色谱常见问题问答

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气相色谱常见问题及注意事项

气相色谱常见问题及注意事项气相色谱常见问题及注意事项一、气相色谱法有哪些特点？答：气相色谱是色谱中的一种，就是用气体做为流动相的色谱法，在分离分析方面，具有如下一些特点：１、高灵敏度：可检出10-13g的物质，可作超纯气体、高分子单体的痕迹量杂质分析和空气中微量毒物的分析。

２、高选择性：可有效地分离性质极为相近的各种同分异构体和各种同位素。

３、高效能：可把组分复杂的样品分离成单组分。

４、速度快：一般分析、只需几分钟即可完成，有利于指导和控制生产。

５、应用范围广：即可分析低含量的气、液体，亦可分析高含量的气、液体，可不受组分含量的限制。

６、所需试样量少：一般气体样用几毫升，液体样用几微升或几十微升。

７、设备和操作比较简单仪器价格便宜。

二、气相色谱的分离原理为何？答：气相色谱是一种物理的分离方法。

利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。

三、何谓气相色谱？它分几类？答：凡是以气相作为流动相的色谱技术，通称为气相色谱。

一般可按以下几方面分类：１、按固定相聚集态分类：（１）气固色谱：固定相是固体吸附剂，（２）气液色谱：固定相是涂在担体表面的液体。

２、按过程物理化学原理分类：（１）吸附色谱：利用固体吸附表面对不同组分物理吸附性能的差异达到分离的色谱。

（２）分配色谱：利用不同的组分在两相中有不同的分配系数以达到分离的色谱。

（３）其它：利用离子交换原理的离子交换色谱：利用胶体的电动效应建立的电色谱；利用温度变化发展而来的热色谱等等。

３、按固定相类型分类：（１）柱色谱：固定相装于色谱柱内，填充柱、空心柱、毛细管柱均属此类。

（２）纸色谱：以滤纸为载体，（３）薄膜色谱：固定相为粉末压成的薄漠。

４、按动力学过程原理分类：可分为冲洗法，取代法及迎头法三种。

四、气相色谱法简单分析装置流程是什么？答：气相色谱法简单分析装置流程基本由四个部份组成：1、气源部分2、进样装置3、色谱柱4、鉴定器和记录器五、气相色谱法的一些常用术语及基本概念解释？答：１、相、固定相和流动相：一个体系中的某一均匀部分称为相；在色谱分离过程中，固定不动的一相称为固定相；通过或沿着固定相移动的流体称为流动相。

安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答气相色谱仪解决方案

安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答气相色谱仪解决方案在利用安捷伦气相色谱仪测测定物质时，常常回碰到一些问题，导致试验不能正常进行，下面我们来看看这些问题该怎么去解决一、有什么方法能替代液液萃取？固相微萃取、加速溶剂提取、微波萃取都是现在开展比较广泛的前处理方法二、色谱柱老化一般怎么处理好一些？1、程序升温老化效果较好，多做几个来回；2、柱子确定要接上载气；3、不要接检测器一端；4、紧密柱子zui高使用温度，应在低于此温度20度以下老化三、安捷伦气相色谱仪气相进样溶剂可以选择MtBE吗？与丙酮相比哪个更好呢？可以的，只是要看你的目标物在那个溶剂系统里面溶解性更强些，基质效应更小。

四、pgm是什么意思？Pgm是“program”的缩写，指的是这个柱子在程序升温的情况下可以短时间保持在这个温度。

五、安捷伦气相色谱仪酒类样品进样是顶空进样吗？不愿定，这个要看对酒类中什么样的物质感喜好，假如是沸点较低的挥发性有机物，那用顶空进样就可以得到较好的试验重复性。

六、安捷伦气相色谱仪标样溶于甲醇，进样时用丙酮稀释后，峰拖尾，且基线较高，有什么方法可以改善吗？是用正己烷溶解的？估量是不分流进样，可以调大隔垫吹扫的流量七、ecd一般用什么试剂溶解标样好一些？是不是甲醇乙腈丙酮一类对ecd进样不好不要用电负性较强的溶剂，甲醇、乙腈等的确要尽量少用，但丙酮还好。

八、乙酸乙酯对ecd合适吗，还有甲苯、正己烷、环己烷，虽然正己烷对ecdzui合适，但好多农药标样在正己烷溶解度低，只能溶解在强极性溶剂中，在这种情况有需要ecd检测怎么配标样比较好？对于ECD，尽量不要用电负性大的溶剂，但乙酸乙酯算中等极性，在某些情况下还是可以考虑使用的。

