微生物限度检查法
中国药典2020微生物限度检查法
我国药典2020微生物限度检查法1.引言我国药典2020版本中，微生物限度检查法是保证药品质量和安全的重要工具。
微生物限度指的是药品中的微生物数量的限定，包括细菌、酵母和霉菌等。
微生物限度检查法的执行对于药品的生产和使用至关重要，它能够保证药品在生产、存储和使用过程中不受到微生物污染，从而确保药品的质量和安全。
2.微生物限度检查法的内容和流程微生物限度检查法主要包括取样、制备试液、接种培养和菌落计数等步骤。
首先要进行取样，从样品中取得代表性的样品；然后是制备试液，将取得的样品溶解或稀释；接下来是接种培养，将制备好的试液接种到适当的培养基上培养；最后是菌落计数，根据培养后的菌落数量来确定微生物的限度。
3.微生物限度检查法的意义微生物限度检查法的实施，可以有效地控制药品中微生物数量的合理范围内，防止药品在生产、储存和使用过程中因微生物污染而导致药品变质、降解或产生毒性。
采用微生物限度检查法，可以杜绝因微生物污染而引起的医源性感染，保障患者用药安全。
4.对我国药典2020微生物限度检查法的个人观点和理解微生物限度检查法是药品质量控制中不可或缺的一部分，它直接关系到患者的用药安全和药品的治疗效果。
我国药典2020版本对微生物限度检查法做了全面更新和完善，包括对检查方法、标准和限度值的详细规定和说明，这对于药品的生产企业和监管部门都具有重要的指导意义。
在日常生产和监管中，执行我国药典2020版的微生物限度检查法，将有助于提高药品的质量和安全水平，保护患者的用药权益，为人民健康事业做出贡献。
5.总结我国药典2020版本中的微生物限度检查法，是药品质量控制中的重要环节。
通过严格执行微生物限度检查法，可以有效地控制药品中微生物数量，防止药品因微生物污染而造成质量问题和安全隐患。
我国药典2020版的微生物限度检查法的更新和完善，将为药品生产和监管提供科学的依据和指导。
在实践中要严格执行微生物限度检查法，确保药品质量和安全，保障患者的用药权益。
微生物限度检测方法
微生物限度检测方法微生物限度检测是指在药品、食品、化妆品等产品中，对微生物的数量和种类进行检测，以确保产品的质量安全。
微生物限度检测方法的选择和执行对产品的质量控制和安全性评价具有重要意义。
本文将介绍常见的微生物限度检测方法及其应用。
一、培养法。
培养法是一种常见的微生物限度检测方法，它通过将样品接种在适当的培养基上，利用微生物在培养基上生长、分裂和形成可见的典型菌落的特性，来检测微生物的数量和种类。
培养法主要包括菌落计数法、膜过滤法等。
菌落计数法是将样品均匀涂布在含有营养物质的琼脂平板上，经过一定时间的培养后，根据菌落的数量来确定微生物的数量。
膜过滤法是将样品过滤到孔径为0.45μm的膜上，然后将膜放置在含有营养物质的琼脂平板上培养，根据在膜上形成的菌落数量来确定微生物的数量。
二、生物学法。
生物学法是利用微生物的生物学特性，通过培养微生物或者利用生物学试剂来检测微生物的数量和种类。
生物学法主要包括酶标记法、PCR法等。
酶标记法是利用酶标记的抗体或抗原来检测微生物的数量和种类，其原理是将酶标记的抗体或抗原与待检测微生物发生特异性反应，然后通过酶反应产生显色物质或荧光物质来进行检测。
PCR法是利用聚合酶链式反应技术，通过扩增微生物的特异基因序列来检测微生物的数量和种类。
三、物理化学法。
物理化学法是利用微生物的生理生化特性，通过测定微生物的生长代谢产物或者利用特定的物理化学性质来检测微生物的数量和种类。
物理化学法主要包括ATP生物发光法、流式细胞术等。
ATP生物发光法是利用微生物在生长过程中产生的ATP来进行检测，通过测定样品中的ATP含量来确定微生物的数量。
流式细胞术是利用流式细胞仪对微生物进行快速、高效的检测和鉴定，通过测定微生物在流式细胞仪中的光散射和荧光信号来确定微生物的数量和种类。
综上所述，微生物限度检测方法多种多样，每种方法都有其适用的范围和特点。
在实际应用中，需要根据产品的特点和检测的目的选择合适的检测方法，并严格按照相应的标准和规范进行执行，以确保产品的质量安全。
微生物限度检查法
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内 ，室内光照应分布均匀，光照度不低 于300勒克斯。缓冲间和操作间均应 设置紫外线杀菌灯（２～２.5W/m3 ），紫外杀菌灯应距实验台面高度不 超过1M，并应定期检查辐射强度， 不得低于70μW.cm-2（１M距离） 。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更 换。
2.1.1.2温度、湿度 无菌室内温度 和相对湿度直接影响紫外杀菌灯杀 菌效果，故温度应控制在18～ 26℃，相对湿度40～60％。操作 间或净化工作台的洁净空气应保持 对环境形成正压、不低于4.9Pa。
6.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和空 气过滤装置，并使其工作不低于 30min。
6.1.3 操作人员用肥皂洗手，关闭 紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作 鞋。再用0.1%苯扎溴铵溶液或其 他消毒液洗手或用乙醇棉擦手，穿 戴无菌衣、帽、口罩、手套。
6.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手， 再用碘伏棉球（也可用乙醇棉球 ）擦拭供试品瓶、盒、袋等的开 口处周围，待干后用灭菌的手术 镊或剪将供试品启封。
