细胞活力测定
细胞活力检测实验报告
一、实验目的细胞活力是细胞生物学研究中非常重要的指标，能够反映细胞在特定条件下的生长、代谢和功能状态。
本实验旨在通过多种方法检测细胞活力，了解细胞在不同条件下的生长情况，为后续实验研究提供依据。
二、实验材料1. 细胞：人胚胎肾细胞（HEK293）2. 试剂：台盼蓝染色液、CCK-8试剂盒、Resazurin细胞活力检测试剂盒、ATP含量测定试剂盒、细胞培养液、培养基、PBS缓冲液等3. 仪器：显微镜、酶标仪、细胞计数板、细胞培养箱、超净工作台等三、实验方法1. 台盼蓝染色法（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）用PBS缓冲液洗涤细胞，加入适量的台盼蓝染色液，室温孵育5分钟。
（3）用PBS缓冲液洗涤细胞，观察细胞染色情况。
2. CCK-8试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。
（3）加入10μl CCK-8试剂，避光孵育2小时。
（4）用酶标仪检测450nm波长下的吸光度（OD值）。
3. Resazurin细胞活力检测试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。
（3）加入10μl Resazurin试剂，37℃孵育4小时。
（4）用酶标仪检测570nm和600nm波长下的吸光度（OD值）。
4. ATP含量测定法检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl ATP含量测定试剂盒，室温孵育10分钟。
（3）用酶标仪检测560nm波长下的吸光度（OD值）。
四、实验结果与分析1. 台盼蓝染色法通过显微镜观察，活细胞不着色，死细胞被染成蓝色。
细胞活力检测方法
细胞活力检测方法
1. 代谢活性检测法：测定细胞内代谢产物的含量或分泌物的释放量，如MTT法、SRB法、LDH脱氢酶活性测定法等。
2. 流式细胞术：利用染色或荧光标记的抗体与特定的细胞表面分子结合，通过流式细胞术检测细胞状态。
3. 荧光显微镜：利用荧光探针或染色剂染色，通过显微镜观察细胞内部结构、代谢活性等。
4. 内源性酶活性测定法：测定细胞内特定酶的活性，如蛋白酶、酸性磷酸酶等。
5. 表型分析：通过观察细胞外形、大小、颜色等特征，评估细胞的生长状态。
6. 细胞周期分析：通过检测细胞的DNA含量，确定细胞的周期阶段。
7. 活细胞成像技术：如实时荧光成像技术，能够非侵入性地记录细胞活力变化的动态过程。
总之，细胞活力检测方法有多种，可以根据具体需要选择合适的方法。
细胞计数及活力测定
2．细胞活力 ①将细胞悬液以0.5ml加入试管中。 ②加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。 ③吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。 ④镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数， 计细胞活力。 死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞， 活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。另外，活力 测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液 对原细胞悬液的加倍稀释作用。
【作业与思考题】
1．根据实验结果，画出生长曲线。 2．试述用MTT法测定细胞生长曲线的过程及注意事项。 3．细胞接种的密度与细胞生长曲线的测量结果之间有 什么关系？ 4．为什么细胞计数时，细胞悬液逸出槽外时要重做？
Experiment 18
细胞计数及活力测定
【实验目的】
1．练习进行细胞计数，并用细胞计数法绘制生长 曲线，以了解培养细胞的生长发育特性 2．掌握测定细胞活力的方法
【实验目的】
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长 良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。 细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总 细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细 胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤 作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而 可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂 发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
