IncuCyte：非标记的、长时间动态活细胞成像分析仪 典奥生物
TCB9-2活细胞工作站
活细胞高速共聚焦成像分析系统背景为适应目前对活细胞成像速度的要求，高速活细胞共聚焦显微镜应运而生，它们大大提高了成像速度，在取得高质量图像的同时，尽量保护样品，减少荧光淬灭，捕捉活细胞长时间动态变化，在生物学中得到广泛应用。
分类（根据扫描单元不同）（一）碟片式共聚焦1、高灵敏度、高分辨率的EMCCD2、YOKOGAWA CSU22/10共聚焦扫描单元3、电动载物台、快速聚焦单元4、细胞培养小室共聚焦扫描单元EMCCD电动载物台细胞培养小室分类（根据扫描单元不同）特点：1、高灵敏度2、高速成像3、低光毒性、光漂白4、多种实验技术应用分类（根据扫描单元不同）（二）点扫描式共聚焦1、PMT2、点扫描共聚焦单元3、电动载物台、快速聚焦单元4、细胞培养小室特点：高分辨率1）细胞迁移与细胞骨架2）细胞分裂与细胞周期3）细胞信号转导4）组织分化与发育5）囊泡和蛋白运输6）生理学和神经科学7）钙离子信号研究8）蛋白质与DNA相互作用9）宿主与病原体相互作用10）癌症研究11）药理研究12）生物物理研究T 细胞，绿色颗粒为HIV 病毒可以精确的跟踪需要观察的细胞记微管蛋白，红色标记染色体Determining the position of the cell division planeVol 424, 1074 -1078 (28 August 2003)T-cell engagement of dendritic cells rapidly rearranges MHC class II transportVol.418、No.6901（29 Aug.’02）细胞核囊泡和微管囊泡运输模式动物4D成像、追踪分析－－3D＋T光诱导动力学（Photokinesis）020060010001400C e l l C o u n t M itochondrial M ass-3-2-1123456400800120016002000T a crineF C C PA ce ta m in o p h e n L o g co m p o un d [礛]M i t o c h o n d r i a l M a s s 020040060080010001200140016001800200000.030.10.3131030Staurosporine [µM]C e l l n u m b e r a n d n u c l e i a r e a [-]什么是高内涵（HCA）细胞成像分析技术？高内涵细胞成像分析系统由三个部分组成：全自动高速显微成像，全自动图像分析和数据管理。
CDCFDA,SE 使用说明书
CDCFDA,SE——活细胞荧光示踪探针产品货号包装规格C03625mg储存条件：-20℃，避光保存。
激发/发射波长：504/529nm产品说明书GeneCopoeia,Inc.广州易锦生物技术有限公司广州高新技术产业开发区广州科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器F区8楼邮编：510663电话：4006-020-200邮箱：******************网址： ©2016GeneCopoeia,Inc.产品介绍5(6)-CDCFDA,SE是可固定、可渗透细胞的荧光素示踪剂，是一种FDA衍生物，已被广泛证实荧光标记细胞能有效确定总细胞的数量和一个样本中存在多少活细胞。
流式细胞术结合荧光染色法是分析非均质细胞种群的有力工具。
FDA和它的衍生物无荧光分子进入细胞后被胞内无特异性的酯酶所水解产生荧光。
这些荧光产物只能积聚在具有完整细胞膜的细胞中。
因此，死细胞无完整细胞膜不能被染色。
FDA具备精确地膜转运动力学和胞内水解作用或者类似物（CDCFDA）相关的细胞功能，因此可以通过荧光显微镜或者流式细胞仪来检测FDA标记的细胞。
过FDA 荧光标记的细胞在细胞系或者菌株中存在变化，可能是由于不同胞内酯酶的活性所造成的。
活细胞荧光示踪探针CDCFDA，琥珀酰亚胺酯是一个胺化FDA衍生物，可以用来制备各种FDA偶联物。
本品为固体形式，使用前需溶解于DMSO中以配制成储备液。
注意事项配制好的溶液为避免反复冻融，建议适当分装。
对于微量的液体，每次使用前请先高速离心数秒，使液体充分沉降到管底。
荧光染料不可避免的存在淬灭问题，请存放操作时注意避光，以减缓荧光的淬灭。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品信息化学名：5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein Diacetate,succinimidyl ester分子式：C25H17Cl2NO11分子量：626.36CAS号：147265-60-9操作指南细胞制备与染色注意：不同的实验体系所需的最佳染液工作浓度可能不同，需具体实验中摸索优化。
