二轮复习选修一专题五蛋白质的提取与分离知识点梳理导学案填空

合集下载

高二生物选修一第六课时蛋白质的分离和纯化.导学案doc

第六课时蛋白质的分离和纯化【课标要求】：本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。

【学习目标】：知识：尝识从血液中提取和分离血红蛋白，了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理能力：体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤学习蛋白质提取和分离的一些基本技术情感：初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神【学习重点】：凝胶色谱法的原理和方法【学习难点】：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填【课前导学】一、制备蛋白质的粗制品组织破碎_______________细胞破碎_______________酸性蛋白质：_______________蛋白质抽提水溶性蛋白质：_______________脂溶性蛋白质：_______________去除固体杂质______________蛋白质粗制品:可能是多种蛋白质的混合物，其中还可能混有许多小分子化合物二、蛋白质的分离与纯化1、原理：根据不同的物质其分子的大小、溶解度的大小、所带电荷的多少，吸附性质等方面存在差异进行的。

2、方法：⑴透析法：其原理是___________不能透过半透膜，而其他小分子化合物可以透过_____________。

⑵离心沉降法：通过控制_________，使得___________________不同的蛋白质发生沉降分层，从而达到分离出不同种类蛋白质的目的。

⑶电泳法①概念：带电颗粒在电场作用下向着与其____________________的现象②影响泳动速度的因素：____________________，（一般来说，分子直径_________，越接近于____形，所带净电荷_______，泳动速度越快，反之，则越慢。

）③常用的方法：______________电泳。

(完整word版)2017人教版高中生物选修1专题5课题3《血红蛋白的提取和分离》word导学案

专题5课题3 血红蛋白的提取和分离一、基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。

2、凝胶实际上是一些微小的球体，这些小球体大多数是由构成的，如葡聚糖或琼脂糖。

3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。

相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。

（二）缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是。

2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。

3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了，必须保持体外的pH与体内的。

（三）电泳1、电泳是指。

2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。

在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。

电泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。

3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决于，因此，在测定蛋白质分子量时通常使用。

二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。

（一）样品处理1、红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用离心（500r/min），然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入（质量分数为），缓慢搅拌 min，离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。

2、血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心（2000r/min）后，试管中的溶液分为4层。

第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。

将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的。

人教版高中生物选修一专题五《DNA和蛋白质技术》知识点归纳

专题五ＤＮＡ和蛋白质技术课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定一、提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。

①DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。

②在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。

酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。

2.从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。

一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。

3.采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离。

4.提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。

利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。

温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。

补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95℃。

5.洗涤剂在提取DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。

6.当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。

原理总结：通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。

二、实验材料的选取不同生物的组织中DNA含量不同。

2020-2021学年生物选修一配套导学案：5.3血红蛋白的提取和分离

§5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案班级：高二（）班姓名：【学习目标】1.概述凝胶色谱法、电泳法分离大分子的基本原理。

2.知道缓冲溶液的作用。

3.尝试对血液中血红蛋白进行提取和分离,体验从复杂体系中提取生物大分子的基础过程和方法。

4.掌握对样品的预处理、色谱柱制作及装填等操作,进行样品的加入和洗脱并最终分离出血红蛋白。

【自主学习】一、基础知识1.蛋白质的分离依据:蛋白质特性的差异,如分子的形状和_____、所带_____的性质和多少、溶解度、_________和对其他分子的亲和力等。

2.凝胶色谱法:(1)概念:也称做___________,是根据____________________分离蛋白质的有效方法。

(2)凝胶的特点形态:微小的_________组成:大多数由_____________构成结构:内部有许多___________(3)常用凝胶:_______和琼脂糖。

(4)分离原理。

①相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程_____,移动速度_____,通过凝胶的时间_____。

②相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶_____移动,路程_____,移动速度_____,通过凝胶的时间_____。

3.缓冲溶液:(1)作用:在一定范围内,缓冲溶液能够抵制______________对溶液pH的影响,维持pH基本不变。

(2)配制:通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。

调节缓冲剂的_________就可以制得____________________的缓冲液。

(3)意义:为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程,保持_____________与体内环境中的pH基本一致。

