胶回收常见问题
胶回收DNA注意事项
胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
切胶回收注意事项
切胶回收注意事项
以下是 6 条关于切胶回收注意事项：
1. 千万要选对工具啊！就像你去砍柴不能拿个小勺子一样，切胶得用合适的刀片啊。
比如你要是用个钝的不行的刀片去切，那能切得动吗？肯定不行呀！所以选择锋利的工具很重要，可别小瞧这个哦。
2. 切胶的时候可得细心点哟！这可不是开玩笑的，你想想，要是马马虎虎的，把需要的部分没切好或者切坏了，那不就白忙活啦！就好比搭积木，小心翼翼才能搭得稳当，对吧。
3. 做好防护措施呀！难道你不怕胶沾到手上或者其他地方吗？戴手套、穿实验服，这些都要准备好呀！不然万一沾到皮肤上，那多麻烦呀！
4. 操作环境要注意呀！你总不能在乱糟糟的地方切胶回收吧，就像你吃饭也不会在垃圾堆旁边吃呀。
找个干净整洁的地方，才能保证操作顺利呀。
5. 控制好力度啊！别太使劲了把胶都压坏了，也别太轻了切不下来。
就像骑自行车，太用力踩会累，太轻了又不走，得掌握好那个度。
6. 切完之后要妥善处理呀！别随手一扔就不管了。
就像你玩完玩具要收好一样，把切胶后的东西整理好，该放哪里放哪里，这样下次用起来也方便呀！
我觉得切胶回收一定要谨慎仔细，每个步骤都不能马虎，不然很可能前功尽弃呀！。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
生物学实验之凝胶回收基础及操作
1. 分类
2. 应用
试剂耗材与设备
四 五
6
操作流程
常见问题解答
理论学习 课堂演示 一对一带教 个人实操 爱苏生物
生物实验培训
2.1 分类
1
• 硅胶柱法
2
• 玻璃奶/纯化填料法
• 低熔点琼脂糖法 • 透析带电洗脱法 • DEAE纤维素膜纸片法
特别是大片断的回收。
9
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2.1.3 低熔点琼脂糖法
传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，
电泳后切割目的条带，在 TE 溶液中 65 ℃保温融化，
用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇
由于绑透析带很难操作，只有在回收非常大的片断时 才会考虑的。
丙烯酰胺电泳凝胶产物回收的方法之一。
11
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2.1.5 DEAE 纤维素膜纸片法
将 DEAE 纤维素膜裁成小条活化处理 。 电泳后 在目的条带前切一刀 ，将比条带略宽 的 DEAE 纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳，条 带上的 DNA 被膜片截留，取出膜片冲洗后转移 到离心管中加缓冲液 65 ℃保温洗脱，直到膜上 DNA 被完全洗脱，将溶液用酚氯仿抽提沉淀。
33
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4.2 注意事项
６ . 切胶是，紫外照射时间应尽量短，以免对
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
DNA凝胶回收.
2.加入3个凝胶体积的Buffer DE-A,混合均匀后于75°C加热(低熔点琼脂糖凝胶于40°C加热,间
断混合(每2-3 min,直至凝胶块完全熔化(约6-8 min。
* Buffer DE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中,可以帮助观察凝胶是否完全熔化。
下易于水解,从而提高回收率。勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下,减少紫外线对DNA
造成的损伤。
3.在步骤2中凝胶必须完全熔化,否则将严重影响DNA回收率。
4.将Eluent或去离子水加热至65°C,有利于提高洗脱效率。
5. DNA分子呈酸性,建议在2.5 mM Tris-HCl,pH 7.0-8.5洗脱液中保存。
Eluent:洗脱液,室温密闭贮存。
二、注意事项
1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇、Buffer DE-B和Buffer W1含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套
和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水
或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
2.在步骤1中,将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间(线型DNA长时间暴露在高温条件
连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