碧云天细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)说明书
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)产品简介：碧云天生产的细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)，即Autophagy Staining Assay Kit with MDC ，是一种使用丹酰尸胺，也称单丹磺酰尸胺、丹酰尸胺或丹酰戊二胺(monodansylcadaverine, MDC)作为荧光探针快速便捷地检测细胞自噬的试剂盒。
自噬(autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。
自噬与多种生理功能有关，在饥饿等环境条件下，细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。
自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。
由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个研究热点。
MDC 是细胞自噬检测最常用的荧光探针之一。
MDC 可以通过离子捕获(ion trapping)和与膜脂的特异性结合，从而特异性标记自噬体(autophagosome)，也称autophagic vacuole ，因而常用于细胞自噬的检测。
MDC 是一种嗜酸性荧光探针，很多酸性膜性结构也会被MDC 染色，因此MDC 染色时正常的细胞也会有一定的染色背景。
本产品的染色原理决定了本产品只能用于培养的细胞或者组织的细胞自噬荧光染色检测，不能用于冻存的或固定的细胞、组织或者组织切片的染色检测。
使用本产品染色后可以通过荧光显微镜拍照观察，也可以通过荧光酶标仪或流式细胞仪进行荧光检测。
荧光显微镜观察时可以使用紫外区激发光激发，发出绿色荧光。
荧光酶标仪或流式细胞仪推荐的激发波长为335nm (330-360nm 均可)，发射波长为512nm (510-540nm 均可)。
本产品用于细胞自噬染色的效果参考图1。
图1. 细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)的染色效果图。
活细胞成像技术在药物研发中的应用
活细胞成像技术在药物研发中的应用现代药物研发中，活细胞成像技术日益受到重视。
这种技术能够实时、动态地观察细胞内分子的互作、信号传递和代谢过程，对药物分子与细胞及其胞外微环境之间的相互作用进行直观记录和分析。
因此，在药物研发过程中广泛应用，成为药物研发和临床治疗中的重要手段。
活细胞成像技术通过显微镜将细胞内分子互作和代谢过程直接呈现在显微镜视野中，为观察药物与细胞相互作用提供了一个全新的视角。
比如，在药物筛选的早期阶段，化学家可以通过实时观察细胞中荧光标记的药物与靶分子的相互作用情况，及时剔除无效分子，节约时间和成本。
在药物开发中，临床医生可以通过实时观察药物进入、分布和代谢情况，推断患者响应和副作用机制，为制定个性化治疗方案提供重要参考。
与传统药物筛选方法相比，活细胞成像技术能够直观地显示药物与细胞之间发生的生物学反应，为药物开发提供了更贴近生物学实际情况的研究手段。
通过活细胞成像技术的应用，药物研发人员可以更加准确地研究药物的作用机制、毒性和副作用等问题，为药物的发现、开发和落地提供强有力的技术支撑。
此外，活细胞成像技术还能应用于标记、追踪和定量药物在细胞内的分布和代谢过程，及时了解药物的通透性、分布情况、抗药性、代谢速率和清除过程等。
通过实时观察药物在细胞和组织内的变化，药物研发人员能够更好地了解药物的作用机制和生物学反应，提高药效和降低副作用，从而提高药物的疗效和安全性。
总之，活细胞成像技术是药物研发和临床治疗中不可或缺的技术手段。
通过这种技术的应用，药物研发人员可以更加准确地研究药物的作用机制和生物学反应，为药物的发现、开发和落地提供强有力的技术支撑，促进了药物的研究和发展，有望为广大患者提供更为个性化和精准的治疗方案。
IncuCyte：非标记的、长时间动态活细胞成像分析仪 典奥生物
IncuCyte：非标记的、长时间动态活细胞成像分析仪典奥生物目前，大部分的细胞检测方法采用的仍然是传统的终点法——仅仅给出最终结果，而且往往需要标记细胞和破坏细胞。
这种方法无法得到细胞在生长时的真正状态，也无法对细胞的生长过程做出动态的监测和分析。
美国Essen公司开发了一款非标记的、长时间动态活细胞成像分析仪——IncuCyte，用一种非侵入式的方法，记录细胞的实时生长状态。
IncuCyte是一套用于长时间动态，非伤害式的活细胞成像分析平台。
