革兰染色
革兰染色
革兰染色革兰染色原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰染色步骤及结果1. 涂片：首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。
2.固定：将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次，以载玻片的加热面接触手背皮肤，不觉过烫为佳，待冷却后再在火焰上方来回通过一两次，再冷却，这样重复操作直到薄层干了为止。
3.染色：在制好的片上滴一滴草酸铵结晶紫，染色1 min后用水洗，注意水流不要直接对准薄层。
4.媒染：加碘液一滴，染1 min后用水冲洗，用过滤纸吸干。
5.脱色：用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。
这一步是革兰氏染色的关键，必须严格掌握好，如果脱色时间过长则会把阳性菌误认为阴性菌；如果脱色不够则容易被误认为是阳性菌。
水洗后用过滤纸吸干。
6.复染：滴加番红染色液一滴，染色10～30 s后，用自来水冲洗。
7.观察：干燥后，用油镜镜检观察，染成紫色的是革兰阳性菌，染成红色的是革兰阴性菌。
革兰染色的意义1.鉴别细菌:用此染色法可将所有细菌分为两大类，便于初步识别细菌，缩小检查范围，并确定进一步的鉴定方法。
2.选择药物:革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌在细胞壁等结构上有很大差别,因而对抗菌素等药物的敏感性不同，如大多数革兰阳性菌对青霉素、红霉素、头孢菌素等敏感；而大多数革兰阴性菌对链霉素、氯霉素、庆大霉素等敏感。
《革兰氏染色》课件
该方法基于细菌细胞壁的构造和成分 差异，通过染色剂对细菌细胞壁的吸 附和渗透作用，显示出不同的颜色， 从而进行鉴别。
革兰氏染色中使用的试剂及其作用
结晶紫
用于初步染色，能与细 胞壁结合，形成不溶性
复合物。
碘液
用于加强结晶紫与细胞 壁的结合，使染色更明
显。
酒精
脱色剂，去除染料与细 胞壁结合的复合物，使
染色
结晶紫染色
将结晶紫染液滴加在载玻片上，覆盖 菌体，染色1-2分钟。
冲洗
用吸水纸吸去多余染液，用清水轻轻 冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
水洗和脱色
水洗
用流水冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
脱色
将载玻片放入脱色液中染液滴加在载玻片上，覆盖菌体，复染1-2分钟。
色或粉红色。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片
将待染色的菌体轻轻涂布在载玻 片上，确保菌体均匀分布。
干燥
将涂有菌体的载玻片放在室温下 自然干燥，避免强烈气流或直接 阳光照射。
固定
火焰固定
通过短时间轻触载玻片边缘，用火焰迅速固定菌体，使其与载玻片粘附。
冷却
将固定后的载玻片放在干净的桌面上自然冷却。
染色时间
染色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
脱色时间
脱色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
染色方法
不同的染色方法可能会影响染 色效果和观察结果。
05
革兰氏染色的应用和意 义
在医学诊断中的应用
01
鉴别细菌种类
革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法之一，通过染色结果的不同可以
将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，有助于医生对感染进
革兰染色的原理及意义
革兰染色的原理及意义
革兰染色是一种常用的细菌染色方法，原理是利用革兰氏染色剂对细菌细胞壁的结构差异进行染色。
革兰氏阳性菌染色后呈紫色或蓝色，革兰氏阴性菌染色后呈红色或粉红色。
革兰染色的原理是基于细菌细胞壁的不同构成。
革兰氏阳性菌的细胞壁主要由厚壁的胞外多聚糖和胞内的肽聚糖组成，其内部由大量的穿孔蛋白质穿过；而革兰氏阴性菌的细胞壁则相对薄且由较少的胞外多聚糖构成，胞内也缺乏穿孔蛋白质。
在革兰染色过程中，首先用碘溶液将革兰氏阳性菌的紫色染料紧密地固定在细菌细胞壁上，然后用酒精洗去多余的染料，再用蓝色染料对革兰氏阴性菌进行染色。
最终，经过适当的处理和洗涤后，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝色，革兰氏阴性菌呈红色或粉红色。
革兰染色的意义在于对细菌进行初步分类和鉴定。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在形态、结构和代谢特性上存在差异，例如革兰氏阳性菌通常较大、形状多样，而革兰氏阴性菌多为小杆菌状。
通过革兰染色可以快速地初步识别细菌的类别，并为进一步的鉴定提供重要的信息。
此外，革兰染色也对指导药物敏感性试验有一定的参考价值，因为革兰氏阳性菌对抗生素的敏感性通常较差，而革兰氏阴性菌相对较容易受到抗生素的影响。
总之，革兰染色是一种简单而有效的细菌染色方法，能够提供有关细菌类型和某些生理特性的初步信息，对微生物学和临床医学起着重要的作用。
革兰染色的原理
革兰染色的原理革兰染色是一种常用的细菌分类染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
革兰染色的原理是利用细菌细胞壁的结构特点，通过特定的染色步骤将细菌染色成紫色或粉红色，从而实现对细菌的分类和鉴定。