Cat. No. AP-GX-4 AP-GX-50 AP-GX-250
制备次数4 preps 50 preps 250 preps
制备管4 50 250
2 ml离心管4 50 250
1.5 ml离心管4 50 250
三、实验准备
1.第一次使用前,Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
塑料回收行业行业痛点与解决措施ppt
xx年xx月xx日
目录
• 引言 • 行业痛点 • 解决措施 • 其他建议 • 加强科技创新引领 • 结论
01
引言
行业背景及现状
全球塑料生产和消费持续增长，废弃塑料数量不断增加，对 环境和人类健康造成严重影响。
塑料回收行业作为资源循环利用的重要组成部分，已成为全 球关注的焦点。
率。
降低成本
通过优化回收体系、提高回收 效率和降低运输成本等措施， 降低整个回收过程的成本。
加强监管
政府应加强对塑料回收行业的 监管力度，打击非法倾倒和处 置塑料废弃物的行为，促进正
规回收。
塑料污染得到有效控制
减少使用
推广可重复使用和生物降解的 替代品，减少一次性塑料制品 的使用，从根本上减少塑料污
加强市场监管
建立健全监管机制，打击不正当竞争和违法行 为。
培育良性竞争
3
鼓励企业之间开展良性竞争，提高服务质量。
加强行业自律
建立行业协会
成立相关行业协会，促进行业 内部的交流和自律。
加强自我约束
企业应自我约束和管理，遵守行 业规定和道德准则。
信息公开透明
及时公开相关信息，接ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ社会监督 ，树立行业良好形象。
报告目的和结构
报告旨在分析当前塑料回收行业所面临的痛 点，并提出相应的解决措施。
报告将分为以下几个部分：行业概述、痛点 分析、解决措施和建议。
02
行业痛点
回收率低下
原因
公众对塑料回收价值认识不足，回收设施不足，政策引导不 够
影响
大量塑料垃圾进入填埋场或焚烧处理，导致资源浪费和环境 污染
回收成本高昂
政府补贴支持
切胶回收注意事项
胶回收DNA注意事项胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA 污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
胶回收的原理
胶回收的原理
胶是一种常见的塑料制品，由于其在生产和使用过程中会产生
大量的废弃物，对环境造成了严重的污染。
因此，胶的回收和再利
用成为了当前环保领域的热点问题。
那么，胶回收的原理是什么呢？
首先，胶的回收可以通过物理方法进行。
物理方法主要包括破碎、洗涤、干燥等步骤。
首先，将废弃的胶制品进行破碎，将其打
成小颗粒状，以便后续的处理。
然后，通过洗涤的方式去除胶表面
的污物和杂质，使胶颗粒变得干净。
最后，将洗净的胶颗粒进行干燥，去除其中的水分，以便后续的加工和再利用。
其次，胶的回收也可以通过化学方法进行。
化学方法主要包括
溶解、聚合等步骤。
首先，将废弃的胶制品投入相应的溶剂中，使
其溶解。
然后，通过控制溶解液的温度和压力，将溶解的胶分离出来。
最后，将分离出来的胶进行聚合反应，使其重新形成新的胶制品。
另外，胶的回收还可以通过生物方法进行。
生物方法主要包括
微生物降解、生物质转化等步骤。
首先，利用特定的微生物对废弃
的胶制品进行降解，将其分解成简单的有机物。
然后，利用生物质
转化的方式，将分解后的有机物转化为生物质能源或者其他有用的化合物。
总的来说，胶的回收原理主要包括物理方法、化学方法和生物方法。
通过这些方法，可以将废弃的胶制品进行有效的回收和再利用，减少对环境的污染，实现资源的循环利用。
同时，这也需要社会各界的共同努力，包括政府、企业和个人，共同推动胶回收工作的开展，为建设美丽的地球作出贡献。
一般正常胶回收dna浓度_概述及解释说明
一般正常胶回收dna浓度概述及解释说明1. 引言1.1 概述胶回收DNA浓度是分子生物学实验中一项重要的操作步骤，其涉及到从凝胶中提取DNA分子并测量其浓度。
胶回收DNA浓度的正确评估对于实验结果的准确性和后续数据分析的可靠性至关重要。
因此，深入了解胶回收DNA浓度的定义、意义以及相关方法和步骤是非常必要的。
1.2 文章结构本文将围绕着一般正常胶回收DNA浓度展开讨论。
首先，我们将介绍胶回收DNA浓度的定义和意义，以说明其在分子生物学实验中的重要性。
接下来，我们将详细探讨胶回收DNA的方法和步骤，包括凝胶切割、脱色、提取等关键操作。
然后，我们将列举并解释影响胶回收DNA浓度的因素，例如凝胶厚度、电泳时间等。
在第三部分中，我们将提供一些实验结果与数据分析，通过实验设计和样本处理来验证并证明一般正常胶回收DNA浓度所具备的特点。
同时，我们还会介绍用于检测和计量DNA的常用方法，以及技术统计和数据分析的过程。
在第四部分中，我们将对胶回收DNA浓度过高或过低的原因进行解释说明。
我们会详细分析可能导致DNA丢失的原因，在胶回收操作中可能存在的误差和影响因素上加以解释。
此外，我们还将讨论其他可能导致DNA浓度异常变化的因素，例如样本质量、实验环境等。
