植物的快繁与脱毒培养PPT课件
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马铃薯的脱毒培养快繁PPT课件
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马铃薯的脱毒试管苗
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再将其转入生长箱中，每天光照16 h， 光照强度3000-4000 lx。2 周后去掉顶芽， 以促进腋芽的生长。当腋芽长到1-2 cm时， 折下腋生枝，用于消毒、接种。
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（2）消毒： 水洗干净，无菌条件下先用70%的酒精
浸组织15-20 s，再用2%次氯酸钠溶液浸泡 4-5 min，然后用无菌水冲洗3 次。
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（3）接种： 把芽置于解剖镜下，左手用一把镊子将
芽按住，右手用解剖针将叶片和叶原基剥 掉，当形似一个闪亮半圆球的顶端分生组 织充分暴露出来后，用锋利的长颈刀片将 分生组织切下来，上面可带/也可不带叶原 基，再用刀片将其接种到培养基上。
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（4）培养基： MS 培 养 基 （ 提 高 NH4+ 、 K+ 浓 度 ， 利 于
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4、微型种薯的扩大繁殖 采用试管、温室、底畦生产的微型薯原原 种，可进一步通过塑料大棚或大田在春秋 两季扩大繁殖，以提供足够大田使用的优 良种薯。
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思考题：
１、对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个 阶段？各阶段是怎样操作的？ ２、马铃薯的生物学习性有哪些？
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感谢您的观看！
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（二）微型薯生产技术 1、试管生产 （1）单茎节扩大繁殖：由无性繁殖的
试管苗中获得茎切段（每个茎段带1-2个 叶 片 或 腋 芽 ） ， 每 个 三 角 瓶 里 接 4-5 个 茎 段，进行培养。
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（1）单茎节扩大繁殖： 培养条件：22 ℃，16 h补充光照1000 lx
马铃薯的脱毒试管苗
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再将其转入生长箱中，每天光照16 h， 光照强度3000-4000 lx。2 周后去掉顶芽， 以促进腋芽的生长。当腋芽长到1-2 cm时， 折下腋生枝，用于消毒、接种。
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（2）消毒： 水洗干净，无菌条件下先用70%的酒精
浸组织15-20 s，再用2%次氯酸钠溶液浸泡 4-5 min，然后用无菌水冲洗3 次。
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（3）接种： 把芽置于解剖镜下，左手用一把镊子将
芽按住，右手用解剖针将叶片和叶原基剥 掉，当形似一个闪亮半圆球的顶端分生组 织充分暴露出来后，用锋利的长颈刀片将 分生组织切下来，上面可带/也可不带叶原 基，再用刀片将其接种到培养基上。
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（4）培养基： MS 培 养 基 （ 提 高 NH4+ 、 K+ 浓 度 ， 利 于
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4、微型种薯的扩大繁殖 采用试管、温室、底畦生产的微型薯原原 种，可进一步通过塑料大棚或大田在春秋 两季扩大繁殖，以提供足够大田使用的优 良种薯。
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思考题：
１、对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个 阶段？各阶段是怎样操作的？ ２、马铃薯的生物学习性有哪些？
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感谢您的观看！
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（二）微型薯生产技术 1、试管生产 （1）单茎节扩大繁殖：由无性繁殖的
试管苗中获得茎切段（每个茎段带1-2个 叶 片 或 腋 芽 ） ， 每 个 三 角 瓶 里 接 4-5 个 茎 段，进行培养。