4.电泳:(1)概念:带电粒子在_____的作用下发生_____的过程。

(2)原理。

①带电粒子:许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有_______的基团,在一定的pH下,这些基团会带上___________。

生物选修1 专题5 DNA和蛋白质技术导学案(高三复习)

1 课题：生物选修1 专题5 DNA 和蛋白质技术导学案编写人：审核组长：审核主任：温馨寄语：【学习目标】1. 初步掌握DNA 粗提取以及DNA 鉴定的原理2．理解PCR 的原理和PCR 的基本操作。

3．了解凝胶色谱法的原理和方法【知识梳理】（一）DNA 的粗提取与鉴定1. 实验原理提取生物大分子的基本思路是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

对于DNA 的粗提取而言，就是要利用＿＿＿＿与＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA ，去除其他成分。

（1）DNA 的溶解性①DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的＿＿＿＿＿溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使＿＿＿＿充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。

②DNA 不溶于＿＿＿＿＿＿溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。

利用这一原理，可以将DNA 与蛋白质进一步的分离。

（2）DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解＿＿＿＿＿，但是对＿＿＿＿＿没有影响。

大多数蛋白质不能忍受60—80o C的高温，而DNA 在＿＿＿＿＿＿才会变性。

洗涤剂能够瓦解＿＿＿＿，但对DNA 没有影响。

（3）DNA 的鉴定在＿＿＿＿条件下，DNA 遇＿＿＿会被染成＿＿色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。

2. 实验设计（1）实验材料的选取凡是含有＿＿＿＿＿＿的生物材料都可以考虑，但是使用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的生物组织，成功的可能性更大。

（2）破碎细胞，获取含DNA 的滤液破碎动物细胞：如在鸡血细胞液中加入一定量的＿＿＿＿，同时用＿＿＿＿＿搅拌，过滤后收集滤液即可。

破碎植物细胞（如洋葱），需在切碎的洋葱中加入一定的＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

①加入蒸馏水作用：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种＿＿＿＿液体，使血细胞＿＿＿＿＿，再加上搅拌的机械作用，加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA 。

(人教版)生物高二选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》学案(有答案)

课题3 血红蛋白的提取和分离蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。

一、凝胶色谱法1．概念：凝胶色谱法也称做__________，是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。

2．原理：大多数凝胶是由________化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程______，移动速度______。

相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

3．凝胶材料：______性，______类化合物，如葡聚糖或________。

4．具体过程：（1）________混合物上柱。

（2）洗脱开始，____________的蛋白质进入凝胶颗粒内；相对分子质量______的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。

（3）___________的蛋白质被滞留；_____________的蛋白质向下移动。

（4）相对分子质量不同的分子完全分开。

（5）___________的蛋白质行程较短，已从________中洗脱出来，________________的蛋白质还在行进中。

提示：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。

二、缓冲溶液1．作用：在________内，能够抵制外界的________对溶液____的影响，维持____基本不变。

2．配制：通常由________溶解于水中配制而成。

调节缓冲剂的______就可以制得在不同________使用的缓冲液。

三、电泳1．概念：带电粒子在______的作用下发生______的过程。

2．原理：许多重要的生物大分子，如______、______等都具有________的基团，在一定pH下，这些基团会带上______或______。

人教版高中生物选修1专题5dna和蛋白质技术复习教案

选修1专题5 DNA和蛋白质技术复习（教案）复习要点1.DNA的粗提取与鉴定2.PCR技术3. 血红蛋白的提取和分离复习过程一、DNA的粗提取与鉴定【知识点讲解】1.实验原理(1)DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同溶解规律 2 mol/L NaCl溶液0.14 mol/L NaCl溶液DNA 溶解析出蛋白质NaCl溶液物质的量浓度从2mol/L逐渐降低的过程中，溶解度逐渐增大部分发生盐析沉淀溶解(2)DNA离。