最后，在结论与展望部分，我们将总结一般正常胶回收DNA浓度概览并强调重要发现和推论点。
同时，我们将提出对未来研究方向和改进方法的展望和建议，以促进胶回收DNA浓度相关技术的发展和应用。
通过本文的阅读，读者将更全面地了解一般正常胶回收DNA浓度所涉及到的各个方面，并能够正确理解其定义、意义以及实验操作步骤。
同时，读者还可以通过文章中所提供的结果与数据分析来验证和参考其在实际应用中的可靠性和有效性。
最后，读者还可以从文章中获取到关于影响胶回收DNA浓度的因素、误差以及其他相关因素的知识，并为今后实验设计和数据处理提供重要参考依据。
这将有助于进一步推动胶回收DNA浓度领域的研究发展和技术改进。
胶回收的原理
胶回收的原理胶是一种常见的粘合材料，广泛应用于各个领域，如包装、建筑、家具等。
然而，随着胶制品的使用量不断增加，胶废弃物也在不断增加，给环境带来了很大的压力。
因此，胶的回收和再利用变得尤为重要。
那么，胶回收的原理是什么呢？首先，胶的回收可以通过物理方法进行。
比如，利用溶剂将废弃的胶制品溶解，然后通过蒸发或其他方法将溶剂分离出来，最终得到原料胶。
这种方法的优点是操作简单，但也存在着溶剂回收困难、成本高等缺点。
其次，胶的回收也可以通过化学方法进行。
例如，利用酸碱或其他化学试剂将废弃的胶制品进行降解，再经过一系列的处理步骤得到原料胶。
这种方法的优点是可以高效地将废弃的胶制品转化为原料胶，但也存在着化学试剂的回收和处理难题。
另外，生物方法也可以用于胶的回收。
通过利用微生物或酶类对废弃的胶制品进行降解，最终得到原料胶。
这种方法的优点是环保、能耗低，但也存在着降解速度慢、操作条件苛刻等问题。
除了以上几种方法，还有一些新型的胶回收技术不断涌现。
比如，利用超临界流体技术、离子液体技术等进行胶的回收，这些新技术在提高回收效率的同时也减少了对环境的影响。
总的来说，胶回收的原理是通过物理、化学或生物方法将废弃的胶制品转化为原料胶，以实现资源的再利用。
在实际操作中，可以根据胶制品的性质和回收条件选择合适的回收方法，以达到高效、环保的目的。
综上所述，胶回收的原理涉及到物理、化学、生物等多个方面，需要综合考虑各种因素，以实现胶的有效回收和再利用。
希望随着科技的不断进步，胶回收技术能够不断完善，为环境保护和资源节约做出更大的贡献。
胶回收原理及注意事项
DNA的凝胶回收一、琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法介绍：1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。
全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。
这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。
但是这个方法不适合用于大片段的回收。
2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。
前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，B uffer溶解，(区别在于这里)加入纯化填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片段释放出来，离心，取上清，就是回收的产物。
这个方法适合各种不同大小的片段，特别是大片段的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀;另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。
后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。
3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，而且低熔点琼脂糖价格较高现在用的人已经不多了，除非用于大片段的回收。
4.透析带电洗脱法。
切下的条带放在充满TAE的透析带中再电泳一段时间，让DNA走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析带上的DNA赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那块胶通常还要再染色看看残留。
胶回收的方法、注意事项以及实验步骤
胶回收的方法、注意事项以及实验步骤DNA片段的分离与回收是基因工程操作中一项重要的技术,如可收集特定酶切片段用于基因克隆或是制备探针,回收PCR产物用于再次鉴定等。