一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可 由一个或多个菌细胞形成。因此供 试品中所测的菌落数实际为菌落形 成单位数（colony forming unit ，CFU），而不应理解为细菌、霉 菌、酵母菌的个数。
微生物检验项目：细菌总数测定、 霉菌与酵母菌总数测定、控制菌检验（ 包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙门 菌、金黄葡萄球菌、破伤风梭菌）以及 活螨的检验。
2.1.2其他设备、净化工作台、恒温 培养箱（30～35℃）、生化培养箱 （25～28℃），微波炉（或其他适 宜加热装置）、康氏振荡器、匀浆 仪（3000～8000r/min）、恒温 水浴、电热干燥箱（250～300℃） 、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器 （使用时要进行灭菌效果检查并应 定期请有关部门检定）。
微生物限度检查法标准操作规程3篇
微生物限度检查法标准操作规程第一篇：微生物限度检查法标准操作规程概述1.引言微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品质量控制检验的重要手段之一。
它的意义在于保证制品中微生物污染的可控性，保障产品的安全有效性。
本篇文章将围绕微生物限度检查法的标准操作规程，对其概述进行介绍。
2.主要内容2.1 微生物限度检查法的定义微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是指对药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中细菌和真菌等微生物数量进行检查的方法和标准。
它是评价产品质量与卫生安全性的重要方法。
2.2 微生物限度检查法的目的微生物限度检查法的目的在于评价药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中的微生物数量是否在规定的限度范围内，以保证产品的安全性和有效性。
同时，微生物限度检查法也可为制品的生产、质量控制和质量管理提供有效依据。
2.3 微生物限度检查法的适用范围微生物限度检查法适用于药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品的质量控制检验。
其中，针对药品类，在我国《药典》中有详细规定。
3. 微生物限度检查法的标准操作规程3.1 样品处理样品处理过程应密闭、无菌且保持无菌状态。
洗手、穿戴无菌工作服及手套等工艺应符合规定，以避免二次污染。
3.2 检验方法微生物限度检查法主要分为计数法和筛选法，具体方法可根据制品的特性进行选择使用，并符合规定的国家标准。
对于细菌，常用的检验方法包括菌落计数法、薄膜过滤法等；对于真菌，常用的检验方法包括直接涂片法、薄膜过滤法等。
3.3 限度对于不同的制品，在药品中通常采用菌落计数法，在制品中微生物的限度规定一般标准分别为：细菌总数不超过10^3CFU/g或/mL，霉菌和酵母菌总数不超过10^2CFU/g或/mL。
3.4 结果判定若检测出的微生物数目符合规定限度，则判定结论为合格；若其中一个指标不符合规定，则判定为不合格。
微 生 物 限 度 检 查 法
微生物限度检验方法的发展情况
1．1980年我国药品微生物限度检验工作正式发行《药品卫生检 验方法》。 2．1984年出版第二版《药品卫生检验方法》。 3．1990.12年中检所出版第三版，主要对原《方法》中各地反 映意见较多的问题进行了改写；增加了部分检验方法和供试液 的制备方法；为了同国内外检验方法相协调，对某些内容作了 相应的更改，此外，还参照国家标准的编写格式作了编排。
恒温培养箱 霉菌培养箱 恒温水浴箱 净化工作台 30～35℃ 25～28℃ 45±1℃ 生物显微镜 1500X 36±1℃
体视显微镜或放大镜
电热干燥箱 250～300℃
电冰箱
高压蒸汽消毒器 电子天平或药物天平 匀浆仪或研钵 锥形瓶 100ml，250ml，500ml，1000ml 感量0.1g
直形吸管 量杯 试管
康氏振荡器 紫外灯 365nm
（带盖）
大、小橡皮乳头
乙醇棉球或碘伏棉球 灭菌剪刀、镊子、钢锥 灭菌称样纸 灭菌不锈钢药匙
火柴、记号笔（玻璃铅笔）
白瓷盘、洗手盆 实验记录纸
细菌、霉菌与酵母菌的检查方法
（平皿菌落计数法）
（一）供试品的抽样、保存及检验量 1． 供试品应随机抽样。一般抽样量（2个以上最小包装单位） 为检验量的3倍量。 2．对异常的供试品应针对性的抽样。抽样时，凡发现有异常或 可疑的样品， 应选取有疑问的样品，但机械损伤、明显破裂的 包装不得作为样品。 凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）、外观看出长螨、发 霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需在抽样检验。 不能以外观有上述情况而检查内容物合格，来判断该药品合格。 3．供试品收检后应及时检验，若有困难，应存放在该品种规定 的储存条件下（一般为阴凉干燥处），勿冷藏或冷冻，以防供试 品内污染菌因保存条件不妥引起致死、损伤或繁殖。
微生物限度检查法名词解释
微生物限度检查法名词解释
微生物限度检查法是一种用于检测和分析微生物在一定条件下的生长、繁殖和分布的检查方法。
该方法通常用于检测和分析生物制品、药品、食品、水源和其他领域中存在的微生物污染情况。
微生物限度检查法的主要目的是确保生产和处理过程中没有引入过多的微生物，从而避免在产品、溶液或环境中形成微生物种群，导致产品质量下降、产品变质、环境污染等问题。
