电泳的分类
电泳技术
常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。
(2) 非连续pH电泳：缓冲液和电泳支持物间有不同 的pH的电泳，如聚丙烯酰胺凝胶盘状 电泳，等电聚焦电泳等。
(二）应用：
1、分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等 2、分析某种物质的纯度及分子量 3、电泳技术与层析法结合可用于物质的结构分析4、 免疫电泳可提高对蛋白质的鉴别能力
(四)染色：
1、取出膜条，浸入氨基黑10B染色液中， 染色2-5分钟。 2、取出薄膜，立即浸入漂洗液中，漂洗 3-4次至背景无色为止。
血清脂蛋白琼脂糖电泳
[原理]
血清脂蛋白经苏丹黑B染色后，以琼脂糖为载 体，在pH8.6巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋 白分成不同的区带。按电泳移动的速度不同，正 常人血清脂蛋白可出现三条区带，从阴极到阳极 依次为β－脂蛋白(最深)、前β－脂蛋白(最浅)，α －脂蛋白(比前β－脂蛋白略深些)。
本实验以乙酸纤薄膜为支持物，利用血清中蛋 白质颗粒的等电点大部分低于7，在pH8.6的缓冲液
中带负电荷，在电场中向正极移动，电泳后根据血
清蛋白移动快慢，可依次分为清蛋白、球蛋白的α1、
α2、β、γ五个区带，染色后显出清晰色带。
乙酸纤维薄膜电泳的优点： 简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离 清晰、没有吸附现象等。 乙酸纤维薄膜电泳的应用： 目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白 和同功酶的分离及用在免疫电泳中。
[操作] （一）准备： 1、取缓冲液中浸泡的薄膜1张。 2、用滤纸吸干多余水分。 3、识别出无光泽面。 4、在角上用铅笔做上记号。
（二）点样： 用点样器蘸上一层血清，于膜的无 光泽面（距膜边端1.5厘米处点样），使 血清全部渗入膜内。1.5cm Nhomakorabea+）
常用电泳技术和电泳方法简介
二、电泳方法简介
2．等电聚焦电泳的特点 ①使用两性载体电解质，在电极之间
形成稳定、连续、线性的pH梯度；②由于 “聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清 晰、鲜明的区带界面；③电泳速度快;④分 辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择；⑥ 可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用 于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶 等）生物组分的分离分析。
它具有机械强度好、弹性大、 透明、化学稳定性高、无电渗 作用、设备简单、样品量小 (1～100μg）、分辨率高等优点。
二、电泳方法简介
（一）等电聚焦电泳
1． 等电聚焦电泳过程 一种利用有pH值 梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的 电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物 加入有pH值梯度的凝胶介质中，在电场内 经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各 自等电点相应的pH值位置上，最后，样品 的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰 而稳定的窄带。
二、电泳方法简介
（二）醋酸纤维素薄膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、
染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。 此电泳的特点是分离速度快、
电泳时间短、样品 用量少。因此三）凝胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳 的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以 凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用 的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。
（一）根据支持物的特点又可分为： ①无阻滞支持物电泳。②高密度的凝胶 电泳。
一、常用电泳技术分类
（二）根据电源控制的不同，一般可分为以下 3类：1. 恒压电泳; 2. 恒流电泳; 3. 恒功 率电泳 。
（一）根据自动化程度的不同，可分为半自动 和全自动型。
一、常用电泳技术分类
电泳技术
