安捷伦液相色谱柱的选择与保养
液相色谱柱的保养与维护
液相色谱柱的保养与维护色谱柱的用法寿命，除了与所分析的样品、流淌相及用法频率有关，最主要的是与日常的维护疏远相关。
色谱柱的用法寿命，主要是按照柱效和柱压两个指标来衡量，假如一支色谱柱柱效太低，或者柱压太高，通常被认为该色谱柱的用法寿命已经结束。
因此，延伸色谱柱用法寿命的关键，是消退引起柱效下降和柱压上升的因素。
可通过以下几点完成色谱柱的日常维护工作。
1.流淌相的pH因为硅胶基质的填料中存在Si——C和Si——O键，流淌相超过其pH范围将会导致硅胶基质溶解和键合相碳链断裂，使柱效下降，寿命变短。
因为流淌相的pH控制不当而对色谱柱造成的伤害，通常很难使色谱柱复原。
因此，必需仔细对待，严格控制流淌相的pH。
2.去除样品和流淌相中的固体颗粒样品和流淌相中含有的固体颗粒物质，会阻塞色谱柱筛板，筛板被堵不仅会引起柱压上升，而且还会引起柱效下降，由于筛板的阻塞会引起液流不均，导致色谱峰形拖尾、变宽，甚至浮现双峰，从而使柱效下降。
因此，建议用法超纯水和色谱纯试剂，在分析前对样品举行超声、针筒过滤，流淌相过0.45um滤膜，尤其是流淌相中加入了缓冲盐(如NaH2PO4等)，必需过滤。
3.用法庇护柱或在线过滤器样品和流淌相经过滤后，并不能彻低消退固体颗粒物质，由于泵的磨损、密封圈和管路的老化，也会产生固体颗粒物，这些固体颗粒被流淌相带入色谱柱，阻塞筛板，导致柱压上升、柱效下降。
庇护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱筛板径相同，因此，可以阻挡固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的阻塞。
因为柱压上升在分析故障中占很大的比例，因此，除了对样品和流淌相举行过滤外，建议在色谱柱进样端加上庇护柱或在线过滤器。
4.正确用法缓冲盐缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流淌相保持一定的离子强度和pH，削减拖尾。
缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此，缓冲盐用法不当会致其析出，阻塞填料基质上的空隙，使填料板结，柱压升高；同时，妨碍了基质上键合的碳链自由伸展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。
液相色谱柱的维护与保养
液相色谱柱的维护与保养
液相色谱柱的维护与保养非常重要，可以延长柱的使用寿命并保证分离效果的稳定性。
以下是液相色谱柱的维护与保养的一些建议：
1. 保持柱的洁净：在使用结束后，及时用纯水和有机溶剂洗净色谱柱。
可以采用逆向流动的方法，即用纯水从柱底往上流动直到洗净。
避免使用酸碱溶液以及有机溶剂中的含有杂质的溶液来清洗，避免杂质残留。
2. 避免干燥：柱在储存或者不使用时要避免干燥。
可以用保湿的方式，例如在储存时使用密封塑料袋或保湿剂。
避免长时间暴露在空气中，避免干燥引起的柱损坏。
3. 正确使用柱：避免使用超过柱最大压力或流速的方法进行色谱分离，这会导致柱壁破裂或分离效果恶化。
遵守柱的使用说明和规格。
4. 定期检查：定期检查柱的使用情况，例如检查是否有柱壁表面损坏或吸附物的形成。
如果发现有问题，应及时更换色谱柱。
5. 柱的再生：某些类型的液相色谱柱可以通过柱的再生来延长使用寿命。
具体的再生方法可以参考柱的使用说明书或与供应商咨询。
6. 注意避免柱受到冲击：在搬运和使用过程中要轻拿轻放，避免柱受到冲击造成损坏。
总之，正确的维护与保养可以延长液相色谱柱的使用寿命并保证其分离效果的稳定性。
根据柱的材质和类型，还可以采取适当的措施进行再生以延长柱的使用寿命。
液相色谱柱的选择与使用
液相色谱柱的选择与使用
目录 一、液相色谱柱的选择 1、 分离模式的选择 2、 C-18柱的性能影响因素 3、 保留值与pH的关系 二、液相色谱柱的安装 1 、液相色谱柱的结构 2、 色谱柱的安装 三、液相色谱柱的使用 1 、样品的前处理 2 、流动相的配制 3、 色谱柱的平衡 4、 流动相流速的选择 四、 分析条件调整的影响 五、液相色谱柱的维护
• 可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 —甚至很小的 0.05–0.25 个pH变化单位.
