病原性球菌及检验
主管检验技师考试临床医学检验微生物检验讲义第13章病原性球菌及检验
病原性球菌及检验● 考点葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属生物学性状微生物学检查法临床意义（致病性、所致疾病）【内容讲解】普及共性，单记个性生物学性状形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。
培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。
生化反应：特殊生化。
抗原：分类：致病性致病物质所致疾病微生物学检查：针对生物学性状和致病性。
一、葡萄球菌属一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。
（一）生物学特性1.形态与结构G+，球形，0.5～1.5μm，呈葡萄串状成堆排列（在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列），无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。
普皿：圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。
可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。
血琼脂平板：几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
液体培养基：生长迅速呈均匀混浊状。
3.生化反应触酶试验（+）；多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气；分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶（多数致病性葡萄球菌）。
4.抗原（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。
存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。
（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。
5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（2）古典分类法6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐。
是抵抗力最强的无芽胞细菌。
（二）临床意义葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。
（1）金黄色葡萄球菌致病物质：血浆凝固酶；葡萄球菌溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮溶解毒素；毒性休克综合征毒素。
医学微生物实验实验四病原性球菌
相关研究和应用前景
研究方向
• 球菌的耐药性研究 • 球菌的毒力机制研究
应用前景
• 新型抗菌药物的开发 • 快速检测方法的改进
实验的意义和价值
促进健康
通过研究病原性球菌，能够更好地了解和应对 与之相关的疾病，促进人们的健康。
拓展科学知识
通过实验，可以进一步了解微生物领域的知识， 为科学研究的发展做出贡献。
3 柯氏试验
通过培养基的反应性来鉴别链球菌。
2 大肠杆菌鉴别试验
利用培养基鉴别肺炎球菌。
病原性球菌的检测方法
1
涂片法
将样品涂在玻璃片上，使用显微镜观察病原性球菌的形态特征。
2
H2 S产生试验
利用培养基观察球菌对H2S的产生情况。
3
SIM管法
通过尿素和铁盐培养基观察球菌的反应。
病原性球菌实验结果分析
形态观察
观察菌落的形态特征，如颜色、 形状和质地。
病原性球菌的特征和疾病
球菌种类 金黄色葡萄球菌 肺炎球菌 链球菌
特征 黄色菌落，产生金黄色素 多形态，革兰阴性 成链状排列
相关疾病 皮肤感染、食物中毒等 肺炎、脑膜炎等 咽炎、扁桃体炎等
病原性球菌的实验判断
1 甘露醇耐性试验
用甘露醇培养基判断金黄色葡萄球菌。
医学微生物实验实验四病 原性球菌
这个介绍病原性球菌的医学微生物实验将带您了解球菌的分类和特征，病原 性球菌对人类健康的影响，以及与常见球菌相关的疾病。
病原性球菌的分离与鉴定
样本采集
收集可能含有病原性球菌的样 本，如血液、尿液或分泌物。
培养与分离
将样本在含有适宜培养基的培 养皿中培养，分离出病原性球 菌。
病原性球菌的检验
病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。
⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。
分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。
（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。
（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。
（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。
（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。
⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。
⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。
⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。
金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。
因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。
无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。
致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。
培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
），在麦康凯琼脂平板不生长。
2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。
5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。
6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。
4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。
微生物检验学 实验七 病原性球菌的检验
A群溶血性链球菌 S
-
无乳链球菌
R
+
肺炎链球菌和草绿色链球菌的鉴别
菌种
镜下形态
菌落形态
Optochin
肺炎链球菌
矛头状、成对、有荚膜
稍大、扁平、湿润、脐 状
S
草绿色链球菌
圆形、成链、无荚膜
较小、凸起、稍干、圆 形
R
【注意事项】
触酶试验中3％H2O2溶液要新鲜配制，并且不宜用 血琼脂平板上生长的菌落。 凝固酶试验通常用玻片法为筛选试验、如遇凝固酶 试验结果不典型可以用试管法鉴定。 观察胆汁-七叶苷试验结果时，要求至少1/2斜面变 黑才能判断为阳性。
【实验方法】 1、染色镜检 2、分离培养 3、生化反应 葡萄球菌属
触酶试验 凝固酶试验 新生霉素敏感试验
4
链球菌属和肠球菌属
触酶试验 链球菌属
杆菌肽敏感试验 CAMP试验 Optochin敏感试验 肠球菌属 胆汁-七叶苷试验 65g/L NaCl耐受生长试验
胆汁七 生化反应
CAMP试验
主要性状
菌落色素 溶血 血浆凝固酶 触酶 甘露醇发酵 新生霉素
3种葡萄球菌的生化反应结果
金黄色葡萄球菌
金黄色 ＋（β溶血）
＋ ＋ ＋ S
表皮葡萄球菌
白色 － － ＋ － S
腐生葡萄球菌
白色或柠檬色 － － ＋ － R
链球菌属和肠球菌属
A群溶血性链球菌和无乳链球菌的鉴别
菌种
杆菌肽
CAMP
10
实验7 病原性球菌的检验
临床微生物学及检验
医学检验学院 病原生物学教研室
【实验目的】
1.掌握葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属的 菌落形态、染色特点和基本生化反应。
实验四病原性球菌
凝集物可被涂散，变阴性。
阳性对照 阴性对照 待测血清 各加溶血素“O” 1滴轻摇1min 再加SLO胶乳1滴轻摇3min 观察成果
成果鉴定：
稀释度
ASO （IU/ml）
1：15 1：30 1：60
400 800 1600
ASO≤250 IU/ml 阴性
注意事项：
1. 液体量要一样，菌量一样。 2. 血浆多挑几环（一滴旳量），菌少挑点，
表3
甲型链球菌 乙型链球菌
血平板 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环 针尖小菌落、透明宽敞溶血环
3. 血浆凝固酶试验--玻片法 （操作，1人/组）
原理：
措施：
1
2
3
兔血浆
+ 金葡
兔血浆
+ 白葡
生理盐水
+ 金葡
凝集（+） 不凝集（-） 不凝集（-）
4、血浆凝固酶试验（试管法） 示教
