病毒感染的检查方法与防治原则
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病毒感染的检查方法与防治原则
第一节 病毒感染的检查
病毒感染的检查
检测内容
电镜直接观察 病毒颗粒 光镜检查包含体 病毒抗原 分离培养 查病毒 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 查特异性抗体
原则基本与细菌相似，但应注意：
1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清
微生物及其代谢产物
生物制品
动物免疫血清
（biological products） 免疫细胞
细胞因子
防治和诊断感染性疾病
灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine）
③形成包涵体(inclusion body)
(2)红细胞吸附（hemadsorption）
病毒囊膜表面血凝素(HA) ＋
红细胞表面HA受体
腮腺炎病毒感染细胞
(3)干扰现象（interference）
风疹病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(＋)
风疹病毒？ ＋人胚肾细胞
1.细胞培养
分类
单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture）
细胞种类
原代细胞（primary cell） 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）
细胞培养瓶
单层细胞
1.细胞培养
特点：①对多种病毒敏感 ②不带异种蛋白(人源性) ③不带病毒，无致瘤潜能 ④可传50代左右
1.细胞培养
(3) 传代细胞培养
特点：①对多种病毒敏感性高 ②繁殖能力高，传代时间长 ③有致癌危险，不能用于疫苗生产
2.鸡胚培养
采用孵化9～14天的鸡胚
接种部位
绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒
数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）
电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查
包涵体
1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术
2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序
可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒
EBV早期抗原抗体 EAV核心抗原抗体 早期抗原的抗体 EAV衣壳抗原抗体
非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂
其他抗病毒药物
干扰素和干扰素诱生剂
中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗
反义寡核苷酸 干扰RNA 核 酶 （ ribozyme ）
HSV/VZV
无环鸟苷（NA）
病毒胸苷激酶 NA一磷酸
宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3’-OH基）
病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止
inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定
病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）
病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制试验）
(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） ——多种病毒鉴定
(3)凝胶免疫扩散试验(gel immunodiffusion test) ——多种病毒鉴定
抗原变异病毒基因的鉴定
应用：
①采取标本分离病毒为时已晚 ②目前尚无分离此病毒的方法或难以分
离的病毒 ③为证实所分离的病毒的临床意义 ④进行血清流行病学调查等
病毒＋中和抗体 病毒失去感染性
特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查
临床诊断少用
用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血 清中相应的补体抗体
特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。
(1)原代和次代细胞培养
组织 剪碎
蛋白酶
组织块
分散的单个细胞
培养基
单层细胞 (原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
1.细胞培养
(1)原代和次代细胞培养 特点：①对多种病毒敏感
②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒
1.细胞培养
(2)二倍体细胞培养
体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体 数目，可用于病毒分离和疫苗生产。
埃可病毒
CPE(-)—风疹病毒(+) 埃可病毒(-)
CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+)
(4)细胞代谢改变
细胞代谢变慢 pH变化减慢
电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），
Байду номын сангаас对一般病毒检测意义不大
鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination
1. 分离病毒的标本和作血清学诊断的标本 各有何要求？
2. 常用组织培养法有几种？各有何应用？
3. 病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？
4. 病毒性感染的快速诊断方法有哪些？
5. 预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制 剂？
6. 诊断病毒的核酸技术有哪些？
携手共进，齐创精品工程
Thank You
世界触手可及
核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序
（三）病毒数量与感染性测定
1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒） 2.蚀斑形成试验
（plaque formation test） 感染性病毒量
3.50％组织细胞感染量 （50％ tissue culture infectious dose, TCID50）
核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
呼吸道合胞病 毒感染细胞
麻疹病毒 感染细胞
②形成多核巨细胞或称融合细胞
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
体内常带有潜伏病毒
（二）病毒的鉴定
1．病毒增殖鉴定
(1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ）
①细胞变圆、聚集、坏死、溶解 或脱落等（多数病毒）；
②形成多核巨细胞或称融合细胞 （麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合 胞病毒等）；
③在培养细胞中形成包涵体 （ 狂 犬病病毒、麻疹病毒等）。
（一）病毒的分离培养
细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）
二、病毒的分离与鉴定
一般程序：
无菌处理
标本
动物接种 指标阳性 鸡胚培养 细胞培养 指标阴性
病毒鉴定 盲传2～3代
指标阴性
病毒阴性
（一）病毒的分离培养
化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）
免疫球蛋白 血清丙种球蛋白
细胞免疫制剂 IFN-α、β、γ
细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF
淋巴因子激活的杀伤细胞
——LAK细胞
核苷类药物
抗病化学制 剂
尿囊腔（allantoic cavity） 流感病毒、腮腺炎病毒
羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离
卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒
2、鸡胚培养
优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂
3.动物接种
应用：尚无敏感细胞的病毒培养