保留值与pH的关系
pH变化： 0.2个pH(7.0~7.2) 保留时间改变： 1.2分钟 (13.6~14.8分钟)
保留时间随pH 改变不明显
保留时间随pH改变 不明显(酸性环境中)
保留时间
保留值与pH的关系
•碳覆盖率 •封端
•硅胶纯度 •色谱柱尺寸 •颗粒形状 •粒径 •表面积 •孔径
C-18柱的性能影响因素：色谱柱物理性质
硅胶纯度 • 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度
色谱柱尺寸 • 填料床的长度和内径
颗粒形状 • 球型或不规则型
粒径 • 平均颗粒直径, 通常3-10µm
表面积 • 颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示
封端 • 键合步骤之后, 用短链将裸露的硅羟基键
合后封闭起来
C-18柱的性能影响因素：键合类型
CH3
键合类型对色谱分离的影响 ： O Si
单齿键合：
CH3
OSi
CH3
提高传质速率, 加快色谱柱平衡
O Si CH3
CH3
OSi
CH 3
双齿键合：
O Si
增加色谱柱稳定性, 增加色谱柱的载
安捷伦的色谱柱的介绍及选择
安捷伦的色谱柱的介绍及选择安捷伦（Agilent）是一家全球领先的科学仪器和化学分析解决方案提供商，其色谱柱产品在色谱分析领域具有广泛的应用和卓越的性能。
在选择安捷伦色谱柱时，需要考虑样品类型、分析目标、分析条件和仪器兼容性等因素。
本文将详细介绍安捷伦色谱柱的特点、类型和选择要点，以帮助读者更好地了解和选择适合自己实验需求的色谱柱。
安捷伦色谱柱主要有液相色谱柱和气相色谱柱两大类，涵盖了分子筛柱、反相柱、离子交换柱、氨基酸柱等各种类型。
以下是对其中一些常用色谱柱类型的详细介绍：1.反相柱（C18、C8等）：反相柱是液相色谱柱中应用广泛的类型之一，它的固定相通常是疏水性的烷基链（如C18、C8等），适用于非极性或弱极性化合物的分离。
安捷伦的反相柱具有较高的分离效果和使用寿命，能够提供良好的保留和分辨能力。
2.离子交换柱：离子交换柱可以根据溶液中离子的电荷和大小进行选择，可分为阳离子交换柱和阴离子交换柱。
它们广泛应用于药物分析、环境分析和生物样品分析等领域。
安捷伦的离子交换柱具有良好的耐酸碱性和高分辨能力，可有效分离带电离子和无机离子。
3.氨基酸柱：氨基酸柱是一类特殊的反相柱，其固定相是在C18固定相的基础上修饰上了特殊的萘乙酰氨基酸萃取相。
这种柱材具有特异性和选择性，特别适用于氨基酸的分离和分析。
4.手性柱：手性柱是用于分离和分析具有镜像异构体的化合物。
安捷伦色谱柱的手性柱具有优良的立体选择性和分离能力，适用于手性药物、香精香料、农药等领域的研究。
在选择安捷伦色谱柱时，需要综合考虑以下几个方面：1.样品特性和分析目标：根据样品的性质和分析目标确定使用的色谱柱类型。
如反相柱适合非极性和弱极性化合物的分离，离子交换柱适用于阳离子和阴离子的分析。
2.分析条件和分离效果：考虑分析条件（如流速、温度等）对色谱柱性能的影响。
根据分析条件来选择具有适当相容性和稳定性的柱材。
3.样品矩阵和交叉污染：如果样品矩阵复杂或存在交叉污染问题，可以选择具有更好选择性和保持高分辨能力的色谱柱。
液相色谱柱的使用和维护保养
液相色谱柱的使用和维护保养液相色谱柱是一种广泛使用的分离技术，可用于分离和测定复杂混合物中的组分。
由于液相色谱柱具有精确分离、操作简便、分离效率高等特点，因此，越来越多的实验室都开始使用该技术。
在使用液相色谱柱时，正确的维护保养非常关键。
本文将介绍液相色谱柱的使用方法和维护保养技巧，以便确保您的分离实验能够得到最佳的结果。
一、液相色谱柱的使用1. 准备工作使用液相色谱柱之前，必须先进行预备工作。
这包括：清洗和准备液相色谱柱以免携带有污染物。
准备需要分离和测定的样品。
准备适当的流动相。
流动相必须符合样品的性质。
液相色谱柱的流动相应该是无色的，纯净的水或相应的缓冲液，并具有必要的缓冲能力。
根据柱的尺寸来选择适当的样品注射量。
2. 柱的装配通常情况下，液相色谱的柱是由管状的柱壳、填充柱节、柱端固定件和柱段之间的密封件组成。
在对柱进行装配的时候，对组件应该加强检查以保证每一个元件的质量。
柱被放置在可控压力的色谱装置中，直到达到设定的温度，流动相通过柱床高度。
在样品通过柱床的过程中，要确保流动相的速度恰好足够将所有的组分都分开并在规定的时间内溶出。
3. 分析过程准备工作完成后，可以开始进行样品的分离实验。
在整个过程中，以下措施应予以注意：在样品从样品室进入色谱柱之前，流动相必须在柱中流动。
否则，在注入样品时，将有空气囤积在柱床中，会在透射检测器处产生噪音。
更换液相色谱柱的流动相时需要小心，因为对于一些化学品来说，即使是微量的杂质也会对结果产生影响。
如果发现柱床粘住或困住，不应使用力量来拉动柱子，而应该使用相反方向的流动相，以使样品回到某一个位置，并反向流动一会，这样可以避免样品损坏柱子床。
二、液相色谱柱的维护保养液相色谱分析的成功与否，除了预备工作和分析过程外，还与样品的制备、取样位置以及样品进入液相色谱柱中的流动相的条件等因素有关。
因此，经常做好液相色谱柱的保养工作，可以有效防止柱子损坏，延长其寿命并保证实验结果的准确。
安捷伦液相操作维护保养规程
安捷伦液相操作维护保养规程一、安全操作规范：1.操作前必须穿戴个人防护装备，包括实验服、手套、护目镜等。
2.在操作液相设备时，要保证周围环境干燥、清洁无尘。
3.不得将有机溶剂直接排放到下水道中，应按照相关规定进行处理。
4.避免与有机溶剂发生直接接触，防止引起火灾和爆炸。
在操作过程中要小心避免溢漏。
二、操作准则：1.严密密封液相系统，避免泄漏。
2.在使用气溶胶短管时，注意定期更换新管，并将废弃管进行妥善处理。
3.当不使用设备时，要关闭电源，并将设备清洁干净，避免灰尘和污渍。