IncuCyte分为信号采集机和控制机两部分，信号采集机可放置于培养箱中，中间放置多种规格尺寸的板、皿、瓶及载玻片，在其下方有显微照相设备，通过显微拍照，对培养细胞进行连续的监测，并通过连接电脑和网络进行远程控制、数据读取与分析。
系统可自动集中每个时间点的图像并自动生成动态录像（live video）。
用户除了可以得到各种格式的图像或动态录像外，还可以得到由系统软件自动依据饱和度和计数分析生成的基于图像应用的图表，以显示细胞的变化及趋势。
IncuCyte FLR可采集相差图像和荧光图像，可显示GFP，YFP和荧光素等；IncuCyte EX可以与自动化的平板和液体处理系统整合。
它们都进行了光学组件的优化，成像清晰，无传统的光晕问题。
图１：培养箱中的IncuCyteIncuCyte的优势：１）培养的细胞用相位差显微镜或荧光显微镜直接监测，为非破坏性的监测，细胞不用染色便可以观察监测，影像效果好；２）监测过程中细胞无需离开培养箱，不用担心培养条件的改变对细胞的影响；３）真正的长时间的动态活细胞成像，可达数天或数月，且没有传统显微系统的光晕问题，可以在384微孔板内监测细胞形态；４）图像处理软件自动依据饱和度和计数分析，量化细胞增殖；５）自动输出细胞生长曲线和细胞生长录像；６）通量大，可同时监测6块标准规格的细胞培养板/皿/瓶，细胞在384微孔板内实验，可以减少宝贵的药品消耗；７）支持超过200种的标准培养容器，无需特殊的培养容器，节约后期实验成本；８）可远程监控，进行数据读取和分析，无需反复出入细胞房，避免了潜在的污染隐患及人工出入观测之麻烦。
活体生物发光成像技术
活体生物发光成像技术-是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA活体生物发光成像技术-是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA，采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记，利用一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。
学术术语来源——绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞的分离鉴定文章亮点：1 利用显性遗传的表达绿色荧光蛋白的转基因大鼠作为细胞供体，进行了骨髓间充质干细胞的分离和培养，成功获得了稳定表达绿色荧光蛋白的大鼠骨髓间充质干细胞。
2 经鉴定后的间充质干细胞传代至10代时仍具有很强的增殖能力，采用油红O和茜素红染色方法进一步证实，在不同的诱导条件下，其可分别向成脂和成骨方向分化。
结果说明稳定表达的绿色荧光蛋白未影响到骨髓间充质干细胞的多向分化潜能，可作为良好的示踪因子。
关键词：干细胞；骨髓干细胞；绿色荧光蛋白；骨髓间充质干细胞；转基因大鼠；细胞表型；成骨分化；成脂分化；辽宁省自然科学基金主题词：骨髓；间质干细胞；绿色荧光蛋白质类；大鼠，转基因摘要背景：转基因动物提取的间充质干细胞自身携带绿色荧光蛋白，与传统病毒、质粒转染相比，能在活细胞中稳定地表达，可较快筛选其修饰的细胞。
目的：观察绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。
方法：取2周龄的绿色荧光蛋白转基因大鼠双侧长骨骨髓，采用全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞。
流式细胞术分析第5代绿色荧光蛋白阳性骨髓间充质干细胞的细胞表型，并分别加入成骨及成脂条件培养液进行体外多向诱导分化，采用茜素红钙盐染色和油红O染色进行鉴定。
结果与结论：成功获得了稳定表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表达CD90和CD105，不表达或弱表达CD14和CD45。
经成骨诱导3周后茜素红染色可见有橘红色钙盐沉积，经成脂诱导3周后油红O染色见红色的脂滴。
Incucyte使用注意事项-中国科学院生物化学与细胞生物学研
活细胞长时间动态影像成像分析仪Incucyte FLR使用注意事项1. 培训：使用本仪器需先经过培训，未经培训者不得擅自使用。
2. 预约：仪器使用，请至少提前一天预约：/admin.jsp.预约非上班时间使用机器的同学，请在预约成功后的上班时间来平台开通门卡。
因活细胞实验周期较长，请在确定预约成功之后再开始接种细胞。
3. 计费原则：以预约时间作为收费依据，每30分钟作为一个计费时间单位，不足30分钟的按30分钟计费。
若时间预估不足，实际使用时间超过预约时间，将按照实际使用时间收费。
4. 使用原则：Incucyte FLR仪器适用于活细胞长时间动态影像成像的连续监测，为避免交叉污染和干扰连续监测，充分保障正常使用研究者的实验条件，原则上不进行非连续短时间检测实验，每人（每个实验）每天最多只能有1次预约，通常建议一次约几天以确保实验稳定顺利。