• 嵌入染料 ：荧光染料溴化乙锭（EB）用于检测琼脂糖凝 胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带 缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15% 。
• 电泳温度 ：DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时 的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率 在4℃与30℃之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝 胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳
第十一小组
制 作
最常用实验技术
“电泳技术”
组员：艾力特别尔 陈南福 陆岩冰 马星星 唐佳坤 王琦 阳明华
目录
➢电泳概述 ➢影响电泳的主要因素 ➢琼脂糖凝胶电泳 ➢常规聚丙烯酰胺凝胶电 ➢SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 ➢等电聚焦电泳 ➢毛细管电泳 ➢连续流动电泳
电泳技术
电泳是指带电粒子在电场的作用下，在一定介质 （溶剂）中所发生的向异性电极定向移动的现象。
利用电泳现象对混合物进行分离、分析的技术叫 做电泳技术。
电泳技术特点
➢ 几乎适用于所有带电物质的分离，并可进行定性或
定量分析；
➢ 样品用量极少； ➢ 设备简单 ➢ 可在常温进行 ➢ 操作简便省时 ➢ 分辨率高。
电泳的分类方法
区带电泳 1.根据有无支持物
纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳
点样：点样量随凝胶板的厚度以及加样孔宽度、染色方法的不同存在 差异。
电泳条件：常在上样之前进行预电泳（冰浴，200v，10min），之后点 样，进行电泳（冰浴，200v，3至5h）
电泳缓冲液：Tris-甘氨酸缓冲液（pH8.8）
不连续电泳
Tris-Hcl(pH8.8)缓冲液或1×TBE缓冲液 连续电泳
琼脂糖由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖组成。
电泳涂装工艺介绍及及与其他表面处理的比较
强，很难脱落
防府性
不耐腐蚀
耐腐蚀
装饰性
表面粗糙，平滑度低
平展光滑
环保性
污染严重
合符环保要求
电泳涂装工艺介绍及及与其他表面处理的比较
4、冷水洗。流动中冷水洗1min。
5、磷化。用中温磷化（60℃时磷化10min）。
6、钝化。用与磷化液配套的药品，室温下1～2min即可。
7、阳极电泳。电解液成分：H08-1黑色电泳漆，固体分质量分数9%～12%，蒸馏水质量分数88%～91%。电压：（70±10）V；时间：2～2.5min；漆液温度：15～35℃；漆液PH 值：8～8.5。注意工件出入槽要断电。电泳过程中电流随漆膜增厚会逐步下降。
三、工艺流程（Technological process）
电泳一般工艺流程如下：
工件前处理（除油→热水洗→除锈→冷水洗→磷化→热水洗→钝化）→电泳→清水洗→烘干
1、除油。溶液一般为热碱性化学除油液，温度为60℃（蒸汽加热），时间为20min左右。
2、热水洗。温度60℃（蒸汽加热），时间2min。
3、除锈。用H2SO4或HCl，例如用盐酸除锈液，HCl总酸度≥43点；游离酸度>41点；加清洗剂1.5%；室温下洗10～20min。
一、电泳工艺分类（Electrophoresis process classification）
电泳工艺分为阳极电泳和阴极电泳。若涂料粒子带负电，工件为阳极，涂料粒子在电场力作用下在工件沉积成膜称为阳极电泳；反之，若涂料粒子带正电，工件为阴极，涂料粒子在工件上沉积成膜称为阴极电泳。
二、特点（Characteristic）
阳极电泳的特点是：原料价格便宜（一般比阴极电泳便宜50%）；设备较简单，投资少（一般比阴极电泳便宜30%）；技术要求较低；涂层耐蚀性能较阴极电泳差（约为阴极电泳寿命之1/4）。
按电泳的原理分类
按电泳的原理分类
1. 直流电泳：电极间接通直流电流，样品在电场力的作用下向电极移动，分离各组分。
适用于蛋白质、核酸等大分子的分离。
2. 凝胶电泳：将样品与凝胶混合，通过电场力将组分分离在凝胶矩阵中。
凝胶电泳又可分为多种类型，如聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳等。
3. 毛细管电泳：将样品注入毛细管，然后通过电场力使样品分离。
毛细管电泳又可分为多种类型，如毛细管凝胶电泳、毛细管区带电泳等。
4. 高效液相色谱电泳：将样品分离在高效液相色谱柱中，然后通过电场力推动分离后的组分通过柱。
适用于分离蛋白质、多肽等小分子。
第三章第三节电泳技术
操作步骤
▪ 3、点样（电泳的关键步骤） 用镊子把膜条从缓冲液中取出，夹在
两层滤纸中间，吸去多余的液体，然后平 铺在玻璃板上（粗面朝上），将点样器先 在培养皿的血浆中沾一下，再在膜条点样 线处轻轻地水平落下并随即提起，这样即 在膜条上点上了细条状的血浆样品。
点样线尽量点得细窄而均匀。宁少勿 多。