4.设备放置时要水平摆放，不可放置在湿润或有机溶剂易波及的地方。
5.使用过程中，要定期检查设备的密封部分是否正常，如有破损应及时更换。
三、操作流程：1.根据实验要求，合理选用相关仪器设备，并调整好设备的参数。
2.操作前先进行设备的预热，保持设备恒定的温度。
3.将待测样品注入进样装置中，确保样品完全进入进样管。
4.打开进样阀，将样品注入到色谱柱中，观察色谱曲线并记录相关数据。
5.实验结束后，使用合适的溶剂将色谱柱进行洗脱，防止发生堵塞现象。
6.将设备进行清洗，除去可能残留下来的污物。
7.对设备进行维护检查，保证下次使用时设备处于良好状态。
四、设备保养：1.定期检查设备的电源线和数据线，如有破损应及时更换。
2.定期清洗仪器的进样口和进样管，防止堵塞。
3.对仪器设备进行定期润滑，确保设备的正常运转。
4.定期校准仪器的测量参数，确保仪器的准确性。
5.确保仪器设备的周围环境干燥，避免设备受潮。
五、事故及处理方法：1.发生溢漏情况时，立即关闭设备，及时清理溢漏物，并通风排气。
3.发生火灾或爆炸时，迅速撤离现场，并使用灭火器等灭火工具进行灭火。
六、员工培训和操作技能提升：1.新员工入职时，进行液相操作培训，包括安全操作规范、设备操作流程等方面的培训。
2.定期组织员工进行操作技能培训和考核，提高员工的操作技能和专业知识水平。
3.鼓励员工参加相关培训和学习，提升专业水平和操作技能。
分析检测中液相色谱柱的选择及使用维护
分析检测中液相色谱柱的选择及使用维护摘要：随着色谱柱技术的不断创新发展，色谱柱填料的种类越来越丰富，分离模式以及方法得到的提高和改进，促进了高效液相色谱法在各领域分析中更为广泛的应用。
高效液相色谱柱是检测分析工作中的重要工具，要更加重视色谱柱的使用与维护。
色谱柱正确的使用与维护是分析检测结果准确性的保障，同时可以延长柱寿命，有利于减少分析检测的成本。
本文将系统介绍分析检测中反相色谱柱的选择和使用维护的注意事项。
关键词：液相色谱法；色谱柱；分析；选择；使用维护引言高效液相色谱仪是一种高压、高速、高效、高灵敏度的检测仪器，特别适用于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大的有机物的定量和定性分析，广泛应用于医药、环保、生命科学和食品安全检测。
但在实际操作中，受目标探测器含量低和样品组成复杂的影响，会出现测试失败、测试错误、检测时间长等现象。
本文通过剖析高效液相色谱法检测常见问题，为检测分析提供技术要点和控制措施，并对问题检测结果进行全面分析，以提高高效液相色谱检测技术水平。
1液相色谱法概述高压泵产生液体水柱，最后使用高压泵形成五色流动色谱，使用当前色谱。
此外，高效分光光度计还有一个关键优势:通过与其他仪器连接，通过分离样品和监测步骤，可以大大提高样品的质量和效率。
因此，高效的色调范围技术具有很大的优势。
简而言之:只有更好地了解和理解高效频谱形成技术的基础，才能最大限度地发挥应用高效频谱颜色技术的价值，这对促进我国石油工业的综合力量至关重要。
因此，技术人员必须充分注意这一点。
2色谱柱填料的结构类型色谱主要填充“无孔”、“完整”和“多孔曲面”孔结构类型。
未填色填满样式是没有孔的表面。
与其他填充相比，避免溶解元和物质在孔内扩散可以提高光谱柱的效果，而光谱分离效果更强，因为它比表面小，因此相对较小。
因此，在分析液体色谱时很少应用无孔色谱柱。
完全填充剂是在多孔制造过程中生产的有机硅，多端口填充材料的应用有助于提高固相溶液分子的保存和分布。
安捷伦液相色谱仪故障分析及解决方法 液相色谱维护和修理保养
安捷伦液相色谱仪故障分析及解决方法液相色谱维护和修理保养安捷伦液相色谱仪是一种应用特别广泛的有机多组分化学分析仪器。
它具有分别效能高,分析速度快,样品用量少,可进行多组分测量等优点。
安捷伦液相色谱仪在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。
它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数。
一种对混合气体中各构成分进行分析检测的仪器。
但是由于人员素养样品的性质以及仪器本身等方面的原因,常常显现这样那样的分析故障严重影响了正常的生产分析。
所以把握一种精准、快速的排出仪器故障的方法特别紧要。
安捷伦液相色谱仪的故障分析：1、什么原因导致液相色谱仪压力过高？可能的原因：1.排气阀里面的 PTFE 滤蕊堵塞。
2.压力上限设置太低。
3.压力传感器堵塞。
安捷伦液相色谱仪建议的措施：1.打开排气阀。
假如压力仍旧很高，则更换排气阀内的 PTFE 滤芯。
2.查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。
3.检查系统内的堵塞部位。
（如下所述）要检查是否堵塞，请接受隔离系统的方法来排出故障：将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。
①. 假如压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装 ZDV 接头。
A 假如压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。
请进行更换。
B 假如压力仍旧很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路）。
②. 假如取杰出谱柱后压力仍旧很高，则检查从排气阀到自动进样器的管路。
假如压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到旁路状态。
A 假如压力正常，则说明自动进样器堵塞。
请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。