如有所内研究组确因实验需要，希望能用本仪器进行非连续短时间检测摸条件，请先和相关技术主管沟通，在确认可行的情况下方可使用，每人（每个实验）每天最多仍只能有1次预约，以免干扰其他研究组的正常预约和使用。
如果“非连续短时间检测实验”与“长时间连续检测实验”有或将要有时间冲突时，只有长时间连续检测实验者有仪器使用权，请申请进行特殊情况实验的人员预先要明确理解此规定并严格按此执行，谢谢！有任何疑问请咨询本仪器管理员赵宏伟（Tel: 21353）邮箱hwzhao@。
4. 收费标准：单次预约时间的第1－8小时，按90元/小时计费；单次预约的第9－24小时之间不计费；第25小时起按30元/小时计费。
5. 使用登记：使用Incucyte仪器，使用完毕，请及时登记。
6. 数据备份和处理：因数据文件较大计算机硬盘需要定时清理，数据导出后请及时备份，平台不负责长期保存数据。
数据一律用光盘刻录形式导出，平台提供分析软件安装，导出后的数据可带回个人实验室进行分析处理。
7．如需进行划伤实验，Wound Maker 必须由本平台工作人员操作。
赛多利斯Incucyte SX5 活细胞分析系统｜细胞分析技术
赛多利斯Incucyte SX5 活细胞分析系统直接在培养箱内实现实时活细胞成像和分析Incucyte®活细胞分析系统是赛多利斯针对细胞分析推出的最具创新特色的产品- 它是一款用于活细胞成像的突破性解决方案，能够以前所未有的速度、深度和规模呈现生物反应的机制。
Incucyte®活细胞分析系统是一种实时定量活细胞成像和分析平台，通过在标准实验室培养箱中全天候自动采集和分析图像，显示和定量分析细胞行为随时间的变化。
这使得研究人员能够对活细胞进行长达数天和数周的延时动态测量，从而实时地洞察生物活动过程。
了解更多关于Incucyte® 系统的信息为您介绍Incucyte® SX5 活细胞分析系统更多色彩，更多发现，更多可能。
新型Incucyte® SX5采用正在申请专利的光学系统，可从各种样品中了解更多信息。
利用活细胞分析专用的5个不同荧光通道，帮助完成更多工作。
提供更多色彩。
提供更多试剂。
为更多应用提供更具专业性的软件。
从细胞获得更深层次的生理学相关信息。
关键功能：•多达五个不同的荧光通道，一次实验可使用多达三个通道•新型三色光学模块配置长波、低光毒性NIR通道，以及优化试剂，提供应用一体化解决方案•搭载4倍、10倍和20倍物镜的电动转架•支持3个可互换的容器托盘，兼容多达600种以上的培养容器，可同时放置6个微孔板•支持新型应用，包括监测新陈代谢、神经元活动和肿瘤球•通过远程网络访问和免费的无限许可提供无缝的多用户支持Incucyte®—研发人员的信赖之选提出新问题针对众多应用，提出新问题、发现新见解，例如检查细胞健康、细胞功能、细胞活性、细胞监测和工作流程、活细胞分析、免疫肿瘤学、免疫学、肿瘤学、细胞治疗和神经科学。
通过为多种细胞类型（从增殖的肿瘤细胞到非贴壁的免疫细胞，再到敏感的原代细胞）设计的系统，快速产生新的见解，并加速发现过程。
Incucyte®具有独特的移动光学系统，不会影响细胞培养，可以对细胞健康和活性、细胞迁移和侵袭、以及一系列基于细胞的表型分析进行细胞实时监测。
活体成像counts.s
活体成像counts.s活体成像counts.s主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。
生物发光是用荧光素酶（Luciferase）基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP、Cyt及dyes等）进行标记。
采用一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。
通过这个系统，可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。
传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据，得到多个时间点的实验结果。
相比之下，可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪同一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化，所得的数据更加真实可信。
另外，这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高，不涉及放射性物质和方法，非常安全。
因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高等特点，在刚刚发展起来的几年时间内，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。