操作步骤
▪ 支持介质放在两个支架上，其两端与 电泳液接通而形成盐桥。通电后，电 流只能在支持介质体上通过，电泳物 质在其上泳动。绝缘盖起防止缓冲液 蒸发以及防触电的保护作用。有些电 泳槽有冷却装置以保证电泳介质的温 度不至过高。
▪ 电泳操作一般有支持介质的制备或饱 和，加样，电泳分离样品、染色及洗
第四节 几种常用电泳技术
血清蛋白电泳
光密度扫描
（五）应用
▪ 醋酸纤维素薄膜电泳已广泛用于各种 生物分子的分离分析中，如血红蛋白、 血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋 白、同工酶及类固醇等的分离和测定。
▪
正常人血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳示意图
二、琼脂糖凝胶电泳
▪ 琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis,AGE）是以琼脂糖凝胶 作为支持物的一种区带电泳技术。琼脂糖 凝胶电泳的吸附作用和电渗作用均较小， 分辨率和重现性较好，电泳图谱清晰，电 泳速度快，区带易染色、洗脱和定量，常 用于生物大分子如：血浆脂蛋白、免疫球 蛋白、同工酶和DNA酶切片段的分离。
▪ 2．不连续pH电泳 支持介质各处的 pH不同，聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电 聚焦电泳等。
三、电泳技术的特点
▪ 1．凡是带电物质均可应用某一电泳技术进 行分离，并可进行定性或定量分析。
▪ 2．分辨率高。 ▪ 3．可在常温下进行。 ▪ 4．样品用量少。 ▪ 5．操作省时简便。 ▪ 6．设备简单。
电泳法
带电粒子在电场中移动的现象称为电泳。
电泳技术即是利用样品中各种带电粒子的
带电性质、分子大小、形状等的差异，在电场
中的迁移速度不同，从而对样品分子进行分离、
鉴定、纯化和制备。在生物学领域，该技术多 一般要求薄板用的活性为Ⅱ ~ Ⅲ级
用于分离，纯化、鉴定蛋白质、核酸等大分子
物质。
电泳的分类
纸电泳
醋酸纤维素电泳
淀粉凝胶电泳
琼脂糖电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳
3.影响电泳迁移率的因素：
1、影响电泳迁移率的外界因素： 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 2.影响电泳迁移率的内在因素： 质点所带净电荷的量 质点的大小和形状
迷你垂双垂直电泳槽
3、操作步骤
1. 准备
醋酸纤维素薄膜的预处理：将薄膜小心放入盛有 缓冲液的培养皿内，使其漂浮在液面；用镊子轻压， 使其全部浸入缓冲液内。待膜完全浸透（约半小时） 后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓 冲液，同时分辨出光滑面和粗糙面。 标记：在粗糙面上用铅笔距薄膜条一端 1.5cm 处 划线即为点样线并作好标记，同时标上学号和正负 极。
3.4 毛细管电泳技术
毛细管电泳：使电泳过程在散热效率极高的毛细 管内进行，使焦耳热效应减小，能使用高电压， 全面改善分离质量和提高分析速度。
uap uos uef
阴离子
uap uos
中性分子
uap uos uef
阳离子
4、 CE 的检测器
CE对检测器的要求： 既能作灵敏检测，又不使谱带展宽。（死体积小） 一般采用柱上检测。 CE 检 测 器 方 法
实验室常见的电泳装置
（ 核水 酸平 电电 泳泳 ） （ 蛋 白垂 质直 电 电泳 泳 ）
5-1电泳
2.实验试剂
(1) 30%丙烯酰胺（Acr）：称Acr30g，甲叉双丙烯酰胺 （Bis）0.8g，加蒸馏水至100ml，过滤后置棕色瓶中， 4℃贮存可用1-2月。 （2）10%SDS（十二烷基磺酸钠） （3）1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris18.2g， 加入50ml水，用1mol/L盐酸调pH8.8， 最后用蒸馏 水定容至100ml。 （4）1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液：称取Tris12.1g，加 入50ml水，用1mol/L盐酸调pH6.8， 最后用蒸馏水 定容至100ml。 （5）0.05mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液：称取Tris0.6g，加 入50ml水，用1mol/L盐酸调pH8.0，最后用蒸馏水定 容至100ml。
4.倒出水（乙醇）并用滤纸把剩余的水分吸干,按 比例配好浓缩胶,连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm 处,迅速插入样梳,静置40分钟. ※样梳需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底 需水平.
5.拔出样梳后,在上槽内加入缓冲液,没过锯齿。 ※要使锯齿孔内的气泡全部排出,否则会影响加样效 果.