微生物限度检查法也是药品生产和质量管理中的重要组成部分，以确保药品的质量和安全性。
在微生物限度检查法中，通常需要对样品进行预处理，然后在一定条件下培养，计数并评估微生物的生长情况。
根据计数的结果，可以确定样品中微生物的数量是否超过了规定的限度，从而判断样品是否被污染。
微生物限度检查法可以广泛应用于许多领域，例如医疗卫生、食品工业、化妆品工业、水处理等。
微生物限度检查法是一个重要的质量管理工具，它可以帮助生产和管理人员及时发现和解决问题，确保产品质量和安全。
微生物限度检查法标准操作规程完整
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查 供试品微生物计数中 所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性 试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备
试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法 适用性试验。
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B) 10104]
大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44102])
乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)[CMCC(B) 50094]
白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]
薄膜过滤法采用的滤膜孔径不大于。滤膜直径一般为50mm。滤器及滤膜使用 前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供 试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。为发挥滤膜的最大过滤效率，应 注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要 用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000m1；以免滤膜上的微生物受损伤。取照上述“供试液的制备”和“接种和 稀释”制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml、10cm2的供试品，若供试品 中所含菌数校对，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液总，混匀，过滤，用 适量的冲洗液冲洗滤膜。测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨 琼脂培养基平板上；测定霉菌和酵母菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖 琼脂培养基平板上，按规定条件培养、技术。每株试验菌每种培养基至少制备1张滤膜。同法测定供试品对照组和菌液对照组菌数。
微生物限度检查
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对于其它控制菌，通常是将制备好 的供试液，按照待检菌的特性取规定 量直接接种于培养基或经薄膜过滤法 处理后接种于培养基，分别进行增菌、 分离培养，在获得单个疑似菌株培养 物的基础上作形态学、生化及血清学 鉴定。
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四、检验结果报告及复试
1. 细菌、霉菌及酵母菌数报告及复试
细菌、霉菌及酵母菌数，一般以每1g、 lml 或l0cm2菌落形成单位数（colony forming nints, cfu）报告，特殊药品可 以最小包装单位报告。
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（2）培养基的pH值
培养基的pH值应符合规定，否则必需
校正。调节培养基pH值，使其高于规定值 的0.2，灭菌后可达到规定的pH值，测定时 溶液温度应为20～25℃，调节PH值可用 1mol/L氢氧化钠溶液、1mol/L盐酸溶液。 分装好的培养基应及时密封, 必须在配制 后2小时内进行灭菌处理。
药品中染菌数量愈高，其中所含致病 菌的几率愈高，这是造成药源性感染疾病 的直接原因。 药品染菌还可使其产生霉变、酸败等 理化性质改变造成药品失效、变质，甚至 产生毒素，危害使用者的健康。 为保证药品质量，必须对微生物污染进 行必要的控制和检验。
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（2）药品染菌反映药品生产工艺的科学 性、合理性及质量管理水平。
1、药品微生物限度检查的特殊性
（1） 活体细胞 （2）分布不匀 （3）多数处于受损状态 （4）生境复杂
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（1） 活体细胞
药品微生物限度检查以活体菌细胞为 对象，污染菌在药品中处于不稳定状态， 可随存放时间延长而死亡，也可在适宜条 件下大量繁殖。药品还可因为本身性质， 存放温、湿度，暴露空气等状态不一，污 染菌发生变化导致检出结果的差异. 由于检验对象的这种活体特征，保持 供检样品污染菌尚存活而又不大量增殖尤 为重要。
