重要多糖分离纯化方法及应用实例
重要多糖分离纯化方法及应用实例
证实了LNTⅠb 为蛋白多糖的假设.
实验结论：
1 利用超滤法快速分离多糖的不同组分，再分别对这些组分利用DEAE‐52 纤维素层析进一步 纯化，最后用Sephadex G‐200 凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶连续电泳检测多糖纯度. 建立了 一套高效快速的香菇多糖提取方法. 通过上述方法，从香菇浓缩液中纯化的LNTⅠb 的多糖 含量为95.55%. 2 通过Sephadex G‐200 凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶连续电泳检测，可以证实LNTⅠb 为蛋 白多糖.
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2009‐8 volume30
多糖分离纯化方法及应用实例
多糖的应用现状
近 20 年来,随着天然药物化学、药理研究的不断深入即分析手段突飞猛进的发展,多糖 的研究引起了国内外许多学者极大的兴趣。研究表明, 多糖具有复杂的多方面的生物活性 和功能,特别是对机体免疫功能的作用。现在多糖已成为天然药物及保健品研发中的重要组 成部分。
多糖分离纯化实例 香菇多糖的分离纯化研究
实验流程： 香菇浓缩液 离心
超滤（100kDa、5kDa） 醇200 凝胶层析
多糖含量的测定 多糖组分纯度检测 实验结果
1、 超滤结果 通过两次不同分子量的超滤膜的分离，可以从香菇出多糖中分离出两个组分：LNTⅠ
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透析、超滤及超速离心
选用不同规格的超滤膜和透析带进行超滤和透析,以及一定条件下的超速离心操作,可按分子 大小差异把多糖样品分级。超滤和透析更常用于除去小分子物质。
多糖的分离纯化及生理作用
多糖的分离纯化及生理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成作用等多种生物活性。
多糖的提取和纯化1. 多糖的提取1.1 热水浸提法：其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或0.1－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）,干燥后可得粉末状的粗多糖。
1.2 微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（28.46％）。
实验三十三黑木耳多糖的提取、分离、纯化及初步测定
实验三十三黑木耳多糖的提取、分离、纯化及初步测定实验目的1.学习真菌多糖的提取方法2.掌握测定多糖组成、总糖含量的基本方法3.掌握柱层析技术实验原理通过水提法浸提出木耳中的多糖，经过有机溶剂脱脂，Sevag脱蛋白，透析除去无机盐等小分子杂质，经干燥的得粗多糖。
粗多糖经酸水解后通过纸层析或薄层层析测出多糖的单糖组成。
经酚硫酸法测得总糖含量。
获得的粗多糖经G-100纯化，获得较纯多糖样品，为进一步研究奠定基础。
设备及试剂1.设备：721型分光光度计回流装置台式离心机电热恒温水浴锅真空干燥箱恒温磁力搅拌器柱层析系统层析缸布氏漏斗2. 材料：黑木耳，使用前烘干、粉粹，过80目筛，得木耳粉3.试剂：苯酚硫酸无水乙醇丙酮乙醚乙酸正丁醇邻苯二甲酸CPC P2O5 NaSO4 NaCl NaOH BaCO3 石油醚氯仿粉末状活性炭阿拉伯糖鼠李糖木糖甘露糖半乳糖葡萄糖步骤1、提取1）.取50g粉末，用石油醚回流脱脂2h,反复两次，抽滤，取残渣。
2). 残渣经80%乙醇除去低聚糖后，热水浴浸提4h，重复一次，六层纱布粗滤，抽滤，取滤液。
3).向滤液中加入1%粉末活性炭，磁力搅拌器搅拌15min，抽滤除净活性炭。
4). 浓缩至80ml左右，加入糖液总体积的1/4 Sevage试剂（正丁醇：氯仿=1：4），充分搅拌2h，静置，离心，取上清液重复，至无游离蛋白为止。
5).将清夜装入透析袋，流水透析过夜。
6).将袋内溶液专移至250ml烧杯中，加入三倍体积95%乙醇沉淀多糖，静置30min。
7).4000rpm离心10min。
8).弃上清，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、氯仿洗涤。
9).将沉淀置于通风橱内挥净有机溶剂。
10).60℃真空干燥过夜，得粗多糖干品。
2.G-100柱纯化3、酚硫酸法测总糖含量1）称量提取出来的多糖粗品100mg，定溶于1000ml容量瓶。
2） 6g苯酚蒸馏水定容于100ml容量瓶中，得6%苯酚。
3）分别取1中母液0.0ml、0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml、0.9ml，分别加蒸馏水定容到50ml。
植物多糖的分离纯化
植物多糖的分离纯化一、植物多糖的提取1 溶剂提取法1．1 水提法水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1．2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。
而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
1．5 超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
多糖的纯化实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖纯化的基本原理和方法。
2. 学习并运用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
3. 通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