1 各类常用回收方法由于分离方法众多,且各种不同的方法可能同时依据多项原理,所以只能粗略地将各种方法分成五大类:电泳法,收集孔法,机械破碎法,溶(熔)胶法与酶处理法:一,电泳法根据凝胶割否分透析袋法与流动电洗脱法(割胶),滤纸-透析膜法与DEAE膜法(不割胶).(1)透析袋法该方法可回收大于5kb的片段,缺点是操作麻烦并易造成DNA酶的污染.(2)流动电洗脱法该方法回收片段大小为4～50kb,且回收效率高达94～100%,极端条件下可回收大至550kb的片段.缺点是操作繁琐,而且为了取得较高的回收率,需特定的流动电洗脱槽.(3)滤纸-透析膜法回收率平均达70%左右,不需割胶,操作相对简单,但实验中需将滤纸上的DNA洗脱,也较繁琐,也不易控制.(4)滤纸-透析膜法此方法用于回收小片段,一般小于5kb的片段回收效率较高,可达70%以上;对于大片段(>15kb)则难以从DEAE膜上洗脱下.二,收集孔法(1)蔗糖法回收小片段效率较高,564bp的PCR产物带回收效率高达97.6%,并且回收中能将较宽的条带浓缩于收集孔中,但回收中制作收集孔较麻烦,并且收集孔中要加入蔗糖,故获得的DNA样品不能直接用于后续实验.(2)羟基磷灰石法该方法回收效率也较高,不利之处与上述方法相同,获得的DNA需再纯化,操作也较繁琐.三,机械破碎法指用机械力将凝胶压碎后再行回收DNA片段,有冻挤法,冻融法,压碎浸泡法,(单层)滤膜过滤法及双层(亲和)膜过滤法.(1)冻挤法将胶条割下置于塞有玻璃棉的吸嘴或是管底刺有小孔的eppendorf管中,冰冻30min后全速离心5min,收集清液,再经酚抽提,乙醇沉淀等纯化浓缩处理(也可直接沉淀).其基本原理理是利用离心力将凝胶中原有的液体挤出,同时也带出胶中的DNA.从胶浓度为1%琼脂糖中回收650bp,1.1kb,2.0kb,4.5kb的片段时,回收率分别为90%,74%,56%,30%.这是因为大分子DNA更难于被胶中的缓冲液带出,所以此法只适用于回收较小的DNA片段.(2)冻融法割下的胶条放在eppendorf管中,将之捣碎并放于-80℃冰冻5min,取出后迅速放置于37℃保温10min,如此反复3次能使DNA从胶中游离出来,离心获得上清中即含有目的DNA,可通过沉淀浓缩获得高浓度.对一般的DNA片段回收效率在60～80%.操作简单,并不需特殊设备.(3)压碎浸泡法又称醋酸铵法,操作较费时,回收效率较低,一般改良的方法是在冻挤法操作中,加入一定的水并浸泡10min,增加DNA的回收率.四,溶胶法根据物理或化学溶胶可分为低融点法(物理熔胶)与NaI,KI,NaClO4溶胶法(化学溶胶).(1)低融点胶法采用特殊的低融点凝胶,该胶在65℃即溶化,实验中是先灌制正常的凝胶,然后用低融点胶取代其中的部分(即可节约低融点凝胶用量,也能保证电泳中整块凝胶的完整性.)电泳完成后割下的凝胶可于65℃下保温溶解,后直接用于酶切,连接,DNA标记的实验.操作方便简单,但需特殊的低融点凝胶,成本较高,且回收得到的样品浓度较低.(2)化学融胶法琼脂糖能溶解于一些盐溶液中(NaI,KI,NaClO4),然后可用特殊的纯化柱将DNA样品溶液纯化,现在广泛使用的凝胶电泳中DNA片段回收试剂盒基本采用了此中回收原理,能在短时间内获得目的DNA片段,成本也较低.五,酶处理法对于大片段DNA的回收,象酵母人工染色体的克隆实验中,克隆片段可大到2 000kb,一般采用此方法.利用琼脂糖酶降解琼脂糖,能较温和的裂解琼脂糖,最终成功回收DNA片段.2 DNA回收中的注意事项除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点:(1)防止抽提过程中污染DNA酶与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末端时也会导致严重的连接困难.(2)紫外照射选择长波段回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射.(3)实验操作要轻柔特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离心管等操作均应缓慢,轻柔.综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础.3 实验步骤一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例)(1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率)(2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN)(3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀.(4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒.(5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟.(6)重复步骤5一次.(7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm离心2分钟.(8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放置2分钟.(9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA片段.二、冻融,挤压回收法(1)用手术刀在DNA紫外检测仪下切割下含有所要DNA片段的凝胶块置于Eppendorf管中,甩至管底,-20℃冻存30min,(2)取出后用牙签将凝胶块尽量捣碎,剪去管上部,用烧红的针头在管底扎几个微孔,孔径越细越好.