2015版中国药典微生物限度
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品， 用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或 pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。 分散力较差的供试品，可在稀释液中加入 表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80，使供 试品分散均匀。若需要，调节供试液 pH 值至 6～8。必要时，用同一稀释液将供 试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的 总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上 生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌 和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可 使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡 萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红 钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每 稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养 基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂 培养基平板在20～25℃培养5 ~7天， 观察菌落 生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时 可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告 。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落 数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌 数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15， 则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。
微生物限度检查法
中华人民共和国药典2000版二部微生物限度检查法附录Ⅺ J 微生物限度检查法微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法,包括染菌量及控制菌的检查。
供试品应随机抽样。
一般抽样量为检验用量(2个以上最小包装单位)的3倍量。
检查的全过程,均应严格遵守无菌操作,严防再污染。
除另有规定外,本检查法中细菌培养温度为30~35℃,霉菌、酵母菌培养温度为25 ~28℃,控制菌培养温度为36℃±1℃。
检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。
培养基及其制备方法除另有规定外,培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。
1.营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法(附录Ⅺ H)2.玫瑰红钠琼脂培养基胨 5g 玫瑰红钠 0.0133g葡萄糖 10g 琼脂 15~20g磷酸二氢钾 1g 水 1000ml硫酸镁 0.5g除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装,灭菌。
3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨 10g 琼脂 15~20g酵母浸出粉 5g 水 1000ml葡萄糖 20g除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖,分装,灭菌。
4.胆盐乳糖培养基(BL)胨 20g 磷酸二氢钾 1.3g乳糖 5g 牛胆盐 1.3g氯化钠 5g (或去氧胆酸钠0.5g)磷酸氢二钾 4.0g 水 1000ml除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2, 煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,灭菌。
5.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基 100ml 曙红钠指示液 2ml20%乳糖溶液5ml 亚甲蓝指示液 1.3~1.6ml 取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液, 摇匀,倾注平皿。
6.麦康凯琼脂培养基(MacC)胨 20g 1%中性红指示液 3ml乳糖 10g 琼脂 15~20g牛胆盐 5g 水 1000ml氯化钠 5g除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
微生物限度检查
