实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验

地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多 重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
地中海贫血与 红细胞渗透脆性试验
Thalassemia
中国南方不同高发地 区人群携带率 3~ 24%
地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一
全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）
地贫的发病率、地域分布及危害
• 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见；
• 广西发病率为20%；
• 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担
【检验原理】
贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。
测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起
的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
结
论
1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基 因携带者，推荐配偶行基因检测。 2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产 前诊断。 3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出 生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。 4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊 断，但推荐羊膜腔穿刺。 5.无创性产前诊断是未来发展的方向。
【样品要求】 新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD）， 置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的
标本为不合格样品。标本采集后，测试应在
三日内完成。
【实验操作】
1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。 2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分 钟。 3、5分钟后，加入B试验液1ml。混匀，3000转/分钟，离心5 分钟。 4、将上清液轻轻倒入1.0cm × 1.0cm的比色杯中（切勿搅动 试管底的红细胞），于530nm波长读取光密度D1（以纯化水 作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液） 5、向试管中加入C试验液0.5ml，混匀，待血液全部溶血（透 明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。 6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色， 读取光密度D2。 7、按下列公式计算出溶血率百分比。
αchain disappear
(HbBart’s hydrop fetalis)
单管多重PCR
PCR-ASO
诊断(Diagnosis)
• 临床特点＋实验室检查＋父母调查阳性＋ （基因分析）
地中海贫血初筛检查
• MCV < 80fl 和/ 或MCH <27pg ,则高度怀 疑为地贫; • 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test ,ROFT ;< 0.60 ): 即可 怀疑为地贫; • HbA2 < 2. 5 % ,则高度怀疑为α地贫基因携 带者;ξ阳性为标准α地贫. • HbA2 >3. 5 % ,则为β地贫基因携带者
溶血率轻度降低：指红细胞溶血率不明显减低，在正常与可疑
贫血症之间。
广 东
• 每10人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每250个家庭就有1个有重型地贫出生 风险 • 每850个胎儿就有1个重型地贫患儿
定义
• 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障 碍性贫血）： 由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失 等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合 成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链 间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb （HbA：α2β2）合成降低的一种遗传性血 红蛋白病。
溶血 ％ = D1 D2 X 1.25 ×100 ％
【参考值（参考范围）】 溶血率％ >65％为正常溶血率；<55％为溶血率降低；（注 56-
64％为溶血率轻度降低）。
【检验结果的解释】 正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。 溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因 携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。
和难以估量的精神负担；
中国南方人群地贫基因携带率
地区
地贫
广西
17.6 8.5 12.7 9.8 4.2
携带率(%) β地贫
6.4 2.5 2.7 7.3 5.1
合计
24.0 11.0 15.4 17.1 9.3
广东
海南 云南 贵州
重庆
5.2
2.0
7.2
高发区人群遗传负荷评估
广 西
• 每4人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每55个家庭就有1个有重型地贫出生风险 • 每230个胎儿就有1个重型地贫患儿
羊膜腔穿刺术
羊膜腔穿刺术
实验室检查
--靶型wenku.baidu.comBC
地贫患者
红细胞脆性实验 正常人 Erythrocyte fragility test
血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis
肽链分析Peptide chain analyses
1 2 3 4 1 2 3 4
βchain disappear (β0-thal major)
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋
白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少
或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改
变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多
表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征） 4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。