6、加样三个。 （1）取10µl标准蛋白溶解液于EP管 内，再加入10µl 样品缓冲液，上样量为20µl。 （2）取10µl样品溶液，再加入10µl 样品缓冲液， 上样量分别为5µl 和10µl。
电泳法
生物大分子分离与表征 shaoyunwang@
电泳:
是带电颗粒在电场作用下，向着 与其电荷相反的电极泳动的现象。
电泳原理示意图
（一）电泳分类和沿革
按装置类型分类：
1. 自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。 2. 区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上 进行电泳，不同组分形成带状区域。 （1）纸上电泳：用滤纸作支持物。
第四章电泳技术
五 凝胶电泳
支持物：多孔凝胶 聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等 具有电泳和分子筛的双重作用，分辨力高 最常用聚丙烯酰胺凝胶，原因： 机械强度好，透明有弹性，稳定，无吸附作用
操作要点：
1 选择缓冲液
对显色剂和紫外光吸收等观察区带的方法无影 响
A 分离蛋白质，pI≈ 5，选pH8.6的缓冲液 （巴比妥缓冲液pH8.6、硼酸pH8.6、磷酸 pH7.4)
B 分离氨基酸：邻苯二甲酸氢钠、磷酸—醋 酸，pH5.9
C 分离核苷酸巴比妥－醋酸pH2.5，柠檬酸 pH2~3
D 分离糖类：HAC-NaAC, pH3~5
2 滤纸的选择与处理 层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场
强度。
3 点样 点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样 品）、点一边（已知样品）
干法、湿法
4 电泳 电桥水平、加盖、电压稳定、注意时间
5 显色及分析 蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红B Aa：茚三酮、靛红 核酸：紫外光下观察
电泳技术思考题
1名词解释 电泳、电泳分离技术、泳动度、电渗、区带电 泳、相对迁移率、不连续凝胶电泳
2 影响泳动度的主要因素有哪些？ 3 区带电泳的操作步骤一般有哪些？ 4 如何制备聚丙烯酰胺凝胶？ 5 不连续电泳样品压缩成层原理。 6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。 7 采用电泳技术如何测定蛋白质分子量？如何
一 电泳的基本原理
电泳分离： 移动方向：带电性质决定
泳动度：带电颗粒在单位电场强度下的移动速 度。
简述电泳的分类及其原理
简述电泳的分类及其原理嘿，你问电泳的分类及其原理啊？那咱就来唠唠。
电泳呢，主要有两种大的分类。
一种是区带电泳，另一种是等电聚焦电泳。
先说区带电泳吧。
这就好比是一群小伙伴在跑道上跑步。
不同的物质就像不同的小伙伴，它们带着不同的电荷。
在电场的作用下，这些带着电荷的小伙伴就开始跑起来啦。
带正电荷的往负极跑，带负电荷的往正极跑。
而且呢，这些小伙伴跑得速度还不一样。
为啥呢？因为它们的大小、形状啥的都不一样呗。
比如说，一个小不点的带正电的粒子，可能就跑得比一个大块头的带负电的粒子快。
这样呢，不同的物质就会在跑道上分开，形成不同的区域，这就是区带电泳的原理啦。
再说说等电聚焦电泳。
这个有点像找一个平衡点。
不同的物质都有自己的等电点，就像每个人都有自己的平衡点一样。
在一个特殊的环境里，通过电场的作用，让这些物质都跑到自己的等电点那个位置。
在等电点的时候，这个物质就不带有净电荷了，也就不跑了。
这样就把不同的物质给分出来了。
比如说在生物实验室里吧，科学家们经常用区带电泳来分离蛋白质。
把蛋白质样品放在凝胶上，通上电，那些蛋白质就开始跑起来啦。
有的跑得快，有的跑得慢，最后就形成了不同的条带。
这样就能看出有哪些不同的蛋白质啦。
还有等电聚焦电泳呢，可以用来分离一些特别难分的蛋白质，找到它们的等电点，更好地了解它们的性质。
总之呢，电泳有区带电泳和等电聚焦电泳两种主要分类。
区带电泳是让不同的物质带着电荷在电场中跑，根据速度不同分开；等电聚焦电泳是让物质找到自己的等电点，不带有净电荷时停下来。
电泳
电泳1809年，俄国物理学家Reŭss首次发现电泳现象1937年，诺贝尔奖金获得者Arne Tiselius教授，发明了最早期的界面电泳，用于蛋白质分离的研究，开创了电泳技术的新纪元。