首先，革兰染色需要使用革兰染色液，它由紫晶紫和碘酒组成。
在染色过程中，细菌的细胞壁对染色液的渗透性起着至关重要的作用。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的穿透性蛋白质，可以较容易地将染色液渗透到细胞内部，使细菌呈紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁则含有较多的脂质，对染色液的渗透性较差，因此在后续的脱色步骤中可以被碘酒去除紫色染料，再用粉红色染料染色。
其次，革兰染色的步骤包括涂片、烘烤、革兰染色、脱色和复染。
在涂片步骤中，将待检细菌悬液滴在载玻片上，用火焰烘烤使细菌固定在载玻片上。
然后将载玻片浸入革兰染色液中，使细菌染色。
接着用碘酒脱色，最后再用粉红色染料复染。
通过这些步骤，可以将细菌染色成紫色或粉红色，从而实现对细菌的分类和鉴定。
革兰染色的原理简单易懂，但在实际操作中需要注意一些细节。
比如，在涂片步骤中，要注意细菌悬液的浓度和均匀涂布在载玻片上，以保证染色的准确性。
在烘烤步骤中，要控制好火焰的温度和时间，避免烤焦细菌。
在染色、脱色和复染步骤中，要控制好每一步的时间，以保证染色效果的准确性。
总之，革兰染色是一种简单而有效的细菌分类染色方法，它通过染色液对细菌细胞壁的特异性作用，将细菌染色成紫色或粉红色，从而实现对细菌的分类和鉴定。
在实际操作中，需要注意细节，以保证染色效果的准确性。
希望本文能够帮助大家更好地理解革兰染色的原理和操作方法。
革兰氏染色
革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家Christain Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。
阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。
有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
革兰氏阳性菌对青霉素敏感，革兰氏阴性菌对链霉素敏感。
可根据革兰氏染色法鉴别不同菌种并对症下药。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。
现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。
另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。
所以染色时的条件要严格控制。
例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。
此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。
所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。
革兰氏染色原理：G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。
呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：１）涂片固定。
革兰氏染色
革兰氏染色求助编辑革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram 创立。
未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。
染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
革兰氏染色属复染法。
目录编辑本段解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所应起的。
①革兰氏阳性细菌的细胞壁G＋细菌细胞壁具有较厚（20-80nm）而致密的肽聚糖层，多达20层，占细胞壁成分的60%～90%，它同细胞膜的外层紧密相连（图2-9）。
有的G ＋细菌细胞壁中含有磷壁酸（teichoic-acid），也称胞壁质（murein），它是甘油和核糖醇的聚合物，磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在。
由于磷壁酸带负电荷，它在细胞表面能调节阳离子浓度。
磷壁酸与细胞生长有关，细胞生长中有自溶素（autolysins）酶类起作用，磷壁酸对自溶素有调节功能，阻止胞壁过度降解和壁溶。
如果细胞壁的肽聚糖层被消溶，G＋细胞成为原生质体（protoplasts），细胞壁不复存在，而只存留细胞膜。
除链球菌外，大多数G＋细菌细胞壁中含极少蛋白质。
②革兰氏阴性细菌的细胞壁 G—细菌细胞壁比G＋细菌细胞壁薄（15～20nm）而结构较复杂，分外膜（outer membrane）和肽聚糖层（2～3nm）（图2-10）。
在细胞壁和细胞质膜之间有一个明显的空间，称为壁膜间隙（periplasmic space）。
外膜 G—细菌细胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同细胞质膜相同之处也是双层类脂，但除磷脂外还含有多糖和蛋白质。
LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特异多糖。
O-特异多糖由重复分支的碳水化合物分子组成，含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脱氧已糖。
革兰染色的原理