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（1）单茎节扩大繁殖： 培养条件：22 ℃，16 h补充光照1000 lx
植物脱毒和快速繁殖技术 ppt课件
力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。
该法尤其适用于类菌原体、类细菌的脱毒，而对于
类病毒的脱毒效果较差，因为类病毒通常有较强的
热稳定性。这种处理方法与1921年首先用于甘蔗的
脱毒，国内用这种方法处理柑橘，可脱除柑橘材料
内的黄龙病类细菌。 PPT课件
4
2 低热长时处理法
低热长时处理一般不能使整株植株脱毒，而只能 使个别器官脱毒，大多是使在热处理过程中长出的 茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生 的茎尖嫁接到无毒实生碊木上或将新产生的茎尖进 行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及 不同植物种类的脱毒率差异很大。
明显药害。据分析，抗病毒醚不是直接作用于病毒，而是作 用于寄主的代谢，从而阻止病毒的增殖，使新梢逐渐脱除病 毒。因此，认为在果树植株生长期间定期喷布抗病毒醚，有 可能在苗木顶端部分扩大无病毒区域，进而可增加茎尖培养 的脱毒效率。除抗病毒醚以外，还有报道证明一些其他药剂 也具有同样的作用。
4、合并使用药剂
在应用组织培养方法以获得无病原菌植株时，所用的外植体可以是茎 尖，也可以是茎的顶端分生组织。在这里，顶端分生组织是指最幼龄叶原基 上方的一部分，最大直径约为100，最长长度为250.茎尖则是由顶端分生组 织及下方的1~3个幼叶原基一起构成的。虽然通过顶端分生培养基消除病毒 的机会较高，但在大多数研究中，无病毒植物都是通过培养100~1000长的 外植体得到的，即通过茎尖培养得到。
PPT课件
5
二、组织培养脱毒
1.茎尖培养脱毒
Morel等（1952）首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离 出茎尖分生组织（0.25mm）培养得到植株，嫁接在大丽花 实生砧木上检验未无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去 病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花等茎尖 培养脱毒的研究中获得成功。茎尖培养脱毒可脱除多种病毒、 类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除 的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。茎尖培养脱毒直接从茎尖 生长获得植株，很少有变异，能很好地保持品种的特性。
第四章 植物的脱毒与快繁培养
第四章植物的脱毒与快繁培养第一节概念与意义一、概念利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的病毒，生产健康的繁殖材料。
二、植物病毒病简介及危害（一）植物病毒病简介定义：由植物病毒寄生引起的病害。
症状：①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。
花朵的花青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶病。
②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。
（二）病毒的侵染特性①有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物，极易受病毒病的侵染。
②大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒除外）。
③病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢.（三）植物病毒的危害：已超过500种，随着生产栽培时间的推移，危害越来越严重，发现的病毒种类也越来越多。
大多数植物病毒不经种子传播，对于有性生殖退化，仅能用无性繁殖方法繁殖的植物，一旦患病则毫无办法，从而使优良品种的生产力衰退。
目前受病毒危害严重影响生产的有：大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、萝卜果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉花卉：香石竹、各种菊花、天竹葵、紫罗兰等块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物，每年相当一部分产品要用留作种。
如：大蒜：留种量占产量的五到八分之一马铃薯：留种量占产量的十分之一贝母：留种量占产量的三分之一。
表1 危害园艺植物的病毒数目植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类菊花19 矮牵牛 5 葡萄26康乃馨11 马铃薯17 樱桃44水仙 4 大蒜24 无花果 5唐菖蒲 5 豌豆15 桃23风信子 3 百合 6 梨11月季10 柑橘23 草莓24天竺葵 5 苹果36病毒的危害给农业生产带来重大的损失，如草莓病毒的危害，曾使日本草莓产量严重降低，品质大大退化，使生产几乎受到灭顶之灾。