动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物
第一节 病毒感染的检查
病毒感染的检查
检测内容
电镜直接观察 病毒颗粒 光镜检查包含体 病毒抗原 分离培养 查病毒 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 查特异性抗体
原则基本与细菌相似，但应注意：
1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清
微生物及其代谢产物
生物制品
动物免疫血清
（biological products） 免疫细胞
细胞因子
防治和诊断感染性疾病
灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine）
③形成包涵体(inclusion body)
(2)红细胞吸附（hemadsorption）
病毒囊膜表面血凝素(HA) ＋
红细胞表面HA受体
腮腺炎病毒感染细胞
(3)干扰现象（interference）
风疹病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(＋)
风疹病毒？ ＋人胚肾细胞
1.细胞培养
分类
单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture）
细胞种类
原代细胞（primary cell） 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）
细胞培养瓶
单层细胞
1.细胞培养
特点：①对多种病毒敏感 ②不带异种蛋白(人源性) ③不带病毒，无致瘤潜能 ④可传50代左右
1.细胞培养
(3) 传代细胞培养
特点：①对多种病毒敏感性高 ②繁殖能力高，传代时间长 ③有致癌危险，不能用于疫苗生产
2.鸡胚培养
采用孵化9～14天的鸡胚
接种部位
绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒
数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）
电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查
包涵体
1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术
2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序
可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒
EBV早期抗原抗体 EAV核心抗原抗体 早期抗原的抗体 EAV衣壳抗原抗体
非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂
其他抗病毒药物
干扰素和干扰素诱生剂
中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗
反义寡核苷酸 干扰RNA 核 酶 （ ribozyme ）
HSV/VZV
无环鸟苷（NA）
病毒胸苷激酶 NA一磷酸
宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3’-OH基）
病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止
inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定
病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）
病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制试验）
(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） ——多种病毒鉴定
(3)凝胶免疫扩散试验(gel immunodiffusion test) ——多种病毒鉴定
抗原变异病毒基因的鉴定
应用：
①采取标本分离病毒为时已晚 ②目前尚无分离此病毒的方法或难以分
离的病毒 ③为证实所分离的病毒的临床意义 ④进行血清流行病学调查等
病毒＋中和抗体 病毒失去感染性
特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查
临床诊断少用
用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血 清中相应的补体抗体
特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。
(1)原代和次代细胞培养
组织 剪碎
蛋白酶
组织块
分散的单个细胞
培养基
单层细胞 (原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
1.细胞培养
(1)原代和次代细胞培养 特点：①对多种病毒敏感
②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒
1.细胞培养
(2)二倍体细胞培养
体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体 数目，可用于病毒分离和疫苗生产。
埃可病毒
CPE(-)—风疹病毒(+) 埃可病毒(-)
CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+)
(4)细胞代谢改变
细胞代谢变慢 pH变化减慢
电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），
Байду номын сангаас对一般病毒检测意义不大
鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination
1. 分离病毒的标本和作血清学诊断的标本 各有何要求？
2. 常用组织培养法有几种？各有何应用？
3. 病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？
4. 病毒性感染的快速诊断方法有哪些？
5. 预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制 剂？
6. 诊断病毒的核酸技术有哪些？
携手共进，齐创精品工程
Thank You
世界触手可及
核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序
（三）病毒数量与感染性测定
1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒） 2.蚀斑形成试验
（plaque formation test） 感染性病毒量
3.50％组织细胞感染量 （50％ tissue culture infectious dose, TCID50）
核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
呼吸道合胞病 毒感染细胞
麻疹病毒 感染细胞
②形成多核巨细胞或称融合细胞
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
体内常带有潜伏病毒
（二）病毒的鉴定
1．病毒增殖鉴定
(1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ）
①细胞变圆、聚集、坏死、溶解 或脱落等（多数病毒）；
②形成多核巨细胞或称融合细胞 （麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合 胞病毒等）；
③在培养细胞中形成包涵体 （ 狂 犬病病毒、麻疹病毒等）。
（一）病毒的分离培养
细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）
二、病毒的分离与鉴定
一般程序：
无菌处理
标本
动物接种 指标阳性 鸡胚培养 细胞培养 指标阴性
病毒鉴定 盲传2～3代
指标阴性
病毒阴性
（一）病毒的分离培养
化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）
免疫球蛋白 血清丙种球蛋白
细胞免疫制剂 IFN-α、β、γ
细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF
淋巴因子激活的杀伤细胞
——LAK细胞
核苷类药物
抗病化学制 剂
尿囊腔（allantoic cavity） 流感病毒、腮腺炎病毒
羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离
卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒
2、鸡胚培养
优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂
3.动物接种
应用：尚无敏感细胞的病毒培养
动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物