实验三 病原性球菌 (2)
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• 出现颗粒状凝集：＋ • 不凝集：－
S.e
3、透明质酸酶试验
（1）取家兔一只，将其背部两侧对应部位剪毛、 消毒 （2）0.5ml溶血性链球菌培养物滤液+1%台盘蓝 （实验组） 0.5ml生理盐水+1%台盘蓝（对照组） （3）于家兔背部两侧分别皮内注射混合物0.5ml （4）注射完毕立即测量两侧台盘蓝扩散直径，1h 后再次测量两侧台盘蓝直径 （5）观察结果，得出结论
注射混合物后： 对照组 试验组
60分钟后： 对照组 试验组
4.肺炎链球菌感染小白鼠，解剖小白鼠
3. 肺炎链球菌Hiss荚膜染色（个人操作）
无菌棉签取小鼠腹腔液或心血涂片
涂片（均匀） 自然干燥
1%结晶紫2’
倾去多余染液
20%硫酸铜冲洗
吸干、镜检
染色结果：背景：紫色，菌体：紫色， 荚膜：无色
– 金黄色葡萄球菌 S. aureas – 链球菌 – 肺炎链球菌 S. pneumoniae – 脑膜炎球菌 N. meningitidis – 淋病双球菌 N. gonorrhoeae
• 奈瑟菌属 Neisseria
1. 病原性球菌的形态染色镜下观察与血平板 培养特点（示教） 2. 血浆凝固酶试验 • 试管法（示教） • 玻片法（个人操作） 3.透明质酸酶试验（示教） 4.肺炎链球菌感染小白鼠，解剖小白鼠 肺炎链球菌荚膜染色（个人操作）
金葡
金黄色
表皮葡萄球 菌 白色或 腐生葡萄球 柠檬色 菌
－
－
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
－
－
2、血浆凝固酶试验
问：血浆凝固酶有几种？其作用机制如何？
试管法（示教）
玻片法（个人操作）
（1）标记后，生理盐水各1滴 （2）无菌操作，取菌苔少许，与N.S. 混 匀，观察有无自凝 （3）各加兔血浆1滴，混匀 （4）观察现象： S.a （5）得出结论：
1、病原性球菌的形态染色镜下观 察与血平板培养特点
• 镜下示教片： – 革兰染色标本片：葡萄球菌、链球菌 – 荚膜染色标本片：肺炎链球菌 （大小、形状、排列、染色反应 ） • 血平板上菌落观察： – 金黄色和白色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌 （大小、形态、表面、边缘、透明度、色素、 溶血性）
链球菌 葡萄球菌
第三次实验 病原性球菌
试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔分别放置在试 管架中间两行。器材使用以后，必须放回原处，依次摆整 齐。
实验室器材 整齐有序,值日生最后整理要求如图。
病原性球菌 Pathogenic cocci
• 葡萄球菌属 Staphylococcus • 链球菌属 Streptococcus
作业 • 绘图注意事项：
– – – – 用红蓝蜡笔绘图。 注意菌体大小合适 标出菌体颜色，显示肺炎双球菌典型排列方式 特殊结构荚膜无色
染色结果：背景：紫色，菌体：紫色， 荚膜：无色
脑膜炎球菌
金黄色葡萄球菌血平板
表皮葡萄球菌血平板
金黄色葡萄球菌
乙型溶血性链球菌血平板
鉴别致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌5大指标
甘露 醇发 酵 ＋ 血浆 凝固 酶 ＋ 耐热 核酸 酶 ＋
色素 致病性 葡萄球 菌 非致病 性葡萄 球菌
溶血 素 ＋
S.e
3、透明质酸酶试验
（1）取家兔一只，将其背部两侧对应部位剪毛、 消毒 （2）0.5ml溶血性链球菌培养物滤液+1%台盘蓝 （实验组） 0.5ml生理盐水+1%台盘蓝（对照组） （3）于家兔背部两侧分别皮内注射混合物0.5ml （4）注射完毕立即测量两侧台盘蓝扩散直径，1h 后再次测量两侧台盘蓝直径 （5）观察结果，得出结论
注射混合物后： 对照组 试验组
60分钟后： 对照组 试验组
4.肺炎链球菌感染小白鼠，解剖小白鼠
3. 肺炎链球菌Hiss荚膜染色（个人操作）
无菌棉签取小鼠腹腔液或心血涂片
涂片（均匀） 自然干燥
1%结晶紫2’
倾去多余染液
20%硫酸铜冲洗
吸干、镜检
染色结果：背景：紫色，菌体：紫色， 荚膜：无色
– 金黄色葡萄球菌 S. aureas – 链球菌 – 肺炎链球菌 S. pneumoniae – 脑膜炎球菌 N. meningitidis – 淋病双球菌 N. gonorrhoeae
• 奈瑟菌属 Neisseria
1. 病原性球菌的形态染色镜下观察与血平板 培养特点（示教） 2. 血浆凝固酶试验 • 试管法（示教） • 玻片法（个人操作） 3.透明质酸酶试验（示教） 4.肺炎链球菌感染小白鼠，解剖小白鼠 肺炎链球菌荚膜染色（个人操作）
金葡
金黄色
表皮葡萄球 菌 白色或 腐生葡萄球 柠檬色 菌
－
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
－
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2、血浆凝固酶试验
问：血浆凝固酶有几种？其作用机制如何？
试管法（示教）
玻片法（个人操作）
（1）标记后，生理盐水各1滴 （2）无菌操作，取菌苔少许，与N.S. 混 匀，观察有无自凝 （3）各加兔血浆1滴，混匀 （4）观察现象： S.a （5）得出结论：
1、病原性球菌的形态染色镜下观 察与血平板培养特点
• 镜下示教片： – 革兰染色标本片：葡萄球菌、链球菌 – 荚膜染色标本片：肺炎链球菌 （大小、形状、排列、染色反应 ） • 血平板上菌落观察： – 金黄色和白色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌 （大小、形态、表面、边缘、透明度、色素、 溶血性）
链球菌 葡萄球菌
第三次实验 病原性球菌
试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔分别放置在试 管架中间两行。器材使用以后，必须放回原处，依次摆整 齐。
实验室器材 整齐有序,值日生最后整理要求如图。
病原性球菌 Pathogenic cocci
• 葡萄球菌属 Staphylococcus • 链球菌属 Streptococcus
作业 • 绘图注意事项：
– – – – 用红蓝蜡笔绘图。 注意菌体大小合适 标出菌体颜色，显示肺炎双球菌典型排列方式 特殊结构荚膜无色
染色结果：背景：紫色，菌体：紫色， 荚膜：无色
脑膜炎球菌
金黄色葡萄球菌血平板
表皮葡萄球菌血平板
金黄色葡萄球菌
乙型溶血性链球菌血平板
鉴别致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌5大指标
甘露 醇发 酵 ＋ 血浆 凝固 酶 ＋ 耐热 核酸 酶 ＋
色素 致病性 葡萄球 菌 非致病 性葡萄 球菌
溶血 素 ＋