第三章植物脱毒技术PPT课件
•7
•8
（二）茎尖脱毒的方法
1、取样与消毒 取病害相对较轻的植株，可以从选定的植株上取顶芽梢 段进行消毒接种。也可从室内培养1－2个月并进行热处 理的盆栽扦插苗上，采顶芽与侧芽消毒接种，消毒方法： 取顶芽梢段3－5cm，剥去大叶片，自来水冲洗，75％酒 精浸泡30秒左右，用0.1％升汞消毒10分钟，最后用无菌 水冲洗4－5次。
而形成一种健康植物没有的碱基配对dsRNA，dsRNA经提纯、电泳、
染色后，在凝胶上所显示的谱带可以反映每种病毒组群的特异性，并
且有些单个病毒的dsRNA在电泳图谱上也显示一定的特征。因此，利
•34
指示植物检测法的优缺点
(1)优点：条件简单，操作方便，是一种经 济有效的检测方法，所以大多数植物检测 用指示植物检测法。 • (2)缺点：不能测出病毒总的核蛋白浓度， 而只能测出病毒的相对感染力。
•35
（二）抗血清检测法
抗体是动物在外来抗原的刺激下产生的 一种免疫球蛋白，抗体主要存在于血清中，含 有抗体的血清即称为抗血清。
TGCCC AATAGCCAGCTTATTGTGGCCCTTAAAATGCTAAT
TGCCC
TGCCC
ACGGGTTATCGGTCGAATAACACGGGCAATTTTACGATTAGACTAACGGGGAGAC
TGCCC AATAGCCAGCTTATTGTGCCCGTTAAAATGCTAATCTGATT GCCC CTCTG
液摩擦
汁液和金刚砂
至于 温室中
2-6天 观察
出现枯斑 有病毒 没有出现 不含病毒
•32
2.嫁接鉴定法： 适用于木本多年生果树和草莓、甘薯等
无性繁殖的草本植物，采用汁液接种法比 较困难，通常采用嫁接接种的方法，以指 示植物作砧木，被检测植物作接穗，可采 用劈接、靠接、芽接等方法嫁接。
葡萄的脱毒与快繁植物组织培养PPT资料(正式版)
5、试管苗的驯化与移栽
• 试管苗长出5~7片新叶时，把瓶子移入温室 中，即时可打开培养瓶，历时7d。把苗从 培养瓶中取出，洗净培养基，栽于经过干 热灭菌处理的蛭石内，盘上塑料薄膜罩严 ，置于阳光下，20 ℃，自然条件下锻炼 15d。移入土中。
小结：
形态特征和生物学习性
葡
选材接种
萄 的
葡萄的组织培养
2、培养条件
• 培养基
• 温度：25±2℃ • 光照：1000lx，16小时
3、生长与分化
• 接种成活的茎尖在一个月左右开始分化出 芽和侧芽，两个月左右形成芽丛，即可进 行大量增殖。每月继代一次，每个芽丛切 成10个。
4、生根培养
• 剪取2~3cm长的无根幼苗，插于上述培养 基上，1~2周内幼苗生根，一个月形成发达 的根系，同时长出5~6片新叶，生根率达 90%以上。
葡萄的脱毒与快繁植物组织培养
一、形态特征和生物学习性
葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部 分的茎细。节上具有卷须，可向上攀援。 叶近圆型或卵型，3～5裂。
葡萄原产于温带地区，不太抗寒。葡萄 的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃时即 受冻。
二、葡萄的组织培养
1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1～2 ㎝的茎尖,消毒,分离出约2mm长的茎尖，接种 到培养基上。
条和接种芽继续生长。 每月继代一次，每个芽丛切成10个。
2、茎尖培养脱毒
• 在25℃，相对湿度80%，每日16h的长日照 Байду номын сангаас件下水培生成新芽，剥离切取带1~3个叶 原基0.2~0.3mm茎尖进行立体培养，即可 获得脱毒苗。
3、无病毒苗的鉴定
• 用抗血清法、电子显微镜检测法、ELISA法 或指示植物进行病毒鉴定，以确保脱毒后 的试管苗不含病毒。
第4章-植物快繁与脱毒培养PPT课件
▪病毒(Virus) 个体微小，结构简单，成熟的个体称为病毒 粒体，有球状、杆状、线条状和弹状以及分枝丝状体，直径 或宽度约为10-120nm，体积比细菌小得多，能通过细菌滤 器。是一种严格寄生性的专性寄生物，又称分子寄生物。
.
46
病毒在植株体内的扩散：
①短距离移动：通过胞间连丝在植物细胞间移动， 其扩散的速度很慢。如烟草普通花叶病毒运转 速度为6-13um/小时；
离体条件下，在外源细
胞分裂素的作用下可以使顶
芽和腋芽共同发育，形成多
枝多芽的小灌木丛状结构。
.
15
丛生芽增殖
.
16
单茎节增殖
.
17
以顶芽和腋芽发育进行增殖的特点：
利用外植体上已有的芽分生组织，促使其萌 发形成枝条或芽，方法简单，能高度保持遗传稳 定性，繁殖速度较慢。
适用于绝大多数植物的繁殖，对具有特殊观 赏价值的嵌合体(chimera)园艺植物来说，也是 唯一能够保持其原有嵌合特性的繁殖途径。
in vivo
试管苗的移植（stage4）
.
24
（一）供体材料的准备：Stage0
对供体植株及外植体的卫生、生理状态进行改进 。可以减少外植体的污染，易于消毒，并在离体培养 时启动生长较好。
常采用的方法：
供体植株在人工气候箱或温室栽培1-3月；
喷洒抗生素；
供体枝条预培养或黄化处理；
修剪、嫁接、避免顶部浇水和雨后取材等。
第四章 植物离体无性繁殖与脱毒技术
第一节 植物离体无性繁殖技术 第二节 植物脱病毒技术
.