B 假如压力仍旧很高，则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管线。
液相色谱柱日常使用和维护色谱柱的正确使用和维护特别紧要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
安捷伦液相色谱仪的安装 液相色谱如何做好保养
安捷伦液相色谱仪的安装液相色谱如何做好保养安捷伦液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分构成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工获得正确牢靠的试验安捷伦液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分构成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工获得正确牢靠的试验数据的必经之路。
第一：安捷伦液相色谱仪安装条件：一、环境要求：1、温度：15～30℃2、日温差：±3℃3、相对湿度：20%～85%4、地面：平滑、不易起尘5、安装场所：无震动、四周无腐蚀性介质、无电磁场干扰，操作台纵深尺寸60cm以上，避开空调直吹风，避开直射阳光。
6、推举液相色谱仪工作台：长2米、宽0.8米，承重点于80公斤。
建议离墙距离0.3米以上。
一般在安装的实际空间上，还要考虑：与其它仪器间距大于60cm，仪器后面板应留有不小于50cm的空间，前面板至操作台边缘距离不小10cm；仪器安装平稳坚固，接入了UPS电源，仪器外壳与地线连接。
二、电源要求：1、单相交流220V，（+5%～—10%），50～60Hz，有单独的良好接地。
2、若电压不稳，需配置稳压电源，功率大于2.5千瓦。
3、准备1个合格的万用接线板，总数不小于5个扁平三角接线插座。
4、断电续电本领：断电情形，设备能持续运行1小时以上。
5、接地：安装场所应有牢靠接地线装置三、溶剂要求：1、二次重蒸馏水，1000毫升以上（建议用0.45微米水相滤膜过滤）。
2、乙腈或甲醇（色谱纯或优级纯），1500毫升以上（建议用0.45微米有机相滤膜过滤）。
四、操作系统：WindowsXP操作系统硬件要求：内存不低于2G；硬盘不低于160G；配有网络适配器（2个网卡）；带光区驱动第二、安捷伦液相色谱仪安装方法：1、液相色谱柱的结构：a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头接受低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹（国内外已规范化）。
安捷伦7890色谱柱使用与维护
一、ECD使用时的开机及关机步骤1.开机步骤：设置检测器的气体（Makeup气的流量及种类）把INJ\COL\DET的温度设置在室温按[Start GC]开始控制等到ECD池中的空气完全被Makeup气和载气所代替时设置检测器的温度及current等到DET的温度到达设定值后，等待10min，然后设定INJ和COL的温度等到基线平稳后，调零，进样。
2.关机步骤：应先降INJ和COL的温度到室温然后等待5min后再降DET的温度待DET的温度降到室温后，继续通载气及Makeup气一段时间（10min） 最后关闭系统（Systemoff）二、柱子及ECD的老化方法1.柱子的老化：用程序升温老化柱子，老化柱子时要把ECD封上，可以通上30ml/min的Makeup气2.ECD的老化方法：柱子的选择：空心无液相的柱子为首选In case of a capillary column :A fused silica tube (option : for instance FQ tube 0.2 mmID⋅2 m,P/N 221-25964-02) is conveniently used.In case of a packed column :Pipe MF-MF (option:P/N 201-48555-**, -** is the length. For instance if the pipe is 30 cm,温度的设定：柱温: 340°C (empty column)，Tmax－30度（一般的柱子）进样口: 340°C检测器温度: 340°C流量的设定：同分析条件检测器的设定：Range=1 , Current=1 nA老化时间：12hr三、注意事项：1.应用液相量少的柱子，尽量不用填充柱2.所使用的柱子必须经过充分老化，老化柱子时不要接检测器3.使用前充分老化进样口4.所用气体的纯度必须达到标准（>99.999）5.定期老化ECD6. DET的温度设置必须比柱温高20度，但不能超过350度7. 在进行连续分析时，最好采用柱温较低的分析条件8.当长期不用ECD时，用堵头堵塞柱接口，Makeup气进口，VENT口9.样品尽量处理干净，不要用强亲电的溶剂，如氯仿作为样品溶剂有关色谱柱的老化－－气相色谱柱在使用前进行老化是很重要的一步，老化得好坏将涉及将来您的色谱柱的使用寿命的长短以及柱对样品的分离的好坏。
安捷伦的色谱柱的介绍及选择
8
Agilent LC colmns
4
Zorbax主要的键合相
Zorbax硅胶颗粒
StableBond
二异丙基 二异丁基键合
Rx-C18/Sil
二甲基十八烷基硅烷
EclipsePlus/XDB
二甲基键合 双封端
Bonus-RP
酰胺嵌入 三封端
Extend-C18
双齿键合 双封端
SB-C18 二异丁基-C18
行业领先的峰形 更好的专利技术处理硅 胶基质 改进的双封端技术：改 进的键合试剂及键合过程
更加严格的质控标准，批与批 之间更加好的重现性
不同粒径 – 1.8, 3.5, 5um
最高的分离效率 C18，C8，PAH, 苯基-己基