革兰染色的原理革兰染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，它是以丹尼尔·埃德温·革兰（1881-1938）的名字命名的。
革兰染色的原理是利用革兰氏染色法对细菌进行染色，根据细菌细胞壁的结构特点来区分细菌的分类。
首先，我们来了解一下革兰氏染色法的步骤。
革兰氏染色法是一种区分细菌的染色方法，它包括了紫晶染色、碘液固定、酒精脱色和蓝色染色四个步骤。
在进行革兰氏染色时，首先将细菌涂片加上紫晶液，使细菌涂片呈紫色；然后加入碘液固定，使细菌涂片呈蓝黑色；接着用酒精脱色，将细菌涂片中的染色物质去除；最后再加上蓝色染色，使革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈粉红色。
革兰染色的原理主要是利用了细菌细胞壁的特点来进行区分。
革兰阳性菌的细胞壁较厚，含有大量的穿过细胞壁的多糖和多肽，这些物质能够与紫晶染料结合，使细菌呈紫色。
而革兰阴性菌的细胞壁较薄，含有脂多糖，这些物质不能与紫晶染料结合，因此在酒精脱色后，革兰阴性菌会呈粉红色。
革兰染色的原理还可以通过细菌的形态特征来进行区分。
革兰阳性菌在显微镜下呈现为紫色或蓝黑色的颗粒状或条状结构，而革兰阴性菌则呈现为粉红色的圆形或椭圆形结构。
革兰染色的原理在临床诊断和实验室研究中有着重要的应用价值。
通过革兰染色，可以快速、简便地区分细菌的分类，为临床诊断提供重要参考依据。
同时，革兰染色还可以帮助科研人员对细菌进行初步鉴定，为后续的实验研究提供便利。
总的来说，革兰染色的原理是通过染色方法和细菌细胞壁的特点来进行细菌的分类和鉴定。
革兰染色不仅在临床诊断中有着重要的应用，也在科研领域发挥着重要作用。
通过了解革兰染色的原理，我们可以更好地理解这一方法的应用和意义。
革兰氏染色名词解释
革兰氏染色名词解释革兰氏染色（Gram staining）是一种常用的细菌鉴定和分类方法，由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉默（Christian Gram）于1884年首次提出，并被广泛应用于临床微生物学和实验室研究中。
革兰氏染色的原理是通过对细菌细胞壁的染色特性进行区分。
细菌的细胞壁在结构上分为两种类型：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌具有厚实的胞壁，其细胞壁主要由多聚肽和多糖组成，对革兰氏染色染料结构相对稳定。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，含有一个内膜和一个较薄的胞壁，对革兰氏染色染料结构不稳定，容易被清洗脱色。
革兰氏染色方法通常由紫晶染液（crystal violet)、碘液（iodine）、酒精脱色液（ethyl alcohol）和洗净液（wash buffer）组成。
以下是革兰氏染色的步骤：1. 取一块无菌玻璃片，用手套或钳子夹住，然后在玻璃片上滴加一滴样本（可以是细菌培养物或分离纯培养的菌液），将细菌均匀涂抹于玻璃片上形成细菌涂片。
2. 将预先烘干的细菌涂片放置在静止的温和热环境中，使菌液完全固定在玻璃片上。
3. 将预热的紫晶染液倒在细菌涂片上，让染液覆盖整个细菌涂片，静置片上1分钟。
4. 倒掉多余的紫晶染液，用洗净液将染液冲干净。
5. 加一倍稀释的碘液在细菌涂片上，静置片上1分钟。
6. 倒掉多余的碘液，用洗净液将碘液冲洗干净。
7. 用酒精脱色液滴在细菌涂片上，进行制片人定时（通常为15-30秒），直到底色变得非常浅。
8. 倒掉酒精脱色液，用洗净液将细菌涂片冲干净。
9. 加入红粉溶液，让染料覆盖细菌涂片，静置片上1分钟。
10. 倒掉多余的红粉溶液，用洗净液将细菌涂片洗净，待片子晾干。
观察结果时，革兰氏阳性菌会呈现出紫色或蓝色，因为其细胞壁能够保留紫晶染料和碘复合物的结晶。
而革兰氏阴性菌则会呈现出红色或粉红色，因为其细胞壁无法保留紫晶染料和碘复合物的结晶，在酒精脱色过程中已经被去除。
细菌的革兰染色法
80%
环境科学的应用
革兰染色法也可用于环境科学中 ，对水样、土壤等环境样品中的 细菌进行分类和鉴定。
05
革兰染色法在医学领域的应用
临床标本中细菌的分离与鉴定
细菌种类的鉴别
革兰染色法可用于区分革兰阳 性菌和革兰阴性菌，帮助医生 快速确定感染病原体的种类。
细菌数量的评估
通过观察革兰染色后细菌的形 态和数量，医生可以评估感染 的程度和病情的严重程度。
观察
将染色后的涂片放在显微镜下进 行观察。革兰氏阳性菌呈现紫色 ，而革兰氏阴性菌呈现红色。
记录
记录观察到的细菌形态、颜色以 及分布情况等信息，以便后续分 析和研究。
03
革兰染色法实验材料与方法
实验材料准备
01
02
细菌样品
待检测的细菌样品，可以是纯 培养物或混合培养物。
革兰染色液
包括结晶紫染液、碘液、 95%乙醇和番红染液。
耐药性的监测
革兰染色法可用于监测细菌耐药性 的变化，及时发现并控制耐药菌株 的传播。
医学研究中革兰染色法的意义
细菌分类学的研究
新药研发中的应用
革兰染色法是细菌分类学的基础之一， 通过对细菌进行革兰染色和形态观察， 可以对细菌进行分类和鉴定。
革兰染色法可用于新药研发过程中的 药物筛选和药效评价，为新药的开发 提供实验依据。
革兰染色法发展历程
革兰染色法最初由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于 1884年发明，当时他使用了一种简单的染色方法将 细菌分为紫色和红色两大类。
后来经过不断改进和完善，革兰染色法逐渐成为一 种常用的细菌分类和鉴别方法，并在医学、生物学 等领域得到广泛应用。