1
有性繁殖 繁殖方式
无性繁殖
无融合生殖 营养繁殖
无融合生殖：在子房和胚珠内不经受精作用而以种子进行 繁殖的方式。
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病毒在植株体内的扩散：
①短距离移动：通过胞间连丝在植物细胞间移动， 其扩散的速度很慢。如烟草普通花叶病毒运转 速度为6-13um/小时；
离体条件下，在外源细
胞分裂素的作用下可以使顶
芽和腋芽共同发育，形成多
枝多芽的小灌木丛状结构。
.
15
丛生芽增殖
.
16
单茎节增殖
.
17
以顶芽和腋芽发育进行增殖的特点：
利用外植体上已有的芽分生组织，促使其萌 发形成枝条或芽，方法简单，能高度保持遗传稳 定性，繁殖速度较慢。
适用于绝大多数植物的繁殖，对具有特殊观 赏价值的嵌合体(chimera)园艺植物来说，也是 唯一能够保持其原有嵌合特性的繁殖途径。
in vivo
试管苗的移植（stage4）
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（一）供体材料的准备：Stage0
对供体植株及外植体的卫生、生理状态进行改进 。可以减少外植体的污染，易于消毒，并在离体培养 时启动生长较好。
常采用的方法：
供体植株在人工气候箱或温室栽培1-3月；
喷洒抗生素；
供体枝条预培养或黄化处理；
修剪、嫁接、避免顶部浇水和雨后取材等。
第四章 植物离体无性繁殖与脱毒技术
第一节 植物离体无性繁殖技术 第二节 植物脱病毒技术
.
1
有性繁殖 繁殖方式
无性繁殖
无融合生殖 营养繁殖
无融合生殖：在子房和胚珠内不经受精作用而以种子进行 繁殖的方式。
植物的快繁与脱毒培养
• 有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的 植物，极易受病毒病的侵染。
• 大多植物病毒不经种子传播（专化性强的 病毒除外）。
• 病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢.
三、传统的植物脱毒技术简介
• 物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温 热处理等
– 原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目 的。
• 化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在 植物体内的复制。
第一节 植物脱毒（virus elimination)培养
一、概念 • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞
中的病毒，生产健康的繁殖材料。
二、植物病毒病简介
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
ISEM
• 脱毒苗的保存与快速繁殖
• 脱毒苗的离体保存与繁殖，建立脱毒种苗 生产繁殖网络体系，木本植物建立隔离的 脱毒苗母本园。
Proliferation medium
Rooting medium
六、植物脱毒培养的意义
• 能够有效地保持优良品种的特性； • 生产无病毒种苗，防止品种退化； • 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； • 节约耕地，提高农产品的商品率；
五、脱毒植物的鉴定方法
指示植物 (test plants)鉴定——利用病毒在其他植 物上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。这种 专用以产生症状的（寄主）植物就是指示植物。寄 主植物能够辨别某种病毒的专化性症状。 方法：将待测植物的汁液接种到指示植物，如果 待测植株带毒，则指示植物上会出现特定症状。 由于病毒的寄生范围不同，所以应根据不同的病 毒选择适合的指示植物。
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16
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
17
二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
21
番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
22
1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
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1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
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1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
Shoots developing from parrotfeather internode sections cultured for 7 days on medium with 2-iP.