(3)将管套入另一个Eppendorf管中,常温下,15 000rpm离心10分钟.(4)将上清液吸到收集管中,向沉淀中加入100μl重蒸水.(5)重复步骤(2),(3),(4)两遍(如图所示).(6)收集的上清于15 000rpm,4℃离心20分钟,吸取上清液,补足400μl.(7)收集的上清液加入0.1V 的KAc(pH=5.5,3M)和2.0～2.5V 的无水乙醇,充分混匀后-20℃放置30min,取出15 000rpm,4℃离心30min.(8)弃上清,加入400μl 70%的乙醇,15 000rpm,4℃离心5min.(9)弃上清并倒扣3~5min,然后37℃烘干(30min左右即可).(10)烘干沉淀可用30ml ddH2O溶解,待用.。
废胶处理方法
废胶处理方法引言废胶是指在生产、使用或处理过程中产生的废弃橡胶制品，如废旧轮胎、废橡胶管、废橡胶板等。
由于橡胶制品具有耐磨损、耐腐蚀、弹性好等特性，使得其处理成为一个全球性的环境问题。
本文将介绍一些常见的废胶处理方法，包括回收再利用、焚烧、填埋和物理化学方法。
1. 回收再利用1.1 橡胶粉碎与再加工将废旧橡胶制品进行机械粉碎，得到橡胶颗粒，然后通过加入适量的添加剂和再加工工艺，将其重新制成可用于生产新型橡胶制品的再生橡胶。
这种方法可以最大限度地利用废旧橡胶资源，并减少对原材料的需求。
1.2 橡胶回收利用技术通过高温和高压条件下的物理或化学反应，将废旧橡胶转化为可供再利用的产品。
例如，通过热解方法可以将废胶转化为燃料油、炭黑和钢丝等。
而通过溶解再生法可以将废胶溶解在溶剂中，然后再重新制备出橡胶制品。
1.3 废胶回收利用的优势•减少资源消耗：废胶回收再利用可以减少对新原材料的需求，降低资源消耗。
•减少环境污染：废胶处理过程中产生的废气、废水和固体废物可以得到有效处理，减少对环境的污染。
•节约能源：回收再利用橡胶制品所需的能量比生产新产品要低，可以节约能源。
2. 焚烧2.1 橡胶焚烧工艺将废旧橡胶制品进行高温焚烧，使其完全燃烧，并通过合理的控制工艺参数和排放治理设施，使排放物达到国家标准。
焚烧过程中产生的高温还可以用于发电或供暖，实现能量的综合利用。
2.2 焚烧处理的优势与不足优势：•高效处理：焚烧可以将废胶迅速处理，并将其转化为能量。
•减少体积：焚烧后的废渣体积大大减小，方便后续处理。
•能量综合利用：焚烧过程中产生的高温可以用于发电或供暖，提高能源利用效率。
不足：•燃烧排放物：焚烧过程中会产生一些有害气体和固体废物，需要通过排放治理设施进行处理，以保证排放符合环保要求。
•能耗较高：焚烧过程需要大量能源供应，对环境造成额外负担。
3. 填埋3.1 废胶填埋方法将废旧橡胶制品埋入地下填埋场，并采取覆盖措施，防止有害气体和液体渗漏。
生物学实验之凝胶回收基础及操作
4.2 注意事项
６.切胶是, 紫外照射时间应尽量短, 以免对DNA 造成损伤。 7.回收<100bp及>10kb的DNA片段时, 应加大 溶胶液的体积, 延长吸附和洗脱的时间。 8.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关, 初始量 越少、洗脱体积越少, 回收率越低。
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目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
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4.2 注意事项
3.电泳时最好使用新的电泳缓冲液, 以免影响电泳 和回收效果。 4.如下一步实验要求较高, 则应尽量使用TAE电泳 缓冲液。 ５.如果回收率较低, 可在胶充分溶解后检测pH值, 如pH值大于7.5, 可向含有DNA的胶溶液中加 10~30μL3M醋酸钠（pH5.2)将pH值调制5~7之 间。
切割 回收
Lane M:1kb DNA Marker Lane 1:胶回收前的2.7kb DNA段 Lane 2:胶回收后的2.7kb DNA段 切割Lane 1后, 经处理回收DNA, 经 电泳得到Lane 2。
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1.2 胶回收原理
利用核酸在裂解液 下与硅胶膜吸附柱 特异性结合, 在洗脱 液条件下被洗脱, 从 而达到核酸纯化回 收的目的。
TAE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致pH值升高，降低DNA和膜的吸 附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好
回收前的样品量太少，加大点样量
洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可 以有效提高回收率30%以上
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5 常见问题解答
问题
解决方法
胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并 加入溶胶液温浴后，液体仍很粘 增加上下颠倒次数帮助溶胶 稠或后续步骤有堵柱子现象？ 胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问题
1、未回收到DNA片段或回收效率很低A、原因：胶块未完全溶解建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。
每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。
B、原因：加入溶胶液过少建议：对于PCR产物，或者酶切产物，应加入2倍体积的溶胶液。
对于凝胶回收，每100 mg 凝胶应加入不少于100uL溶胶液。
对小于200bp的片段应加入5倍体积的溶胶液。
C、原因：DNA Wash Buffer 中未加入无水乙醇建议：第一次使用前，按照说明书要求加入要求的无水乙醇。
DNA Wash Buffer使用后，应旋紧瓶盖，以防乙醇挥发，漂洗时损失DNA，降低回收效率。
D、原因：洗脱缓冲液不合适建议：洗脱液的pH值在7.0~8.5时，洗脱效率最高，洗脱液pH超出此范围，将会显著影响收获率，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mM Tris-HCl），或者使用使用pH 值在此范围的ddH2O。
E、原因：洗脱缓冲液未加到离心柱中间建议：因为在洗脱时使用较少的洗脱缓冲液，洗脱缓冲液应加在中间位置，并室温放置1~2分钟，然后再离心洗脱。
另外，采用65度预热的洗脱Buffer将显著提高回收效率。
F、原因：起始回收量太少建议：如果起始回收量很好的样品，应富集，最好使用不少于1ug的样品。
对于PCR产物，应事先电泳检测产量，在进行回收操作。
2、电泳时，产物漂出点样孔原因：洗脱时，柱子中残留乙醇建议：在进行洗脱前，如果柱子上残留乙醇，将会影响洗脱效率，在洗脱前应再次离心，或者空气中放置几分钟，再进行洗脱。
3、后续无法进行连接等实验操作原因：洗脱液中含有乙醇建议：洗脱前，确保柱子中乙醇已无残留乙醇。
原文地址:/biotech/exp/molbio/DNA/2011/i814562160.html。
塑料制品回收利用的难点在哪里
塑料制品回收利用的难点在哪里在我们的日常生活中，塑料制品无处不在，从食品包装到家居用品，从医疗器械到工业零件，塑料制品的应用广泛而深入。
然而，随着塑料制品的大量使用，其回收利用却面临着诸多难题。
首先，塑料制品的种类繁多，成分复杂，这是回收利用的一大障碍。
塑料并非单一的物质，而是包含了聚乙烯（PE）、聚丙烯（PP）、聚苯乙烯（PS）、聚氯乙烯（PVC）等多种类型。
不同类型的塑料具有不同的性能和用途，其物理和化学性质也存在差异。
这就导致在回收过程中，需要对各种塑料进行准确的分类和鉴别。
但在实际操作中，由于塑料制品在使用过程中可能会被污染、混合，或者其标识不清晰，使得分类工作变得异常艰难。
而且，一些塑料制品是由多种塑料复合而成，进一步增加了分离和回收的难度。
其次，塑料制品的回收渠道不够完善。
在很多地区，尤其是一些中小城市和农村，缺乏有效的塑料回收体系。
居民对于塑料制品的回收意识相对薄弱，往往将塑料制品与其他垃圾一起丢弃，导致大量可回收的塑料被填埋或焚烧，造成资源浪费和环境污染。
即使在有回收设施的地区，回收站点的分布也可能不均匀，给居民的回收带来不便。
此外，一些非法的小作坊式回收企业，由于缺乏规范的处理技术和设备，不仅回收效率低下，还可能对环境造成二次污染。
再者，塑料制品的回收成本较高也是一个不容忽视的问题。
回收塑料制品需要经过收集、运输、分类、清洗、破碎、再造等多个环节，每个环节都需要投入人力、物力和财力。
特别是对于一些低值的塑料制品，如一次性塑料餐具、塑料袋等，其回收价值往往低于回收成本，这使得企业缺乏回收的动力。
同时，先进的塑料回收技术和设备价格昂贵，也增加了回收的成本压力。
另外，塑料制品在使用过程中的污染和老化也给回收带来了困难。
例如，食品包装上的残留食物、油脂等污染物，会影响塑料的回收质量。
长期暴露在环境中的塑料制品会发生老化、脆化，其性能下降，回收利用的价值降低。
而且，塑料制品中的添加剂，如增塑剂、阻燃剂等，在回收过程中可能会释放出来，对环境和人体健康造成潜在威胁。
胶回收浓度低的原因
胶回收浓度低的原因嘿，你问胶回收浓度低的原因啊？那咱就来唠唠。
这胶回收浓度低啊，原因可不少呢。
首先呢，可能是提取的过程有问题。
比如说在切胶的时候，没切好，切得太小了或者不整齐。
这样就会导致回收的量少，浓度自然就低啦。
就像你切蛋糕，如果切得太小块，那分到每个人手里的就少了。
然后呢，洗脱的条件不合适也会导致浓度低。
如果洗脱液用得不对，或者洗脱的时间不够长，那里面的东西就洗不出来多少。
就像洗衣服，要是水不够或者洗的时间短，衣服上的脏东西就洗不干净。
接着呢，可能是吸附的环节出了问题。
吸附柱要是不好使，或者吸附的时间不够，那也会让回收的浓度变低。
就像吸铁石，如果吸力不够强，就吸不住多少铁。
还有啊，样品本身的量就少也会造成浓度低。