随着科学技术的不断发展，革兰染色法也在不断改 进和完善。例如，近年来出现了一些自动化革兰染 色仪器和数字化图像处理技术，使得革兰染色法更 加准确、快速和便捷。
革兰染色名词解释
革兰染色名词解释革兰染色是一种细菌分类和鉴定方法，在细菌学和临床医学中得到广泛的应用。
它是以细胞壁组成和结构差异为基础，将细菌分为两大类：革兰氏正染菌和革兰氏阴染菌。
革兰染色不仅可以用于快速鉴别细菌种类，而且还能推断细菌的结构和生长特性，为细菌分类提供了理论和实践基础。
第一、革兰染色的原理革兰染色的依据是细胞壁在外观和组成上的差异，通过不同的染色方式，使细胞壁的不同特性显现出来。
革兰染色主要使用了两种基本染料，即染成紫色的靛紫和染成红色的碘高锰酸钾。
细菌在染色时，先被染成紫色，然后被浸泡在碘高锰酸钾溶液中，去除多余的染料，最后再进行脱色和染色，阴性菌会被染成粉红色，而阳性菌保持为紫色。
第二、革兰染色结果的解释细菌革兰染色的结果分为两大类：革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。
革兰氏阴性菌因为细胞壁薄且不含多量壁多糖，无法抵御碘高锰酸钾的脱色作用，因此会被染成红色或粉红色。
革兰氏阳性菌由于细胞壁厚且含有多量的壁多糖和多肽，更加耐脱色，因此仍然保持染色紫色。
除了这两种基本结果，还有一些细菌表现出革兰染色不典型，如革兰氏变染菌和革兰氏不定菌，这些菌对染色的解释需要更多的实验和观察数据。
第三、革兰染色的应用革兰染色是细菌鉴定和分类常用的方法。
通过革兰染色的结果，可以初步判断细菌属于哪一类，从而推断它的感染特性、药敏性和生长特点。
革兰氏阴性菌常常与医院感染和疾病有强相关性，例如大肠杆菌、克雷伯杆菌和拟杆菌等；革兰氏阳性菌则更多表现出各种产生毒素和分泌酶的能力，例如链球菌、葡萄球菌和炭疽菌等。
此外，由于革兰染色相对简单易行，可以直接观察到细胞形态和细胞壁特征，因此被广泛应用于临床检测、食品卫生和环境卫生等领域。
第四、革兰染色的局限性革兰染色虽然具有很高的可靠性和快速性，但它并不是百分百准确可靠的。
有些细菌由于结构或者环境等原因，可能表现出革兰染色不典型的特点，使得它们和其他细菌的区分变得复杂和模糊。
例如，钩端螺旋体即不属于革兰氏正染菌也不属于阴染菌，而是一种具有特殊性质的菌类。
革兰染色名词解释
革兰染色名词解释革兰染色是一种常用的细菌分类方法，它是通过染色反应来区分细菌的一种方法。
革兰染色的原理是利用细菌细胞壁的化学性质，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
本文将从革兰染色的历史、原理、操作步骤、意义和应用等方面进行解释。
一、革兰染色的历史革兰染色是由丹麦微生物学家克里斯汀·格拉姆（Christian Gram）于1884年发明的。
当时，格拉姆正在研究肺炎球菌和链球菌，他发现这两种菌在显微镜下形态相似，但在染色反应上却有很大的不同。
于是，他想到了一种新的染色方法，即革兰染色，用来区分这两种菌。
二、革兰染色的原理革兰染色的原理是利用细菌细胞壁的化学性质来区分细菌。
细菌细胞壁的主要成分是多糖和蛋白质，革兰氏阳性菌的细胞壁主要由多糖构成，而革兰氏阴性菌的细胞壁则由磷脂和蛋白质构成。
在染色过程中，革兰氏阳性菌的细胞壁可以被靛紫染色剂染色，而革兰氏阴性菌的细胞壁则不能被染色。
三、革兰染色的操作步骤革兰染色的操作步骤主要包括以下几个步骤：1. 取一支细菌液，涂在玻片上晾干。
2. 用火焰消毒的铁钩将玻片在火焰中烧热，使其杀死细菌并固定在玻片上。
3. 用靛紫染色液滴在玻片上覆盖细菌，静置1分钟。
4. 用水冲洗玻片，使多余的染色液流掉。
5. 滴上碘液，静置1分钟。
6. 用酒精洗涤，使细菌脱色。
7. 用碱性红染色液滴在玻片上覆盖细菌，静置1分钟。
8. 用水冲洗玻片，使多余的染色液流掉。
9. 用纸巾吸干水分，然后用显微镜观察细菌形态。
四、革兰染色的意义革兰染色的意义在于区分不同类型的细菌，因为不同类型的细菌对人体的影响不同。
革兰氏阳性菌常常引起严重的感染，如葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌等，而革兰氏阴性菌则常常引起肠道感染和泌尿道感染，如大肠杆菌、沙门菌等。
通过革兰染色可以迅速的进行初步鉴定，为后续的治疗提供有力的依据。
五、革兰染色的应用革兰染色在临床上有广泛的应用，可以用于快速鉴定细菌的类型。
简述革兰氏染色法
简述革兰氏染色法革兰氏染色法是由19世纪德国医学家威廉革兰发展的一种医学染色方法，是一种利用化学特性显示细胞中各种结构的常用技术。
1882年，威廉革兰开创了这种技术，被公认为医学染色的先驱。
革兰氏染色法也称革兰染色法，简称革兰氏染色。
革兰氏染色是一种化学反应技术，通过配制特定的染料与植物、细菌细胞或血液中的其他活体物质发生反应，其反应结果是使得特定的染料在物体表面形成明亮的染色，从而可以简单准确地观察、分类和研究植物、细菌、血液、病毒等活体结构的特性。
革兰氏染色的原理是，活体的细胞结构具有固有的电荷，当染料与活体细胞发生反应时，染料就会因为电荷的作用而在活体细胞表面结合，产生染色。
根据染料结合细胞表面的类型和强度，可以得出不同的深浅程度和颜色。
革兰氏染色法的应用非常广泛，它不仅可以用来研究细胞的结构，而且还可以用于检测血液中的疾病，如感染性疾病、肿瘤等，还可以检测细菌的抗药性，以及病毒、血液中抗原和抗体的存在。
此外，由于革兰氏染色法反应和结果都很明显，也常常用于活体组织学研究，如病理检查、局部病原学研究和病理病理学研究。
在革兰氏染色法中，染料是细胞杂质检测的关键因素，它们必须是安全、可以长期存储，具有良好的抗氧化性和可溶性，能够在活体组织中稳定存在，同时能够与活体细胞中的其他物质发生反应，以达到染色的效果。
