 盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住
材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2〜3毫米，材料的切面必须保持水平方向。
(2) 右手执刀( 剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，
自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损
伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。
(6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察; 等切到相当数量后; 再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存，可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定
挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。
固定时间为16 分钟或更长时间。
4、染色、脱水、透明
(1)用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红( 50%酒精溶液)约30 分钟。
(2)再用吸管吸去番红，换用70%^85%>95%酉精进行冲洗、脱水，每级酒精3〜5分钟。
(3)复染色。
吸去酒精，用
0.5%固绿(95%酉精溶液)进行复染色，时间为0.5 分钟。
(4)冲洗、脱水。
用95%酒精冲洗1次，时间10秒。
后移入纯酒精中脱水2〜 3 次，每次3〜 5 分钟。
( 5)透明。
吸去纯酒精，放入1/2 二甲苯—1/2 纯酒精溶液中脱水和透明1次，时间5分钟。
( 6)吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明 2 次，时间 5 分钟。
5、封片、贴标签将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。
在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作日期和制作者姓
名等项，以便查考。
较好的切片，其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色，细胞质和纤维
素的壁则常被染成绿色，红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。
现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下:
选材-切片-固定（70%酉精）-1%番红（50%酉精溶液）染色-70%酉精
冲洗-脱水（85%酒精、95%酒精）-0.5%固绿（95%酒精溶液）复染色 -冲洗（95%酒精1次）-进一步脱水（纯酒精2〜3次）-透明（1/2纯酉精十1/2 二甲苯及纯二甲苯各二次）-封片（中性树胶）-贴标签。
附：药品的简单配方
（1）1%番红：于蒸馏水或50%酉精100 毫升中溶入番红粉末l 克，过滤后使用。
（2）0.5%固绿：95%酉精 1 00毫升中加入固绿粉末0.5 克。
徒手切片方法的改进徒手切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久, 在石蜡切片之前, 基本上使用徒手切片。
它的优点在于可以观察新鲜材料组织和细胞的天然色彩, 看到活体细胞结构状态, 所以徒手切片运用在植
物学实验教学中比较普遍。
为了克服传统徒手切片技术中的不足, 我们进行了改进, 改为皮套加刀片。
这种切片方法切片速度快, 软硬质材料都可以切, 不需要任何夹物, 既经济适用, 又简单易行。
1 材料用品
双面刀片 1 个,直径1〜1.5 cm 的乳胶管, 毛笔、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸, 质量分数1%的中性红染液或红墨水,新鲜的植物根、
茎、叶、花药和子房等。
2 切法
将直径1〜1.5 cm的乳胶管剪成3.5 cm长的一段，用剪子从中间剖开扣在右手的大拇指上, 注意皮套一定要高于拇指, 把要切的植物材料, 紧贴
在皮套的外侧。
如果是叶可以把它卷紧, 所切的材料不可过
长, 大约2~2.5 cm 即可。
此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住, 幼嫩的材料捏时不可用力过猛, 以免损坏组织细胞。
右手的拇指和食指捏住双面刀片的一侧, 手腕端平, 把刀片的前端与要切的材料保持垂直相接状态, 先切平材料, 然后用腕力向内连续切片, 刀片只要搭住材料就可以垂直切片。
另外还可以用同样的方法将双面刀片的先端与材料搭住、垂直、从右向左推切, 如此连续切下去, 然后用毛笔将切得薄而透明的材料刷入培养皿的水中, 避免干燥。
3 染色、封片把载玻片和盖玻片用纱布擦拭干净, 放在实验台上, 加上1 滴中性红染液或红墨水, 用毛笔在培养皿中选择薄而透明切片沾到染色液上, 用解剖针轻轻拨入染色液中, 大约30 s 后, 吸去染色液, 加 1 滴清水封片。
为了防止气泡的产生, 用左手拇指与食指拿住盖玻片的两侧, 使盖玻片的基部与滴液先接触, 右手握解剖针挑着盖玻片从左向右徐徐放下盖玻片, 使气体从一侧排出, 如果有多余的水溢出, 可用吸水纸吸
干, 再进行下一步的镜下观察。
4 镜检镜下观察时, 对好光源, 让视野光线均匀一致, 放上临时切片, 从低到高进行观察。
一个好的皮套切片,镜下观察有 4 点标准: 材料完整, 薄而透明; 镜下结构清晰; 无气泡; 封藏剂合适。
通过染色后的材料, 凡是死细胞均被染成红色, 而生活细胞仍然保持活体的自然色彩。
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