微生物限度检查微生物限度检查是一种常见的检验方法，用于评估制药产品、食品和环境的微生物质量。
微生物限度检查主要包括总大肠菌群、总菌落计数、霉菌和酵母菌的检验。
总大肠菌群是一类常见的微生物群体，其检验结果可以反映样品中可能存在的致病性微生物的数量。
在微生物限度检查中，常用的方法是将样品置于适当的培养基上进行培养，然后通过观察菌落形态和计数来确定总大肠菌群的数量。
在制药产品和食品领域，总大肠菌群的检验结果必须符合相关法规的要求，以确保产品的安全性和质量。
总菌落计数是评估样品中细菌和真菌总数量的常用方法。
在微生物限度检查中，常用的方法是将样品进行适当的稀释，然后将稀释液均匀涂布或点接到琼脂平板上进行培养。
经过一定时间的培养后，通过观察菌落形态和计数来确定总菌落计数。
总菌落计数的结果可以反映样品中微生物的总数量，是评估样品微生物质量的重要指标。
霉菌和酵母菌是常见的真菌类微生物，其检验结果可以反映样品中可能存在的霉变和腐败情况。
在微生物限度检查中，常用的方法是将样品进行适当的稀释，然后将稀释液均匀涂布或点接到含有抑制剂的琼脂平板上进行培养。
经过一定时间的培养后，通过观察菌落形态和计数来确定霉菌和酵母菌的数量。
霉菌和酵母菌的检验结果可以帮助评估样品的质量，并采取相应的控制措施。
在微生物限度检查中，还有其他一些常用的检验项目，如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等。
这些项目的检验方法与总大肠菌群和总菌落计数类似，通过培养和观察菌落形态和计数来确定微生物的数量。
这些检验项目主要用于评估样品中可能存在的致病性微生物的数量，以确保制药产品和食品的安全性。
总之，微生物限度检查是一种重要的质量控制方法，可以评估样品中微生物的数量和质量。
通过采用适当的培养和观察方法，可以得到准确的微生物检验结果，为制药产品、食品和环境的质量控制提供科学依据。
中国药典微生物限度检查法
中国药典微生物限度检查法
中国药典是中华人民共和国国家药品监督管理局编制的用于药品质量标准和规范的权威性文献。
其中，微生物限度检查是对药物产品中的微生物污染进行评估和控制的重要环节。
中国药典中的微生物限度检查法主要包括以下几个方面：
1.检测项目：微生物限度检查主要关注细菌、真菌和酵母菌
的存在与数量。
通常会检测大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉
菌和酵母菌等常见微生物。
2.样品准备：样品准备过程中，要根据具体要求制备适当稀
释的样品溶液。
根据不同产品的特点和要求，可能需要使
用适当的培养基进行预处理。
3.检测方法：中国药典中提供了一系列的微生物限度检测方
法，包括涂片法、水洗法、滤膜法等。
这些方法可以根据
不同的样品类型和特性选择适合的检测方法。
4.培养和观察：按照检测方法的要求，将样品接种在适当的
培养基上，进行培养并观察一定时间。
观察期间，需要注
意各种细菌、真菌和酵母菌的生长情况。
5.计数和判定：根据培养结果，进行微生物数量的计数，并
与规定的限度标准进行比较。
根据比较结果，判定样品是
否符合微生物限度标准。
通过微生物限度检查，可以评估药物产品中的微生物污染状况，并确保其在接受者使用时的安全性。
中国药典中的微生物限度
检查法为药品质量控制提供了重要的指导和标准。
药典微生物限度检查法
微生物限度检查法微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方式。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及操纵菌检查。
微生物限度检查应在环境干净度10000 级下的局部干净度100 级的单向流空气区域内进行。
查验全进程必需严格遵守无菌操作，避免再污染，避免污染的方法不得阻碍供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应按期按《医药工业干净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方式》的现行国家标准进行干净度验证。
供试品检查时．若是利用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
除还有规定外，本检查法中细菌及操纵菌培育温度为30～35 ℃ ；霉菌、酵母菌培育温度为23～28 ℃ 。
查验结果以1g 、lml 、10g 、l0ml 或10cm2为单位报告，特殊品种能够最小包装单位报告。
查验量查验量即一次实验所用的供试品量（g 、ml 或cm2）。
除还有规定外，一样供试品的查验量为10g 或10ml；膜剂为100 cm2；珍贵药品、微量包装药品的查验量能够酌减。
要求检查沙门菌的供试品，其查验量应增加20g 或20ml （其中10g或10ml 用于阳性对如实验）。
查验时,应从2 个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4 片。
一样应随机抽取很多于查验用星（两个以上最小包装单位）的3 倍量供试品。
供试液的制备依照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方式制备供试液。
供试液制备假设需加温时，应均匀加热，且温度不该超过45℃ 。
供试液从制备至加入查验用培育基，不得超过1 小时。
除还有规定外，经常使用的供试液制备方式如下。
1.液体供试品取供试品10ml ，加无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml ，混匀，作为l:10 的供试液。