如果一开始的胶里面含有的目标物质就不多，那怎么回收也高不到哪儿去。
就像你口袋里只有几块糖，怎么分也分不出一大把来。
另外呢，操作过程中如果不小心洒了或者丢了一些，那也会让浓度变低。
就像你端着一碗水，不小心洒了一点，那水就少了。
我给你讲个事儿吧。
我有个朋友在实验室做胶回收，有一次他做出来的浓度特别低。
他就很纳闷，不知道咋回事。
后来他仔细检查了每个步骤，发现是切胶的时候切得太小了，而且洗脱的时间也不够长。
他调整了方法之后，再做一次，浓度就高了很多。
他说这下可知道要注意这些问题了。
总之呢，胶回收浓度低的原因有切胶不好、洗脱条件不合适、吸附问题、样品量少和操作不当等。
我们在做胶回收的时候，要注意这些问题，认真操作，才能得到高浓度的回收产物。
让我们一起把胶回收做好吧。
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胶回收常见问题
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1、如何计算提取率？
1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率；
2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比；
3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。
2、如何简易测算提取率？
取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。
3、如何看待提取得率？
影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。
4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？
DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？
1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收；
3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；
4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率；
5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好；
6）回收前的样品量太少，加大点样量；
7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。
6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象？
1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶；
2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收；
3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。
7、琼脂糖凝胶块不溶？
1）琼脂糖质量不好；
2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃；
3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
8、点样时发现DNA样品有漂出点样孔外的现象？
柱子上的乙醇未完全挥发干净，延长室温下空柱静置时间以确保乙醇完全挥发干净。
9、能否使用去离子水洗脱回收？
可以，但是实验室所用去离子水一般PH值偏低，可用NaOH适当调高PH值＞7.0，以增加回收得率。
10、能否使用TE（PH8.0）洗脱？可以。
11、可否使用小于30μl的洗脱液进行洗脱？
不可以。
因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积。
12、关于DNA片段大小与回收率的问题？
100bp-500bp，30-60%；500bp-4kb，80-95%；4kb以上，30-50%。
13、OD值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符？
从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260的值。
14、吸光度纯度测定时应注意哪些问题？
吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。
15、为什么溶胶不彻底会影响回收结果的纯度？
在电泳过程中，DNA会与大分子的多糖紧密的结合在一起，凝胶的种类和质量不同，DNA与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放，否则，凝胶将与DNA一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。