近几十年以来，电泳技术发展很快，各种类型的电泳技术相继诞生，在生物化学、医学、免疫学等领域得到了广泛应用。
概念：带电颗粒在电场作用下，向与其电荷相反的电极移动的现象。
电泳的分类显微电泳自由界面电泳：在没有支持介质的溶液中进行的电泳区带电泳：是指有支持介质的电泳，待分离物质在支持介质上分离成若干区带。
支持介质的作用主要是防止电泳过程中的对流和扩散。
是目前常用的电泳系统区带电泳按支持介质种类分类纸电泳淀粉凝胶电泳醋酸纤维素薄膜电泳琼脂糖凝胶电泳：多用于核酸的分离聚丙烯酰胺凝胶电泳：可用于核酸和蛋白质的分离区带电泳的其他分类根据支持介质形状不同，可分为：薄层电泳板电泳柱电泳据用途不同，可分为：分析电泳制备电泳定量电泳免疫电泳本章内容基本概念及原理聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦毛细管电泳印迹法（转移电泳）第一节泳动度概论电泳是在电场作用下产生的物质运动。
电场力阻力电泳的基本原理若将带净电荷q的颗粒放入电场，则受到的电场力为 F = E·q在溶液中,运动颗粒遵循Stoke’s Law（斯托克斯定律）F阻=6πrηv当F = F阻时E·q = 6πrηvv =颗粒的移动速度(泳动速度v)与电场强度(E)和颗粒所带电荷量(q)成正比,而与颗粒的半径(r)及溶液的粘度(η)成反比。
颗粒的泳动速度与颗粒形状有关。
如非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力。
由（4）可知，带电颗粒的泳动速度受电场强度影响，使得同一种带电颗粒在不同电场里泳动速度不同，为了便于比较，常用泳动度（mobility，m）或迁移率（Rf）代替泳动速度表示颗粒的泳动情况。
m = v /E = q/6πrη（5）由上式可以看出，迁移率仅与球形颗粒所带电荷数、颗粒大小及溶液粘度有关，与电场强度无关，是带电颗粒的物理常数。
电泳技术
电泳技术综述电泳技术有着八十年的发展史，是一种先进的检测手段。
它广泛用于多个领域，还能与其他先进技术相配合，创造出惊人的结果。
它对解决当前人类所面临的食品、能源、环境和疾病等一系列迫切问题，都有积极作用。
一、电泳发展史1809年，俄国物理学家Рейсе 首次发现电泳现象。
他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极，加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊，即带负电荷的粘土颗粒向正极移动，这就是电泳现象，但是当时还不叫电泳。
1909年，Michaelis 首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。
他用不同pH 的溶液在U 形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。
1937年，瑞典Uppsala 大学的Tiselius 对电泳仪器作了改进，创造了Tiselius 电泳仪，建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法，并发现了血清蛋白可分为白蛋白及α、β、γ 球蛋白，使电泳技术开始用于临床研究。
但这电泳结构复杂，价格昂贵不易推广。
1948年Wieland 和Fischer 等，发明了用滤纸作为支持介质的电泳方法使该技术大为简化，而且可以使许多组分相互分离为区带，所以这类电泳被称为区带电泳。
纸电泳发明后在临床上得到广泛的应用。
1950年Durrum 用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后，开创了利用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。
1959年Raymond 和Weintraub 利用人工合成的凝胶作为支持介质，创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳，极大地提高了电泳技术的分辨率，开创了近代电泳的新时代。
30多年来，聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍，分辨率最高的分析鉴定技术，是检验生化物质的最高纯度：即”电泳纯”(一维电泳一条带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法，至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段，即”Last Check”。