常用的染料包括绿唑酮（Gram）、南方染料（Safranin）、血蛋白（Haematoxylin）和紫色素（Purple）等。
革兰氏染色法在19世纪被发明出来，是一种广泛应用于医学检测、医学研究和病理学研究的重要技术。
它有助于研究细胞结构特性，进一步提高活性物质的筛选，提高疾病的检测效率，也有助于解决很多医疗难题，为现代医学技术提供了重要的帮助。
革兰染色的原理和方法
革兰染色的原理和方法革兰染色是一种常用的细菌染色方法，广泛应用于微生物学领域。
它通过染色剂的作用，使细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类。
本文将介绍革兰染色的原理和方法，并详细说明其步骤和注意事项。
一、原理革兰染色的原理基于细菌细胞壁的特征，细菌的细胞壁分为两大类：革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性菌细胞壁较厚，主要由多聚肽和穿孔肽组成，能够紧密结合染色剂，如靛胺紫。
而革兰阴性菌细胞壁较薄，含有较多的脂多糖，无法紧密结合染色剂，在染色过程中容易被洗去。
革兰染色方法利用这一原理，通过一系列的步骤将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。
染色后的细菌在显微镜下观察，革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌则为红色。
二、方法革兰染色的方法主要包括以下几个步骤：1. 培养细菌：选择要研究的细菌，并在无菌培养基上进行培养。
确保培养物为单一菌株，以避免结果的干扰。
2. 固定细菌：将培养好的细菌涂抹在玻片上，并使用火焰进行固定。
固定后的细菌样本可以更好地吸附染色剂。
3. 革兰染色试剂准备：准备靛胺紫染色溶液、碘溶液和乙醇。
靛胺紫染色溶液主要用于染色，碘溶液用于增强染色效果，乙醇用于洗去多余的染色剂。
4. 染色：将固定的细菌涂片放入靛胺紫染色溶液中，浸泡数分钟，使细菌充分接触染色剂。
5. 冲洗：将染色的细菌涂片用纯净水轻轻冲洗，去掉多余的染色剂。
6. 碘处理：将碘溶液滴在细菌涂片上，使其与靛胺紫形成复合物，增强染色效果。
保持片上有足够的碘液润湿约一分钟。
7. 除色：用乙醇轻轻洗去多余的染色剂。
洗至片上的洗涤液变得透明。
8. 湿润：将涂片用水轻轻冲洗，以去除乙醇的残留物。
9. 甲醇处理：将涂片浸入甲醇中，固定染色。
10. 干燥：将涂片自然晾干或用柔软无纤维纸轻轻吸干。
11. 观察：将干燥的涂片放在显微镜下观察。
革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈红色。
三、注意事项在进行革兰染色之前，需要注意以下几点：1. 使用无菌操作环境，以避免外部细菌的污染。
革兰染色原理步骤和结果意义
革兰染色原理步骤和结果意义
革兰染色是一种常用的细菌鉴别方法，通过对其染色特性的观察，可以对细菌进行分类。
革兰染色主要基于细菌壁的成分对染料的亲和性不同，导致其染色反应不同。
革兰阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖构成，而革兰阴性菌的细胞壁则由脂多糖和蛋白质组成。
这种结构差异导致两种类型的细菌对结晶紫和碘的染色反应不同。
一、染色原理
革兰染色主要包括初染、媒染、脱色和复染四个步骤。
初染使用结晶紫将细菌染成紫色。
媒染则是利用碘溶液处理已着色的细菌，使其着色更为鲜明。
接下来是脱色，这一步骤需要使用乙醇或其他醇类物质脱去部分色素，使结果更为清晰。
最后是复染，通过番红或沙黄等染料对细菌进行复染，使其呈现不同的颜色以便观察。
二、染色步骤
1. 涂片：将待检测的细菌均匀涂布在载玻片上。
2. 干燥：轻轻晾干涂片，以便后续操作。
3. 结晶紫染色：用结晶紫溶液对涂片进行染色，约1-2分钟。
4. 媒染：用碘溶液处理涂片，增强染色效果。
5. 脱色：用乙醇或其他醇类物质脱去部分色素。
6. 复染：用番红或沙黄等染料进行复染。
7. 干燥：轻轻晾干涂片，以便观察。
三、结果意义
革兰染色的结果主要用于鉴别细菌的类型，例如革兰阳性菌和革兰阴性菌。
这一鉴别具有重要实践意义，因为革兰阳性菌和革兰阴性菌在抗生素敏感性、致病性等方面存在显著差异。
例如，大多数化脓性球菌属于革兰阳性菌，而肠道杆菌则多为革兰阴性菌。
因此，革兰染色结果对于临床诊断和治疗具有指导意义。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。
该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。
本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。
一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。
1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。
待菌落完全干燥后，即可开始染色。
二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。
将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。
此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。
2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。