九、NPD是不是也对强极性试剂也是不太好？是的，特别是卤族溶剂，简单导致铷珠激发淬灭，所以尽量避开使用。

十、安捷伦气相色谱仪进样溶剂对响应影响不大吗？溶剂对响应的影响紧要体现在对目标物的溶解度上，在对色谱系统污染或损害小的基础上，选择溶解度较大的溶剂。

色谱常见问题解答

色谱常见问题解答问题1:为什么有些峰出现拖尾答:①这可能是由于进样口或色谱柱不干净,或色谱柱切割不正确.冷却进样口,关闭气流并更换或清洁进样口部件,包括进样口衬管和金密封垫.取出色谱柱.切掉一段色谱柱以清除不挥发性残留物,隔垫碎屑和密封圈碎片.这段色谱柱的长度可以是 1 英寸到 1 米,如果需要的话,可以更长.使用正确的切割工具来切割色谱柱.如果切割不好,则可能导致样品吸收.使用黄铜刷子或氧化铝粉末等软质研磨剂擦洗进样口钢质内壁.在重新安装其他部件前,要确保已将进样口清洗干净.对于5890,卸下分流出口管路并用溶剂清洗是比较好的方式.②在不分流方式下进行分析时,不分流时间过长可能导致拖尾.通常时间应在0.5 至 1 分钟范围内.③未吹扫(死)体积也可能导致拖尾.确保在进样器和检测器中色谱柱安装正确.④如果考虑色谱柱部分流失,则可以使用色谱柱前的保留间隙(制备色谱柱).如果没有降低色谱柱效率,则可以将其切割掉或更换掉,并可延长色谱柱的寿命.但要注意保留间隙和分析色谱柱的连接可能引起泄漏和样品吸收.问题2:如何改善峰形(前伸峰,拖尾峰)答:前伸峰是由于色谱柱过载.当一种或多种化合物的进样量超过色谱柱固定相容量时,可能发生这种情况.液相膜越薄,色谱柱中保留的每种化合物就越少. 这涉及到进样体积和进样中每个峰的化合物浓度.通过减少进样量,分流样品或进样浓度较低的样品,可减小进样体积.问题3:什么原因导致峰比原来大,而且出现的早答:过快,过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少,而更多的进入色谱柱;因此增加柱头压力,可降低分流比.检查分流出品的气体流量,如需调整分流比则对调整此流量.如果问题依然存在,可卸下并清洁分流口.这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起.问题4:何时需更换隔垫或衬管答:通常比较好的隔垫至少能保证100 次进样不发生问题. 当色谱特征说明衬管有问题时,需要更换衬管.影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸,进样口温度和压力,当然受压力影响的程度比较小.影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度.应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序.问题5:随着进样室温度升高,对分析物分解有影响吗答:如果化合物热稳定性差,分析物分解可能会带来一些问题.这在制药工业中比较常见.如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度,则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应.问题6:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题7:如何得知分流/不分流进样口的进样体积不超过进样口衬管反应室的容积答:如果不是多次重复进样引起精度问题,则不会经常发生这个问题.精度问题经常是由于不合适的进样体积引起.因为分流进样的进样口流速比较高,样品进出进样口比不分流快得多.同样地,由于溶剂没有时间扩散到衬管外,因此分流模式进样体积要求没有那么严格.实际上,1 微升是比较合适的,由于降低分流比对增大峰面积比增加进样量更有效.然而,不分流进样要求要严格的多,建议使用蒸汽体积计算器估算最终的扩散体积.问题8:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题9:色谱分析运行时,标样和样品的峰均随时间加宽,这正常吗答:如果保留时间没有很大区别,只是加宽的峰拖尾,可能表明有活化点.如果加宽的峰是对称的,可能是由于正常的色谱柱"损耗和流失".如果峰前伸,说明色谱柱过载.问题10:为什么在空白运行中出现了我的样品组分峰答:有可能是由于样品制备或系统清洁问题.尝试在样品和空白样品制备中使用新溶剂,并在样品清洗瓶中装上新溶剂.尝试使用新的注射器和隔垫.取出并清洗分流出口管路.在未进样情况下运行以观察仅加热色谱柱有无峰出现.问题11:什么原因导致基线不稳和干扰答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.检测器一般需要24h才能得到平衡.4. 在程序升温的时候改变载气流速(在很多情况下为正常现象).问题12:什么原因导致过多的基线噪音答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.清洗检测器,通常噪音不是突然增大而是逐渐产生.4. 污染或载气质量降低.使用高质量的载气或检查气体是否泄露.一般在换载气钢瓶的时候会突然发生.5. 柱子安装太过.可重新安装.6. 载气流速不合适.重新设定流速.7. 与MS,ECD,TCD联用时发生漏洞,查找并消除漏洞即可.8. 检测器的灯或电子倍增管老化.问题13:什么原因导致峰形改变答:1.检测器响应改变.检查气体流速,温度和设置.2.样品的浓度改变.检查并检验样品的浓度,样品的蒸发或成分的改变都可能引起.3. 色谱柱受污染.问题14:如果分离度下降,如何处理1.柱温不同.检查柱温.2.不同的色谱柱的维数和相位.核实色谱柱的特性.3.改变载气流速.4.色谱柱受污染,应用溶媒清洗柱子.5.进样器的改变.检查进样器的设置.6.样品的浓度或溶解能力的改变.试用一个不同的浓度.问题15:如果出现分裂峰,如何处理1.试着改变一下进样方法.2.改变溶媒,使其成为单一的溶媒.3.重新安装色谱柱.4.减小进样温度.问题16:如果怀疑进样器或载气被污染了,应采用何种检测1. GC在40-50℃保持8小时或8小时以上.2. 运行一个空白分析(开启GC,但不进样).3. 收集空白分析的色谱图.4. 第一个空白分析完成以后立即开始第二次,二者间隔时间不要超过5min.5. 收集第二次空白分析的色谱图,并与第一次的图谱进行比较.6. 假如在第一次时,峰图包含了大量的色谱峰,而且基线不稳定,那就暗示了毛细管柱被污染了(进样器或载气被污染).7. 假如两次色谱峰图都包含少数的峰或基线的微小漂移,那就可以假定进样器或载气是比较干净的.假如8. 假如两次色谱峰图都包含重大数量的噪音和(或)基线漂移,那通常也就表明了进样器或载气被污染了.问题17:保护柱应为多长比较有代表性的保护柱柱长为0.5-10m.虽然没有确定的长度适合所有的样品,但是以下一些建议也可以参考.假如样品相对来说比较纯净,溶质为极性,保护柱应该在0.5-1.0m之间;若样品相对来说不纯净,保护柱应该适当长些.5-10m长的主要是为了维护单一系统.长保护柱允许使用者减去大约1m而代替整个保护柱安装.问题18.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