【注意事项】
1．细胞计数时的注意事项 ①消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液。否则 会影响细胞计数结果。 ②取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时尤应注意 这一点。否则，前后计数结果会有很大误差。 ③镜下计数时，遇见2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计数。 如细胞团占10%以上，说明消化不充分。 ④细胞数少于200个/10mm2或多于500个/10mm2时，说明稀释不当， 需重新制备细胞悬液。 ⑤在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液时，加液量不要溢出盖 片，也不要过少或带气泡。 ⑥在计数过程中，对大方格的边缘压线细胞应按数上不数下，数左 不数右的原则进行计数。 2．MTT法的原理是测定细胞线粒体琥珀酸脱酶的活性，反映的是细 胞代谢和增殖活力，而非绝对的细胞数量。
细胞活力测试实验报告
通过本实验，了解细胞活力测试的基本原理和方法，掌握MTT法（MTT比色法）测定细胞活力的操作步骤，并分析细胞在不同条件下的活力变化。
实验时间：2023年4月10日实验地点：细胞生物学实验室实验材料：1. 细胞系：人肺上皮细胞（A549）2. MTT试剂：3-（4，5-二甲基噻唑-2-yl）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）3. DMSO（二甲基亚砜）4. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素5. 细胞培养瓶、细胞培养板、移液器、吸管、试管、离心机、酶标仪等实验方法：1. 细胞培养：将人肺上皮细胞（A549）接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 细胞传代：待细胞生长至约80%融合时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，传代至新的培养瓶中。
3. 实验分组：将传代后的细胞分为实验组和对照组，实验组细胞在特定条件下培养，对照组细胞在正常培养条件下培养。
4. 细胞接种：将实验组和对照组细胞分别接种于96孔细胞培养板中，每孔接种细胞数量为5×104个。
5. 细胞培养：将细胞培养板置于37℃、5%CO2的培养箱中培养24小时。
6. MTT实验：向每孔细胞中加入20μl MTT试剂，继续培养4小时。
7. 终止培养：弃去孔内液体，向每孔加入150μl DMSO，振荡混匀。
8. 比色：用酶标仪在490nm波长下测定各孔的吸光度（OD）值。
9. 数据分析：计算实验组和对照组的细胞活力，并比较两组间的差异。
1. 实验组细胞活力较对照组显著降低，说明特定条件下细胞活力受到抑制。
2. 不同浓度药物处理的实验组细胞活力呈剂量依赖性下降，说明药物浓度越高，细胞活力抑制越明显。
实验结论：通过MTT法测定细胞活力，可以有效地评估细胞在不同条件下的生长状态。
本实验结果表明，特定条件下细胞活力受到抑制，且药物浓度越高，细胞活力抑制越明显。
实验讨论：1. MTT法是一种简单、快速、灵敏的细胞活力测定方法，适用于多种细胞系和药物筛选实验。
MTT法检测细胞活力讲解
评估细胞因子对免疫细胞活性的影响
实验中遇到的问题与解决方案
问题一
细胞培养污染导致实验结果异常
解决方案
严格控制细胞培养环境，定期进 行细胞污染检测
问题二
不同批次细胞生长状态不一致
解决方案
加强实验操作培训，提高实验员 操作水平
问题三
MTT法操作过程中出现误差
解决方案
标准化细胞培养条件，确保细胞 生长状态一致
可见光下稳定
MTT结晶在可见光下稳定，不易分解，因此可以长 时间保存和测量。
细胞代谢与颜色变化
细胞代谢
活细胞通过代谢将MTT染料还原成蓝紫色结晶，结晶的数量与细 胞活性成正比。
颜色变化
随着结晶的形成，培养液的颜色逐渐由黄色变为蓝紫色，颜色的 深浅与细胞活力成正比。
细胞活力的判定标准
80%
细胞存活率
荧光染色法
利用荧光染料对活细胞进行染色，通 过荧光显微镜观察荧光信号判断细胞 活力。
mtt法与其他方法的优缺点比较
染色法
操作简单，但主观性强，误差 较大。