革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。
2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的碘液。
2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。
乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。
2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的乙醇。
2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。
碱性紫的作用是染色细菌细胞。
2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。
确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。
三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。
革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。
通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。
需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。
革兰氏染色法原理
革兰氏染色法原理革兰氏染色法是一种常用的细菌染色法，是由德国医学家威廉·革兰发明的，它的原理是根据细菌的结构和生理特性，利用特定的染料把细菌分类鉴定出来。
这种染色法在细菌学领域中应用广泛，可以用来辨认出不同细菌的种类和性质。
一、革兰氏染色法的原理革兰氏染色法的原理是根据细菌的结构和生理特性，利用特定的染料把细菌分类鉴定出来。
染色法的基本步骤是将细菌用特定的染料染色，染色过程中，染料会与细菌的结构和生理特性相互作用，染料的固定程度及细菌的色泽、大小、形状、染色效果等，可以用来鉴别出不同种类的细菌。
二、革兰氏染色法的特点1、廉价易得。
革兰氏染色法使用的染料廉价易得，染色法只需要简单的实验设备，而且染色过程简单，易于操作，安全可靠。
2、染色效果好。
革兰氏染色法使用的染料染色效果好，染色后的细菌可以清晰地观察出来，便于进行鉴定和研究。
3、灵敏度高。
革兰氏染色法的灵敏度高，可以检测出微量的细菌，而且它可以检测出更小的细菌，比其他染色方法敏感很多。
三、革兰氏染色法的应用1、医学检验。
革兰氏染色法可以用来检测体液中的病原体，检测它们的种类和数量，可以用来诊断疾病和确定病原体的种类，进一步确定治疗方案。
2、制药工业。
革兰氏染色法可以用来检测药物中污染物的存在，以及药物成分的含量，确保药物的质量和安全性。
3、食品卫生。
革兰氏染色法可以用来检测食品中的细菌，以确保食品的卫生安全性。
4、环境监测。
革兰氏染色法可以用来检测环境中的细菌，以监测环境质量，检测水质和土壤质量。
综上所述，革兰氏染色法是一种简单、安全、有效的细菌染色方法，具有廉价易得、染色效果好、灵敏度高的特点，在细菌学领域应用广泛，可以用来检测和鉴定不同种类的细菌，在医学检验、制药工业、食品卫生和环境监测等领域有着重要的应用价值。
革兰氏染色法
细菌学中鉴别染色法
01 染色原理
03 常见种类
目录
02 操作流程 04 主要作用
革兰氏染色法，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，属于复染法。这种染色法是由丹麦医生革 兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等 四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。经染色后，阳性菌呈 紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。染色原理：通 过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。Fra bibliotek常见种类
常见的革兰氏阳性菌有葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌（Streptococcus）、肺炎双球菌、炭疽杆菌、 白喉杆菌、破伤风杆菌等。
常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等及 脑膜炎双球菌等。
主要作用
革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）：大多数化脓性球菌都属于革 兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，可以选择青霉素族，头孢曲松钠等。
革兰氏阴性菌，大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。而革兰氏阴性菌 则对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），可以选择氟喹诺酮类药 物如诺氟沙星，左氧氟沙星等，也可以选择大环内酯类比如克拉霉素、罗红霉素等。所以首先区分病原菌是革兰 氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。
革兰染色原理及意义