凝 集 为 阳 性
金葡菌
Байду номын сангаас
白葡菌
+
+
兔血浆
兔血浆
37℃30′水浴观察
不 凝 集 为 阴 性
凝固酶试验 （试管法）
五、抗链球菌溶血素“O”（ASO） 迅速胶乳法 （操作，1人/组）
原理： 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平
旳抗体后，还有多出ASO，这些多出抗体即与SLO胶乳 试剂反应，出现清楚、均匀旳凝集颗粒。
措施：
实验四病原性球菌
1. 五类病原性球菌旳形态、排列及染色性 示教
G+球菌：
金葡菌
链球菌
肺炎双球菌
G-球菌：
实验四病原性球菌的检验
1、标本采集：脓液
2、检验程序：
脓液
↓
↓
直接涂片
分离培养
革兰染色镜检 （操作）（血琼脂平板）
↓
↓ 37℃ 18～24h
初报 挑取可疑菌落（性状、色素、溶血）
↓
鉴定试验及药敏试验
↓
↓
↓
↓
革兰染色镜检 生化反应鉴定 其他鉴定 药敏试验
↓
↓
↓
↓
↓37℃ 18～24h
报告
三、葡萄球菌属生物化学反应：
（一）触酶试验（操作）
规定时间内出现清晰凝集者为阳性，不出现凝集 者为阴性。
主要用于风湿热的辅助诊断：
风湿热患者ASO大多在250单位；
活动性风湿热患者ASO一般≥400单位。
『实验报告』
绘出化脓性球菌镜下形态图。 记录脓液标本的分离培养与鉴定程序。
实验四 病原性球菌的检验
病原性球菌，又称化脓性球菌，根据革 兰染色性的不同，分为两类： G＋球菌： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链 球菌等。 G- 球菌： 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 等。
『目的要求』
掌握：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜 炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的形态及染色特点；葡 萄球菌、链球菌的菌落特点及链球菌在血琼脂 平板上的溶血性；血浆凝固酶试验、触酶试验 的试验方法、结果及意义。
四、抗链球菌溶血素“O”的测定（乳胶法，示教）
1、原理：ASO高滴度的血清被适量溶血素“O”中 和后，失去了正常水平量的抗体，多余的抗“O” 抗体与ASO乳胶试剂反应，出现肉眼可见的，清 晰均匀的凝集颗粒（ASO乳胶试剂系羧化聚苯乙 烯乳胶与溶血素“O”共价交联的产物）。
2、方法：（略）3、结Fra bibliotek及意义：1、原理：
微生物实验设计-病原性球菌的鉴定
医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。
本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。
对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。
一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。
然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。
（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。
葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。
链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。
肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。
奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。
通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。
在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。
（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。
观察菌落的形态。
葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。
形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。
链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。
医学微生实验 本科实验三细菌致病性及病原性球菌-PPT文档