代谢活性检测
客观准确，但试剂成本较高。
荧光染色法
灵敏度高，但操作复杂，需要 荧光显微镜。
MTT法
操作简便，成本低，结果准确 可靠。
选择合适的细胞活力检测方法的原则
经验总结与未来展望
经验总结
MTT法是一种简单、可靠的检测细胞 活力的方法，但在实验过程中需要注 意避免污染、误差等问题。
未来展望
随着细胞生物学研究的深入，MTT法 将会有更多的应用场景，如药物筛选、 免疫疗法评估等。同时，需要不断优 化实验条件和方法，提高实验结果的 准确性和可靠性。
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cck8法检测细胞活力的基本原理和步骤
文章标题：深度探讨CCK-8法检测细胞活力的基本原理和步骤一、引言CCK-8法是一种常用的细胞活力检测方法，广泛应用于细胞生物学、药理学和医学研究领域。
本文将从CCK-8法的基本原理和步骤入手，深入探讨这一检测方法的应用和意义。
二、CCK-8法的基本原理1. CCK-8试剂的组成和作用机制CCK-8试剂主要由WST-8和辅酶Ⅰ组成。
WST-8可被还原成橙色的水溶性甲烷化产物，其还原程度与细胞代谢活性成正比。
辅酶Ⅰ促进WST-8的还原反应，增强反应敏感度。
2. 检测原理细胞内代谢活跃时，能还原WST-8为橙色产物，其光密度与细胞数量和代谢活性成正比。
通过测定产物的吸光度，可以反映细胞的活力水平。
三、CCK-8法的操作步骤1. 细胞预处理将生长的细胞悬浮液均匀分配至不同的孔板中，使每个孔内细胞数大致相等，保证实验结果的准确性。
2. 添加CCK-8试剂向各孔内加入CCK-8试剂，使其充分接触到细胞。
待反应一定时间后，测定吸光度。
3. 数据处理和分析根据吸光度值计算细胞活力指数，进一步分析实验结果，获取所需数据。
四、CCK-8法在细胞生物学研究中的应用1. 细胞增殖实验CCK-8法可用于评估细胞增殖速率和抑制剂对细胞生长的影响，为细胞生长调控机制的研究提供重要数据支持。
2. 细胞毒性评价通过CCK-8法可以快速、准确地评估药物对细胞的毒性，为药物筛选和临床用药提供重要参考依据。
五、个人观点和总结CCK-8法作为一种快速、灵敏度高的细胞活力检测方法，对于细胞生物学和药理学研究具有重要的应用价值。
通过本文的探讨，我们对CCK-8法的基本原理和操作步骤有了更深入的理解，相信它将在未来的研究中发挥越来越重要的作用。
结语本文通过对CCK-8法的基本原理和操作步骤的深入探讨，希望能帮助读者更加全面、深入地理解这一重要的细胞活力检测方法。
我们期待更多的学者和研究人员能够运用CCK-8法，推动细胞生物学和药理学研究的发展。
实验报告细胞活力
一、实验目的1. 了解细胞活力的概念和测定方法。
2. 掌握MTT法和CCK-8法测定细胞活力的原理和操作步骤。
3. 通过实验验证细胞活力测定方法的有效性。
二、实验原理细胞活力是指细胞生长、增殖和代谢的能力。
细胞活力测定是细胞生物学和分子生物学实验中常用的技术，用于评估细胞增殖和细胞毒性。
常用的细胞活力测定方法有MTT法、CCK-8法等。
1. MTT法：MTT法是一种通过检测细胞代谢产物（如NADH）还原MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四唑溴化物）生成甲紫（Formazan）的量来间接反映细胞活力的一种方法。
在一定条件下，活细胞内的脱氢酶可以将MTT还原成甲紫，甲紫呈紫色，其颜色的深浅与细胞活力成正比。
2. CCK-8法：CCK-8法是一种基于细胞代谢产生乳酸脱氢酶（LDH）的原理，通过检测LDH将CCK-8还原成水溶性甲偶氮盐的量来反映细胞活力的一种方法。
在一定条件下，活细胞内的LDH可以将CCK-8还原成甲偶氮盐，甲偶氮盐呈黄色，其颜色的深浅与细胞活力成正比。
三、实验材料1. 细胞：待测细胞系2. MTT试剂：3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四唑溴化物3. DMSO（二甲基亚砜）：用于溶解MTT4. CCK-8试剂：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫唑基)-2H-四唑5. 96孔板：用于细胞培养和实验操作6. 细胞培养试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素7. 其他：移液器、吸头、酶标仪、水浴锅、恒温培养箱、超净工作台等四、实验方法1. 细胞培养：将待测细胞系按照一定密度接种于96孔板中，置于恒温培养箱中培养至细胞贴壁生长。
2. MTT法测定细胞活力：（1）将细胞培养至一定密度后，加入MTT试剂，置于恒温培养箱中继续培养；（2）待细胞代谢完成后，加入DMSO溶解甲紫；（3）使用酶标仪在490nm波长处检测吸光度值。