•致密键合 •双封端 •超纯坚固的ZORBAX硅胶 •宽的 pH使用范围2-9
ZORBAX Rx-Sil (1987) 由于金属含量低, 硅羟基pKa高, 碱性化合物不发生拖尾
二氧化硅 Zorbax Rx-SIL Zorbax SIL Nucleosil Hypersil nd = 未检出
金属浓度（ppm) Na K Mg Al Ca Ti Fe Zr Cu Cr Zn 10 < 3 4 1.5 2 nd 3 nd nd nd 1 17 nd nd 57 9 32 21 88 < 1 nd 88 56 N/A N/A nd 130 57 76 nd N/A N/A nd 2900 N/A 40 300 38 65 230 N/A N/A N/A N/A
Agilent 液相色谱柱
高通量和LC/MS柱
Zorbax 高通量柱，LC/MS 色谱柱 Zorbax 快速分离柱 Zorbax 快速分离高通量柱 Zorbax 溶剂节省色谱柱 Zorbax 微径色谱柱 Zorbax 毛细管柱和纳流柱
安捷伦1260高效液相色谱仪维护保养规程
1 使用前1.1 保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洁；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。
1.2 定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器，保持过滤器畅通无阻。
1.3 使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02µm滤膜过滤）。
对流动相一定要脱气。
1.4 每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。
1.5 保持仪器使用环境20℃-30℃，湿度30%-70%。
2 使用中2.1 珍惜保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。
如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压力的波动。
2.2 采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。
如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰型变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。
2.3 避免超负荷进样，对250*4.6mm的柱子，绝对进样量应不超过100µg。
在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC 柱性能持久良好的重要举措之一。
2.4 经常用强溶剂冲洗柱子，将柱内强保留组分及时洗脱出。
反相柱用异丙醇-二氯甲烷（1:1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗，时间均不少于1h。
2.5 以硅胶为基质的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。
2.6 尽量用流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。
2.7 对于阻塞或受伤严重的柱子，必要时，可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作，此举可使柱效恢复到一定程度（80%），有继续使用的价值。
2.8 色谱仪检测器输出和积分仪（处理机）要匹配，要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。
安捷伦HPLC色谱柱选择与色谱柱维护保养67页PPT
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71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——
31、别人笑我太疯癫，我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣，抱怨者 的牢骚 ，这是 羊群中 的瘟疫 ，我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望， 辛勤耕 耘，忍 受苦楚 。我一 试再试 ，争取 每天的 成功， 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ，我继 续拼搏 。
33、如果惧怕前面跌宕的山岩，生命 就永远 只能是 死水一 潭。 34、当你眼泪忍不住要流出来的时候 ，睁大 眼睛， 千万别 眨眼!你会看到 世界由 清晰变 模糊的 全过程 ，心会 在你泪 水落下 的那一 刻变得 清澈明 晰。盐 。注定 要融化 的，也 许是用 眼泪的 方式。
35、不要以为自己成功一次就可以了 ，也不 要以为 过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
Agilent液相色谱柱的选择与日常维护
•ODS柱都是一样的吗？
•硅胶类型： 不定形硅胶，球形硅胶 柱容量，充填均匀度
•硅胶纯度： 金属含量，填料酸性
峰形
•填料颗粒尺寸：粒径大小分布，均匀度 充填均匀度，流速相关性
•填料孔径： 7～12nm，30nm
适用的化合物分子量范围
•键合密度： 含碳量
容量因子，保留时间
•键合方式： 键合相修饰
选择性，水性流动相的耐受性
Ø最高的分离效率 Ø更加可靠的长期性能可以广 泛应用于QA/QC
New!