(3)DNA与二苯胺沸水浴加热，呈蓝色。

2.操作流程（1）材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织（2）破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞→加蒸馏水→用玻璃棒搅拌→用纱布过滤→收集滤液（3）去除杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质（4）DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液（5）DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5 min，溶液变成蓝色【例题讲解】如图为菜花DNA的粗提取与鉴定的实验流程图。

据图回答下列问题：（1）选择菜花作为提取DNA的实验材料的原因是______________。

（2）研磨前，向研钵中加入石英砂的目的是___，加入的物质a是_______。

（3）研磨液过滤后，应向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液，目的是______；也可以向滤液中加入嫩肉粉，目的是__________。

（4）鉴定DNA所用的化学试剂为________，鉴定实验中，A、B两支试管属于对照组的是____________________，对照组试管中加入的物质有______。

【答案】（1）菜花中的DNA含量相对较高（2）使研磨充分洗涤剂和食盐（3）溶解DNA，析出不溶的杂质分解蛋白质（4）二苯胺A NaCL溶液和二苯胺试剂【解析】（1）原则上含DNA的生物材料都可以作为提取DNA的实验材料，只是选用DNA含量相对较高的生物组织，实验成功的可能性更大。

中图版选修一蛋白质的提取和分离学案

第一节蛋白质的提取和分离翦因fl 自主学习•基础知识|接^息讣扣一、蛋白质分离提纯技术常用的蛋白质分离提纯技术包括离心技术、层析技术和电泳技术等。

其中电泳技术最为快捷灵敏、简便易行。

二、电泳技术分离蛋白质的原理1. 蛋白质中含有游离的氨基和羧基，是两性电解质，在一定 pH 条件下带有电荷。

2. 蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动。

3 •蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，分子量越小_ 移动越快。

三、结果分析不同蛋白质的混合溶液经过同一电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹，每种带纹可能就是一种蛋白质。

四、 “血清蛋白的提取和分离”活动程序1. 点样：取新制血清5微升、质量浓度为0.4克/毫升的蔗糖溶液和质量分数为0.1%的溴酚蓝指示剂等体积混匀后，用微量加样器吸取 5卩样品加到电泳样品槽的胶面上。

2. 电泳。

3. 染色：用质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R 250染色液对凝胶进行染色。

4•脱色：用体积分数为7%的醋酸溶液对凝胶板进行浸泡漂洗,至底色脱净。

5 .制干胶板：将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡 3 h 〜4 h 后，放在两层»第六章蛋白质和DNA 技术透气的玻璃纸中间自然干燥。

疑难问题卡片预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中刃合作探究•重难疑点问题1问题2问题3问题4ZHONGNANTUPO 突破^-----------一、蛋白质分离提纯的方法1.蛋白质分离的基本过程破碎细胞抽提(粗制品) 纯化蛋白质2.破碎细胞的方法在分离与纯化蛋白质之前，必须采用适当的方法使蛋白质呈溶解状态释放出来：通常先将生物组织进行机械破碎，再根据细胞的特点，选择不同的破碎细胞方法(常用的有研磨法、超声波法、酶解法)。

3.抽提细胞破碎后，各种蛋白质被释放出来，再根据蛋白质的不同性质，选择不同的溶剂进行抽提。

4.纯化(1)原理：纯化主要是指根据蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度大小、所带电荷的多少、吸附性质等方面存在的差异进行的。

高二生物人教版选修一教学案：专题5_课题3_血红蛋白的提取和分离_word版有答案

一、蛋白质提取、分离（阅读教材P64～66）1．蛋白质分离的理论依据2．凝胶色谱法(分配色谱法)(1)概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

(2)分离原理相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。

3．缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。

(2)配制：通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内的缓冲液。

4．电泳(1)概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

(2)原理①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。

②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。

③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。

二、血红蛋白的提取和分离（阅读教材P66～70）1．样品处理(1)红细胞的洗涤①目的：去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。