细胞活力检测方法
细胞活力检测方法细胞活力是指细胞内外环境稳定，细胞结构完整，代谢活跃，功能正常的状态。
细胞活力的高低直接影响着生物体的生长、发育、免疫功能等多个方面。
因此，准确、快速地检测细胞活力对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。
下面将介绍几种常见的细胞活力检测方法。
一、MTT法。
MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。
其原理是将MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物）加入培养基中，MTT会被细胞内的还原酶还原为可溶性的紫色产物，然后用溶剂将产物溶解，最后用酶标仪测定其吸光值。
吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
二、CCK-8法。
CCK-8法是一种新型的细胞活力检测方法，其原理是将CCK-8（Cell Counting Kit-8）溶液加入培养基中，CCK-8会被细胞内的还原酶还原为橙黄色的产物。
然后用酶标仪测定其吸光值，吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
相比MTT法，CCK-8法更为灵敏和稳定。
三、荧光染料法。
荧光染料法是一种常用的细胞活力检测方法，其原理是利用荧光染料（如FDA、PI等）染色活细胞和死细胞，然后观察染色情况来判断细胞的活力。
活细胞呈绿色荧光，而死细胞呈红色荧光。
通过计数活细胞和死细胞的比例，可以间接反映细胞的活力情况。
四、细胞代谢物测定法。
细胞代谢物测定法是一种直接反映细胞活力的方法。
通过测定细胞产生的代谢产物（如乳酸、ATP等）的含量，可以客观地评价细胞的活力情况。
这种方法不仅可以用于细胞培养液的检测，也可以用于组织样本的检测。
综上所述，细胞活力的检测方法有多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际应用中，我们可以根据具体情况选择合适的方法来检测细胞活力，以便更好地开展生物学研究和临床诊断工作。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
细胞活性测定方法
细胞活性测定方法细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。
其中MTT法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。
但MTT法形成的Formazan 为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan，故有时重复性略差。
为了解决这个问题，研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如XTT、CCK-8（WST-8）等。
现就这三种四氮唑盐类方法作一个简单介绍：1.MTT法MTT：化学名： 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
2.XTT法XTT：化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5- sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲产物。
当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲产物的吸光度与活细胞的数量成正比。
优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。
细胞生物学实验细胞活力的测定
020301Contents0201实验目的及原理Experimental purpose and principle01.实验目的及原理Experimental purpose and principle学习荧光显微技术来测定细胞活力实验用品Experimental supply02.实验用品Experimental supply(一) 材料：新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆原生质体悬液，人口腔上皮细胞。
(二) 用品：荧光显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，烧杯，牙签等。