色谱岗位基础知识问答

色谱岗位基础知识问答1、什么是气相色谱？答：用气体做载气的色谱法称为气相色谱法。

2、气相色谱分离原理是什么？答：根据气化样品中的各组分在色谱柱中的流动相和固定相间分配系数或吸附能力不同进行分离。

3、气相色谱仪主要分为哪几部分？答：进样系统、分离系统、检测系统三部分。

4、气相色谱有哪些特点？答：高性能、高选择性、高灵敏度、分析速度快、样品用量少、应用范围广。

5、气相色谱常用载气有哪些？答：氮气、氢气、氦气、氩气等。

6、什么是色谱图？答：色谱柱流出物通过检测器系统时产生的响应信号。

7、什么是基线？答：基线是指仅有载气通过检测器系统时产生的响应信号。

8、什么是死时间？答：不被固定相滞留的组分（如空气或甲烷）从进样到出现峰最大值所需的时间称为死时间。

9、什么是保留时间和调整保留时间？答：组分从进样到出现峰最大值所需的时间称为保留时间，调整保留时间就是保留时间减去死时间。

10、什么是保留指数？答：保留指数是定性指标的一种参数。

通常以色谱图上位于待测组分两侧的相邻正构烷烃的保留值为基准，用对数内插法求得。

11、气相色谱对载气有何要求？答：作为载气要求其不能与被分析样品和固定相发生反应，载气必须纯净，价格便宜容易得到，并且载气必须与所使用的检测器匹配。

12、什么是分离度？答：分离度是指两个相邻色谱峰的分离程度，它是以两个组分保留值之差与其平均峰宽值之比（R）表示：R=2（t R2-t R1）/（W1+W2）13、什么是检测器的灵敏度？答：灵敏度是指被检测物质通过检测器时，物质量变化时响应信号的变化率。

14、常用的检测器有哪几种？答：浓度型检测器：热导池检测器（TCD）、电子捕获检测器（ECD）等。

质量型检测器：氢火焰离子化检测器（FID）、火焰光度检测器（FPD）、氮磷检测器（NPD）等。

15、什么是检测限？答：检测限是指随单位体积的载气或单位时间内进入检测器的组分所产生的信号等于基线噪声信号二倍时的量，用D表示。

有关液相色谱使用的十问十答

有关液相色谱使用的十问十答01梯度洗脱的原理是什么？解答：（1）梯度洗脱是指在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，达到有效分离的洗脱方式。

梯度洗脱一般采用二元流动相，通常为水相和有机相。

（2）梯度洗脱时流动相通常由多种不同极性的溶剂组成。

梯度洗脱主要原理是通过调整不同时间段流动相的极性来调节各个组分的容量因子κ，使得在合适的时间范围内将各个组分的保留合理分配，最终实现最佳分离。

02影响出峰时间的因素有哪些？解答：（1）流动相的pH值主要是影响到分配系数而导致各组分出峰时间的不同。

（2）除此之外，影响出峰时间的因素还有很多，从分配系数、容量因子等各个方面考虑，除了与目标化合物在固定相和流动相中的分配性质有关，还与流速，压力，柱温等液相色谱仪参数有关，具体涉及下面几种因素的影响：a.目标化合物本身，具体包括分子量、结构、化合物类型、极性等；b.流动相，具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性，洗脱方式，流速等；c.固定相，具体包括固定相种类、结构、色谱柱长度等；d.分配系数与容量因子，具体包括化合物在流动相与固定相之间的分配情况，柱温等。