②过程：分离(低速短时间离心)→用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆→下层暗红色的红细胞用生理盐水洗涤(如此重复三次)。

(2)血红蛋白的释放①目的：使红细胞破裂释放血红蛋白。

②过程(3)分离血红蛋白溶液：离心(以2 000 r/min速度，离心10 min)→观察到离心管中的溶液分为4层，从上往下依次为：第1层：无色透明的甲苯层。

第2层：脂溶性物质的沉淀层——白色薄层固体。

第3层：血红蛋白的水溶液——红色透明液体。

第4层：其他杂质的暗红色沉淀物。

将液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。

2．透析——粗分离过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol·L －1的磷酸缓冲液中(pH＝7.0)，透析12 h。

【人教版】选修一生物：5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案

专题5课题3 血红蛋白的提取和分离一、基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。

2、凝胶实际上是一些微小的球体，这些小球体大多数是由构成的，如葡聚糖或琼脂糖。

相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。

（二）缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是。

2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。

3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了，必须保持体外的pH与体内的。

（三）电泳1、电泳是指。

2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。

在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。

电泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。

3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决于，因此，在测定蛋白质分子量时通常使用。

二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。

2、血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心（2000r/min）后，试管中的溶液分为4层。

第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。

将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的。

二轮复习选修一专题五蛋白质知识点梳理导学案填空 +答案

班级姓名血红蛋白的提取和分离导学案一、基础 1、蛋白质提取与分离的依据:1.分子的大小 2.电荷性质和多少 3.溶解度 4.吸附性质5.对其他分子亲和力 2、血红蛋白由条肽链组成，包括和；因含而成红色；作用： 2、凝胶色谱法：根据被分离物质的凝胶 ①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的；②化学本质：化合物，如、糖：原理：的蛋白质由于扩散作用不进入凝胶颗粒内部，路程，移动速度，先流出，的蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部，路程，移动速度，后流出，依此可对血红蛋白进行分离和纯化。

3、透析法：利用透析袋通过，留下。

透析袋一般用又称制成4、电泳法：利用分离样品中各种分子，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。

两种常用电泳法和；测定蛋白质分子量常用SDS 能消除的影响，原因：SDS 使蛋白质变成链，SDS 所带负电荷大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因此掩盖了不同种类蛋白质的，使电泳迁移速率完全取决于二、蛋白质提取与分离四步1、样品处理（1）红细胞的洗涤：目的：，洗涤次数过少，无法除去低速短时离心，防止白细胞和淋巴细胞沉淀加入，防止血液凝固缓慢搅拌的目的，防止（2）血红蛋白的释放：加和 40%体积蒸馏水的作用：甲苯的作用（3）分离血红蛋白第1层（最上层）：无色透明离心第2层色薄层固体，物质的层，第3层：色透明的层第4层：其它杂质的色层滤纸的作用： ___________________________分液漏斗的作用是：______________________2、粗分离（4）透析血红蛋白目的将透析袋放入中缓冲溶液的作用：模拟细胞内的pH 环境，保证血红蛋白的正常和。

3、纯化法 ①胶色谱柱的制作 ②凝胶色谱柱的 . ③.观察到红色区域移动，说明色谱柱制作成功注意：凝胶装填时尽量紧密，均匀，以低凝胶颗粒之间的空隙；装填凝胶柱时不能有气泡存在。

生物选修1之蛋白质的提取和分离

配制：作用：
在一定范围内，抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持 pH基本不变。
返回
调节缓冲剂的比例，可配制不同pH的缓冲液。
（三）电泳
(三)电泳
1.电泳的概念指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程. 2．凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
磁力搅拌器
返回
3.分离血红蛋白
分离过程
红细胞混合液
高速离心 10min
离心管
脂类物质
滤纸
过滤
烧杯
(3)分离血红蛋白溶液：
①过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min。
②试管中溶液层次：
第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。 ③分离：将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。返回
红细胞与血红蛋白
血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。返回
1.洗涤红细胞阅读思考：洗涤的目的是什么？洗涤过程： 3g柠檬酸钠
吸出血浆 5倍体积生理盐水
血液 100mL
低速离心 2 min
血
浆红细胞
4.透析血红蛋白
1mL
1mL
20mmol/L磷酸缓冲液
利用透析袋透析
透析过程