(三) 试剂：1．二丙酸酯荧光素溶液：取10mg二丙酸荧光素于5ml丙酮中，将此溶液逐滴加入 5ml PH5-6生理盐水或0.65M的甘露醇溶液中，直到出现永久性乳白沉淀为止。
2．0.01％吖啶橙的生理盐水溶液。
实验方法Experimental methods04.实验方法Experimental methods(一) 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞活力的测定原理：二丙酸酯荧光素是非荧光性的亲酯性化合物，很容易进入细胞活力较强的细胞内。
①细胞内有较强的活性酯酶而将二丙酸酯荧光素中的荧光素分解出来，从而在荧光显微镜下发出了强烈的黄绿荧光②相反活力较弱的细胞，由于酯酶的含量低，表现荧光较弱③而死亡的细胞，由于酯酶活性丧失，不能分解二丙酸酯荧光素，而完全没有荧光(一) 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞活力的测定1．取少许新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆表皮放在玻片上，加二丙酸酯荧光素溶液一滴，5-1O分钟后，在荧光显微镜下观察，时间不宜太长，以免细胞逐渐死亡。
2．若着染是悬浮细胞，可将上述染色液数滴直接加入细胞培养液5分钟后，可离心收集。
再用无细胞和无染料的培养液洗二次，即可收集观察。
上述染过的细胞可保存在4℃左右的冰箱中，直到细胞死亡前都可观察。
(二) 吖啶橙鉴定细胞死活（台盼蓝也可鉴定）细胞经吖啶橙染色，在激发光作用下，活细胞核呈黄绿色或亮绿色荧光，而细胞质为淡红色，但含有粘多糖的细胞在其细胞质中出现桔黄色颗粒，或整个细胞质呈桔黄桔红色荧光，死细胞核呈红色荧光方法如下：用牙签取少许口腔粘膜上皮细胞，涂在载玻片上，滴加1-2滴0.01％吖啶橙生理盐水溶液，加盖玻片，待染色5分钟后于荧光显微镜下观察，注意细胞核所呈荧光颜色。
细胞活性检测方法
细胞活性检测方法
细胞活性检测是观察和分析细胞在不同环境条件下生长和活动状态的常用方法，是细
胞生物学研究的重要工具。
下文重点讨论细胞活性检测方法。
细胞活性检测主要分为细胞增殖检测和细胞毒性检测两类。
细胞增殖检测是用于检测细胞增殖水平的一种常见方法，其方法可以分为物质检测法
和荧光检测法。
其中，物质检测包括以下几种方法：1. 细胞计数法：使用酶标仪或显微
镜统计细胞的数量和亚群分布；2.发光检测法：用苯乙烯（MTT）或朴素假单胞菌（XTT）
等试剂测定细胞代谢活力；3.生物量测定：用铜铋还原定氮法或硝酸还原法测定细胞原材
料和产物含量。
荧光检测包括以下几种：活性染色法：如酶原发光染色（ELISA）；假单
胞菌（xTT）荧光定量法等。
细胞毒性检测是研究细胞在有毒物质存在下的活性情况。
常见的细胞毒性检测方式有：
1.细胞实验系统和荧光染色：检测细胞内毒性物质产生变化前后细胞形态和蛋白组成等；
2.细胞能量测定法：检测细胞受有毒物质影响后ATP含量及其他代谢产物及表观遗传学变化；
3.细胞凋亡检测：通过检测细胞凋亡标志物TUNEL法以及流式细胞仪中染色体减数等
来检测细胞凋亡的发生。
细胞活性检测是生物学研究的重要工具，它不仅可以帮助我们更好地理解细胞在不同
环境条件下的活动，而且还可以用于预测细胞对外界刺激和毒素等的反应，进而帮助提高
细胞培养和药物研究的准确性和效率。
细胞计数及细胞活力检测
细胞计数
当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
1.将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上；
2.将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间；
3.静置3分钟；
4.镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的,然后按下式计算：
细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×稀释倍数×104
注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
细胞计数板
细胞活力测定
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。
复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。
用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。
1.将细胞悬液以0.5ml加入试管中；