•致密键合 •双封端 •不同粒径 – 1.8, 3.5, 5um
•坚固的硅胶基质 •快速及超快速分离
•对于所有样品都有较好的
峰形
•专利技术 •完整的质控过程 –
•方法开发的首要选择
Eclipse XDB
ØC18, C8, 苯基, CN Ø对于快速方法开发有很广泛 的应用谱图库 Ø多种色谱柱规格，从毛细柱 到制备柱 Ø 使用1.8um 颗粒实现快速有 效的方法转化
•柱填料量： 柱床实密性
柱容量
•封端技术： 屏蔽硅醇基，二次化学平衡 峰形，选择性
•pH适用范围
2006-11-30
22
Page 22
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ZORBAX 不同色谱柱的选择性
Zorbax SB C18( 150*4.6mm, 5um) USP Tailing: 1.157 Plates:8463
青果丸
色谱柱：Zorbax SB C18, 4.6×250mm, 5µm 流动相：甲醇-0.36%磷酸溶液（43:57）
16.171
mAU 50
40
安捷伦的色谱柱的介绍及选择
D250oC O2 孔径
80A & 300A
粒径
1.8 µm 3.5 µm 5.0 µm 7.0 µm
ZORBAX Rx
多孔硅胶微球
安捷伦拥有此项填料专利技术
8
Agilent LC colmns
4
Zorbax主要的键合相
Zorbax硅胶颗粒
StableBond
二异丙基 二异丁基键合
Rx-C18/Sil
Zorbax Eclipse XDB-C18 (B类硅胶)
普通硅胶（A类）
由于带负电荷的残留硅羟基和酸 性表面上金属含量高 (硅羟基的 pKa低), 导致碱性化合物发生拖 尾
高纯硅胶 (B类)
ZORBAX SB-C18 (B类硅胶)
由于金属含量低, 硅羟基pKa高, 碱性化合物不发生拖尾
ODS (A类硅胶) 封端
Eclipse StableBond
柱装填
• 具可追溯性 • 可定购生产批号不同的色谱柱 • 特殊规格定制ExtendBo Nhomakorabeaus RP
4
Agilent LC colmns
2
ZORBAX®硅胶类型
A类硅胶
Original ZORBAX SIL (1970s) 由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面 上金属含量高 (硅羟基的pKa低), 导致 碱性化合物发生拖尾
高通量和LC/MS柱
Zorbax 高通量柱，LC/MS 色谱柱 Zorbax 快速分离柱 Zorbax 快速分离高通量柱 Zorbax 溶剂节省色谱柱 Zorbax 微径色谱柱 Zorbax 毛细管柱和纳流柱
生化分析柱
Zorbax 300 SB 柱 Zorbax 300Extend柱 Zorbax Poroshell柱 Zorbax Eclipse AAA柱 Zorbax GF-250/450 凝胶柱 Zorbax Oligo HPLC柱 Zorbax SAX和SCX柱 MARS mRP column
安捷伦液相色谱柱选择指南
安捷伦液相色谱柱选择指南000什么是色谱柱1.简介英文名chromatographiccolumn装填有固定相用以分离混合组分的柱管。
多为金属或玻璃制作。
有直管形、盘管形、U形管等形状。
色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。
液相色谱通常均采用填充柱。
色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。
色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。
对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。
即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。
这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。
在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
2.色谱柱的构造色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。
柱管多用不锈钢制成，压力不高于70kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。
为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。
也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。
还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。
色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20µm(5~10µm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。
(完整word版)Agilent1260安捷伦高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程
Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程1目的建立1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程，规范人员操作。
2 适用范围适用于Agilent（四元泵）高效液相色谱仪的使用与维护。
3 责任与监督检验人员负责执行本规程，部门负责人监督本规程的实施。
4 规程细则4.1仪器原理高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.2仪器操作4.2.1系统组成：本系统由四元梯度泵、VWD检测器、自动进样器、柱温箱及Openlab Chemstation工作站和台式电脑等组成。
4.2.2操作前准备：4.2.2.1流动相的选择分类：组成分——单组分和多组分极性-极性、弱极性、非极性常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等。
（溶剂最好为HPLC级，水为纯化水）其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。
4.2.2.2流动相的选择为了除去流动相中的杂质，保护系统和色谱柱，在流动相使用完，装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤。
4.2.2.3流动相的超声与脱气为了除去溶解在流动相中的气泡，降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声10-15min左右。