二、实验原理多糖是一类重要的生物大分子，具有广泛的生物活性。
然而，天然多糖往往伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等杂质，这些杂质会干扰多糖的结构鉴定和活性分析。
因此，对多糖进行纯化是研究多糖生物活性的关键步骤。
多糖的纯化主要包括以下步骤：1. 提取：采用热水浸提法或超声波辅助提取法等从植物、动物或微生物中提取多糖。
2. 净化：去除提取液中的蛋白质、脂肪和色素等杂质。
3. 纯化：利用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
4. 测定：通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
三、实验材料1. 实验药品：DEAE-Sephadex A-50柱层析材料、氨水、盐酸、无水乙醇、葡萄糖标准品等。
2. 实验仪器：层析柱、紫外可见分光光度计、离心机、移液器、容量瓶等。
四、实验方法1. 提取：称取一定量的多糖样品，加入适量蒸馏水，用超声波辅助提取法提取多糖。
提取液离心分离，取上清液作为待纯化样品。
2. 净化：将待纯化样品加入适量的氨水，调节pH值至7.0，静置一段时间。
离心分离，取上清液作为待纯化样品。
3. 纯化：将DEAE-Sephadex A-50柱层析材料预处理后，装入层析柱。
将待纯化样品上柱，用蒸馏水进行梯度洗脱。
收集洗脱液，利用紫外可见分光光度计检测洗脱液中的多糖含量。
4. 测定：配制葡萄糖标准溶液，绘制标准曲线。
将纯化后的多糖样品按照比色法进行测定，计算纯化前后多糖的浓度。
五、实验结果1. 提取：超声波辅助提取法提取多糖，提取率约为70%。
2. 净化：氨水处理去除蛋白质、脂肪和色素等杂质，纯化率约为90%。
3. 纯化：DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化，纯化率约为95%。
4. 测定：纯化前后多糖浓度分别为1.5 mg/mL和0.7 mg/mL，纯化效果良好。
多糖的提纯化技术
多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。
(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
多糖分离纯化
多糖分离纯化一、概述多糖是一类高分子化合物，具有复杂的结构和多样的功能，广泛存在于生物体内。
多糖的分离纯化是研究其结构和性质、开发应用的前提和基础。
本文将介绍多糖分离纯化的方法及其优缺点。
二、多糖分离纯化方法1. 溶液沉淀法溶液沉淀法是一种常用的多糖分离纯化方法。
该方法基于不同多糖在不同浓度下溶解度不同的原理，通过控制溶液中某些成分（如盐类）浓度来使目标多糖沉淀。
该方法操作简单，但需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解，并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用固定在固相上带电基团与目标多糖间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团（如硫酸基、羧基等）的多糖。
该方法分离效果好，但需要对固相的选择和操作条件进行优化。
3. 凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法是一种利用多孔凝胶作为分离介质，目标多糖根据其大小在凝胶中进行分离的方法。
该方法适用于具有不同分子量的多糖，且操作简单、分离效果较好。
但由于凝胶孔径大小限制，对于较小或较大的多糖可能无法有效分离。
4. 亲和层析法亲和层析法是一种利用目标多糖与特定配体间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有特定结构或功能的多糖，如具有特异性结合蛋白质、抗原表位等。
该方法操作简单、分离效果较好，但需要对配体选择和操作条件进行优化。
5. 聚焦电泳法聚焦电泳法是一种利用电场作用将目标多糖在pH梯度中移动并实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有不同等电点或带电性质的多糖。
该方法分离效果好、可同时实现高效分离和纯化，但需要对pH梯度的选择和操作条件进行优化。
三、多糖分离纯化方法的优缺点1. 溶液沉淀法优点：操作简单，无需昂贵设备。
缺点：需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解，并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法优点：分离效果好，适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团（如硫酸基、羧基等）的多糖。
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法一、本文概述天然药物多糖是一类具有广泛生物活性的天然高分子化合物，其独特的结构和功能使得它们在医药、食品、化妆品等多个领域具有广阔的应用前景。
本文旨在全面概述天然药物多糖的主要生物活性以及分离纯化方法，以期为相关领域的研究和应用提供有价值的参考。
我们将深入探讨天然药物多糖的主要生物活性，包括其免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖等多方面的药理作用。
这些生物活性使得天然药物多糖在预防和治疗多种疾病方面具有独特的优势。
我们将详细介绍天然药物多糖的分离纯化方法。
由于天然药物多糖的来源广泛，结构复杂，因此其分离纯化过程往往具有一定的挑战性。
我们将从样品的采集、预处理、提取、分离、纯化以及结构鉴定等方面，系统地介绍天然药物多糖的分离纯化流程，以期为相关实验提供技术指导和参考。