2.加入0.5ml0.4%台盼兰染液，染色2-3分钟；
3.死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。
细胞存活率为：活细胞数÷总细胞数×100％。
注意：活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
细胞活力检测
细胞活力检测在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力（cell viability）。
细胞活力测定方法有MTT法、克隆（集落）形成法、台盼蓝染色法、3H放射性同位素掺入法等。
其中MTT法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。
但MTT法形成的Formazan为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan，故有时重复性略差。
为了解决这个问题，研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如CCK-8（WST-8）、XTT等。
MTTMTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan 结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和配置好的溶液都需要用铝箔纸包好避光保存。
实验的时候尽量关闭超净台上的日光灯进行避光操作。
步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞的密度接种到96孔板中，每孔体积200ul.2：培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul. 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
细胞活力测定实验报告
细胞活力测定实验报告细胞活力测定实验报告细胞活力是评估细胞生命力和功能状态的重要指标之一。
在现代生物学研究中，细胞活力测定实验被广泛应用于药物筛选、毒性评估、细胞增殖和凋亡研究等领域。
本文将介绍一种常用的细胞活力测定方法——MTT法，并结合实验结果进行分析和讨论。
MTT法是一种基于细胞还原酶活性的颜色反应原理，可用于测定细胞的代谢活性和细胞数量。
实验中，我们选取了人类肺癌细胞株A549作为研究对象，通过MTT法测定细胞在不同处理条件下的活力变化。
首先，我们将A549细胞均匀地分配到96孔板中，每孔约含有1×10^4个细胞。
然后，根据实验设计，对细胞进行不同的处理。
我们选择了三个处理组：阳性对照组、阴性对照组和实验组。
阳性对照组是指给予细胞一种已知能够促进细胞增殖的药物，以验证实验方法的可行性；阴性对照组是指未给予任何处理的细胞，作为对照组；实验组是指给予待测药物处理的细胞。
接下来，我们在每个孔中加入一定浓度的MTT试剂，并孵育细胞一段时间，使细胞摄取MTT并还原为紫色的甲基咪唑溴化物。
然后，通过加入溶解剂将细胞内的甲基咪唑溴化物溶解出来，形成蓝色的溶液。
最后，利用酶标仪测定吸光度，即可得到细胞活力的定量结果。
实验结果显示，阳性对照组的细胞活力明显高于阴性对照组，验证了MTT法的可靠性。
而实验组的细胞活力则与阳性对照组相比有所降低，表明待测药物对细胞的增殖能力有一定的抑制作用。
进一步的数据分析发现，待测药物的抑制效果呈剂量依赖性，即随着药物浓度的增加，细胞活力的降低程度也随之增加。
通过以上实验结果，我们可以得出结论：MTT法是一种简便、可靠的细胞活力测定方法，适用于药物筛选和毒性评估等研究领域。
同时，该实验结果也提示了待测药物对A549细胞增殖的抑制作用，为进一步研究该药物的抗癌潜力提供了重要线索。
除了MTT法，还有许多其他常用的细胞活力测定方法，如CCK-8法、LDH释放法等。
这些方法在原理和操作上有所不同，但都能够提供有关细胞代谢活性和生命力的信息。
细胞活力测定方法
细胞活力测定方法
以下是 6 条关于细胞活力测定方法的内容：
1. 嘿，你知道吗？有一种超简单的细胞活力测定方法，就像我们判断水果新鲜不新鲜一样直观！比如说，咱可以用台盼蓝染色法呀。
想象一下，细胞就像一个个小果子，通过这种染色，就能清楚地知道哪些是有活力的，哪些已经“不行了”。
这不是很神奇吗？
2. 哇塞，细胞活力测定还可以用 MTT 法呢！这就好像是给细胞们来一场特别的“考试”，那些活力满满的细胞就能顺利通过。
就像是运动场上的健儿们，活力强的就能在比赛中脱颖而出。
你说是不是很有意思？
3. 嘿呀！还有一种细胞活力测定方法叫荧光素酶报告基因法。