对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。
4.2.2.4流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。
安捷伦液相色谱仪的维护和修理与保养 液相色谱维护和修理保养
安捷伦液相色谱仪的维护和修理与保养液相色谱维护和修理保养安捷伦液相色谱仪的维护和修理与保养1、安捷伦液相色谱仪用不同批号的色谱柱后如何对分析方法进行测试并确认可用此柱？首先，在色谱柱包装盒的外面找到它的批号。
批号的字体比较小，通常在条形码的下面。
批号通常以字母“B”开头，后面是 5 位阿拉伯数字。
例如，下面示例中的色谱柱批号为 B99091、假如找不到包装盒，则查看色谱柱标签上的序列号。
要从序列号来确定批号，请安捷伦科技公司 HPLC色谱柱的。
他们会请公司生产部门来查询批号，同时确定其它哪些批号的色谱柱可用。
获得所需的批号或知道您的批号后，可使用以下步骤进行订购：从安捷伦科技公司。
使用特别的部件号 899999—888, 该号码表示此订单是专用色谱柱。
说明要订购的色谱柱的类型、尺寸和填料粒度大小，包括通用部件号。
指出您希望色谱柱是哪个批号，或者哪个批号的色谱柱不能用。
示例说明: 部件号 899999—888 EclipseXDB—C18 分析色谱柱，4.6mm x 250mm，（963967—902）除了批号为 B99091 和B99079 的专用色谱柱用于方法确认目的的色谱柱2、安捷伦液相色谱仪—如何避开峰拖尾和峰分叉？与色谱柱相关的原因及处理方法1色谱柱污染；处理方法:清洗或更换色谱柱2色谱柱填料有问题；处理方法:反冲色谱柱或更换柱头过滤片3色谱柱中心显现间断；处理方法:更换色谱柱或填充空隙4保护柱失效；处理方法:更换保护柱5样品分布差；处理方法:改进色谱柱进口的设计6与色谱柱无关的原因：柱外体积大、样品过量、流动相组分（添加剂、pH值、缓冲液浓度）更改。
3、什么原因导致安捷伦液相色谱仪显现神秘峰”？与色谱柱相关的原因：1色谱柱污染；处理方法:清洗或更换色谱柱2保护柱失效；处理方法:更换保护柱3与色谱柱无关的原因：流动相溶不纯、样品里有其他成分、系统里有气泡、电路问题。
更多关于安捷伦液相色谱仪与色谱柱的产品相关信息，可访问我公司或致电销售工程师。
液相色谱柱选择方法及保存 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱柱选择方法及保存液相色谱常见问题解决方法液相色谱柱选择方法及保存一、液相色谱柱选择方法液相色谱柱选择的简单思路1.确定分别目的确定你的应用是否要求高分别度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质.诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
液相色谱柱的保存1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度*好是室温。
一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。
A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、掌控器设定不正确或设定失败实行恰当的设定、修理或更换掌控器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。
4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、掌控器失常修理或更换掌控器8、保护柱堵塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器堵塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维护和修理3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、掌控器失常维护和修理或更换掌控器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维护和修理6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
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8页
C-18柱---性能影响因素
A类硅胶
Original ZORBAX SIL (1970s) 由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表 面上金属含量高 (硅羟基的pKa低), 导致碱性化合物发生拖尾
B类硅胶 (高纯)
ZORBAX Rx-Sil (1987) 由于金属含量低, 硅羟基pKa高, 碱性化合物不发生拖尾
6页
C-18柱---性能影响因素
色谱柱物理性质
硅胶纯度
• 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度
色谱柱尺寸
• 填料床的长度和内径
颗粒形状
• 球型或不规则型
粒径
• 平均颗粒直径, 通常3-10µm
表面积
• 颗粒外表面和内部孔表面的总和,
示
以m2/gram表
孔径
• 颗粒的孔或腔的平均尺寸,
范围80-300Å
O Si R
固定相键合 二甲基硅烷
封端 四甲基硅烷
Agilent Technologies
19页
安捷伦专利的空间位阻保护
取代基：五个 旁侧基团: 异丙基
键合相 流失, 保留减弱
另一个裸露的硅羟基 ,
潜在的拖尾因素
普通硅胶柱低 pH <2 不稳定, 发生水解
Zorbax StableBond 空间位阻保护---抗水解能力
非离子化
抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式
样品
离子化
用硅胶的正相模式 离子交换模式 溶于有机溶剂 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱
分子量>2, 000
溶于水
大孔填料的离子交换模式
用大孔填料的反相模式
Agilent Technologies
正相 &反相色谱
正相吸附色谱
极性:固定相 > 流动相 固定相 - 极性 流动相(己烷, 庚烷)- 非极性 极性物质后出峰
安捷伦科技
Sa
1页
HPLC色谱柱选择与维护保养
Agilent Technologies
分离模式的选择
溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水 溶于有机溶剂
2页
用硅胶的正相模式
用键合相的正相模式 用键合相的反相模式
用键合相的反相模式
