沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验之袁州冬雪创作

食品学院14食品质量与平安1班

刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君

201430520115 201430520116 201430520121 201430520122

摘要：本实验采取GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌.通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，懂得沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属.

关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定

前言

沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科.沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有慎密连络的细菌，包含引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌.虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数.因此，采取迷信、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1].国标法(GB4789.4-2010)是今朝中国规定的食品中沙门氏菌的尺度检测方法,也是基层实验室普遍采

取的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采纳前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步调停止[2].

1资料与方法

均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒

恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃

电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；

手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂

试剂药品

鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI生化鉴定卡

培养基

蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基

1.2 实验方法

培养基的制备

培养基的配制步调

蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混平均，静置约 10 min，煮沸溶解，调节

pH，高压灭菌 121 ℃，15 min. 分装10瓶，每瓶90ml

四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌 121 ℃，15 min灭菌

冷却后至30℃，每100ml基础培养液加碘液2ml，煌绿液

1ml

配制培养基的注意事项

（1)依照说明书上的用量停止换算，称取准确分量的合成

培养基粉末；

（2）加热煮沸溶解培养基时，寄望锅内水位的变更，水位下降可再添加适量的水，以免水分蒸发过多，导致后面分

装不敷量；

（3）往试管中放小导管时，注意处理气泡.

1.2.2沙门氏菌群检测

2沙门氏菌检测操纵步调

称取 10 g（mL）样品放入盛有 90 mL BPW的无菌均质杯中，以 8 000 r/min～10 000 r/min 均质 1 min～2 min，或置于盛有90 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min.使用均质袋，可直接停止培养，于 36 ℃±1 ℃培养8 h～18h.

轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于

10mL TTB 内，于42℃±1℃培养18h～24h.同时，另取

1mL，转种于10mL SC内，于36℃±1℃培养18 h～24h.

分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个HE琼脂平板 .于36℃±1℃分别培养 18 h～24 h（HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或 40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平

板上的菌落特征见表1

自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接

种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h～24h，需要时可延长至48h.在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属

的反应成果见表2.

在三糖铁琼脂内斜面产酸，底层产酸，同时赖氨酸脱

羧酶试验阴性的菌株可以解除.其他的反应成果均有沙门氏菌属的能够，同时也均有不是沙门氏菌属的能够.

接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步断定成果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种.于36℃±1℃培养18 h～24 h，需要时可延长至48h，按表3断定成果.将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保存24h，以备

需要时复查.

2.4.3 反应序号 A1：典型反应断定为沙门氏菌属.如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可断定为沙门氏菌，如有2项异常为非沙门氏菌.

反应序号 A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验成果均为阳性，但需要连络血清学鉴定成果停止断定.

2.4.5 反应序号 A3：补做 ONPG.ONPG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性.

2.4.6 需要时按表 5停止沙门氏菌生化群的鉴别.

滴一定生理盐水在载玻片接近磨砂的一边作对照，在别的一边滴一滴血清，用灭菌后的接种环从三糖铁琼脂培养基的斜面取一点菌种，放进血清中，然后用酒精灯将接种环灭菌冷却后，再取少量菌种放进生理盐水中.观察血清中的的菌落是否固结，与生理盐水中的菌落对比.

2.6成果与陈述

综合以上生化试验和血清学鉴定的成果，陈述25 g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌.

3 实验成果与分析

3.1.1 沙门氏菌检测现象和成果（见表7）

表7 沙门氏菌检测现象和成果