实验过程通过分子生物学克隆技术，应用单克隆细胞技术的筛选，将荧光素酶的基因稳定整合到预期观察的细胞的染色体内，培养出能稳定表达荧光素酶蛋白的细胞株。
典型的成像过程是：小鼠经过麻醉系统被麻醉后放入成像暗箱平台，软件控制平台的升降到一个合适的视野，自动开启照明灯拍摄第一次背景图。
下一步，自动关闭照明灯，在没有外界光源的条件下拍摄由小鼠体内发出的光，即为生物发光成像。
与第一次的背景图叠加后可以清楚的显示动物体内光源的位置，完成成像操作。
之后，软件完成图像分析过程。
使用者可以方便的选取感兴趣的区域进行测量和数据处理及保存工作。
当选定需要测量的区域后，软件可以计算出此区域发出的光子数，获得实验数据。
软件的数据处理和保存功能非常强大，可以加快实验速度，方便大批量的实验。
技术应用通过活体动物体内成像系统，可以观测到疾病或癌症的发展进程以及药物治疗所产生的反应，并可用于病毒学研究、构建转基因动物模型、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究以及细胞体外检测等领域。
萤火虫荧光素酶活体成像方法步骤
萤火虫荧光素酶活体成像方法步骤：
萤火虫荧光素酶活体成像方法步骤如下：
1.准备实验动物和标记荧光素酶的细胞：选择适当的实验动物，如小鼠或大鼠，并获取标记荧光素酶的细胞。
标记荧光
素酶的方法是将荧光素酶基因转染到目标细胞中，使细胞表达荧光素酶。
2.建立活体成像系统：建立适合实验动物大小的活体成像系统，如小动物全身成像系统或显微成像系统。
3.标记细胞的移植：将标记的细胞移植到实验动物的特定部位，如皮下、肌肉或器官中。
4.荧光素酶底物的给药：通过给药方式将荧光素酶底物（如荧光素）给予实验动物，使底物在细胞内代谢并发出荧光。
5.活体成像：在设定的时间点对实验动物进行荧光成像，记录荧光信号的变化。
荧光信号的强弱与标记细胞的数目和活
性有关。
6.数据分析和处理：对获得的荧光图像进行定量分析，计算标记细胞的数目、荧光强度等参数，并根据需要绘制时间-
荧光强度曲线或其他相关图表。
7.结论分析：根据数据分析结果，评估荧光素酶活体成像方法在生物学、药理学或医学研究中的应用价值，并针对具体
问题给出相应的结论和建议。
活细胞分析检测技术
活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术是指对活体细胞进行实时监测和分析的一种技术手段，通过对细胞的形态、功能以及代谢等方面进行观察和分析，可以揭示细胞的生理状态、亚细胞结构和功能、细胞间相互作用等信息。
活细胞分析检测技术广泛应用于细胞生物学、药物筛选、疾病诊断等领域。
本文将介绍几种常用的活细胞分析检测技术。
一、荧光显微镜技术荧光显微镜技术是利用荧光染料标记的靶分子与细胞结构或靶蛋白相互作用，通过荧光显微镜观察荧光信号的分布和强度变化，得到有关细胞状态和功能的信息。
例如，利用荧光染料标记能与细胞膜结合的小分子，可以观察细胞膜的形态和动态变化；利用荧光标记的抗体可以检测细胞内特定蛋白的定位和表达水平。
荧光显微镜技术具有高分辨率、灵敏度高、实时性好等优点，可以用于观察细胞的动态过程和细胞内分子的相互作用。
二、流式细胞术流式细胞术是通过将单个细胞悬浮液流过光学器件，利用细胞自身特征和荧光标记与细胞状态和功能相关的分子相互作用，实现对细胞的快速分析和检测。
流式细胞术可以实现对大量细胞样本进行高通量分析，可以同时检测多个分子的表达水平和细胞的多种功能。
流式细胞术广泛应用于肿瘤学、免疫学、细胞生物学等领域，可以用于检测癌细胞的标记物、淋巴细胞的表型和功能等。
三、融合蛋白技术融合蛋白技术是将荧光蛋白或其他标记蛋白与感兴趣的细胞结构或靶蛋白相融合，通过对融合蛋白的表达和定位进行观察，可以得到有关细胞结构和功能的信息。
例如，将荧光蛋白与细胞核定位信号序列融合可以观察细胞核的位置和形态变化；将荧光蛋白与线粒体靶向序列融合可以观察线粒体的位置和数量变化。
融合蛋白技术可以用于研究细胞器的位置和功能改变以及细胞间相互作用等。
四、细胞电生理技术细胞电生理技术是通过记录细胞膜上的电位变化和电流活动来研究细胞的生理功能和代谢活动的一种技术方法。
常用的细胞电生理技术包括膜片钳技术、全细胞钳技术和垂直内出封技术等。
细胞电生理技术可以用于研究细胞的离子通道功能、细胞膜电位变化、膜上受体和信号转导通路等。
韩帅
克隆抗体与细胞表面相应抗原的结合的继发荧光量转换成电信号，这就代表了细胞表面的
抗原量。这些荧光通过流式细胞仪的识别和分辨，从而实现对细胞表面抗原的定量检测。 流式细胞术与单克隆抗体结合，对细胞表面和细胞内抗原、癌基因蛋白及膜受体的定 量检测取得很大的进展，克服了普通免疫学方法难以准确定量的不足。这一技术对于人体