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛
第十三章 病原性球菌及检验
第十三章病原性球菌及检验一、A11、与淋病奈瑟菌无关的性状是（）。
A、革兰阴性肾形双球菌B、营养要求高C、初次分离需5%～10%CO2D、普通培养基上即可生长E、氧化酶试验阳性2、甲氧西林金黄色葡萄球菌是（）。
A、MRSAB、MRSEC、MRSD、MRCNSE、SPA3、抗链“O”试验可以辅助诊断（）。
A、结核病B、肺炎C、流脑D、百日咳E、急性肾小球肾炎4、有关细菌学检验的描述选项中错误的是（）。
A、原则上所有标本均应作病原分离培养B、脑膜炎奈瑟菌初次培养需用巧克力培养基C、结核杆菌需2～6周才长成菌落D、葡萄球菌分离培养的阳性率一般比直接涂片镜检的阳性率为低E、布氏杆菌初次培养时需5%～10%的CO25、下列何种细菌为革兰阴性球菌（）。
A、乙型溶血性链球菌B、肺炎链球菌C、铜绿假单胞菌D、脑膜炎奈瑟菌E、肺炎克雷伯菌6、有关肺炎链球菌不正确的描述（）。
A、革兰阳性双球菌B、有自溶现象C、对optochin敏感D、均对青霉素敏感E、可引起脑膜炎7、肺炎链球菌在血平板上生长，菌落周围的颜色是（）。
A、红色B、褐色C、绿色D、黑色E、金黄色8、卡他布兰汉菌在形态方面与下列哪种细菌相似（）。
A、流感嗜血杆菌B、淋病奈瑟菌C、军团菌D、放线菌E、支原体9、脑膜炎球菌侵入机体繁殖后，因自溶或死亡而释放内毒素，内毒素的主要作用是引起（）。
A、菌血症B、血小板解聚C、血液白细胞减少D、细菌素产生E、血管坏死和血栓形成，周围血管出血10、某患者餐后数小时出现头晕、恶心、腹痛、呕吐等症状。
呕吐物接种到血液琼脂平皿培养，出现完全溶血环，金黄色菌落。
培养滤液幼猫腹腔注射4小时后出现呕吐，此病可诊断为（）。
A、金黄色葡萄球菌引起的食物中毒B、产气荚膜梭菌引起的食物中毒C、肠沙门菌引起的食物中毒D、肉毒梭菌引起的食物中毒E、鼠伤寒沙门菌引起的食物中毒11、甲型溶血性链球菌生长时，菌落周围常出现溶血环，此现象称为（）。
A、α溶血B、β溶血C、γ溶血D、δ溶血E、ε溶血12、脑膜炎奈瑟菌属于（）。
病原性球菌的检验
触酶试验 血浆凝固酶试验
(1)触酶试验
方法：用接种环挑取细菌，置于洁净载玻 片上，滴加3％H2O2溶液1～2滴，观察结 果。
结果判断、解释和报告：于半分钟内产生 大量气泡，为触酶试验阳性，而不产生气 泡者为阴性。
(2)血浆凝固酶试验
方法：取未稀释的新鲜人血浆和生理盐水各1滴 分别滴于载玻片上，挑取待检葡萄球菌菌落少许， 分别与生理盐水和血浆混合，立即观察结果。此 法用于测定结合型凝固酶。
球菌检验
成都医学院 临床微生物学教研室
【目 的】
1．掌握常见病原性球菌的分离培养与鉴定 方法。
2．熟悉葡萄球菌、链球菌的菌落特点、 菌体形态及染色性。
【器 材】
接种环、培养箱、酒精灯、载玻片、显微镜 等
【试 剂】
1．培养基 普通琼脂平板（1个/人） 2．试剂 革兰染液、3％H2O2、人血浆、生
理盐水
【标 本】
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄 球菌
草绿色链球菌
【方 法】
第一次
1．标本涂片染色镜检 观察三种葡萄球菌 的镜下形态、染色性。
2．接种与培养 接种三种葡萄球菌于普通 琼脂平板上；37℃ 18~24h
第二次
3.菌落形态观察 4.菌落涂片染色
细菌检验表格整理(球菌、肠杆菌、弧菌)
肠外无菌部位——增菌——BAP；
混有其他污染菌——MAC、EMB——抑制其他革兰阳性菌及少数革兰阴性菌；
粪便标本——BAP、MAC、SS；
鉴定：
（科间鉴别）氧化酶、O/F实验
（属间鉴别）
KIA：分解葡——产酸/产酸产气；
分解乳糖——鉴别致病菌与非致病菌
MIU：U——大肠阴性为黄、变形阳性为红；
MAC：发酵乳糖产酸，形成较大黏液型、红色菌落；
在科玛嘉定位显色培养基呈绿色菌落
BAP、MAC培养基分离培养——挑选可疑菌落；
属间鉴别：
MIU（- - +）I除了产酸克雷伯菌，都为阴
KIA（发酵葡萄糖/发酵乳糖）
志贺菌属
4个血清群：A、B、C、D群
致病与侵袭力、内毒素、外毒素有关；
引起人类细菌性痢疾即菌痢，粪口传播；
生化：
发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）、触酶+、氧化酶-、硝酸盐还原+；
抗原构造：
主要包括菌体O抗原（脂多糖）、鞭毛H抗原（蛋白质）、表面抗原（多糖）；
O抗原与H抗原是肠杆菌科血清型分群和分型的依据
抵抗力：
不强，高温即可被杀死
标本采集：
只有肠外感染标本做直接镜检（除血液）；
肠道感染标本（粪便、脓血、粘液）；
分类
（1）肠杆菌科：
革兰阴性杆菌，多为肠道的正常菌群；
（2）KIA：克氏双糖铁培养基，为肠杆菌科细菌常用的鉴别培养基