03怎样将目标物的保留时间提前？问题描述：用液相色谱做某物质含量测定时，保留时间太长，20min左右才出峰，有没什么方法可以将保留时间提前？解答：可以从通过改变目标组分容量因子k、缩短柱长、增加柱温等方式将保留时间提前，具体可以采取以下方法：（1）调整流动相，具体包括调整流动相构成、配比、流动相各组分极性、洗脱方式、提高流速等。

（2）调整固定相，具体包括固定相种类、结构、缩短色谱柱长度等。

（3）增加柱温，降低流动相传质阻力等。

04如何计算溶剂强度（容量因子）κ？解答：（1）容量因子指在一定温度和压力下组分在两相中分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。

容量因子反映了组分在柱中的迁移速率，又称作分配比，用符号κ表示。

（2）容量因子的具体计算公式见式（1-19）。

色谱柱常见问题及答案(三)

21、正相硅胶柱一般保存在什么溶剂里面比较合适？答：短期和长期都建议保存在正相测定所用的流动相中，一般是正己烷和极少量的异丙醇。

22、磷酸盐缓冲盐渗透力强，为什么，是因为与醋酸盐，枸椽酸盐相比，基团小吗，使用磷酸盐缓冲液与其它缓冲液相比，会使色谱柱寿命缩短多少？答：经常用磷酸盐，在其它条件差不多一样的情况下，柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。

但用磷酸盐也有不可取代的优点吧，否则不可能现在大部分人还在用。

23、反相离子对色谱法中，离子对是如何起作用的，是离子对试剂的非极性端溶解在填料的非极性端里，解离端伸向流动相，对含胺化合起离子交换作用，还是样品与离子对生成紧密的结合物，离子对试剂掩藏化合物中的极性基团，还是这种结合物是在解离与结合的动态平衡之中？答：首先离子对试剂的解离端和目标离子形成离子缔合物，降低其极性，这样就能较好的在柱子上保留。

再者，根据疏水效应理论，离子对试剂的疏水端是很容易和C18链相互作用的，这样更容易在柱子上保留，所以我认为离子对试剂作用是混合保留机制，即纯粹的反相保留和离子对保留机制共同作用。

24、四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电离后，也形成了类似N＋H(CH2CH3)3的结构N＋(CH2CH2CH2CH3)4，这种结构也能有效的与Si－O－产生较强的静电作用，此类离子对用的比较少，但它的作用仅是掩藏Si－O－吗，它对物质的保留性能有何影响，实验中发现检测胺化物时，流动相中加入磷酸缓冲盐有增加物质保留的趋势，而加入三乙胺则会降低物质的保留能力？答：前面提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂确实不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得普遍，原因是酸类极性物质很容易通过降低pH值的方法提高在反相色谱中的保留能力，降低pH可抑制酸的电离，使酸处于中性状态而与疏水碳链的作用力增强。

而碱类分析物则受硅胶基质pH上限的严重影响（以前上限是8，后来抬到10，直到最近杂化硅胶才将pH上限提到12左右）。

气相色谱常见问题及注意事项汇总

气相色谱常见问题及注意事项汇总一、无峰1、FID检测器火焰熄灭2、进样器的气化程度太低，样品未能汽化3、柱温过低使样品冷凝在色谱柱中4、进样口漏气5、色谱柱入口漏气或堵塞6、进样针的问题，取不上样品一、所有组分峰小或变小可能原因和建议措施1 进样针缺陷，使用新针2 进样后漏液，判断漏液点3分流比过大4 分析物质分子量过大，提高进样口的温度5 NPD被污染物(二氧化硅)覆盖更换铷珠6 NPD温度过高(使用或环境温度)，气体不纯，更换铷珠：避免高温使用7 检测器与样品不匹配二、前延峰1 峰伸舌多为色谱柱过载，减小进样量，使用大容量柱子2 提高OVEN，INJ温度3 增大载气流速4 掌握进样技巧5前次样品在色谱柱中凝聚，未能及时出尽6 试样与固定相载体有反应三、峰高、峰面积不重复1 进样不重复，偏差大2 其他峰型变化引起的峰错位3 基线的干扰4 仪器系统参数设定的改变，参数标准化，规范化5 色谱柱性能改变四、连续进样时灵敏度重复性差在连续进样的条件下，峰面积忽大忽小，测定精度不高，原因如下：1 进样技术差2载气泄漏或流速不稳3 检测器沾污4 色谱柱，衬管被污染，清洗衬管，用溶剂(优级纯甲醇)清洗色谱柱：更换之(如有必要)5 注射器有泄漏6 进样量超过检测器线性范围形成检测器过载五、峰拖尾1 衬管，色谱柱被污染或者衬管，色谱柱安装不当，存在死体积，注射甲烷，峰若拖尾，则重新安装2、进样器温度过高3色谱柱柱头不平用金刚砂切割4 固定相的极性指标与样品不匹配，换匹配的柱子5 样品流通路线中有冷井，消除路线中的过低温度区6衬管或色谱柱中有堆积切割碎屑清洗更换衬管，切除柱头10cm 7 进样时间过长8分流比低，增大分流比(至少大于20/1)9进样量过高，减小进样体积或稀释样品六、分离度下降1色谱柱被污染2 固定相被破坏(柱流失)3 进样失败检查泄露4 检查温度的适应性，检查衬管5 样品浓度过高，稀释，减少进样量，用高分流比七、溶剂峰拉宽1色谱柱安装失败2进样渗漏3进样量高提高汽化温度4分流比低提高分流比5 柱温低6 分流进样时，初始OVEN过高降低初始柱温，使用高沸点溶剂7吹扫时间过长(不分流进样) 定义短时间的吹扫程序八、基线向下漂移1 新安装的柱子，基线连续向漂移几分钟继续老化2 检测器未达到平衡延长检测器的平衡时间3 检测器或GC系统中其他部分有沉积物被烤出来，清洗之九、基线向上漂移1色谱柱固定相被破坏2 载气流速下降，调整载气压力十、噪音1毛细管柱插入检测器太深重新安装色谱柱2 使用ECD，TCD气体泄露引发基线噪音检查，维修气路3 FID ，NPD ，FPD燃气流速或燃气选择不当高纯燃气，调整流速4进样口被污染清洗进样口，更换搁垫，更换衬管中的玻璃纤维5毛细管色谱柱被污染切除首端10cm，用溶剂清洗色谱柱，更换之6检测器发生故障十一、提高分离度的几种方法1 增加柱长可以增加分离度。