[精品]新人教版选修1高中生物5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案

血红蛋白的提取和分离思考1：分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。

思考2：蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。

思考3：高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构思考4：人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白一、基础知识：㈠凝胶色谱法（分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质的（），利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。

2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

3、具体过程：A. 的蛋白质由于作用进入凝胶颗颗粒（1）（2）（3）（4）（5） A粒内部而被滞留；的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。

B.（1）混合物上柱；（2）洗脱开始，的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；（3）的蛋白质被滞留；的蛋白质被向下移动。

（4）不同的蛋白质分子完全分开；（5）的蛋白质行程较短，已从中洗脱出来，的蛋白质还在行进中。

㈡缓冲溶液：1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。

2、作用：能够抵制（）的对溶液的（）的影响，维持PH基本不变。

3、缓冲溶液的配制通常由（）种缓冲剂溶解于水中配制而成。

调节缓冲剂的（）就可以制得（）使用的缓冲液。

高二生物学案52蛋白质的提取与分离(I)人教版选修一

12．凝胶色谱法操作正确的是（）
A．将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B．将橡皮塞下部切出凹穴
C．插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D．将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片
13．样品的加入和洗脱的操作不正确的是（）
A．加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面
学习重点：凝胶色谱法的原理和方法。
学习难点：色谱柱制作、填料的处理、色谱柱的装填和样品的加入与处理。
预习内容
凝胶色谱操作
(1)凝胶色谱柱的制作
①柱底部的制作
a．选择合适的橡皮塞，中间打孔。
b．在橡皮塞顶部切出锅底状_____________，在0.5 mL的___________头部切下___________长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。
11．在盛有红褐色的Fe(OH)3，胶体的U形管的两个管口，各插一个电极，通直流电后，发现
阴极附近的颜色逐渐加深，这说明()
A．Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阴极移动B．Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阳极移动
C．Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阳极移动D．Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阴极移动
c．剪尼龙网小圆片覆盖在___________。用___________的尼龙纱将橡皮塞___________包好，插到玻璃管一端。
d．色谱柱下端用移液管头部作___________，连接一细的___________，并用___________控制尼龙管的___________与___________，另一端放入收集___________的收集器内。
A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳
B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定

2019-2020最新高中生物专题5DNA和蛋白质技术5-1DNA的粗提取与鉴定导学案新人教版选修1

7．盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。
练习
1．在破碎血细胞时，要先加入20 mL的蒸馏水，其作用是
2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；
思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？
3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；
4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；
思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？
5．滤取含DNA的黏稠物：过滤；
B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精
C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精
D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精
4.DNA在下列浓度的NaCl溶液中，溶解度最低的是
A．2mol·LB．0.015mol·LC．0.14mol·LD．5mol·L
5.与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是
思考题10：这一步骤的目的是什么？
思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？
9．DNA的鉴定：取两支试管，各加入0．015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。
思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？
实验探究
1．实验原理
思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？
6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；

人教版高中生物选修一5.3《血红蛋白的提取和分离》word导学案

人教版选修一课题三 5.3 血红蛋白的提取和分离情境导入知识目标：尝试从血液中提取和分离血红蛋白了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理能力目标：体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤情感态度价值观：初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神教学重点：凝胶色谱法的原理和方法教学难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填★学情分析“初步获取血红蛋白的原理和方法”比较简单，又有必修的基础，因此学生容易理解；凝胶色谱法的原理容易理解，但操作复杂，难度较高，是学生学习的重点；电泳的原理和方法比较复杂，绝大多数学校目前缺乏相应的实验设备，而且是用于鉴定分离后蛋白质纯度的后续实验。