（3）迁徙现象：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌种在普通琼脂平板上生长时可蔓延成波纹状，布满整个培养基表面
形态：
革兰阴性杆状或球杆状，无芽孢，多有鞭毛，能运动，致病性的菌株多有菌毛；兼性厌氧，营养要求不高，在BAP和MAC上生长良好；
医学课件病原性球菌及检验
可引起：大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支 气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。
三、微生物学检验
（一）标本采集
痰液，脓液，血液，脑脊液等。
（二）检验程序 （三）检验方法
检验程序
痰、脓
脑脊液
血液
直接涂片
革兰染色、美兰染色 荚膜肿胀试验
荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌有毒力， 失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。
二、致病性和免疫性
（一）致病物质
1、荚膜： 肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。
2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素O等 溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物
的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。
（二）所致疾病
条件：营养要求较高，兼性厌氧菌， 5-10% C02生长
最好。 产生自溶酶。
液体：培养24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄
清。
普通琼脂平板：不生长。
血液琼脂平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有
草绿色溶血环（α溶血）
（三）生化反应
活泼 分解多种糖类。
菊糖（多数 + ）
胆汁溶菌试验（+） Optochin试验(+)
有草绿色溶血环（α溶血）
3、鉴定试验 （1）荚膜肿胀试验
（2）胆汁溶菌试验：+
（3）Optochin试验：+
（4）菊糖发酵试验：+ （5）小鼠毒力试验：
有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。
胆汁溶菌试验阳性：
加入胆汁 或10%去氧胆 酸钠，37℃， 5-10min，激 活本菌的自溶 酶，出现溶菌 现象。
初级检验士考试(微生物学检验)练习题第十三章病原性球菌及检验
第十三章病原性球菌及检验一、A11、不符合脑膜炎球菌送检标本要求的是A、采集标本注意无菌操作B、采集标本立即送检C、采集标本一般在使用抗菌药物之前D、根据该病原菌主要存在部位取材E、标本送检过程中要保持低温和干燥2、对低温敏感的细菌是A、肺炎链球菌B、脑膜炎奈瑟菌C、脆弱类杆菌D、伤寒沙门菌E、布鲁菌3、淋病奈瑟菌的主要传播途径是A、呼吸道传播B、消化道传播C、创伤伤口感染D、性接触传播E、节肢动物叮咬4、关于金黄色葡萄球菌，下列哪种说法是错误的A、耐盐性强B、在血平板上形成完全透明的溶血环C、引起局部化脓性感染时病变比较局限D、不易产生耐药性，抵抗力强E、革兰阳性菌5、下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点A、血浆凝固酶试验阳性B、产生溶血素C、分解甘露醇D、产生耐热核酸酶E、胆汁溶解试验阳性6、葡萄球菌致急性胃肠炎的致病因素是A、杀白细胞素B、溶血毒素C、肠毒素D、血浆凝固酶E、红疹毒素7、以下叙述正确的是（）。
A、淋病奈瑟菌感染主要由呼吸道传播B、淋病奈瑟菌为革兰阳性球菌C、人是淋病奈瑟菌唯一宿主D、淋病奈瑟菌不产生β－内酰胺酶E、淋病奈瑟菌有毒株无菌毛8、化脓性炎症，其脓汁黏稠、病灶局限，这是由于病菌产生了A、玻璃质酸酶B、血浆凝固酶C、耐热核酸酶D、链道酶E、葡激酶9、分离培养淋病奈瑟菌时，不能采用的方法是A、标本要立即送检B、标本要保湿保暖C、在含5%～10%CO2的环境中培养D、接种于预温的巧克力色血平板上E、厌氧环境培养10、用于监测血浆凝固酶的细菌为A、肺炎链球菌B、表皮葡萄球菌C、甲型溶血性链球菌D、乙型溶血性链球菌E、金黄色葡萄球菌11、下列哪种细菌感染一般不侵入血流A、葡萄球菌B、淋球菌C、脑膜炎球菌D、伤寒杆菌E、链球菌12、经验治疗链球菌引起的感染，应首选A、红霉素B、链霉素C、青霉素D、克林霉素E、多黏菌素13、脑膜炎奈瑟菌在人体的定植部位一般为A、肠道黏膜B、口腔黏膜C、皮肤表面D、鼻咽部E、脑膜14