eNOS介导的槲皮素抗心肌细胞缺氧复氧损伤保护机制研究

eNOS介导的槲皮素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤保护机制研究

目的:槲皮素(Quercetin,Que),是日常食物存在的黄酮醇类物质,已经有大量的实验证实槲皮素能够改善多种原因引起的内皮功能障碍,抑制氧化应激反应和炎症反应,但目前在心肌细胞缺氧复氧损伤中,仍然缺乏实验数据证实槲皮素预处理与心肌细胞的NOS/NO信号通路的潜在关系。本课题拟构建体外心肌细胞缺氧复氧模型,深入探讨缺氧复氧损伤后槲皮素预处理对H9c2心肌细胞中

NOS/NO信号通路的影响以及其心肌保护作用机制。

进一步探讨NOS/NO信号通路中eNOS、iNOS和n NOS三者扮演的角色,阐述槲皮素可能的作用机制。方法:选取H9c2心肌细胞作为实验对象,构建缺氧复氧损伤(A/R)模型,模拟体内缺血再灌注(I/R)模型。

MTS比色法检测各实验组细胞存活率,分光光度法检测各实验组培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用Western blotting(免疫印迹)检测eNOS、iNOS和n NOS及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,分光光度法检测细胞内一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,流式细胞仪测定各实验组细胞内活性氧(ROS)的水平以及细胞凋亡程度。结果:1.槲皮素预处理后,Que+A/R处理组较A/R处理组细胞培养基中LDH活性显著下调,细胞存活率显著上调并有剂量依赖性,20μM槲皮素预处理组最显著;2.Western Blotting 法检测eNOS蛋白较A/R处理组显著上调,iNOS蛋白较A/R处理组显著下调;3.分光光度法检测细胞内NO的含量,较A/R处理组显著减少;4.与A/R组比较,20μM Que+A/R组中MDA含量减少,SOD和GSH-Px含量增加,细胞内ROS的含量显著降低,Bcl-2蛋白表达显著上调,最终细胞凋亡程度显著降低;5.与Que+A/R组比较,eNOS特异性抑制剂L-NAME的加入能显著减弱槲皮素抗心肌细胞缺氧复氧损

伤的保护作用,Que+L-NAME+A/R与Que+A/R组各项数据差异均具有统计学意义。

结论:槲皮素抗A/R损伤的保护作用与eNOS/NO信号通路有关,至少部分地依赖于eNOS表达程度的增加。