分子量<2, 000 溶于四氢呋喃 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式 溶于水
样品: 1. ketoprofen 2. ethyl paraben 3. Hydrocortisone 4. fenoprofen 5. propyl paraben 6. Propranolol 7. ibuprofen
pH 7.00
0 1
1
2
4
5
7 3
6
0.25 个pH
2 1
3 Time (min) 4 5
Agilent Technologies
11页
C-18柱---性能影响因素
颗粒形状 --- 对色谱分离的影响
当使用黏度较大的流动相50:50=MeOH:H2O时 , 球型颗粒可以降低柱压, 延长色谱柱寿命
粒径 --- 对色谱分离的影响
较小的颗粒柱效较高, 但会引起柱压过高. 3.5µm粒径的常用于分离复杂的多组份样品, 而组份单一的样品多采用5µm的粒径
可用于分离蛋白质和多肽 分子量虽小但hydrodynamic volume(水动力学体积)较大的分子
Poroshell 色谱柱
高流速下, 高柱效分析大分子的蛋白质和多肽
色谱柱填料孔径必须适合 待测物分子自由进出填料 孔, 与孔内表面的键合相 进行分离分配
Agilent Technologies
14页
15页
300Å 孔径可改善大分子的峰形
色谱柱: 4.6 x 150 mm, 5 mm 流动相: 60% MeOH: 40% 0.1% 三氟乙酸 O 流速: 0.75 mL/min CH 3 CHO 温度: RT CH H 2 3C 检测器: UV 282 nm HC
HO OCH 3 O O OCH 3 CH 2 CH 2 O H 3C O HO 3 O O O H
保留时间随pH 改变不明显
保留时间随pH改变 不明显(酸性环境中)
Agilent Technologies
23页
液相柱---保留值与pH的关系
方法稳定区
中性组份 酸性组份
方法波动区(pKa+1.5)
方法稳定区
碱性组份
Agilent Technologies
24页
液相柱---保留值与pH的关系
Extend C18 pH 2~11.5
球形
不规则形
1.8µm
3.5µm
5µm
Agilent Technologies
7µm
12页
C-18柱---性能影响因素
表面积 --- 对色谱分离的影响
高表面积对于多组份样品的分离具有较强的保 留能力, 柱容量和分离度. 表面积低的填料通 常能迅速达到平衡状态, 对于梯度淋洗尤为 重要
孔径 --- 对色谱分离的影响
4
7
6
6
0 5 10 Time (min) 1. Maleate 马来酸盐 2. Scopolamine 东莨菪碱 pKa 7.6 色谱柱: ZORBAX Extend-C18 3. PseudoEphedrine 假麻黄碱 pKa 9.8 4.6 x 150 mm, 5 mm 4. Doxylamine 抗敏安(多西拉敏) pKa 9.2 流动相: 30% 缓冲液: 70% 待测物pKa+1.5以外 5. Chlorpheniramine 氯苯吡胺pKa 9.1 MeOH pH 7 缓冲液20 mM 的流动相pH Na2HPO4 pH 11缓冲液 20 mM 6. Triprol内径ine 苯丙烯啶pKa 6.5 可保证方法的稳定性 TEA 7. Diphenhydramine 苯海拉明 pKa 9.0 0 5
4
5
6
pH 7.25
0 1
2
67
3
2
3 Time (min)
4
5
6
• 可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 —甚至很小的 0.05–0.25 个pH变化单位.
Agilent Technologies
22页
液相柱---保留值与pH的关系
pH变化： 0.2个pH(7.0~7.2) 保留时间改变： 1.2分钟 (13.6~14.8分钟)
Agilent Technologies
C-18柱---性能影响因素
色谱柱尺寸 --- 对色谱分离的影响
• 短柱 (15-100mm) - 运行时间短, • 长柱 (150-250mm) - 分辨率高, 柱压低 运行时间长
10页
• 窄径柱 ( 2.1mm) - 检测器灵敏度高 • 宽径柱 (3-21.2mm) - 载样量高
Zn 1 88
< 1 nd
N/ A N/ A nd
130 57
nd N/ A N/ A nd
2900 N/ A 40
65 230 N/ A N/ A N/ A N/ A
Zorbax Rx-SIL: 11种金属< 35 ppm (未检出其他杂质,
<1ppm); 99.995% 纯度的二氧化
Agilent Technologies
碳覆盖率--- 对色谱分离的影响
高碳覆盖率：提高分辨率, 分析时间长 低碳覆盖率：缩短运行时间
封端 --- 对色谱分离的影响
封端：减轻待测组份与硅胶表面残留的酸 性硅羟基反应而引起的色谱峰拖尾现象 对于极性样品, 未封端与经过封端处理的 色谱柱在选择性上有明显差异
Agilent Technologies
孔结构复杂, 孔径不均匀导致柱效不够高, 有 • 聚合物基质 机溶剂可能导致聚合物基质溶涨而受损
Agilent Technologies
C-18柱---性能影响因素
•硅胶纯度 •色谱柱尺寸 物理性质
5页
•颗粒形状
•粒径 •表面积 •孔径
•键合类型 化学性质 •碳覆盖率 •封端
Agilent Technologies
RS变化值 1.6
Agilent Technologies
21页
液相柱---保留值与pH的关系
色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6 x 75 mm, 3.5 µm 流动相: 44% 25 mM磷酸, pH 7.00 : 56% 甲醇 流速: 1.0 mL/min 温度: 25°C 检测: UV 250 nm
二氧化硅 Zorbax Rx-SIL Zorbax SIL Nucleosil Hypersil nd = 未检出
Na 10 17 56
K <3 nd
金属浓度（ppm) Mg Al Ca Ti 4 nd 1.5 57 300 2 9 38 nd 32
Fe 3 21 76
Zr nd 88
Cu nd
Cr nd
300Å 孔径可改善蛋白质和多肽峰形
孔径,
选择合适的 填料孔径分析 大分子可获得 最佳峰形
0.20 0.18
0.16 0.14
分子量对峰宽的影响(梯度分离)
300SB-C18 (300Å) SB-C18 (80Å)
PW 1/2
0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0
Agilent Technologies
ZORBAX®生产工艺
• StableBond • Eclipse XDB • Bonus-RP • Extend
硅胶 + 脲 (pH=2) + 甲醛 CH2O
9页
D O2
粒径