6
2.外植体（毛地黄叶片）--愈伤组织—再生植株
愈伤组织
愈伤组织再生的不定芽
7
5.外植体（叶片等）--原球茎---再生植株（兰科植物）
• 驯化现象:植物组织经长期继代培养,发生一些 变化,开始继代培养要加入生长调节物质,其后 加入少量或不加入生长调节物质就可以生长. 这种现象称为“驯化”(acclimation)。
• 例：胡萝卜薄壁组织初代培养要加入10-6 mol/LIAA才能达到最大生长量，但继代培养 10代以上，则不加IAA照样得到同样的生长量。
• 石斛兰茎尖或掖芽培养，固体培养基培养形成原 球茎后，继代培养要用液体培养基进行振荡培养。
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衰退现象（续）
• （3）继代培养次数： • 影响因培养材料而异。 • 有些植物长期继代培养仍保持再生能力和繁殖力。 • 有些植物继代增加，变异频率增加，如香蕉不定芽，
继代5次为2.14%；10次为4.2%；20次为100%变异。 故香蕉继代培养不能超过一年。蝴蝶兰连续培养4年后， 植株退化不开花。 • （4）季节：有些植物材料能否继代培养与季节有关。 如水仙鳞茎，六七月份休眠，生长变慢，8月休眠后， 生长加快。 • 百合鳞片分化能力：春季>秋>季夏季>冬季
第四章植物快速繁殖及脱毒和应用
1.植物快速繁殖 2.脱毒技术及应用 2.1.病毒病及其危害 2.2脱毒的原理 2.3.脱毒苗的鉴定和 保存
授课人：施和平 Email：shihp@ 1
整体概述
概述一
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概述二
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概述三
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13
继代培养
• 蝴蝶兰，蕙兰等也如此。 • 驯化发生的原因：可能是继代培养中细胞
积累了较多的生长物质，因此逐渐减少对 外源生长物质的需要。 • 驯化的不足：长期继代，卡德利亚兰只长 芽不长根，芽多而细弱。
14
3 衰退现象：长期继代培养的组培材料也会逐渐衰退
（recession），丧失形态发生能力（生长不良，再生能力和增殖 力下降等）
大花蕙兰原球茎增殖与植株再生
8
6.外植体（叶片）-（或愈伤）-体胚---再生植株
体细胞胚胎发生
9
8.外植体—孢子—小植株（蕨类植物）
10
固体培养：
二，培养方式
液体培养
11
温室移 栽炼苗
12
3.继代培养(Subculture)
• 当初代培养的试管苗在瓶内长到满瓶,或培养 基养分利用完时就要转瓶,进行继代培养。
直成束（毁灭性病害）.不结果或果特心,异常 • 柑桔黄龙病:苹果花叶病毒，番茄病毒病，葱类黄
带芽小插条无菌扦插
可直接种植
在试管内形成小鳞茎 需较长时间
萌发时间长,消毒困难
繁殖速度较孢子型 快
为木本植物快速繁殖 方式
花叶芋,马铃薯
百合,贝母,水仙,郁 金香
地钱,狼尾蕨
肾蕨等
4
葡萄,杨树等
1.外植体（不定芽）---出芽（不定芽）（直 接再生）
贯叶金丝桃不定芽直接再生过程
5
2外植体（茎段）---出芽（不定芽）（直接再生）
2
一，植物快速繁殖
即应用组织培养技术,快速繁殖名优 新品种,使其在较短时间内繁衍较多 的植株,快速繁殖珍稀濒危植物,使物
种得以保存的技术.
3
一，植物快速繁殖的途径和方法
类型
器官型
器官发生型
胚状体发生型 原球茎型 球茎芽型
方式
特点
事例
直接以芽增殖
脱分化,愈伤再分化
从愈伤或外植体直接 产生
外植体产生原球茎
• 衰退现象发生的影响因素：
• （1）植物材料：不同植物，不同品种，不同器官 或不同部位的继代繁殖能力都不相同。
• 通常：草本植物>木本植物，被子植物>裸子植物， 年幼材料> 老年材料；胚> 营养组织，胚> 胚状体 > 愈伤组织
• （2）培养基和培养条件：培养基和培养条件适当 与否对继代培养影响颇大,所以常用改变培养基和 培养条件来保持继代培养。
叶柄-圆球形小突起球 茎芽
繁殖系数高,遗传性 稳定 繁殖系数高低,用于 细胞分化研究 繁殖系数高,
遗传性稳定,
遗传性较稳定,球茎 可直接种植
甘蔗,香蕉,香石竹等 烟草,油菜等 胡萝卜,石刁柏等 兰花 观叶海棠.ZZ
块茎型 鳞茎型
孢子型
根茎型
微枝扦插型
叶片形成粒状芋块-芽 和根
鳞片形成小鳞茎
成熟孢子培养 以短根茎为外植体
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
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二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
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番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
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1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
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1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
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1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
Shoots developing from parrotfeather internode sections cultured for 7 days on medium with 2-iP.