【薄层色谱】薄层色谱四个常见问题

【薄层色谱】薄层色谱四个常见问题1.简述薄层色谱法常见问题及相应解决方案所谓薄层色谱法，是指通过利用各成分对同一吸附剂的吸附本领不同，在流动相流过固定相的过程中，连续发生吸附、解吸、再吸附、再解吸，实现各成分相互分别的吸附薄层色谱法分别法。

以下依据网上资料，对薄层色谱的一些问题进行简述：1.如何选择薄层色谱的打开剂：薄层色谱在流动相的选择具有较大的快捷性，而流动相的选择目的是使绝大部分样品能达到较好的分别，与此对应的是流动相要有适当的强度和构成。

流动相强度越大，溶质比移值越大，但很可能降低分别本领；另外单一溶剂很难分别较多而杂的混合物，依据相像相溶原理，要使用多元溶剂体系。

一般打开剂体系选择如下：依据分别样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系，通过调整溶剂比例以寻求适合比移值。

2.薄层色谱的通用显色方法：理想的显色希望灵敏度高、斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好、斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比。

在样品构成未知的情况下，通用显色方法显得成尤为紧要。

一般显色方法有便利并且不破坏样品的紫外照射法，还有通用性强的点蒸汽法，还有制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被辨别的荧光试剂法，以及对绝大多数有机物有效但却会存在破坏性的硫酸溶液。

3.怎么提高薄层色谱的点样效率：由于点样是造成薄层色谱定量误差的紧要来源。

由于定量毛细管更适合较小体积的点样；微量注射器更适合较大体积的点样。

这紧要是由于微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。

为避开不同定量毛细管间的点样误差，一般建议一块薄层板上用同定量毛细管。

但应注意更换样品时，应将毛细管用超声波或不同极性溶剂清洗干净。

由于资料有限，因而上述对薄层色谱使用过程中的一些问题概述并不全面，欢迎补充。

2.薄层色谱法在中药复方制剂中的应用薄层色谱法在中药复方制剂中的应用薄层色谱法又简写为TLC，常用于中药成方制剂中有效成分的定性辨别。

由于该方法辨别专属性强，使用设备简单，易于操作，故应用广泛，在目前的药品质量标准定性辨别中（如中国药典和国家食品药品监督管理局标准），已大大地超过了显微辨别、理化辨别和光谱辨别。

色谱答疑——精选推荐

用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题？液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏？为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响？毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么？HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？做PGS/MS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱？我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？高温毛细柱的使用寿命一般为多长？如毛细管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢复？是否可通过老化来解决？BPX70毛细柱是否可用于GC/MS分析？问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？答:关于漂移问题：1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合问: 色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题？答: 1．柱效要高2．热稳定性好3．化学惰性强具体选择应注意1．柱极性。

根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析2．柱子内径。

内径大小决定柱容量3．液膜厚度。

分析样品温度不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄4．柱长度。

柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度5．外涂层（柱体）的选择。

6．另外还有仪器型号、分析对象等因素问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？答: 1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

关于色谱常见问题与解决方法

关于气相色谱常见问题与解决方法1.进口安捷伦气相色谱（1）报警提示进样口压力不够①查看气体是否符合仪器设置要求，否则更换气体②查看进样垫是否漏气，否则更换进样垫（2）峰组分无法识别①在已知待测组分的保留时间的前提下更改保留时间②在未知待测组分的保留时间的前提下用标样进行定性确认保留时间③单个峰无法识别时采用手动峰进行积分④有双峰无法分别定义时使用分裂峰进行处理⑤对于因仪器原因造成分析谱图出现未知峰形（例如阀切换造成的基线不稳）时，又无法进行标样定性，可以对比厂家标样谱图，来确认未知组分的保留时间。