油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80 使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
2.固体、半固体或粘稠性供试品取供试品10g ，加无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至1OOml ，用匀浆仪或其他适宜的方式，混匀，作为1:10 的供试液。
微生物限度检验
2007.4
1
微生物限度检查 (Microbial Limits Test) ：
是指非无菌制剂及原，辅料受到微生物污染程度的检查。 包括：
1）细菌计数； 2）霉菌及酵母菌计数； 3）控制菌检查：大肠杆菌，沙门菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡 萄球菌，大肠菌群
2
细菌、霉菌及酵母菌计数
大肠杆菌 1g (1ml)样品 样 100ml 胆盐乳糖 培养基 35-37 ℃,18-24h 大肠菌群 1g (1ml)样品 样 3X10ml 胆盐乳 糖发酵管 35-37 ℃,18-24h 沙门菌 10g (10ml)样品 样 200ml 营养肉汤 营养肉 铜绿假 铜绿假单胞菌 1g (1ml)样品 样 100ml 胆盐乳糖 培养基 35-37 ℃,18-24h 金黄色葡萄球菌 1g (1ml)样品 样 100ml 亚碲酸钾 碲酸钾 肉汤 (或营养肉汤) 或营养肉 35-37 ℃,18-24h 梭菌 1g (1ml)样品X2 样 (其中一份样品80 其中一份样 其中一份 ℃,10分钟) 分 100ml 新鲜庖肉 培养基 厌氧, 35-37 ℃,72-96h
8
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件 检验方法
检验规程
样品量 稀释液种类 稀释液体积 中和剂 培养基 培养时间 培养温度 ……
SOP
9
影响微生物检验的因素
- 样品/药品自身的特殊性 - 样品/药品中添加的防腐剂/抑菌剂 - 培养基的特性 - 培养条件 - 人员因素 - 实验器材的选择
甘露醇氯 甘露醇氯化钠琼 脂 (或卵黄氯化钠琼 或卵黄氯 或卵黄 脂) 35-37 ℃,18-72h
0.2ml 涂抹于 含庆大霉素的哥 亚琼脂 伦比亚琼脂 厌氧, 35-37 ℃,48-72h
微生物限度中国药典2020年版四部通则1105、1106、1107
微生物限度中国药典2020年版四部通则1105、1106、
1107
摘要：
一、微生物限度检查的重要性
二、中国药典2020 年版四部通则1105、1106、1107 介绍
三、微生物限度检查方法
四、微生物限度检查在药品质量管理中的作用
正文：
微生物限度检查在药品生产和质量控制中扮演着至关重要的角色。
它旨在确保药品中微生物的数量和种类符合规定标准，以避免微生物污染和药品失效。
在中国，药品的微生物限度检查主要依据《中国药典》进行。
《中国药典》2020 年版四部通则1105、1106、1107 对微生物限度检查进行了详细规定。
其中，1105 通则规定了非无菌药品微生物限度检查的基本要求和方法；1106 通则针对无菌药品的微生物限度检查进行了规定；1107 通则则对微生物限度检查中使用的培养基、试剂和仪器等进行了详细说明。
微生物限度检查方法主要包括计数法和定性法。
计数法是通过计算样品中微生物的数量来判断其是否符合规定标准；定性法则是通过观察和鉴定微生物的种类，以确定其是否为有害微生物。
这两种方法在实际应用中往往相互结合，以提高检查的准确性。
微生物限度检查在药品质量管理中发挥着重要作用。
首先，它为药品生产过程中的微生物控制提供了依据，帮助企业制定合理的生产工艺和质量控制策
略。
其次，微生物限度检查可以有效防止药品在生产和储存过程中的微生物污染，保证药品的安全性和有效性。
最后，微生物限度检查还有助于药品监管部门对药品质量进行监督和评价，确保药品市场秩序和公众用药安全。
总之，微生物限度检查在药品质量管理中具有重要意义。
2015年版中国药典微生物限度检查法
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为 菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最 高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低 稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小 于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进 一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也 可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株 试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时
微生物限度检查方法
微生物限度检查方法
微生物限度检查方法是检验食品或药品中微生物水平的一种方法。
根据国家卫生部《食品微生物学检验规程》的标准要求，目前常用的微生物限度检查方法包括以下几种：
1.总菌落数测定法：通过菌落计数法，检测某一样品能够培养出的所有微生物数量。
2.大肠菌群检测法：通过检测样品中大肠菌群的数量，来判断食品卫生安全问题。