sds-page
电流过高、凝胶过热
Buffer 的pH值
︶ 条带呈笑脸状，原因：凝胶不均匀冷却，中 间冷却不好。 ︵ 条带呈皱眉状，可能是由于装置不合适，特 别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边 聚合不完全。 拖尾(tailing)：样品溶解不好。 纹理streaking（纵向条纹）：样品中含有不溶性 颗粒。 条带偏斜：电极不平衡或者加样位置偏斜。 蛋白带(过宽)两边扩散：加样量过多或加样孔泄 漏
聚丙烯酰胺的特性，机械性能，弹性，
透明度，孔径大小取决于 T ， C 。 T 是两 个单体 ( 单体丙烯酰胺和 N-N ’ - 甲叉双 丙烯酰胺)的总百分浓度，C是与总浓度 有关的交联百分比浓度。 T=(a+b)/m C=b/(a+b) （a为单体丙烯酰胺的克数，b为N-N’-甲叉双丙烯酰
胺的克数，m为缓冲液终体积，加10ul样品buffer 微波处理3分钟 加样 : 20ul 多余的孔加样品buffer 电泳：浓缩胶70-80v，分离胶100-120v 染色：考马斯亮兰染1小时 脱色：2小时
（四）可能出现的情况
上下层胶凝结的不均匀
上样蛋白量太大
胶表面不平
胶浓度太高
2 引发剂、增速剂和聚合 常用过硫酸铵，过硫酸钾或核黄素来引发这个 过程，用TEMED（ N，N ， N，N-四甲基乙二 胺），三乙醇胺作为加速剂，这种引发-增速的催 化系统是氧化-还原过程。聚合是由过硫酸铵在碱 性条件下产生游离氧自由基引发单体丙烯酰胺成 为自由基状态而成。
3 影响聚合的因素
SDS-PAGE
PAGE电泳分类
带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动， 这种现象称为电泳。 电泳分类：移动界面电泳、区带电泳、稳态电泳。
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区带电泳的分类
1.按支持物的物理性质分类： 按支持物的物理性质分类： 按支持物的物理性质分类 （1）纸电泳：以滤纸为支持物 ）纸电泳： （2）粉末电泳：如纤维素粉、淀粉、玻璃 ）粉末电泳：如纤维素粉、淀粉、 粉电泳 （3）凝胶电泳：如琼脂、琼脂糖、硅胶、 ）凝胶电泳：如琼脂、琼脂糖、硅胶、 淀粉胶、 淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳 （4）缘线电泳：如尼龙丝、人造丝电泳 ）缘线电泳：如尼龙丝、
水 平 电 泳 槽
水 平 电 泳 槽
垂 直 电 泳 槽
垂 直 电 泳 槽
柱 状 电 泳
柱 状 电 泳
3.按pH的连续性不同分类 按 的连续性不同分类 电泳： （1）连续 电泳：如纸电泳、醋酸纤维素 ）连续pH电泳 如纸电泳、 薄膜电泳 电泳： （2）不连续 电泳：如聚丙烯酰胺凝胶盘 ）不连续pH电泳 电泳
电泳的分类
2011级临床2班第二小组
电泳的分类
（一）自由电泳：不需要支持物的电泳 自由电泳：
（二）区带电泳：需要支持物的电泳 区带电泳：
电泳技术的分类
自由电泳 区带电泳
1.Tiselius或微量电 或微量电 泳 2.显微电泳 显微电泳 3.等电点聚焦电泳技 等电点聚焦电泳技 术 4.等速电泳技术 等速电泳技术 5.密度梯度电泳 密度梯度电泳
1.纸上电泳 纸上电泳 2.醋酸纤维薄膜电泳 醋酸纤维薄膜电泳 3.薄层电泳 薄层电泳 4.非凝胶性支持体区带电 非凝胶性支持体区带电 支持体有：淀粉， 泳 （支持体有：淀粉，纤 维素粉，玻璃粉，硅胶等) 维素粉，玻璃粉，硅胶等 5.凝胶支持体区带电泳 凝胶支持体区带电泳 ①淀粉液 ②聚丙烯酰胺凝 琼脂（ 胶 ③琼脂（糖）凝胶
4.按用途不同分类 按用途不同分类 （1）分析电泳 ） （2）制备电泳 ） （3）定量免疫电泳 ） （4）连续制备电泳 ）
5.按所用电压不同分类 按所用电压不同分类 （1）低压电泳：100~500V，电泳时间较长， ）低压电泳： ，电泳时间较长， 适于分离蛋白质等生物大分子 （2）高压电泳：1000~5000V，电泳时间短， ）高压电泳： ，电泳时间短， 有时只需几分钟，多用于氨基酸、多肽、 有时只需几分钟，多用于氨基酸、多肽、 核苷酸和糖类等小分子物质的分离