革兰染色原理及意义革兰染色法是一种细菌分类方法，是由丹麦微生物学家克里斯汀·格兰（Christian Gram）于1884年发明的。
革兰染色法通过染色后，可将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类，这两类菌在药物选择和医疗用药中有不同的适应症。
革兰染色法是临床微生物学的一项必要检验方法，广泛应用于医疗、环境监测、食品卫生等领域。
下面我们具体来讲解革兰染色原理及意义：一、革兰染色实验步骤1、涂片制备：将草细菌用营养琼脂培养基在37°C培养24h，取少量菌剪切拉长于玻璃片上用火烧灼固定。
2、染色：上述制备的玻璃片放置于草紫和碘水中。
然后用酒精洗涤，洗净玻璃片，然后将其放置于蓝紫色乙酸中染色。
3、观察：将玻璃片在显微镜下观察。
二、革兰染色原理革兰染色法是利用革兰阳性菌和革兰阴性菌细菌细胞在染色后在显微镜下的颜色来进行区分的。
革兰阳性菌：其细胞壁脂多糖含量较高，革兰染色后呈现紫色，即细菌紫染色。
革兰阴性菌：其细胞壁相对脆弱，革兰染色后呈现红色或粉色，即细菌未染色。
三、革兰染色意义革兰染色的意义在于对于革兰阳性和革兰阴性细菌的分类及鉴定。
革兰阳性菌通常具有更完整、坚固的细胞壁，革兰染色的结果为紫色，且具有较高的药物敏感性。
革兰阴性菌细胞壁相对较薄，具有脆弱性，革兰染色结果为红色或粉色。
革兰阴性菌常常具有更强的抗药性。
临床上，对于革兰阳性菌和革兰阴性菌的鉴定对于选择合适的药物有重要意义。
使用正确的药物，可以更好地控制和治疗感染和病情。
同时，革兰染色法可以帮助对细菌的生长和形态进行评估和追踪，对于制定有效的治疗方案也很有帮助。
因此，革兰染色法在临床微生物学的检测中有着极为重要的作用。
总之，革兰染色法是一项重要的微生物学检测方法，在医疗、环境科学、生物学等领域有着广泛的应用。
通过革兰染色法的实验操作，有助于更好地掌握革兰染色原理及其应用，提高临床诊断和检测的准确度，也有助于科学家更好地探索微生物的研究。
革兰染色法实验原理
革兰染色法实验原理
革兰染色法是一种用于细菌分类的基本实验方法，它是由丹麦细菌学家克里斯汀·格拉姆于1884年发明的。
这种染色方法可以将细菌分为两大类，革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰染色法的原理是利用细菌细胞壁的化学成分差异，通过染色后的显微镜观察，可以区分出这两类细菌。
首先，革兰染色法的实验原理是基于细菌细胞壁的差异。
细菌细胞壁是由多糖和多肽组成的，而革兰阳性菌的细胞壁含有较多的肽聚糖复合物，而革兰阴性菌的细胞壁则含有较多的脂多糖。
这种差异导致了在染色过程中，革兰阳性菌能够保留染色剂的紫色染色，而革兰阴性菌则无法保留紫色染色，需要用洗涤剂进行去染。
其次，革兰染色法的实验步骤包括，先将细菌样本涂抹在玻片上，然后用火焰烘烤杀死细菌并固定在玻片上。
接着，将碘液滴在细菌上，使得革兰阳性菌和革兰阴性菌都变成蓝紫色。
然后用酒精洗去细菌上的颜色，革兰阳性菌不褪色，而革兰阴性菌褪色。
最后，用碱性溶液（如碱性甲苯溶液）染色，革兰阳性菌呈紫色，而革兰阴性菌呈红色。
革兰染色法的实验原理简单易懂，但在实际操作中需要严格控制实验条件，以确保染色结果的准确性。
此外，革兰染色法在临床诊断、食品卫生和环境监测等领域有着广泛的应用，可以帮助人们快速准确地识别细菌的类型，从而采取相应的防治措施。
总之，革兰染色法作为一种简单而有效的细菌分类方法，其实验原理基于细菌细胞壁的化学成分差异，通过染色后的显微镜观察，可以区分出革兰阳性菌和革兰阴性菌。
这种方法在医学、食品卫生和环境监测等领域有着重要的应用意义，对于细菌分类和研究具有重要的意义。
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• 3 固定方法 固定不仅能杀死细菌，改 变细菌对染料的通透性，还能使细菌吸 附在玻片上，保持原有的形态结构。固 定方法是将干燥后的细菌涂片以快速通 过火焰三次，以玻片触及手背皮肤热而 不烫为宜，自然冷却。但在实际操作中 如果将玻片在火焰上烤的太久，改变了 细菌原有的通透性，会使细菌的染色性 发生变化，影响染色结果。
革兰染色步骤
染色标本制备
染色标本制备
1. 涂片 在载玻片上标记名称或者编
号，然后滴加1滴生理盐水，将接 种环在火焰上烧红，待冷却后挑取 少量菌种与玻片上的水滴混匀后， 在载玻片上涂布成一均匀的薄层， 菌膜直径在0.5~1cm。
2. 干燥
涂好的菌膜在室温下自然干 燥，或将标本面向上，置于离酒精 灯火焰约16cm高处缓慢烘干，切 不可放在火焰上烧干。
• 2脱色时间 阳性菌透性小，不易被脱 色，阴性菌透性大，易脱色；但这是在 固定的时间条件下的结果，如果延长脱 色时间，也会使脱色剂渗透进阳性菌的 细胞壁中，使染上的结晶紫脱去颜色， 最后染上复红的颜色，变成革兰阴性菌 。而脱色时间太短的话又会使阴性菌染 上的结晶紫不能完全脱色，出现紫色， 误认为革兰阳性菌。
乙醇脱色 水洗 30s
水洗 复红30s
紫碘酒红
碘液 （1min）
水洗
水洗 干燥 镜 检
分分半半
结果
• 细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； • 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
革兰染色的影响因素
• 1操作因素 • 2细菌因素 • 3染液因素
操作因素
• 1. 涂片太厚 在涂片时细菌挑的 太多，没法分开，在脱色时就不能 将第一步染上的结晶紫的颜色脱去 ，可能会使革兰阴性菌也出现紫色 ，误认为革兰阳性菌。
• 革兰染色在临床上有助于细菌 致病性分析及抗菌药物选择。
革兰染色