3.霉菌和酵母菌检测法：通过培养样品中的霉菌和酵母菌，来检测食品是否存在霉变。
4.致病菌检测法：通过检测样品中致病菌的存在与数量，来判断食品是否受到污染。
5.细菌耐热菌数量检测法：通过检测样品中细菌耐热菌的数量，来判断食品加热杀菌处理的有效性。
综上所述，微生物限度检查方法是对食品或药品中微生物水平的一种常规检测方法，其结果对保障公共卫生安全具有重要作用。
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n 6 操作方法
n 6.1 试验前准备 n 6.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥
形 瓶 、 匀 浆 杯 、 试 管 、 吸 管 （ 1ml 、 10ml）、量筒、稀释剂等移至无菌室内。 每次试验所用物品必须事先计划，准备足 够用量，避免操作中出入操作间。编号后 将全部外包装（牛皮纸）去掉。
微生物限度检查法
n 6.2.2 固体、半固体或粘稠供试品 称取供试品10g，置于匀浆杯或适当 灭菌容器中，加入100ml 0.9%无菌 氯 化 钠 溶 液 ， 用 匀 浆 仪 （ 3000 ～ 5000r/，2～4min），振荡器或乳钵 研磨等方法分散混匀。胃溶胶囊加 稀释剂后置45±1℃水浴中振摇，肠 溶胶囊加无菌磷酸盐缓冲液后先打 碎再置45℃±1℃水浴振摇溶解。
微生物限度检查法
n 6.2.3 非水溶性供试品 软膏剂、 乳膏剂 称供试品5g（5ml），加入 含已灭菌溶化并保温45℃左右的司 盘-80 5g、单硬脂酸甘油酯3g、聚 山梨酯-80 10g混合物的烧杯中， 用无菌玻棒搅拌均匀后，慢慢加入 45℃左右的0.9%无菌氯化钠溶液 85ml，边加边搅拌，使供试品充分 乳化，作为供试液（1：20）。
微生物限度检查法
在30～35℃培养箱内倒置培养48h， 取出检查。 3个平板生长的平均菌落 数不超过1个。 n 无菌室操作台或净化工作台要定期 检 测 其 洁 净 度 ， 应 达 到 100 级 。 净 化工作台中的高效及中效过滤器应 根据检测情况，必要时予以更换处 理。
微生物限度检查法
n 2.1.1.6消毒处理 无菌室应在每次 操作前、后均用０.1%苯扎溴铵溶 液或其他消毒液擦拭操作台及可 能污染的死角。开动层流净化装 置，同时用紫外杀菌灯照射30min。
微生物限度检查法
n 3 试液 n 3.1消毒液 n 3.1.1 0.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、
擦拭操作台面用）。
n 3.1.2 5%石碳酸溶液 (配好后装入 玻璃消毒缸内， 供消毒带菌吸管用) 亦可选用其他适宜消毒液。
n 3.1.3 75%乙醇溶液 n 3.1.4 碘酊或碘剂 n 3.2.1 0.9%无菌 n 氯化钠溶液 (附录3.1) n 3.2.2 无菌聚山梨酯-80 n 3.2.3 无菌聚山梨酯-80氯化钠溶液
n 5.3.3 液体制剂检验量为10 ml。 n 5.3.4 膜剂除另有规定外，中药膜
剂 检 验 量 为 30 ～ 50cm2 ， 化 学 药 及 生化药膜剂检验量为10cm2。
微生物限度检查法
n 5.3.5 特殊贵重或微量包装的药品， 检验量可酌减。除另有规定外，口 服固体制剂不低于3g。液体制剂采 用原液者不得少于6ml，采用供试 液者不得少3ml，外用药品不得少 5g。
琼脂培养基 (附录5.4)
微生物限度检查法
n 培养基制备应注意： n 4.3.1 采用干燥培养基，按说明配
制，应对灭菌后的培养基pH值进行 校验。若为自配培养基，原料应挑 选，琼脂凝固力应测定，以确定配 制时琼脂用量。试剂规格应为化学 纯以上的试剂。
微生物限度检查法
n 4.3.2 配制的培养基不应有沉淀，如 有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌 后使用。
微生物限度检查法
n 玻璃器皿用前应洗涤干净，无残留 抗菌物质吸管口上端距0.5cm处塞 入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管 桶内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、 试管均应加棉塞或硅胶塞，再用牛 皮纸包扎。玻璃器皿，均于160℃ 干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌 30min，烘干备用。
微生物限度检查法
n 2.3 用具
微生物限度检查法
n 2.1.1.4缓冲间 缓冲间内应有洗手 盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。 缓冲间内不应放置培养箱和其他杂 物。
n 2.1.1.5洁净 级 别 及 检 查方法 通 常采用尘 粒 数 及 浮 游 菌 数 或 沉 降 菌 数测 定 法。
微生物限度检查法
洁净室（区）空气洁净度级别表
洁净度级 别
n 6.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手， 再用碘伏棉球（也可用乙醇棉球） 擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口 处周围，待干后用灭菌的手术镊 或剪将供试品启封。
微生物限度检查法
n 6.2 供试液的制备 n 6.2.1 液体供试品 取供试品10ml，
置灭菌锥形瓶中，加入90ml稀释剂， 摇匀，作为1:10供试液。 n 含王浆或蜂蜜的液体制剂和滴眼剂 直接用供试品作为供试液。