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流式细胞仪
流式细胞仪基本功能
流式细胞仪器根据其基本功能可分为：分析型流式细胞仪和分选型流
式细胞仪。
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流式细胞仪——液流系统
流式细胞仪——光路系统 流式细胞仪——检测分析系统 流式细胞仪——分选系统
流式细胞仪
流式细胞仪——液流系统
流式细胞仪液流系统由两套 紧密联系而又相互独立的液流组 成，即鞘液流和样品流。一般是 将待测细胞或微粒进行荧光染色 后制成悬液标本，在一定气体压 力下将待测样品压入流动室。
大小成比例。和与激光在同一方向在同一水平
面并与激光成90°角的侧向角散射光（SSC）， 与细胞粒度或者内部复杂度成比例。
外周血白细胞FSC-SSC散点图
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流式细胞仪
流式细胞仪——光路系统
滤光片根据功能主要分为：长通滤片，短通滤片，带通滤片
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流式细胞仪
流式细胞仪——检测分析系统
流式细胞仪就是以通道为单位将细胞的各个通道的光信号汇总分析，最后得出样 本群体中细胞的物理化学特性。
被测群体大、可进行多参数测量。即对同一个细胞做有关物理、
生物化学特性的多参数测量，且在统计学上有效。
流式细胞仪原理
流式细胞仪的原理，简而言之就是 一定波长的激光束直接照射到高压驱动 的液流内的细胞，产生的光信号被多个
接收器接收，根据接收到的信号强弱就
GeneCopoeia EU法细胞增殖(细胞成像)检测试剂盒 产品说明书
iClick™EU Andy Fluor594Imaging Kit——EU法细胞增殖（细胞成像）检测试剂盒产品货号包装规格A010250次储存条件：-20℃，避光保存。
激发/发射波长：Andy Fluor594azide:590/615nm；Hoechst33342:350/461nm。
产品说明书GeneCopoeia,Inc.广州易锦生物技术有限公司广州高新技术产业开发区广州科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器F区8楼邮编：510663电话：4006-020-200邮箱：******************网址： ©2016GeneCopoeia,Inc.iClick™EU Andy Fluor594Imaging Kit产品货号:A010试剂盒组份：产品介绍直接测定RNA合成及RNA水平的变化是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法。
EU法细胞增殖（细胞成像）检测试剂盒采用一种尿嘧啶核苷类似物-EU（5-乙炔基-尿嘧啶核苷），能够在RNA转录时期代替尿嘧啶（U）掺入正在合成的RNA分子，利用EU与染料之间的点击化学(Click Chemistry)反应可以在体内和体外水平检测时间和空间上RNA合成的变化，能够更方便地研究RNA转录位点，结合相关抗体标记能够检测与RNA有相互作用的蛋白。
结合EdU和EU进行检测新合成的DNA和新合成的RNA，可以深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、DNA复制及修复、信号通路等方面的研究。
注意事项荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验所需耗材（不包含在试剂盒中）•1×PBS（pH7.2~7.6）•细胞固定液（含3.7%甲醛的PBS）•细胞透膜液（含0.5%Triton®X-100的PBS）•含3%BSA的PBS（pH7.4）•去离子水•18×18mm盖玻片EU法细胞增殖（细胞成像）检测实验流程细胞铺板可选：处理细胞样品EU孵育细胞固定、透膜细胞EU检测可选：抗体或其他染料细胞染色图像获取及分析实验步骤1.EU标记注意：EU标记的最佳浓度根据细胞类型而变化。
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IncuCyte：非标记的、长时间动态活细胞成像分析仪典奥生物目前，大部分的细胞检测方法采用的仍然是传统的终点法——仅仅给出最终结果，而且往往需要标记细胞和破坏细胞。
这种方法无法得到细胞在生长时的真正状态，也无法对细胞的生长过程做出动态的监测和分析。
美国Essen公司开发了一款非标记的、长时间动态活细胞成像分析仪——IncuCyte，用一种非侵入式的方法，记录细胞的实时生长状态。
IncuCyte是一套用于长时间动态，非伤害式的活细胞成像分析平台。