通过本文的阐述，我们期望能够为读者提供全面而深入的天然药物多糖知识，进一步推动其在医药、食品、化妆品等领域的应用和发展。
二、天然药物多糖的主要生物活性天然药物多糖作为一大类生物活性物质，具有多种独特的生物活性，这些活性使其在医药、保健品、食品等领域具有广泛的应用前景。
以下将详细介绍天然药物多糖的几种主要生物活性。
免疫调节作用：许多天然药物多糖具有显著的免疫调节作用，能够激活并增强机体的免疫功能。
它们可以促进免疫细胞的增殖与分化，提高免疫细胞的活性，从而增强机体的免疫力，对预防和治疗免疫相关疾病具有重要意义。
抗肿瘤作用：许多研究表明，天然药物多糖具有抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、增强抗肿瘤药物疗效等作用。
这些作用使得天然药物多糖成为肿瘤治疗中的重要辅助药物，具有广阔的应用前景。
抗氧化作用：天然药物多糖中的许多成分具有显著的抗氧化活性，可以清除体内的自由基，减轻氧化应激损伤，保护细胞和组织免受氧化损伤。
这对于预防和治疗氧化应激相关疾病具有重要意义。
降血糖作用：部分天然药物多糖具有降低血糖的作用，可以通过提高胰岛素敏感性、促进胰岛素分泌、抑制肝糖原分解等途径来调节血糖水平。
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定以多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定为题，本文将介绍多糖的分离纯化方法、纯度鉴别和分子量测定的原理和技术。
一、多糖的分离纯化方法多糖是一类由多个糖基组成的生物大分子，其结构复杂多样。
为了研究多糖的性质和功能，需要将多糖与其他杂质分离开来并纯化。
常用的多糖分离纯化方法包括离心沉淀、凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等。
离心沉淀是一种简单有效的多糖分离纯化方法。
通过调节离心速度和时间，可以使多糖与其他杂质沉淀分离，然后将上清液取出，即可得到相对纯净的多糖溶液。
凝胶层析是一种常用的多糖分离纯化方法。
凝胶层析根据多糖分子的大小和形状，利用凝胶的孔隙大小选择性地分离多糖。
常用的凝胶材料有琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
离子交换层析是一种利用多糖与离子交换树脂之间的电荷相互作用进行分离的方法。
树脂表面带有正负电荷，多糖分子根据其电荷性质与树脂发生吸附和解吸作用，从而实现分离纯化。
亲和层析是一种利用多糖与特定的亲和配体之间的特异性结合进行分离的方法。
常见的亲和配体有金属离子、抗体、受体等。
通过与亲和配体结合，多糖可以被选择性地吸附在亲和树脂上，其他杂质则被洗脱，从而实现纯化。
二、多糖的纯度鉴别多糖的纯度鉴别是判断多糖溶液中是否存在杂质的过程。
常用的纯度鉴别方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外-可见光谱、红外光谱等。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
通过在凝胶中施加电场，多糖分子根据其大小和电荷性质在凝胶中迁移，从而实现分离和鉴定。
紫外-可见光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
多糖溶液在紫外-可见光谱范围内有特征性的吸收峰，通过测量多糖溶液在不同波长下的吸光度，可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
红外光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
不同多糖具有特征性的红外吸收峰，通过测量多糖溶液的红外光谱，可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
三、多糖的分子量测定多糖的分子量是衡量多糖结构大小的重要指标。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
香菇多糖的分离纯化（水提醇沉法）
香菇多糖的分离纯化（水提醇沉法）香菇多糖的提取、纯化（水提醇沉法）一、实验目的了解并掌握水提醇沉法提取香菇多糖的原理和方法。
二、实验原理提取香菇多糖的方法有：水提醇沉法（热水浸提法）、碱浸提法和酶解法。
水提醇沉法是最常见的方法。
香菇多糖溶于水。
热水浸提时，香菇的组织细胞破裂，多糖成分浸出，再用乙醇沉淀香菇多糖。
料液比、温度、时间、PH值、乙醇浓度、提取次数都是影响提取效果的重要因素。
最佳提取条件为：料液比1:40（30~40倍均可），提取温度为80~95℃，提取时间2h，提取时的乙醇浓度为75%，PH 值6.0~8.0，提取次数为2次。
三、材料和仪器材料：香菇（取子实体）、蒸馏水、无水乙醇、Sevage试剂、（Sevage试剂配制：取三氯甲烷和正丁醇，按照5﹕1进行混合，放置在棕色瓶中备用。
）仪器：分析天平、高速离心机、离心试管、冷冻干燥机、磁力搅拌器、恒温水浴锅、烧杯等。
四、实验步骤1、提取：将干燥的香菇子实体粉碎后，加入30倍的蒸馏水，用沸水提取2h，过滤，滤渣再按第一次提取工艺提取1次，将上清液合并后于80℃下浓缩。
在冷却后的浓缩液中加入一定量95%的乙醇，使乙醇的浓度为75%，室温下放置过夜，离心，将收集到的沉淀用真空冷冻干燥机冻干，放到后4℃冰箱中保存、备用。
2、sevage法除蛋白：称取得到的样品10g（含水率9.7%）充分溶解于100mL蒸馏水中。
加入一定体积的Sevage试剂，用磁力搅拌器剧烈搅拌20 min 左右，离心，分离粗多糖中蛋白质杂质。
重复2次。
3、乙醇沉淀：往除过蛋白的多糖溶液（上清液）中缓慢加入95%的乙醇，至乙醇体积占溶液总体积的75%，边加边搅拌，使多糖均匀沉淀。