、肺炎链球菌的主要致病物质是A、透明质酸酶B、溶血毒素C、普通菌毛D、荚膜E、外毒素15、关于乙型溶血型链球菌，下列哪项是错误的A、是链球菌属中致病力最强的B、感染容易扩散C、可引起超敏反应性疾病D、产生多种外毒素，故可用类毒素预防E、对青霉素敏感二、A21、某一脓标本，涂片革兰染色镜检：革兰阳性球菌，直径1μm左右，呈单个、成对或短链排列；血琼脂平板分离培养：菌落表面光滑湿润，圆形，边缘整齐，黄色，凸起，直径1～1.5mm，菌落周围有完全透明的溶血环；菌落涂片革兰染色镜检：革兰阳性球菌，呈单个、双、短链和葡萄串状排列，以葡萄串状排列为主；生化试验：触酶阳性，血浆凝固酶（试管法）阳性，发酵葡萄糖产酸，发酵甘露醇产酸，对新生霉素敏感。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。
G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。
G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。
对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。
常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。
一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。
为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。
(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。
1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。
2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。
(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。
1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。
存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。
2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。
有型特异性，分A、B、C三型。
(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。
2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。
3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。
(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。
在20%CO2环境中，有利于毒力产生。
最适温度37℃，最适PH7.4。
DNA中G+C含量：30-39%。
1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。
2.在高盐甘露醇血平板上，致病性的的葡萄球菌能分解甘露醇，其菌落呈淡橙黄色。
3.在卵黄高盐琼脂平板上，由于致病性的的葡萄球菌能产生卵磷脂酶，因此在培养基其菌落周围形成白色沉淀圈。
4.在血平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
5.在肉汤（液体）培养基中，其生长迅速呈均匀混浊状，并有部分细菌沉淀于管底，摇动易消散。
(六)生化反应1.葡萄球菌触酶（3%H2O2）实验阳性（+）操作方法：挑取培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加3%H2O2溶液1-2滴，静置之。
观察结果：1min内产生大量气泡为阳性，反之不产生气泡为阴性。
2.葡萄球菌氧化酶实验阴性（-）3.多数葡萄球能分解葡萄糖、麦芽糖及庶糖，产酸不产气。
4.多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇、液化明胶和产生血浆凝固酶。
但并不以次作为有无致病性的依据。
5.葡萄球菌凝固酶实验操作方法：取生理盐水4倍稀释的血浆0.5ml，然后挑取3-5个菌落于稀释血浆中作成菌悬液,置37℃水浴。
观察结果：3-4h后出现凝固者为阳性。
应见到明显的纤维蛋白块，出现羊毛状或纤维状沉淀状物并非真正凝固，应判为阴性。
6.葡萄球OF实验此实验应使用葡萄球菌专用OF管，不可与非发酵菌用的OF管混用。