这就像是给细胞装上了小小的“信号灯”，活力强的细胞就会让这信号灯闪闪发亮。
比如说，在研究某些基因功能的时候，用这个方法就能清楚地看到细胞的活力变化啦，太酷啦！
4. 告诉你哦，细胞活力测定还能用流式细胞术！这不就像是给细胞们来一次精准的“点名”嘛。
可以快速又准确地知道细胞活力的情况。
就好比在人群中，一下子就能找出那些充满活力的人一样，真牛啊！
5. 哇哦，细胞活力测定的方法之一是细胞计数法呢！这就好像我们数星星一样，去数数有多少活力的细胞。
比如说在培养细胞的过程中，通过这种方法来看看细胞有没有好好生长，是不是很实用呀？
6. 哈哈，还有一种细胞活力测定的好方法——CCK-8 法哟！就如同给细胞们举办一场欢乐的“派对”，活力强的细胞就会在这场派对中尽情展现自己。
在药物筛选等方面，这个方法可厉害啦，能快速知道药物对细胞活力的影响。
怎么样，很神奇吧？
我的观点结论：这些细胞活力测定方法都各有特点和优势，在不同的研究和应用场景中都能发挥重要作用呢！。
实验4 细胞的活力测定(MTS法)
（X为4个大格的 细胞总数）
2. 正中央红色小格用于计数红细胞
➢ 计数前，如果细胞密度很大则先将细胞用台盼蓝 溶液将细胞稀释一定倍数（如5倍），计算时需要 在公式里乘以相应的稀释倍数，即得到细胞的实 际密度。
➢ 根据个人习惯，计数时当细胞压到大格的边线时， 遵循“数上不数下，数左不数右”的原则。
实验对照每孔 加100ul细胞
空白对照每孔 加100ul 1640 培养基
从右到左分别加入100ul经10uM，5uM……的梯度药物处理的细胞
1.加细胞和 培养基。
2.细胞加完
后，每孔加
入MTS和
PMS的混合 液20ul
，
VMTS:VPMS=2 0：1，先计
算需要多少
孔，可以多
配6孔 为了减少误
差，每个浓MTS法的原理与TT法相同（测定490nm吸光度值），灵敏度高，操作简单。
酶标仪
实验内容
1.测定抗癌药物对慢性粒细胞白血病(CML)细胞系的IC50. 2.细胞倍比稀释测定细胞活力. 3.细胞计数.
IC50（ inhibitory concentration 50% ）：药物抑制细胞活力50%时的浓度。 单位：nM,uM
2.细胞倍比稀释测定细胞活力.
取CML细胞系1ml（细胞浓度约为5*106个/ml）于1.5ml离心管中， 编号为第1管；取7个1.5ml离心管编号为2-7管， 向第2-7管中分别加入 500ul培养基；管1颠倒混匀数次后，吸取500ul细胞加入到管2，管2颠 倒混匀后吸取500ul细胞加入到管3，依次类推直到第7管；各管吸取 100ul加入到96孔细胞培养板中（设置3个复孔），同时设置3个空白对 照孔（培养基）。将MTS和PMS解冻后，按20：1的比例混匀，每孔 加入20ul，将细胞培养板置于细胞培养箱中培养4个小时后，取出细胞 培养板使用酶标仪测定490nM波长时的吸光度值，绘制细胞浓度（X轴 ）和细胞活力（Y轴），分析细胞活力与活细胞数量是否呈正比？ 注意：MTS和PMS需避光，操作时需避光操作。
细胞增殖及细胞活力检测方法
目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。
一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。
另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。
显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。
如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。
所以最直接的证据应该采用方法一。
用于检测细胞增殖能力最经典的方法是用氚标记的胸腺嘧啶核苷处理细胞，再检测DNA链中氚含量。
若细胞具有增殖能力，DNA合成过程中将会采用氚标记的胸腺嘧啶核苷作为合成原料，因此检测细胞DNA链内标记核苷酸的量可判断细胞是否进行DNA的合成。
但更为常用的方法是BrdU检测法。
用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。
细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量（如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定），从而判断细胞的增殖能力。
Calbiochem/EMD公司提供一种BrdU检测试剂盒，以微孔板的形式，合并所有清洗、固定、变性的步骤以单一试剂当中。
比色检测在一抗二抗标记后在450nm下读数，所有操作在3小时内结束。
