EGFP在肿瘤细胞中的表达分析9

EGFP在肿瘤细胞中的表达分析

黄娟

西南大学生命科学学院，重庆 400715

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摘要............................................... 错误！未定义书签。Abstract............................................ 错误！未定义书签。第一章文献综述..................................... 错误！未定义书签。

1.1 HTERT基因在肿瘤治疗中的研究进展............. 错误！未定义书签。

1.1.1 HTERT基因的发现........................ 错误！未定义书签。

1.1.2 HTERT基因的结构和特征.................. 错误！未定义书签。

1.2 HTERT基因在肿瘤治疗中的生物学意义........... 错误！未定义书签。

1.2.1 端粒与端粒酶........................... 错误！未定义书签。

1.2.2 端粒酶与肿瘤的关系..................... 错误！未定义书签。

1.2.3 针对端粒酶的抗肿瘤治疗................. 错误！未定义书签。

1.3 HTERT基因肿瘤在治疗中的研究进展............. 错误！未定义书签。

1.3.1HTERT基因肿瘤治疗中的发展前景.......... 错误！未定义书签。

1.3.2 HTERT基因在肿瘤在治疗中的存在的问题.... 错误！未定义书签。

1.3.3 HTERT基因在肿瘤治疗中的展望............ 错误！未定义书签。

第二章引言......................................... 错误！未定义书签。第三章材料与方法................................... 错误！未定义书签。

3.1 实验材料.................................... 错误！未定义书签。

3.1.1 实验动物............................... 错误！未定义书签。

3.1.2 主要仪器与设备......................... 错误！未定义书签。

3.1.3主要试剂、培养基和试剂盒............... 错误！未定义书签。

3.1.4 常用试剂及其配制....................... 错误！未定义书签。

3.1.5 常用生物信息学网站和分析软件........... 错误！未定义书签。

3.2 实验方法.................................... 错误！未定义书签。

3.2.1 猪基因组DNA的提取..................... 错误！未定义书签。

3.2.2 总RNA的提取及cDNA的制备.............. 错误！未定义书签。

3.2.3 EST拼接和引物设计..................... 错误！未定义书签。

3.2.4 PCR及PCR-RFLP分析.................... 错误！未定义书签。

3.2.5 PCR产物的纯化、克隆和测序............. 错误！未定义书签。

3.2.6 印记分析............................... 错误！未定义书签。

3.2.7 基因组织表达半定量分析................. 错误！未定义书签。

3.2.8 基因定位分析........................... 错误！未定义书签。第四章结果与分析................................... 错误！未定义书签。

4.1 基因组DNA的提取............................ 错误！未定义书签。

4.2 总RNA的提取与cDNA的制备................... 错误！未定义书签。

4.2.1 总RNA的提取........................... 错误！未定义书签。

4.2.2 cDNA的制备与检测...................... 错误！未定义书签。

4.3 四个候选基因的克隆、印记鉴定与基因定位...... 错误！未定义书签。

4............................................ 错误！未定义书签。

4.3.2 猪GTL2基因............................ 错误！未定义书签。

4.3.3 猪RTL1基因............................ 错误！未定义书签。

4.3.4 猪DIO3基因............................ 错误！未定义书签。第五章讨论......................................... 错误！未定义书签。

5.1 印记基因的分离.............................. 错误！未定义书签。

5.2 印记基因表达的研究方法...................... 错误！未定义书签。

5.2.1 基于“表达的SNP”的分析方法........... 错误！未定义书签。

5.2.2 应用品种间正反交模型分析印记基因的可行性错误！未定义书签。

5.3 四个候选印记基因的表达状况.................. 错误！未定义书签。

5.3.1 DLK1基因.............................. 错误！未定义书签。

5.3.2 GTL2基因.............................. 错误！未定义书签。

5.3.3 RTL1基因.............................. 错误！未定义书签。

5.3.4 DIO3基因.............................. 错误！未定义书签。

5.4 RTL1和DIO3基因的遗传定位................... 错误！未定义书签。

5.5 印记基因与动物遗传育种...................... 错误！未定义书签。参考文献............................................ 错误！未定义书签。致谢................................................ 错误！未定义书签。发表论文及参加课题一览表............................ 错误！未定义书签。

摘要：【目的】构建携带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP)质粒载体，通过将启动子置换成端粒酶（HTERT）启动子，使其能在肿瘤细胞中特异性的表达，观察EGFP的表达情况以及对靶细胞生物活性的特异性的影响。【方法】以质粒pEGFP-N3为模板进行PCR反应获得完整保留pEGFP-N3的多克隆酶切位点的EGFP基因片段，定向插入更换启动子的pLenti6V5DTop质粒中，其启动子由原来的PCMV置换为HTERT启动子，筛选出正确的重组绿色荧光蛋白基因的重组载体pLenti6V5DTop-EGFP，在阳离子脂质体的作用下导入肿瘤细胞后，获得具有绿色荧光蛋白颗粒的表达产物，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白作为目的基因在体外的表达情况，以及对肿瘤细胞生物活性的影响。【结果】成功克隆携带有EGFP基因的载体，该载体经导入人的肿瘤细胞后产生稳定的表达产物。