放在4℃冰箱中6h，6000r/min 离心10min，弃去上清液，将沉淀在溶解于蒸馏水中，重复以上过程3次，将最后得到的溶液放在-40℃的冷冻干燥机中冻干，制得香菇粗多糖。
五、含量测定（苯酚-硫酸法）1、标准曲线的绘制精确称取100 mg 葡萄糖，溶解定容于100 mL容量瓶中，得含1 mg/mL葡萄糖的对照品储备溶液，备用。
昆布多糖提取纯化工艺及应用
昆布多糖提取纯化工艺及应用昆布多糖是一种具有多种生物活性的天然多糖，其在医药、保健品、食品等领域的应用广泛。
本文将介绍昆布多糖的提取纯化工艺及其应用。
一、昆布多糖的提取昆布多糖的提取通常采用水提法或碱提法。
水提法是利用昆布多糖的可溶性，以水为溶剂，通过加热搅拌或超声波辅助提取昆布多糖。
碱提法则是利用碱处理昆布，使昆布中的蛋白质和酚类物质变性，从而释放出昆布多糖。
二、昆布多糖的纯化提取得到的昆布多糖往往含有杂蛋白和色素等杂质，因此需要进行纯化。
常用的纯化方法包括 Sevage 法、DEAE 纤维素柱层析法和凝胶柱层析法等。
1. Sevage 法Sevage 法是一种常用的脱蛋白方法，其原理是利用蛋白质和脂溶性物质在有机溶剂中溶解度的差异，将蛋白质和脂溶性物质分离。
具体操作方法是加入Sevage 试剂（三氯甲烷：正丁醇=4：1），在搅拌下生成蛋白质沉淀，然后离心分离，得到粗提的昆布多糖。
2. DEAE 纤维素柱层析法DEAE 纤维素是一种阴离子交换剂，可用于分离和纯化多糖。
将 DEAE 纤维素装入色谱柱中，用一定浓度的 NaCl 溶液洗脱，通过逐步增加 NaCl 浓度的方法，将不同极性的组分分离。
通过 DEAE 纤维素柱层析法，可以将昆布多糖分为不同的组分，进一步提高纯度。
3. 凝胶柱层析法凝胶柱层析法是一种根据分子大小进行分离的方法。
将昆布多糖溶液通过凝胶柱，大分子物质不能进入凝胶颗粒，而小分子物质可以进入凝胶颗粒并被洗脱出来。
通过凝胶柱层析法，可以去除昆布多糖中的低分子量杂质和小分子量杂质。
三、昆布多糖的应用1. 药品原料药和辅料昆布多糖具有显著的抗肿瘤、抗凝血、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，因此被广泛用作药品原料药和辅料。
例如，可以将昆布多糖与其他药物成分结合，制备成抗肿瘤药物、抗凝血药物、抗炎药物等。
2. 保健品添加剂昆布多糖具有多种生物活性，对人体健康有很好的保健作用。
因此，昆布多糖也被用作保健品添加剂，如增强免疫力、抗衰老、降血糖等保健品中都含有昆布多糖成分。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
《白芨多糖的分离纯化及其在炎症治疗方面的应用》
《白芨多糖的分离纯化及其在炎症治疗方面的应用》一、引言白芨作为一种传统中药材，其药用价值历来备受关注。
白芨多糖作为白芨的主要活性成分之一，具有显著的生物活性和药理作用。
近年来，随着对白芨多糖的深入研究，其在炎症治疗方面的应用逐渐受到重视。
本文旨在探讨白芨多糖的分离纯化方法及其在炎症治疗方面的应用，以期为相关研究提供参考。
二、白芨多糖的分离纯化（一）分离方法白芨多糖的分离主要采用热水提取法、超声波辅助提取法等方法。
其中，热水提取法是一种常用的方法，其操作简单、成本低廉。
具体步骤为：将白芨药材用热水浸泡、提取、浓缩，然后通过乙醇沉淀、离心等步骤得到多糖粗品。
超声波辅助提取法则可以加快提取速度，提高多糖的提取率。
（二）纯化方法白芨多糖的纯化主要包括脱蛋白、脱色、透析等步骤。
首先，通过醇沉法去除粗品中的蛋白质；其次，采用氧化剂或吸附剂等方法进行脱色处理；最后，通过透析法去除小分子杂质，得到较为纯净的白芨多糖。
三、白芨多糖在炎症治疗方面的应用（一）抗炎机制白芨多糖具有显著的抗炎作用，其机制主要包括抑制炎症介质释放、调节免疫功能等方面。
研究表明，白芨多糖能够抑制炎症细胞因子的产生和释放，减轻炎症反应；同时，还能够调节免疫系统的功能，增强机体的抗病能力。
（二）应用领域1. 临床治疗：白芨多糖可应用于治疗各种炎症性疾病，如风湿性关节炎、慢性支气管炎、胃炎等。
通过口服或注射给药，白芨多糖能够有效地缓解炎症反应，改善患者症状。
2. 药物研发：白芨多糖可以作为新药研发的候选药物。
通过对其结构进行修饰和优化，可以进一步提高其生物活性和药理作用，为治疗炎症性疾病提供更多选择。
3. 化妆品：白芨多糖还具有很好的保湿、抗氧化的作用，可以应用于化妆品中，为皮肤提供保护和滋养。
四、结论本文对白芨多糖的分离纯化方法及其在炎症治疗方面的应用进行了探讨。
通过热水提取法、超声波辅助提取法等方法，可以有效地提取和纯化白芨多糖。
而其在炎症治疗方面的应用则主要体现在其显著的抗炎作用和调节免疫功能等方面。
红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究
红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究红枣作为一种常见的食材和药材，因其营养丰富和药用价值受到广泛关注。
红枣中含有丰富的营养成分和活性成分，其中红枣多糖是其主要活性组分之一。
红枣多糖具有多种功能，包括抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
因此，红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究具有重要的理论和应用价值。
红枣多糖的分离纯化是研究其结构和活性的基础。
目前，常用的纯化方法包括水提取、醇沉淀、膜分离、离子交换和凝胶过滤等。
这些方法能够有效地分离红枣多糖，并提供较高纯度的样品用于后续的研究。
分离纯化后的红枣多糖样品可以通过质谱、红外光谱、核磁共振等技术进行结构表征。
红枣多糖的结构表征是研究其活性功能的重要手段。
红枣多糖主要由单糖组成，其中主要成分是葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖等。