IncuCyte分为信号采集机和控制机两部分，信号采集机可放置于培养箱中，中间放置多种规格尺寸的板、皿、瓶及载玻片，在其下方有显微照相设备，通过显微拍照，对培养细胞进行连续的监测，并通过连接电脑和网络进行远程控制、数据读取与分析。
系统可自动集中每个时间点的图像并自动生成动态录像（live video）。
用户除了可以得到各种格式的图像或动态录像外，还可以得到由系统软件自动依据饱和度和计数分析生成的基于图像应用的图表，以显示细胞的变化及趋势。
IncuCyte FLR可采集相差图像和荧光图像，可显示GFP，YFP和荧光素等；IncuCyte EX可以与自动化的平板和液体处理系统整合。
它们都进行了光学组件的优化，成像清晰，无传统的光晕问题。
图１：培养箱中的IncuCyteIncuCyte的优势：１）培养的细胞用相位差显微镜或荧光显微镜直接监测，为非破坏性的监测，细胞不用染色便可以观察监测，影像效果好；２）监测过程中细胞无需离开培养箱，不用担心培养条件的改变对细胞的影响；３）真正的长时间的动态活细胞成像，可达数天或数月，且没有传统显微系统的光晕问题，可以在384微孔板内监测细胞形态；４）图像处理软件自动依据饱和度和计数分析，量化细胞增殖；５）自动输出细胞生长曲线和细胞生长录像；６）通量大，可同时监测6块标准规格的细胞培养板/皿/瓶，细胞在384微孔板内实验，可以减少宝贵的药品消耗；７）支持超过200种的标准培养容器，无需特殊的培养容器，节约后期实验成本；８）可远程监控，进行数据读取和分析，无需反复出入细胞房，避免了潜在的污染隐患及人工出入观测之麻烦。
图２：IncuCyte内部结构，支持超过200种的标准培养容器图３：IncuCyte记录的细胞的相差图像和增殖曲线图３是IncuCyte记录的细胞增殖的相差图像和增殖曲线。
左侧图像是在同一视野内间隔12小时拍摄的CHO细胞的相差图像，图像可以24小时连续生成，而无需将细胞移出培养箱。
右侧的增殖曲线是依据间隔3小时的图像生成的，由软件自动将图像数据转换成定量的饱和度vs.时间的数据，生成动态的增殖曲线。
最后图像会被导出成单独的JPEG文件或视频。
IncuCyte软件功能：通过联网的软件，用户可以在任何一台联网的计算机上操控仪器，而无需反复拿进拿出标本及出入细胞房，这使IncuCyte成为了一个“虚拟的培养箱”。
用户可以在软件的操作界面上定义耗材的类型、拍摄的时间和位置。
IncuCyte可以自动对焦，自动进行图像收集。
对得到的图像也可以进行亮度、尺寸、对比度的显示控制。
用户可以电子化标记器皿，并设定关键词，必要时可用设定的关键词搜索数据库，方便查询过去任何时间得到的图像和数据。
用户还可以直接从软件中抓取图像、图表、曲线至Word、Excel、Powerpoint和Email中。
生成的所有数据均可存档，并且数据和图表可以打包封存，便于用户带回家分析。
图４：软件操作界面IncuCyte的应用：1）监测细胞增殖（Proliferation）可监测细胞形态上的变化，可用荧光标定细胞核，观察细胞核的大小及计数。
关键特性：1）由实时图像获得定量的动态的过程指标；2）指标为非侵入型，如单层饱和度；3）标记指标（GFP或活细胞染色）可进行细胞核计数；4）所有动态信号均有图像和影片验证。
图5：不同细胞的生长曲线，每隔3小时拍照，自动生成单层饱和度VS.时间图表2）细胞质控（Cell Culture QC）监测细胞形态上的变化，对细胞培养进行质控，如进行自动化的细胞培养，用175T 培养瓶，培养出大量且高质量的细胞，可做进一步细胞分析实验的细胞来源。
监测生长曲线与培养基的血清浓度的变化，寻找最适合的培养基的血清浓度。
监测生长曲线与培养基的配方的变化，寻找最适合的培养基配方。
关键特性：1）获得增殖细胞的实时图像，无需标记和将细胞移出培养箱；2）用动态指标，如单层饱和度优化培养过程；3）对微孔板能进行极好的质控，专利的HD（高清晰度）成像模式能消除微孔板的弯液面缺陷（meniscus artifacts）；4）用object algorithms评价细胞生长，消除人为干扰；5）系统可观察大面积的细胞培养容器，增加了评估的准确性；6）所有指标都有图像和影片进行验证。
图6：不同血清浓度培养基中CHO-hERG细胞的增殖曲线，单层饱和度VS.时间图表，细胞在2％血清的培养基中的生长快于在10% 血清的培养基中的生长3）监测细胞毒性（Cytotoxicity）关键特性：1）动态读数：可以实时动态地记录细胞活性在不同生理环境下的短期和长期的变化，不需要事先决定一个广泛适用的终点；2）Mix and read：将YOYO-1直接加入全培养基的细胞中，移除了液体的吸气步骤（fluid aspiration steps），消除了受损细胞的细胞破裂（cell disruption）；3）自动数据获取：可在培养箱中自动收集相差图像和荧光图像；4）细胞形态区分：高对比度的相差图像和影像资料可以使用户定性地区别Cytotoxic和Cytostatic（抗增殖）的不同作用；5）高度可重复性：实时动态的细胞死亡记录是高度可重复的，Z’在0.6和0.8之间。