而且该试剂盒的灵敏度与市场上其他同类产品相比是最强的。
1000个细胞以上水平的检测只需用BrdU预孵育2小时，100个细胞则采用过夜预孵育，即可检测细胞的增殖能力。
BrdU法的一个缺点是需要固定和变性等破坏DNA的处理。
有些情况下，研究者可能希望在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量，然而，在变性条件下，DNA的双链结构将被破坏，DAPI和Hoechest 33342等核酸标记探针就不再能识别DNA，因而也无法估计DNA总量。
细胞活力的测定
甲液KH2PO49.08溶于1 000ml双蒸馏水
乙液KH2PO49.47g溶于1 000ml双蒸馏水
（6）甲基绿复染液：取1g甲基绿，溶于100ml双馏水中，4℃保存。
（7）应用染色液（孵育液）的配制取1ml亚硝酸钠溶液缓慢滴入1ml的付品红液中，边加边摇匀，付品红液由红色变为浅黄色，混合后，静置1min～2min，将此混合液倒入30ml pH7.6PB液中，充分混合后，再加入α-醋酸萘酯溶液0.85ml，边加边搅拌，混匀后使用。
2不要频繁换液一般23次换液离心一次只是补充培养基3使用1640atcc推荐注意加碳酸氢钠25g就可以了宁酸勿碱注意冻存的时候密度大些推荐用血清冻存5感觉hyclone的血清比较好6复苏比较慢建议开始用小瓶不要用一次性的聚蔗糖泛影葡胺分层液密度梯度离心法分离外周血单个核细胞试剂及配制1聚蔗糖泛影葡胺分层液
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试剂：
1．二丙酸酯 荧光素溶液： 取l0mg二丙酸 荧光素于5ml 丙酮中，将此 溶液逐滴加入 5ml PH5-6生 理盐水或0.65 M的甘露醇溶 液中，直到出 现永久性乳白 沉淀为止。 2．0.01％吖 啶橙的生理盐 水溶液
实验方法
利用荧光增白剂 观察植物细胞壁
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实验方法
DNA分布的观察
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实验方法
细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞 活力的测定
新鲜紫鸭趾 草花粉或蚕 豆表皮
加二丙酸酯 荧光素溶液 一滴5-lO 分钟 荧光显微镜 下观察
悬浮细胞
染色液数 滴直接加 入细胞培 养液
离心收集
用无细胞 和无染料 的培养液 洗二次
收集观察
实验方法
吖啶橙鉴定细胞死活
细胞经吖啶 橙染色
活细胞核呈 黄绿色或亮 绿色荧光
细胞质为淡 红色
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实验方法
吖啶橙鉴定细胞死活
口腔粘 膜上皮 细胞
滴加1-2 滴0.01％ 吖啶橙生 Nhomakorabea理盐水溶 液
染色5分 钟后于荧 光显微镜 下观察
谢谢
实验用品
材料： 洋葱 新鲜紫鸭趾 草花粉或蚕 豆原生质体 悬液，人口 腔上皮细胞 用品： 荧光显微镜， 载玻片，镊 子，烧杯 荧光显微镜， 载玻片，盖 玻片，镊子， 烧杯，牙签 试剂：
(1) O.01％ 吖 啶橙生理盐水 溶液 (2) O.02％ 异 硫氰酯荧光素 生理盐水溶液 (3) O.Ol％ 罗 丹明生理盐水 溶液 (4) 荧光增白 剂溶液，将荧 光增白剂溶于 0.4M山梨醇溶 液中，使浓度 达到0.1％。
荧光细胞化学测定及细胞活力的测定
实验目的
• 学习荧光显微镜的使用 • 了解荧光显微技术原理和方法 • 以及荧光技术在细胞化学方面的应用
实验原理
荧光显微技术
利用短波光照射物质，激发其发射荧光在荧光显微镜下可以检 视的方法
自发荧光、次生荧光
1. 指有些生物体受到短 波光照射后，直接发 出的荧光 2. 生物材料受到短波光 照射后并不发光，当 它吸附荧光染料后产 生荧光
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实验方法
蛋白 质 分 布 的 观 察
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实验方法
线 粒 体 观 察
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实验方法
细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞 活力的测定
二丙酸酯荧 光素是非荧 光性的亲酯 性化合物;
进入细胞活力 较强细胞内,细 胞内活酯酶,将 二丙酸酯荧光 素的荧光素分 解
在荧光显微 镜下发出黄 绿荧光