此外，红枣多糖还含有少量的灰氮和酸，这些成分对红枣多糖的活性和稳定性具有影响。
利用质谱和红外光谱等技术可以确定红枣多糖的分子量、化学结构和功能基团等信息。
红枣多糖的活性功能是研究者关注的焦点。
多糖作为一类天然产物，具有多种活性功能。
红枣多糖的抗氧化活性是其一大特点，可以清除自由基，提高机体的抗氧化能力。
红枣多糖还具有抗肿瘤活性，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
此外，红枣多糖还具有免疫调节作用，可以增强机体的免疫功能。
这些功能是红枣多糖应用于食品、保健品和药物的基础。
红枣多糖的应用潜力广阔。
红枣多糖作为一种天然产物，具有良好的生物相容性和安全性，因此在食品、保健品和药物等领域具有较大的应用潜力。
红枣多糖可以作为食品添加剂，用于提高食品的营养价值和功能性；可以作为保健品的活性成分，用于改善机体的免疫功能和抗老化能力；还可以作为药物的辅助治疗药物，用于改善肿瘤患者的治疗效果。
综上所述，红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究对于充分发挥其营养和药用价值具有重要意义。
未来的研究可以进一步探索红枣多糖的结构与功能之间的关系，并开展红枣多糖的制备工艺和应用研究，以促进其在食品、保健品和药物等领域的应用综上所述，红枣多糖作为一种天然产物具有广泛的应用潜力。
多糖的分离和纯化
一、多糖的分离和纯化多糖是极性极大的大分子化合物，提取时一般先将原料脱脂、脱色，然后用水、盐或稀碱水在不同温度下提取。
提取物浓缩后加沉淀剂(乙醇、丙酮等)离心沉淀，沉淀部分可反复多次离心沉淀，以除去部分水溶性色素等杂质。
1．除蛋白用水或稀碱提取的多糖常含有蛋白质，常用的除蛋白质的方法有Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。
前两种多用于微生物多糖，后者多用于植物多糖。
Sevag 法是经典的除蛋白质方法，复杂、费时，且样品损失较大。
冯建林等比较了Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、硫酸铵法及木瓜蛋白酶复合酶法除蛋白的效果，从蛋白残留量和多糖的得率两方面评价．认为三氯乙酸法最好，但三氯乙酸仍不能完全除去蛋白，建议三氯乙酸法和Sevag 法结合使用。
2．脱色多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素)，根据其不同性质采取不同的去除方法。
常用的脱色方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)。
D EA E一纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色目的，而且可以进行多糖的分离。
H2 O2：是一种氧化脱色剂，浓度不宜过高，宜在低温下进行，否则引起多糖的降解。
对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过生成金属络合物的方法同时除去蛋白和色素，即加入费林试剂生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。
吸附脱色法也常用，如通过活性炭、高岭土、硅藻土柱达到脱色的目的。
3．多糖的分级采用一般方法提取的多糖，通常是多糖的混合物，即是多分散性的，其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同。
分级可以达到纯化的目的，可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。
(1)分级沉淀利用分子大小和溶解度不同进行分离，常用的有两种方法，即有机溶剂沉淀法和季铵盐或硫酸铵法。
膜分离技术分离多糖
膜分离技术分离多糖
膜分离技术是一种根据溶质在溶液和膜界面之间传质而实现分离纯化的方法。
在多糖
的分离过程中，膜分离技术被广泛应用。
我们需要准备一种适用于多糖分离的膜材料。
常用的膜材料有聚醚砜（PES）、聚醚酯（PEEK）和聚氟乙烯（PTFE）等。
选择材料时，需考虑到它们的透水性、分离效果和耐受
性等因素。
接下来，需要进行膜的制备和改性。
制备膜材料的方法主要有溶液浇铸法、溶剂交替
法和拉伸法等。
利用这些方法，可以得到具有不同孔径和表面性质的膜。
在多糖分离中，
常采用一种称为膜改性的方法，通过在膜表面引入亲水性官能团或离子基团，以提高多糖
分离的选择性和效率。
在分离过程中，需要将原料液通过膜分离设备进行处理。
膜分离设备一般包括膜组件、压力装置和收集系统等。
膜组件是多糖分离的核心部分，其中膜的选择和配置会对分离效
果产生重要影响。
压力装置则用于施加适当的压力，促使溶质通过膜障。
收集系统用于收
集分离后的多糖产物。
在多糖分离过程中，还需要根据多糖的特性和所需的纯度，选择合适的操作条件，如
溶液pH、温度和压力等。
操作过程中还需根据膜的特性和溶液性质，采取适当的预处理方法，如超滤、浸渍和浸漂等，以减少污染物与膜的接触，提高分离效果。
膜分离技术是一种重要的多糖分离方法，可以有效地实现多糖的分离纯化。
通过选择
适合的膜材料和设备，调节操作条件，提高预处理方法的效果，可以获得高纯度的多糖产物。
多糖的分离纯化及药理作用
多糖的分离纯化及药理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、免疫调节及降血糖等多种生物活性。
1.板栗多糖的分离纯化及抗氧化活性研究1. 1板栗多糖的提取及纯化（1）板栗粗多糖的提取称取原料粉末50 g，加入去离子水1000 ml在100℃水浴中回流2h.先用纱布过滤，然后离心除去不溶物质。
将提取液减压浓缩至约200 ml然后将体积比为4: 1的三氯甲烷/正丁醇混合液等体积加入多糖溶液中。