n 4.3.6 勿用电炉直接熔化琼脂培养基， 以免营养成份过度受热而破坏。应 用水浴或微波炉加热。
微生物限度检查法
n 5 供试品抽样、保存及检验量 n 5.1 抽样 n 5.1.1 一般采用随机抽样方法，抽
样量应为检验用量（2个以上最小包 装单位）的3倍量（以备复试）。 n 5.1.2 抽样时，凡发现有异常或可疑 的样品，应选取有疑问的样品，但 机械损伤、明显破裂的包装不得作 为样品。
微生物限度检查法
n 5.1.3 凡能从药品、瓶口（外盖内 侧及瓶口周围）外观看出长螨、发 霉、虫蛀及变质的药品，可直接判 为不合格，无需再抽样检验。
n 5.2 保存 n 5.2.1 供试品在检验之前，应保存
在阴凉干燥处，勿冷藏或冷冻，以 防供试品内污染菌因保存条件不妥 引起致死，损伤或繁殖。
微生物限度检查法
n 5.2.2 供试品在检验之前，应保持原 包装状态，严禁开启。包装已开启 的样品不得作为供试品。
n 5.3 检验量 n 5.3.1 所有剂型的检验量均需取2个
以上包装单位（中药蜜丸、膜剂， 需取自4丸、4片以上）。
微生物限度检查法
n 5.3.2 固体及半固体(粘稠性供试品) 制剂检验量为10 g。
微生物限度检查法
n 一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可 由一个或多个菌细胞形成。因此供 试品中所测的菌落数实际为菌落形 成单位数（colony forming unit ， CFU ） ， 而 不 应 理 解 为 细 菌 、 霉 菌 、 酵母菌的个数。
微生物限度检查法
微生物检验项目：细菌总数测定、 霉菌与酵母菌总数测定、控制菌检验 （包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙 门菌、金黄葡萄球菌、破伤风梭菌）以 及活螨的检验。
微生物限度检查法
前国际上许多国家常用的一 种方法。
n 该方法以在琼脂平板上，每个细菌 （营养琼脂）、霉菌（玫瑰红钠琼 脂）、酵母菌（玫瑰红钠琼脂或酵 母浸出粉胨葡萄糖琼脂）形成一个 独立可见的菌落为计数依据。
微生物限度检查法
n 测定结果只反映在规定条件下所 生长的细菌（一群在营养琼脂上 发育的嗜中温、需氧和兼性厌氧 菌）、霉菌和酵母菌的菌落数。 不包括对营养、氧气、温度、PH 和其他因素有特殊要求的细菌、 霉菌和酵母菌。
微生物限度检查法
2020/11/14
微生物限度检查法
细菌、 霉菌（酵母菌） 计数
n 1简述（微生物限度检查的意义） n 细菌、霉菌、酵母菌计数是检测规定企业
单位内的非灭菌制剂污染的活菌数量，是 判定药品受到微生物污染程度的重要指标， 也是对生产企业的药品、原料、辅料、设 备器具、工艺流程、生产环境和操作者的 卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。
n 4.3.3 培养基的分装量不得超过容器 的确2/3，以免灭菌时溢出。包装时， 塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成 染菌。
n 4.3.4 培养基配置后应在2h内灭菌， 避免细菌繁殖。
微生物限度检查法
n 4.3.5 灭菌后的培养基在冷暗处保存 备用，放置时间不能过长，以免水 分散失及染菌。已熔化的培养基应 一次用完，开启后不宜再用。
尘粒最大允许数 /立方米
≥0.5μm
≥5μm
百级
3，500
0
万级
350，000
2，000
十万级 3，500，000 20，000
三十万级 10，500，000 60，000
微生物限度检查法
级别
微生物最大允许数 换 气 次 数 /小时
浮游菌/ 沉降菌 /
立方米
皿
百级
5
1 0.3米/秒
万级
100
3
20
十万级 500
10
15
三十万级 —
15
---
微生物限度检查法
n 2.1.1.5.1 浮游菌数测试方法（参照 中人民共和国国家标准 GB/T16293-1996）。
n 2.1.1.5.2 沉降菌数测定(Ⅱ法)
微生物限度检查法
n 无菌室操作台消毒擦拭处理后，先 启动层流净化装置30min，将备妥的 营养琼脂平板3个(经30～35℃预培养 48h，证明无菌落生长。)以无菌方式 （或经传递箱）移入操作间，置净 化台左、中、右各1个，开盖，暴露 30min后将盖盖上。
微生物限度检查法
n 2.2 仪器及器皿
n 2.2.1 菌 落 计 数 器 、 显 微 镜 （1500X）、电子天平或药物天平 （感量0.1g），pH系列比色计。
微生物限度检查法
n 2.2.2 玻璃器皿 锥形瓶(250～300ml， 内装玻璃珠若干)、研钵（陶瓷制， 直 径 10 ～ 12cm ） 、 培 养 皿 (Ф9cm) 、 量筒(100ml)、试管(18×180mm)及 塞、吸管(1ml分度0.01，10ml分度 0.1)、注射器(20或是30ml)、注射针 头、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸 (带盖) 。
(附录3.2) n 3.2.4 无 菌 磷 酸 盐 缓 冲 液 (pH7.2)
(附录3.3) n 3.2.5 无菌0.1%氯化三苯四氮唑溶
液(TTC) (附录2.15)
微生物限度检查法
n 4 培养基
n 4.1 营养琼脂培养基 (附录5.2) n 4.2 玫瑰红钠琼脂培养基 (附录
5.3) n 4.3 酵母浸出粉胨葡萄糖 (YPD)
n 无菌室内应六面光滑平整，能耐受 清洗消毒。墙与地面及墙壁、天花 板连接处应呈凹弧形无缝隙，不留 死角。操作间内不应安装下水道。