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2.外植体（毛地黄叶片）--愈伤组织—再生植株
愈伤组织
愈伤组织再生的不定芽
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5.外植体（叶片等）--原球茎---再生植株（兰科植物）
• 驯化现象:植物组织经长期继代培养,发生一些 变化,开始继代培养要加入生长调节物质,其后 加入少量或不加入生长调节物质就可以生长. 这种现象称为“驯化”(acclimation)。
• 例：胡萝卜薄壁组织初代培养要加入10-6 mol/LIAA才能达到最大生长量，但继代培养 10代以上，则不加IAA照样得到同样的生长量。
• 石斛兰茎尖或掖芽培养，固体培养基培养形成原 球茎后，继代培养要用液体培养基进行振荡培养。
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衰退现象（续）
• （3）继代培养次数： • 影响因培养材料而异。 • 有些植物长期继代培养仍保持再生能力和繁殖力。 • 有些植物继代增加，变异频率增加，如香蕉不定芽，
继代5次为2.14%；10次为4.2%；20次为100%变异。 故香蕉继代培养不能超过一年。蝴蝶兰连续培养4年后， 植株退化不开花。 • （4）季节：有些植物材料能否继代培养与季节有关。 如水仙鳞茎，六七月份休眠，生长变慢，8月休眠后， 生长加快。 • 百合鳞片分化能力：春季>秋>季夏季>冬季
第四章植物快速繁殖及脱毒和应用
1.植物快速繁殖 2.脱毒技术及应用 2.1.病毒病及其危害 2.2脱毒的原理 2.3.脱毒苗的鉴定和 保存
授课人：施和平 Email：shihp@ 1
整体概述
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继代培养
• 蝴蝶兰，蕙兰等也如此。 • 驯化发生的原因：可能是继代培养中细胞
积累了较多的生长物质，因此逐渐减少对 外源生长物质的需要。 • 驯化的不足：长期继代，卡德利亚兰只长 芽不长根，芽多而细弱。
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3 衰退现象：长期继代培养的组培材料也会逐渐衰退
（recession），丧失形态发生能力（生长不良，再生能力和增殖 力下降等）
大花蕙兰原球茎增殖与植株再生
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6.外植体（叶片）-（或愈伤）-体胚---再生植株
体细胞胚胎发生
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8.外植体—孢子—小植株（蕨类植物）
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固体培养：
二，培养方式
液体培养
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温室移 栽炼苗
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3.继代培养(Subculture)
• 当初代培养的试管苗在瓶内长到满瓶,或培养 基养分利用完时就要转瓶,进行继代培养。
直成束（毁灭性病害）.不结果或果特心,异常 • 柑桔黄龙病:苹果花叶病毒，番茄病毒病，葱类黄
带芽小插条无菌扦插
可直接种植
在试管内形成小鳞茎 需较长时间
萌发时间长,消毒困难
繁殖速度较孢子型 快
为木本植物快速繁殖 方式
花叶芋,马铃薯
百合,贝母,水仙,郁 金香
地钱,狼尾蕨
肾蕨等
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葡萄,杨树等
1.外植体（不定芽）---出芽（不定芽）（直 接再生）
贯叶金丝桃不定芽直接再生过程
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2外植体（茎段）---出芽（不定芽）（直接再生）
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一，植物快速繁殖
即应用组织培养技术,快速繁殖名优 新品种,使其在较短时间内繁衍较多 的植株,快速繁殖珍稀濒危植物,使物
种得以保存的技术.
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一，植物快速繁殖的途径和方法
类型
器官型
器官发生型
胚状体发生型 原球茎型 球茎芽型
方式
特点
事例
直接以芽增殖
脱分化,愈伤再分化
从愈伤或外植体直接 产生
外植体产生原球茎
• 衰退现象发生的影响因素：
• （1）植物材料：不同植物，不同品种，不同器官 或不同部位的继代繁殖能力都不相同。
• 通常：草本植物>木本植物，被子植物>裸子植物， 年幼材料> 老年材料；胚> 营养组织，胚> 胚状体 > 愈伤组织
• （2）培养基和培养条件：培养基和培养条件适当 与否对继代培养影响颇大,所以常用改变培养基和 培养条件来保持继代培养。
叶柄-圆球形小突起球 茎芽
繁殖系数高,遗传性 稳定 繁殖系数高低,用于 细胞分化研究 繁殖系数高,
遗传性稳定,
遗传性较稳定,球茎 可直接种植
甘蔗,香蕉,香石竹等 烟草,油菜等 胡萝卜,石刁柏等 兰花 观叶海棠.ZZ
块茎型 鳞茎型
孢子型
根茎型
微枝扦插型
叶片形成粒状芋块-芽 和根
鳞片形成小鳞茎
成熟孢子培养 以短根茎为外植体