振荡30 min后，静置，除去中间层变性蛋白质，并收集上层清液，重复以上操作3次去除蛋白。
向滤液中加入95%乙醇至含乙醇量达到80%，边加边搅拌，得灰白色絮状沉淀。
静置6h后，倾出上层清液，余下进行离心分离沉淀，回收上层乙醇溶液。
固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干即为粗多糖(CPS)。
（2）板栗粗多糖的纯化将二乙胺基乙基纤维素（DE-A E- 52)处理后填充3. 0 x 50 cm层析柱,用2倍量蒸馏水平衡。
取0. 5 g多糖用蒸馏水溶解后上样，蒸馏水洗脱后分别用0. 1. 0. 3. 0. 5 mol/ L氯化钠溶液梯度洗脱，洗脱液流速为60 ml/ h分部收集，每管10 ml 隔管取0. 2 ml洗脱液用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖的含量。
以480 nm处吸收值为纵坐，分部收集的管数为横坐标，做出多糖的洗脱曲线。
将柱层析分出的各个组分分别合并收集，减压浓缩至100 ~ 200 ml，自来水流水透析48 h,去离子水透析24 h,每4—6 h换一次水。
离心除去不溶性杂质后，用4倍体积的95%乙醇进行沉淀，固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干后得纯化多糖( CPS1)2胡萝卜多糖的分离纯化及抑制小鼠酒精肝损伤作用研究2.1胡萝卜粗多糖的制备（1）将胡萝卜洗净，切丝，于50℃烘干，粉碎。
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定以多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定为题，本文将介绍多糖的分离纯化方法、纯度鉴别及分子量测定的原理和常用技术。
一、多糖的分离纯化方法多糖是指由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物，常见的多糖有淀粉、纤维素、壳聚糖等。
多糖的分离纯化是指将多糖与其他杂质分离开来，得到纯净的多糖样品。
常用的多糖分离纯化方法包括溶剂沉淀法、离子交换色谱法和凝胶过滤法等。
溶剂沉淀法是通过在特定溶剂条件下，使多糖在溶液中沉淀，然后通过离心等方式分离沉淀物和上清液。
离子交换色谱法是利用多糖与离子交换树脂之间的电荷相互作用，通过调节溶液pH 值和离子强度等条件，实现多糖与其他组分的分离。
凝胶过滤法则是利用多糖分子的大小和形状差异，在凝胶柱中进行分离，大分子多糖难以进入凝胶颗粒内部，从而被留在柱上，小分子杂质则能够顺利通过。
二、多糖纯度的鉴别方法多糖的纯度鉴别是指确定多糖样品中多糖的含量以及杂质的种类和含量。
常用的多糖纯度鉴别方法包括光谱法、色谱法和凝胶电泳法等。
光谱法是通过多糖在特定波长下吸光度的变化来确定多糖的含量，如紫外吸收光谱法和红外光谱法。
色谱法是利用多糖与其他组分在色谱柱中的分离行为，通过检测样品中多糖峰的峰面积或峰高来确定多糖的含量。
凝胶电泳法是利用多糖在电场中的迁移行为，通过在凝胶上观察多糖的迁移距离和带电量来确定多糖的含量和电荷性质。
三、多糖分子量测定方法多糖的分子量是指多糖分子中单糖个数的总和，是评价多糖结构和性质的重要指标。
常用的多糖分子量测定方法包括凝胶渗透色谱法、粘度法和质谱法等。
凝胶渗透色谱法是通过多糖在凝胶柱中的分离行为，利用不同分子量的多糖在凝胶柱上的停留时间来确定多糖的分子量。
粘度法是通过测量多糖溶液的粘度和浓度，利用Mark-Houwink公式计算多糖的分子量。
质谱法是通过测量多糖分子在质谱仪中的离子质量来确定多糖的分子量。
多糖的分离纯化、纯度鉴别和分子量测定是研究多糖性质和功能的重要步骤。
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阴离子交换柱层析法是目前在多糖纯化中应用最普遍的一种方法,特别是对于体积较大的多 糖溶液,大多数首先采用阴离子交换柱层析。通过柱层析,多糖溶液得到浓缩及初步纯化(有的 多糖通过该步骤即可得到各种均一多糖组分)。至今应用的阴离子交换剂有DEAE‐纤维素 (DEAE‐cellulose),DEAE‐葡聚糖(DEAE‐Sephadex)及DEAE‐琼脂糖(DEAE‐Sephadex) 3种,其中以 DEAE‐纤维素应用得最为广泛。DEAE‐cellulose具有开放性的骨架,多糖能自由进入载体中并进 行迅速扩散。
取225.667mg 的 LNTⅠ经DEAE‐52 纤维素层析柱，收集流出液，并用苯酚‐硫酸法测定 为多糖含量，测得其含糖量为59.0318mg，此为中性多糖（LNTⅠa）. 再用0.1M‐0.5MNacl 梯 度洗脱，得到的洗脱液经苯酚‐硫酸法测定糖分布为单一对称洗脱峰（图1）. 洗脱液即为酸 性多糖（LNTⅠb）. 测得其多糖含量为 83.0016mg. LNTⅠa 和LNTⅠb 的糖量之和为 142.0334mg，得率为62.94%. 从色泽上看，香菇粗多糖为黄褐色液体，LNTⅠa 和LNTⅡa 都 为无色透明的物质；LNTⅠb 和LNTⅡb都为淡黄色物质，说明DEZE‐纤维素层析柱具有 较好的脱色效果。
图1 苯酚-硫酸法测100kDa 以上酸性多糖含量图
3、 Sephadex G‐200 凝胶柱层析 将LNTⅠb 组分过Sephadex G‐200 凝胶层析柱，得到色谱（图2）. 色谱图中只出现一个
峰，这说明，该组分中可能只有一种蛋白. 用部分收集器收集下来的收集液苯酚‐硫酸法测 得单一糖洗脱峰（图3）. 对比图2 和图3，发现两者的峰的形状相似，出峰的时间也基本相 同. 这说明，LNTⅠb 很可能是蛋白多糖.LNTⅠb 过完Sephadex G‐200 凝胶柱后的糖含量为 43.179mg，得率为52.02%；冻干后，干粉重41.256mg，可知LNTⅠb 组分的多糖含量为95.55%.