★教材分析：“血红蛋白的提取和分离”是人教版选修模块《生物技术实践》中的实验内容，其目的是使学生体验从复杂细胞混合物体系中提取生物大分子的基本原理、过程和方法，该实验虽然操作难度较大，但原理清晰，动手机会较多，因此，学生的学习兴趣很高。

下面结合人教版教材对该实验进行分析并提出相应的教学建议。

★教学建议：本课题的实验操作相对复杂，影响实验效果的关键环节之一是凝胶色谱柱的制作和装填，对实验者的操作有很高的要求，建议有条件的学校直接购买商品色谱柱。

由于甲苯是剧毒试剂,不太适合在中学实验中使用，因此，我们尝试在血红蛋白的释放时，只使用蒸馏水使细胞涨破,也获得了很好的实验效果。

电泳过程中制胶、染色和脱色耗时较多，建议由教师完成，其他环节由师生共同完成。

此外，本课题也可选用鸡血或猪血作为实验材料。

★导入设计导入一：情景导入引发共鸣蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。

对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。

所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。

怎样提取蛋白质呢？导入二：问题导入引发思考思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。

生物人教版高二选修1素材：教材梳理_专题5课题3血红蛋白的提取和分离

庖丁巧解牛知识•巧学一、凝胶色谱法凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

当一个含有各种分子的样品溶液缓慢通过凝胶时，相对分子质量大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，通过的路程短，移动速度快；相对分子质量小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程长，移动速度慢。

因此，样品中相对分子质量大的蛋白质先流出，相对分子质量小的分子后流出。

二、缓冲溶液缓冲溶液能够抵制外界加入少量酸和碱的影响，仍能维持溶液pH基本不变。

该溶液的这种抗pH变化的作用称为缓冲作用。

缓冲溶液通常是由一或两种化合物溶于溶剂（即纯水）所得的溶液，溶液内所溶解的溶质（化合物）称之为缓冲剂，调节缓冲剂的配比即可制得在不同pH范围内使用的缓冲液。

知识拓展缓冲溶液由足够浓度的酸碱对组成。

其中，能对抗外来强碱的称为共轭酸，能对抗外来强酸的称为共轭碱，这一对共轭酸碱通常称为缓冲对、缓冲剂或缓冲系，常见的缓冲对主要有三种类型：弱酸及其对应的盐；多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐；弱碱及其对应的盐。

三、电泳电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

许多重要的生物大分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH下会带上正电或负电；在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极方向移动。

电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的的。

要点提示电泳分离方法主要就是根据大分子的分子量及电性差异将大分子在电场中彼此分来的。

简单地说，这些带电粒子在电泳时的迁移率，与粒子所带的电荷量成正比，与分子量大小成反比。

四、实验操作：蛋白质的提取和分离1.样品处理（1）红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白。

采用低速短时间离心，吸出上层透明的黄色液体，再加入五倍体积的生理盐水，重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。

2019届二轮复习蛋白质的提取与分离学案(适用全国)

1．蛋白质提取与分离的依据分子的形状、大小；电荷性质和多少；溶解度；吸附性质；对其他分子亲和力。

2．凝胶色谱法（1）材料：凝胶多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。

（2）步骤：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子原理：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。

相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

3．缓冲溶液（1）概念：在一定范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化的溶液。

（2）作用：能够抵制外界的酸或碱的对溶液的pH的影响，维持pH基本不变。

（3）配制：通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。

调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH 范围内使用的缓冲液。

由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。

如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等。

（4）本实验使用的是磷酸缓冲液(NaH2PO4/Na2HPO4)，目的是利用缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和科学研究（活性）。

4．电泳法（1）概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。

（2）原理：分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。

（3）类型：琼脂糖凝胶电泳法：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子在电场中迁移速度决定于所带电荷性质的差异及分子的大小、形状的不同。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法：在凝胶中加入SDS，使蛋白质解聚成单链，与各种蛋白质形成蛋白质－SDS复合物，使其迁移速度完全取决于分子的大小。

5．实验操作实验操作的基本步骤：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。

（一）样品处理（1）红细胞的洗涤：①目的：去除杂蛋白。