（3）谱图峰形不好①因仪器原因造成杂峰过多而对分析结果产生影响可更换内衬管或老化色谱柱或更换微量进样器②因待测样品本身杂质过多而使得谱图含有很多杂峰可增大最小面积的积分值来减少对目标组分含量的影响③峰形出现平头峰时对于采用面积百分比的积分方法的可适当减少进样量或重新设定仪器条件④峰形出现前伸峰或拖尾峰或负峰时，首先考虑进样方式有无问题并再次进样；若无问题再查看仪器设置是否正确，确保已经启动“开始”键。

（4）进样体积及分析结果单位①外标法：进样量必须准确与标样保持一致，分析结果单位为气体体积百分比；液体为质量百分数②内标标准曲线法：进样量必须准确与标样保持一致，苯甲苯为体积百分比，内标物输入“1”，样品不输入任何值；氧化物为质量百分比，内标物和样品处均输入各自称量的质量。

③面积百分比法：进样量要适当，确保谱图峰形良好即可（5）样品分析操作注意①G C-3420色谱主机的采集器无法控制电脑时，在进样之后点击电脑上的绿色图标“谱图采集”按钮即可②对于样品中氧含量过高时考虑采样球胆是否存在问题，如果球胆存在问题，应更换锡箔纸袋取样。

如果球胆没有问题，样品中氧气含量确实很高，则不宜采用色谱分析法，改用奥氏气体分析仪进行分析。

2.国产GC-2010气相色谱（1）仪器正常运行①当进样垫漏气或紧固螺丝松动时会导致样品分析不准确，当进样垫附近有“呲呲”的声音时应紧固螺丝或更换进样垫。

色谱分析法常见问题

色谱分析法常见问题一．名词解释1capacity fact：容量因子，也称分配容量或容量比，用k′表示。

其定义为：一定温度与压力下两相达平衡后，溶质在固定相和流动相中分配量（质量或摩尔数）之比.2分配系数：K,一定温度与压力下两相达平衡后，组分在固定相和流动相中浓度的比值;3extra-column effect：柱外效应，即除柱内多种因素产生的色谱峰扩张外，其它产生峰扩张的因素之和：进样系统，系统连接管，检测器及其它柱外因素引起的峰扩张。

4gradient elution：梯度洗脱，在HPLC分析中，控制流动相组成或洗脱强度随时间的改变而改变，以使极性差异较大的多个组分均能分离,同时谱峰间隔较均匀，分析时间尽量短。

5HPSEC：高效体积排阻色谱法,即以多孔性填料为固定相，依据样品组分分子体积大小的差别进行分离的液相色谱方法。

常用于肽和蛋白质的分子量分布测定及多步分离纯化程序中。

其填料一般有硅胶基质和合成高聚物基质以及高交联多糖型凝胶三种。

6ODS：十八烷基键合硅胶，又称C18. 典型的反相色谱柱，表面键和的基团为非极性羟基，适于分离弱极性，中等极性，较强极性及可电离的酸碱性有机物。

7基线：在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的连续的响应信号，一般是一条直线;8峰面积：色谱曲线与基线间所包围的面积;9半峰宽：亦称半宽度,半峰宽度,指色谱峰高一半处的宽度10标准偏差σ：正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。

正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。

标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。

σ小，分散程度小、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。

11死时间t0:流动相流过色谱柱所需时间(不保留组分流过色谱柱所需时间)12调整保留时间:t R’=t R-t0，指扣除死时间后的保留时间。

13保留时间t R—进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。

14相对保留值:(用γ或α表示,也称分离因子)两个组分调整保留值之比=t R2’/t R1’=V R2’/ V R2’; 15分离度:相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。

色谱知识35问题

一、分别说明硅藻土载体Chromosorb W AW DMCS中“W”、“AW”、“DMCS”的含义? 答:W—白色;AW—酸洗;DMCS—二甲基二氯硅烷处理。

二、对气相色谱固定液有哪些基本要求？答：1、选择性好：对不同组分有不同的溶解和解析能力，以便达到所规定的分离要求；2、极性范围广：具有多种类型的作用力，以利于分析多种不同类型的样品；3、化学稳定性佳：不与载气或样品组分发生不可逆的反应，以免出现固定液变质或干扰分析的现象；4、液态粘度小：组分能在其中快速完成溶解和解析过程，以便实现高效快速分析之目的；5、热稳定性高：有较宽的工作温度范围，能承受较高的工作温度和较低的凝固点，以便完成对沸程较宽样品的分离分析工作；6、附着力强：能在载体表面上形成一层均匀的不易脱落的薄膜，以利于提高柱效率；7、蒸汽压低：在使用条件下流失少，以便获得稳定的基线和较长的柱寿命；三、制备色谱填充柱时，应注意哪些问题？答:A.选择合适的固定液和担体,注意合适的配比;B.根据分析样品性质选择合适的柱管材质,如不锈钢,玻璃,聚四氟乙烯;C.充分清洁柱管内壁,必要时对内壁做钝化处理;D.配置合适浓度的固定液使其能在适量的担体上均匀分布;E.充分干燥配置好的填料;F.事先计算好柱体积,以便验证柱子装填是否紧密;G.注意装好柱端的玻璃棉(或不锈钢网)后再连接到真空泵;H.确定装填紧密后,在通载气状态下对柱子进行老化(注意:检测器端不连接).四、气相色谱分析，柱温的选择主要考虑哪些因素？答：1、被测组分的沸点2、固定液的最高使用温度；3、检测器灵敏度；4、柱效。