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多糖分离纯化方法及应用实例
多糖的应用现状
近 20 年来,随着天然药物化学、药理研究的不断深入即分析手段突飞猛进的发展,多糖 的研究引起了国内外许多学者极大的兴趣。研究表明, 多糖具有复杂的多方面的生物活性 和功能,特别是对机体免疫功能的作用。现在多糖已成为天然药物及保健品研发中的重要组 成部分。
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学习园地
凝胶过滤填料 GCL‐2000 可用于分离多糖，且分离范围较宽，GCL‐2000 应该如 何装填？
柱子装填 1 、计算所需填料体积 2、使用合适的缓冲液，准备浓度为 40%‐60%的匀浆液 。 3、关闭出口，小心向层析柱倾倒匀浆液。根据柱体积，一个灌装管可能是必须的。 4、插入并固定顶端调节器放置在匀浆液表面。 5、打开泵出口，开启泵，缓冲溶液以高于操作流速的 10%‐20%的流速流过层析柱。 6、柱床稳定后，关闭柱子出口，调节柱床顶端调节器的位置。 平衡 用 2‐5 柱体积的缓冲溶液冲洗柱子，或者直至基线稳定即可。 样品的准备和上样量 通常来讲，样品用缓冲溶液溶解，通过过滤的方法去除一些不溶物。根据柱体积计算上样 量。如果是分级分离，达到较高的分辨率，上样量一般为柱体积的 0.1%‐1.0%，如果是一 般的制备分离，上样量可高达柱体积的 5%。对于缓冲溶液的置换或者脱盐，上样量为柱 体积的 15%‐25%。样品蛋白质的浓度应该是 1‐20mg/ml。 流速 建议的线性流速的范围是 5‐50cm/h. 洗脱 如果是缓冲溶液置换，要确保在上样之前，用要求的缓冲溶液平衡层析柱 。 再生 用 5 倍柱体积的 0.1M 的 NaOH 以 5‐50cm/h 的流速冲洗柱子。通过用数个柱体积的 DIW 或是缓冲溶液冲洗层析柱来去除腐蚀剂。然后，测定柱子的 PH 值，确保系统已经回复到 平衡状态。
阴离子交换柱层析适合于分离各种酸性、中性多糖以及粘多糖。其分离机理不是单一的离子 交换,而是吸附与解吸附,所以其不仅可应用于中性多糖与酸性多糖的分离,也可应用于不同
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中性多糖的分离。一般在pH值为6时,酸性多糖能吸附于AIER上,中性多糖不吸附,然后用pH值 相同、离子强度不同的缓冲液将酸性多糖分别洗脱下来,但如果柱为碱性(即OH‐型),则中性多 糖也能吸附。另外,某些多糖还能与硼酸形成络合物,采用硼酸型AIER或硼酸溶液作流动相,从 而使糖类物质能在AIER上进行分离纯化。如黄芪用水提取,经Pb (OAC)2沉淀除去蛋白质,加乙 醇可使多种糖沉淀出来。粗多糖再溶于水,通过硼酸型DEAE‐纤维素柱,以0.01mol/L硼砂溶液 洗脱,再用乙醇、丙酮处理,可得黄芪多糖成分AG‐1。其他黄芪多糖成分如AH‐1和AH‐2等,也用 同样的工艺进行分离纯化。吴亚林等通过DEAE‐Sepharose fast flow阴离子交换层析得到 纯化的无花果多糖。
作为药物的多糖在治疗肿瘤时,不像一般化疗药物直接杀死生长着的肿瘤细胞,而是促 进细胞和体液免疫反应,如激活补体、巨噬细胞、T 淋巴细胞、B 淋巴细胞或加强抗体生成 等,以达到抑制和消灭肿瘤细胞的作用,对正常细胞影响很小。
例如：紫草和枸杞多糖具有抗突变、抗衰老和增强免疫功能的作用;枸杞多糖等可抵抗 自由基过氧化；香菇、商陆、松果、柴胡和云芝多糖可激活巨噬细胞,从而抑制肿瘤生长; 从三七、防风、甘草和刺五加中提取的多糖类化合物能激活网状内皮系统,发挥抗肿瘤作用; 灵芝多糖通过活化巨噬细胞和蛋白激酶 C (PKC)而发挥免疫增强作用等。目前,已有部分天 然多糖类化合物用于临床,显示出良好的疗效,多糖在治疗肿瘤、代谢及感染性疾病等方面 的应用仍在不断扩大,给近代肿瘤、艾滋病及其他疾病的治疗开辟了新的方向。
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图2 100kDa 以上酸性糖过G200 凝胶柱层析色谱图
4 多糖的纯度鉴定
图3 苯酚-硫酸法测100kDa 以上酸性多糖含量图
取LNTⅠb 组分进行电泳检测，并分别进行糖染和银染. 在银染电泳图谱和糖染电泳图谱都
呈现单一条带，且两条带的位置基本相同，这说明LNTⅠb 为单一成分，纯度较高，而且也
证实了LNTⅠb 为蛋白多糖的假设.
