微生物实验(4)

鲎试验
• 材料：大肠杆菌裂解物、鲎试剂、标准内毒素、蒸馏水、 小试管、吸管、37℃水浴箱
• 实验方法： 1. 打开3支鲎试剂，每支各加入0.1ml蒸馏水溶解，并编号； 2. 将3支鲎试剂分别加入标准内毒素、蒸馏水、大肠杆菌裂解物各0.1ml， 摇匀。 3. 置37oC水浴箱，15~30min取出。
• • • • • 形态结构变异(H-O变异、L型细菌) 抗原性变异 菌落的变异(S-R变异) 毒力变异 耐药性变异
Байду номын сангаас 基因型和表型变异的比较
基因型变异 基因结构 可逆性 稳定性 变化 不或极少 稳定 表型变异 未变 可逆 不稳定
环境影响
涉及细菌数
不受影响 个别
受影响 全体
基因型？表型？
结核杆菌可发生菌落、毒力、耐药性变异。 牛型结核杆菌(有毒株H37Rv)
• 结果记录： +++ 固体 ++ 凝胶 + 粘液 未凝固
H-O变异
• • 菌种：变形杆菌 培养基：普通琼脂平板及0.1%石炭酸琼 脂平板
实验方法：
•
1. 本别在普通琼脂平板和0.1%石炭酸琼脂平板的 边缘四端点种变形杆菌； 2. 置37oC培养24h，观察菌落有无迁徙现象。
细菌的致病性
• 荚膜、内毒素、外毒素、酶
• 内毒素的检测-鲎试验 原理：鲎是海洋中的一种冷血节肢动物，其血液 中有一种特殊的变形细胞，内含凝固酶原和可凝 固蛋白。将此变形细胞冻融后制成鲎变形细胞溶 解物（即鲎试剂）。内毒素能激活其中的凝固酶 原使之变成凝固酶而使可凝固蛋白凝结成凝胶状 态。用以检查药液或注射液是否有内毒素污染。 能测出0.01~1.0ng/ml的内毒素。
• 耐药程度用某药物对细菌的最小抑菌浓度(MIC)表示。
H-O变异
原理：将有鞭毛的普通变形杆菌点种在琼 脂平板上，由于鞭毛的动力使细菌在平板 上弥散生长，菌落形似薄膜(H菌落)；若将 此菌点种在含0.1%石炭酸的培养基上，细 菌失去鞭毛，只能在点种处形成不向外扩 展的单个菌落(O菌落)。此变异是可逆的。
耐药机制
• 针对不同的药物有不同的耐药机制。
– 接合：细胞间通过性菌毛相互沟通，将遗传物质如质粒或染色质 DNA从供体菌转移给受体菌。 – 转导：以噬菌体及其含有的质粒DNA为媒介，介导供体菌耐药基 因转移给受体菌内。 – 转化：少数细菌可从周围环境中摄入裸DNA，并掺入到细菌染色 体中。 – 针对β内酰胺类抗生素：产生β内酰胺酶；青霉素结合蛋白（PBP） 的作用位点改变或产生新的对β内酰胺类抗生素不敏感的PBP； 革兰阴性细菌外膜通透性降低和主动外排系统将抗生素泵出胞外。
胆汁-甘油-马铃薯培养 13年，230次传代
BCG(减毒株H37Ra)
耐药性分类
• 细菌耐药性（drug resistance）亦称抗药性，是指细菌 对某抗菌药物（抗生素或消毒剂）的相对抵抗性。指病原 体或肿瘤细胞对反复应用的化学治疗药物敏感性降低或消 失的现象。
• 天然或突变产生的耐药，即染色体遗传基因介导的耐药。 • 质粒介导的耐药性，即细菌因获得了由质粒、噬菌体或其 他外来DNA片段，所致的细菌耐药，其所带的耐药基因 易于传播，在临床上占有重要地位。
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实验四、 细菌变异现象观察及其毒力测定
河南大学医学院 娄强
qiang_lou@126.com
目的要求
• 掌握内毒素测定的实验原理及实验方法。
• 理解细菌变异的原因，观察细菌变异现象， 加深对变异机制的认识。
细菌的变异现象