五、气相色谱分析的保留值是何含义？答：保留值是表示试样中各组分在色谱柱中的停留时间的数值，通常用时间或用将组分带出色谱柱所需载气的体积来表示。

其表示了溶质通过色谱柱时被固定相保留在柱内的程度。

六、何谓气相色谱的相对保留值？相对保留值有何意义？答：以一种物质作为标准，而求出其他物质的保留值对此标准物的比值，称为相对保留值。

色谱技术答案

1若想建立某中药的醇提液的RPHPLC 指纹图谱，是采用等度洗脱还是梯度洗脱？简述其分析条件的优化。

答：1系统梯度洗脱由于中药的醇体液成分复杂，样品的K （容量因子）范围宽，不能用等度洗脱，梯度洗脱可以使不同K 值的样品成分洗脱时随流动相的连续改变而趋于同一K 值，谱峰尖锐而对称，分离度改善，缩短分离时间，降低最小检测量和提高分离精度，从而让所有成分均出峰2．优化思路：梯度期间，强溶剂的浓度B%增大，优化梯度条件起始B%，终止B%，梯度时间t 和溶剂B 的种类，因此在RPHPLC 指纹图谱建立时，考虑流动相种类，流动梯度范围和梯度斜率三方面。

（1）流动相种类的选择：RPHPLC 中常用甲醇，乙腈，四氢呋喃等有机溶剂与水混合，流动相种类由样品分离难易程度决定。

MeoH 、CAN 、THF 洗脱强度逐渐增高，样品易分离时采用溶剂优化法选择流动相和水的最佳比例，调整K 值，使其在1—20(t R :3—35min).（2）梯度范围：即起始和终止B%一般为5%--100%（t R ：30min ）若谱图前段空白可提高初始B%，末端空白需降低终止浓度，可节省时间缩小梯度范围使所有组分短时间从柱中洗脱出来（3）梯度斜率：根据初步分离的谱图，峰密集部位可降低斜率，减小强溶剂B%变化速度，峰疏散部分提高梯度斜率，时间短2，根据Van deemter f 方程在液相色谱中的表现形式，分析在HPLC 中影响柱效的因素及实验条件的选择。

答：Van Deemter 方程在液相色谱中表现形式为:(1) 影响柱效的因素：a. 涡流扩散项：为避免涡流扩散而引起的峰扩张，需用小而均匀颗粒填充颜色等等b. 纵向扩散项：HPLC 中Dm 仅有Gc 的10-4—10-5倍，该项系忽略。

c. 固定相传质阻力项：降低固定液膜厚度，加快组分在固定相中的扩散d. 流动相传质阻力项：组分分子随流动相进入色谱柱时，靠近固定相颗粒的部分分子流速较慢，中央分子流速较快，而引起峰扩张，要降低该项需减小dp 和u ，增大Dm.e. 流动相滞留传质项：固定相的多孔性使部分流动相滞留于固定相某一局部，流动相中组分分子必须自流动相扩散到滞留区，才能与固定相进行质量交换，为降低该项，应采用颗粒小，微孔浅，孔径大的固定相。

常见色谱分析问题解疑

常见色谱分析问题解疑‎一、产生前沿和拖‎尾的原因一般有哪些？‎（1）拖尾：1.‎干扰峰，优化条件分离‎2 色谱柱塌陷，更‎换色谱柱 3 流动相‎p H不合适，调节pH‎值 4 管路没有接好‎，存在较大的死体积，‎可以重新接一下（2‎）前沿：1 溶剂选‎择不合适，选择合适的‎溶剂2 样品过载，‎降低进样量3 柱温‎太低，升高柱温4 ‎色谱柱损坏，更换色谱‎柱5 干扰峰，优化‎色谱条件分离可能的‎问题：1.柱子问题2‎.流动相不恰当3.定‎容样品的溶剂不合适‎产生峰前沿的原因：柱‎过载，柱头塌陷，溶剂‎选择不对产生峰拖尾‎的原因：存在杂质未分‎开，柱污染，柱子选择‎不对。

拖尾峰与柱子‎有关，可能是过载，稀‎释样品再做，或换新柱‎做吧一般产生托尾峰‎往往是有机性相近杂质‎没有分开，可以优化分‎析方法，或更换柱子试‎一试；也可能由于柱子‎使用时间太久柱效下降‎出现塌陷等原因；再有‎也会根样品本身性质有‎关，基团需要流动相中‎添加能与之结合优化峰‎形的化学物质，要根据‎具体情况而定。