革兰染色法是微生物 学中常用的一种染色 方法，该染色法由丹 麦医生Gram于1884年 首创，故名。
Hans Christian Gram
细菌染色方法中最经典应用最广泛的
染色方法革 兰 染 色
革兰阳性细菌 革兰阳性细菌
2、在微生物检验中的地位
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95% 乙醇 30” 复红 30’’
冲洗
滤纸干燥 油镜观察
革兰染色
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
菌Байду номын сангаас
革兰染色步骤示意图
革兰染色步骤小结
滴水 取菌 涂片 固定 结晶紫（1min）
G+菌等电点（pI2~3） G-菌等电点（pI4~5）
在相同pH条件下G+菌所带负电荷 比G-菌多，所以与带正电荷的结 晶紫染料结合较牢固，不易脱色 。
化学学说
G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可
与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着 色的细菌不易被乙醇脱色
G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易 被脱色
细菌革兰染色 及形态鉴定
细菌标本染色检查法
细菌染色
活 菌染色
死菌染色
正染色
负染色
普通染色
特殊染色
简单染色法
复杂染色法
芽孢染色法
荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
• 细菌微小、半透明，在普通光 学显微镜下不易识别。
• 将细菌染色，增加反差，便于 观察。
• 革兰氏染色法是细菌学中广泛 使用的一种鉴别染色法。
• 是贯穿于微生物检验始终的一项
• 是保证细菌鉴定结果的 首项工作
• 故是检验工作者
基本技能
必备技能
原理
1、细胞壁通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说
通透性学说
G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚 ，脂质含量少，乙醇不易进入。
G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄 ，含大量脂质，乙醇易渗入。
等电点学说
• 1 碘液 碘液作为媒染剂能增加 染料与被染物的亲和力。如果碘液 放置时间太长，或经日光照射失效 ，失去媒染剂的作用，就可能使结 晶紫与细菌结合的不牢固，容易被 脱色，使革兰阳性菌染成革兰阴性 菌。
• 2结晶紫 结晶紫的浓度太高，就 会使染上的颜色不容易被酒精脱色 ，可能会使革兰阴性菌染成革兰阳 性菌。
3. 固定 手持载玻片的一端，菌膜
面向上，在火焰最热部分快速通 过3次，待玻片冷却后方可染色。
固定的目的：
• 使细菌的细胞凝固，固定其细胞 结构；
• 使菌体与玻片粘得更牢固，以免 水洗时被冲掉；
• 可改变菌体对染料的通透性，一 般死细胞原生质容易着色；
• 加热固定可杀死细菌，比较安全 。
革兰染色
细菌形态鉴定
细菌的三种基本形态
• 球菌：葡萄球菌。 • 杆菌：大肠杆菌。 • 螺形菌：霍乱弧菌。
细菌的三种基本形态示意图
⊕
葡萄球菌：
Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.
杆菌(bacillus)
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
显微镜下的杆菌
弧菌
细菌荚膜示意图
荚膜的观 察：
负染色
谢 谢！
• 3 酒精 酒精作为脱色剂，革兰染色的 脱色酒精浓度为95% ，在此浓度下革 兰阳性菌染上的结晶紫不易被脱去，保 留紫色，革兰阴性菌染上的结晶紫容易 被脱去，最后呈红色。但当酒精的浓度 为70% 时，它的脱色能力最强，可能 使革兰阳性菌染上的结晶紫也被脱去， 使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。
• 除外所述影响染色的其他因素，还有菌 体细胞的构造和其外膜的通透性，如细 胞膜的通透性、膜孔的大小和细胞结构 完整与否，在染色上都起一定作用。此 外，染色液中的电介质含量和pH、温 度、药物的作用等，也都能影响细菌的 染色，所以我们在染色时要注意当染色 结果与预想的结果出现不一致时，要考 虑到这些因素的影响 .（阴阳性对照）
• 4 水洗时， 不要直接冲洗涂面，而应 使水从载玻片的一端流下，水流不宜过 急，以免涂片薄膜脱落。
二、细菌因素
• 1 细菌培养时间 细菌的典型形态、染色 性是在对数生长期，取这时的细菌做革兰染色 可以反应细菌的真实的染色性。一般选用培养 18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌培养时间 太长，细菌太老，由于菌体死亡或自溶，染色 性就会发生变化，可能会使革兰阳性菌染成革 兰阴性菌。
• 2 培养基的成分 一般认为革兰阳性菌 体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的 复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合 很牢，不易脱色。但是如果培养基中缺 乏核蛋白质镁盐就不能合成菌体成分的 核蛋白质镁盐，细菌与碘和结晶紫的复 合物结合就不牢固，容易脱色，可能会 使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。
三、染液因素