实验结论：
1 利用超滤法快速分离多糖的不同组分，再分别对这些组分利用DEAE‐52 纤维素层析进一步 纯化，最后用Sephadex G‐200 凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶连续电泳检测多糖纯度. 建立了 一套高效快速的香菇多糖提取方法. 通过上述方法，从香菇浓缩液中纯化的LNTⅠb 的多糖 含量为95.55%. 2 通过Sephadex G‐200 凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶连续电泳检测，可以证实LNTⅠb 为蛋 白多糖.
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和LNTⅡ. 其中，LNTⅠ分子量为100kDa 以上；而LNTⅡ的分子量在5kDa 和100kDa 之间； 至于5kDa 以下的多糖由于分子量小，没有生物活性，弃去. 通过超滤的方法可以快速高效 地将粗多糖分成两个组分，为进一步纯化提供便利。而且，实验证明，超滤法还有一定的脱 色作用. 2、DEAE‐52 纤维素纯化
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糖类提取之后需要进一步除去大量的非糖杂质，再进行混合糖类的相互分离，这是一项 比较困难的工作，尤其是多糖类难以获得纯品。一般可采用下列方法分离纯化混合多糖。其 中柱层析法是目前采用比较多的方法。
部分沉淀法
z 金属盐沉淀法 提取液中加入中性醋酸铅可沉淀去除大部分酸性、酚性的杂质（如有机酸、氨基酸、蛋白质、 树脂酸、黄酮、蒽醌、鞣质等），包括酸性多糖。而用碱式醋酸铅对多糖的沉淀就更为完全。 除去杂质后的母液用H2S脱盐后，单糖、低聚糖和水溶性较大的中性苷类仍保留在滤液中。 铅盐沉淀法除去杂质比较完全，母液脱铅后可用于单糖和低聚糖的定量，也可用铜盐沉淀法 提取多糖。 z 季铵盐沉淀法 季铵类氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于分离酸性多糖。季铵氢 氧化物与中性多糖不生成沉淀，但当调高PH，使某些OH基解离，或加硼酸缓冲液增高糖的 酸度，中性糖也能被沉淀。利用季铵氢氧化物在酸性、中性、微碱性、碱性中分级沉淀可以 分离多糖。 z 甲醇分级沉淀法 常用的分级沉淀法是在混合多糖的浓水溶液中（常在PH=7时），逐步加入乙醇，收集不同醇 浓度下析出的沉淀。一般各次沉淀需经反复溶解后，再醇析，直到测得的物理常数恒定，最 常用的是旋光度测定和电泳检查。用分级沉淀法得到的多糖，常杂有较多的蛋白质，必须予 以去除。一般选择那些使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞣酸 等。但必须处理时间短，温度低，避免多糖降解。
透析、超滤及超速离心
选用不同规格的超滤膜和透析带进行超滤和透析,以及一定条件下的超速离心操作,可按分子 大小差异把多糖样品分级。超滤和透析更常用于除去小分子物质。
2009‐8 volume30 制备性区域电泳
在电场作用下，不同的多糖按其分子大小、形状及其所带电荷的不同而达到分离。载体通常 是玻璃粉。电泳完毕后，将玻璃粉载体推出柱外，分割后分别洗脱。此法分离效果较好，但 只适于实验室小规模应用。常用的有聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维塑膜电泳。
因此，许多学者也纷纷开始研究多糖，而多糖的分离纯化也成为了研究多糖不可或缺 的步骤。选择合适的分离纯化多糖填料尤为重要。
多糖的分离方法
尽管多糖来源不同、品种繁多，但其分离纯化的方法基本类似，主要是利用多糖溶于水 或酸、碱、盐溶液，而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂的特点。提取时，一般应先将植物原 料脱脂和脱色素，然后以水为主体溶剂（如冷、热税或烯的酸、碱溶液）提取多糖。提取液 以醇、丙酮等沉淀析出，所获得的粗多糖需经反复溶解与醇析。对于含糖多的苷类也可采用 此法得到总苷。
柱层析法
凝胶过滤层析
它是根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离的目的，已用于各种植物淀粉中直链和支链 多糖的分离。常用的凝胶色谱分离材料主要有葡聚糖凝胶（sephadex G、sephadex LH‐20）, 琼脂糖凝胶（sepharose）,纤维素凝胶（cellufine GCL‐2000）,聚丙烯酰胺凝胶（Bio‐gel P）等。 在色谱分离时，大分子的多糖比小分子先洗下来。对于分子量较大的多糖，选择的sephadex G类对应的凝胶型号一般为sephadex G‐100、sephadex G‐150、sephadex G‐200，这些都属于 比较软的一些凝胶（其中sephadex G‐200由于太软已经停止生产），这时，可以考虑用Cellufine GCL‐2000代替，此填料的基材为纤维素，机械强度好，且它的分子量范围较宽，比较适合 多糖的分离。