柱子可‎能污染了吧，溶剂也可‎能有，或柱效下降。

‎图谱前沿和拖尾的原因‎主要是流动相选择不合‎适，可以相应调整流动‎相的极性，或者适当加‎入酸来调整，可以得到‎较好的改善。

一般来讲‎，酸碱在流动相中对于‎前沿和拖尾影响较大。

‎柱前沿是可能因为柱‎超载，拖尾是可能因为‎样品被污染，选择合适‎的流动相，调节好PH‎能够改善这以情况。

‎二、怎样避免拖尾和前‎沿，有何措施？选择‎合适的色谱条件和色谱‎柱，就可以避免峰拖尾‎和前沿在处理样品时‎选择合适的流动相最为‎重要，所以在实验设计‎时充分了解所要分离的‎物质的化学性质和溶解‎度、极性等相关问题，‎摸条件时找到较好的流‎动相，是避免拖尾峰出‎现的最好方法。

避免‎拖尾和前沿主要要控制‎好溶质的量，每种色谱‎方法有一定的线性范围‎，超过这一范围不对称‎峰则会出现。

要看是‎由于什么原因造成的：‎分析物本身的性质：‎这类问题首先要选择合‎适的色谱柱，另样品的‎前处理非常重要，部分‎样品在分析过程中分解‎，那肯定是拖尾的。

色谱常见十四种使用问题的详细解答

色谱常见十四种使用问题的详细解答问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?( 答：关于漂移问题：1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?答：1、柱效要高2、热稳定性好化学惰性强具体选择应注意1、柱极性。

根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析2、柱子内径。

内径大小决定柱容量3、液膜厚度。

分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄4、柱长度。

柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度5、外涂层(柱体)的选择6、另外还有仪器型号、分析对象等因素问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?答：1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子( 问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏?答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。

2、理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定3、柱子的极性。

热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。

4、噪声。

热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加.5、柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。

质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响?答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：1、提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。

色谱100问

色谱100问色谱柱100问1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。

反冲后是正者用，还是反着用。

具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。

答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。

反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。

我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。

2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相，在调整梯度的时候发现，刚开始用60%乙腈，RT为2.5分钟，调到40%乙腈，RT没有变化，30%也没有变化，一直调到20%的时候，RT突然变到了约13分钟，请问这是什么原因?我用的是离子交换柱。

答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。

譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。

因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。

具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。

如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。

用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。

特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。

光学色谱分析化学问答题

1.各类基本类型色谱的分离原理有何异同？1）分配色谱法：利用被分离组分在固定相或（和）流动相中的溶解度差别，即分配系数的差别而实现分离。

包括气液分配色谱法和液液分配色谱法。

（2）吸附色谱法：利用被分离组分对固定相表面吸附中心吸附能力的差别，即吸附系数的差别而实现分离。

包括气固吸附色谱法和液固吸附色谱法。

在硅胶液固吸附色谱中，极性强的组分吸附力强。

常见化合物的吸附能力有下列顺序：烷烃＜烯烃＜卤代烃＜醚＜硝基化合物＜叔胺＜酯＜酮＜醛＜酰胺＜醇＜酚＜伯胺＜羧酸。

（3）离子交换色谱法：利用被分离组分离子交换能力的差别即选择性系数的差别而实现分离。

按可交换离子的电荷符号又可分为阳离子交换色谱法和阴离子交换色谱法。

（4）分子排阻色谱法：根据被分离组分分子的线团尺寸，即渗透系数的差别而进行分离。

2.说明保留因子的物理含义及与分配系数的关系。

为什么保留因子(或分配系数) 不等是分离的前提？分配系数K：在一定温度和压力下，达到分配平衡时，组分在固定相与流动相中的浓度之比。

保留因子k：在一定温度和压力下，达到分配平衡时，组分在固定相和流动相中的质量之比。

分配系数K，容量因子k与保留时间之间有如下关系：k＝＝＝K＝，t''R＝k t0。

上式说明容量因子的物理意义：表示一个组分在固定相中停留的时间（t''R）是不保留组分保留时间（t0）的几倍。

k＝0时，化合物全部存在于流动相中，在固定相中不保留，t''R＝0；k越大，说明固定相对此组分的容量越大，出柱慢，保留时间越长。

色谱过程是组分的分子在流动相和固定相间多次分配的过程。

若两组分的分配系数存在微小的差异，经过反复多次的分配平衡，使微小的差异积累起来，其结果就使分配系数小的组分被先洗脱，从而使两组分得到分离。

色谱分离的前提是分配系数或保留因子不等。

3.气相色谱定量分析的依据是什么？为什么要引入定量校正因子？常用的定量方法有哪几种？各在何种情况下应用？答：气相色谱定量分析的依据：组分进入检测器的量(质量或浓度)与检测器的响应信号(峰面积或峰高)成正比。