图7：不同浓度的Taxol对MDA-MB-231细胞的毒理实验，Taxol在24小时和48小时处加入，每隔3小时拍照，自动生成单层饱和度VS.时间图表4）监测细胞凋亡（Apoptosis）关键特性：1）可动态、持续地观察凋亡的发生；2）独特的“免洗”标记程序使定量更方便，避免在标记过程中洗掉死亡的或将死的细胞；3）与流式细胞仪不同，细胞无需移动，就可进行分析，同样的细胞可以被用于后续的动态的研究；4）从实时图像中可取得动态的过程指标，包括细胞凋亡目标计数或细胞凋亡的目标区域的标准化；5）相差图像可用来监测与凋亡相关的细胞形态上的改变；6）实验结束后用染料染色计量DNA总数目，可得到凋亡指数（apoptotic index），表示凋亡对象的百分比；7）可用于96孔微孔板的定量分析。
图8：细胞凋亡的荧光图像图10：伤口愈合、细胞迁移和细胞侵袭IncuCyte可以从预设的时间点来获得图像并转换成影片。
系统记录了初始的Wound Mask，然后随着Revised Wound Mask的生成，系统持续记录图像来跟踪伤口的愈合。
IncuCyte还可用于其它细胞运动如“迁移”和“侵袭”的监测。
用户可以很直观地通过2D的迁移和3D的侵袭图像来观察细胞形态的变化，并对两种细胞运动方式进行对比。
在我们的高清成像基础上，细胞无需标记就可以进行观察。
使用专利的算法，可以得到综合的基于时间推移的持续性图像采集指标，包括：伤口相对密度（专利）、伤口宽度、伤口饱和度，使实验结果的定量性和重复性更好。
所有时间点的指标都可以通过细胞图像和影片进行验证。
细胞迁移的关键特征：1）无需标记；2）96孔的定量动态数据适合pathway analysis，能最优化动态范围，Z’>0.7；3）2D的迁移与ECM（细胞外基质）coating相容；3）可从实时图像中获得动态的过程指标，包括伤口相对密度（专利）、伤口宽度、伤口饱和度。
4）所有指标均有图像和影片验证。
细胞侵袭的关键特征：1）可重复的药理学：此实验使用户能评估在有细胞外基质（ECM）存在时，不同试剂对细胞的药理学作用；2）细胞形态学：可按事先制定的方式获得图像，使用户能观察到2D的迁移和3D的侵袭时细胞的不同的形态变化；3）对比：用户能在同一块微孔板上设置不同的ECM浓度，对比迁移和侵袭；4）无需标记：HD成像技术无需细胞标记；5）动态读数：用户能同时观察到不同实验变量下的侵袭的速度和程度，可用于探索基于时间的药理学、进行实验优化（如ECM浓度，细胞密度）、增加实验敏感性；6）可定量：当使用专利的伤口相对密度（RWD）指标时，结果是定量的，可重复的。
y0.01uM0.04uM0.1uM0.3uM1uM3uMVehicleTime (hours)RWD%图11：Cytochalasin D对HT 1080细胞的迁移的抑制作用，伤口相对密度（RWD%）VS.时间图表，Cyto D浓度越大，伤口愈合越缓慢图12：细胞迁移（奇数列）和细胞侵袭（偶数列）图表对比，伤口相对密度（RWD%）VS.时间图表7）监测血管新生（Angiogenesis）血管新生是一种复杂、多步的过程，包括细胞增殖、迁移和血管形成。
IncuCyte FLR 和GFP-AngioKits合用，能监测血管生成的全过程，同时测定药物对血管生成的作用。
关键特性包括：1）使用人类的原生细胞，和共培养体系可显示血管新生过程中的所有阶段的变化；2）实验十分精确，Z’>0.7；3）动态读数可研究复杂的通路，包括VEGF（血管内皮生长因子）和non-VEGF（非血管内皮生长因子）信号介导的血管新生；4）时序性的读数可研究药物基于时间的作用，如对血管分裂的作用；5）能测量促血管生成pro-angiogenic和抗血管生成anti-angiogenic的作用；6）定量指标来源于实时图像的采集，指标包括：血管长度、血管面积和分支点；7）所有数据可用图像和影片验证。
图13：血管新生，第1天和第14天对比，血管长度从0.6mm/mm2增长到11.6mm/mm2图14：在VEGF存在的情况下Suramin对血管新生的抑制作用，Suramin浓度越大，血管长度增长越小，抑制作用越明显。
8）监测报告基因（Reporter Gene）与传统的终点荧光素酶方法对比，IncuCyte的关键特征在于：1）数据丰富：可获得终点法无法得到的多个时间点的实时动态的图像和数据；2）节约成本：无需裂解，无需荧光素酶法需要的终端反应底物，节省时间和花费；3）方便：动态的数据使用户能在单个的实验中优化信号窗（signal window），无需事先决定何时终止实验；4）敏感：可得到每个条件下的多个时间点数据，增加了实验的定量性（quantitative robustness）；5）可定制：用户可根据需要定制启动子，修改反应体系，监测药物对报告基因的作用。