操作方法：挑取被检菌落，接种于2支O-F管中，发酵管加灭菌液体石蜡约1cm深，氧化管不加石蜡。
观察结果：35℃孵育24h后观察，产酸即变黄色。
结果判定：见表1-1。
表1-1 OF实验鉴定表(七)致病性葡萄球菌鉴定依据1.涂片镜检为G+性葡萄状排列的球菌2.产生脂溶性金黄色色素3.平板上菌落有透明溶血环4.血浆凝固酶实验阳性（+）5.发酵甘露醇（+）(八)鉴别诊断1.葡萄球菌属的鉴别（1）葡萄球菌属内27个种的鉴别，祥见（第二版）§476-477页。
其中27个种的诊断性药物鉴别：见表1-2。
表1-2 葡萄球菌属27中细菌药物敏感性鉴别（2）葡萄球菌属内的三个种的鉴别：见表1-3。
表1-3 葡萄球菌三个种的鉴别（3）有临床意义的8种常见葡萄球菌关键性鉴定：祥见§478页。
2.微球菌科内的鉴别（1）葡萄球菌与微球菌鉴别：见表1-4。
（2）葡萄球菌与其它G+球菌的鉴别：祥见§475页。
3.葡萄球菌与链球菌球菌的鉴别（1）形态（2）触酶实验，链球菌阴性。
(九)致病性葡萄球菌的致病力的强弱与其产生的毒素和酶有关。
1.溶血毒素可分为α、β、γ、δ、ε五种，对人类有致病作用的主要是α溶血毒素。
α溶血毒素为蛋白质，对白细胞、血小板几多种组织细胞有毒性作用，能使局部小血管收缩，导致局部缺血坏死。
β溶血毒素有称“冷热溶血素”。
γ、δ溶血素对人和动物红细胞均能溶血。
2.肠毒素肠毒素是一种可溶性蛋白质，重要作用于肠壁，并通过传入神经到达呕吐中枢而引起呕吐。
金黄色葡萄球菌的某些溶血菌株产生的一种引起急性胃肠炎的肠毒素，此种菌株可污染食物，入食后可引起中毒。
葡萄球菌肠毒素分为A、B、C1、C2、C3、D、E、F等8个血清型。
除F型与中毒性休克综合征有关外，均能引起食物中毒，以A、D型多见。
3.血浆凝固酶血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病性有关的侵袭性酶，其作用是使血浆中的纤维蛋白原在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。
大多数致病性葡萄球菌能产生此酶，因此血浆凝固酶是鉴定葡萄球菌有无致病性的重要指标，但有些血浆凝固酶实验阴性的菌株也可致病。
4.还有杀白细胞素、5.剥脱性毒素、6.中毒性休克综合征毒素等。
(十)所致疾病本菌感染部位的特点是组织化脓、坏死和脓肿的形成。
1.金黄色葡萄球菌是引起感染最常见的葡萄球菌。
2.表皮葡萄球菌是存在皮肤的正常栖居菌，该菌已成为医院感染的重要病原菌，是导致血培养污染的的常见细菌之一。
3.腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。
(十一)抵抗力耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞的细菌。
湿度80℃30-60分钟才能被杀死；在含10-15%Nacl培养基中依能生长。
对万古霉素、替考拉宁、大蒜素、呋喃唑酮较敏感；对青霉素G耐药的菌株据统计1946年仅占14%，1966年已高达97%。
(十二)药敏须知纸片法检测甲氧西林对葡萄球菌敏感性是用 1 ug/片的苯唑西林纸片检测的，由于常出现假阳性现象，因此，2004年美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）建议：1.用30 ug/片的头孢西丁代替苯唑西林检测mecA介导的葡萄球菌耐药。
结果应报苯唑西林耐药，而不是头孢西丁耐药。
2.头孢西丁抑菌环直径判断标准：（1）金黄色葡萄球菌，R≤19mm；S≥20mm。
（2）凝固酶阴性的葡萄球菌，R≤24mm；S≥25mm。
3.报告：4.葡萄球菌属药敏纸片选择A、苯唑西林k、青霉素k。
B、万古霉素、复方新诺明、克林霉素、（红霉素b、阿齐霉素b、克拉霉素b）、Linezolid。
C、庆大霉素、氯霉素b、四环素c、利福平d、奎奴普汀/达福普汀l、（环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、加替沙星）。
二、链球菌属1.形态与染色链球菌呈圆形或椭圆形，直径0.5-2.0 um，成对或长短不一的链状排列。
为G+性球菌，无芽胞、鞭毛、动力；多数菌株在含有血清肉汤的培养基中培养2~4h易见有荚膜，以后又逐渐消失。
2.分类链球菌分类方法很多，常用的有以下两种：（1）根据链球菌在血平板上溶血情况分成三大类。
〈1〉甲型(α)溶血性链球菌：通称甲型链球菌或草绿色链球菌，菌落呈灰色针尖状，在菌落周围有宽1~2mm的草绿色溶血环（α-型溶血）。
〈2〉乙型(β)溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，菌落较小、灰白色、在周围有宽2~4mm的透明溶血环（β-型溶血）。
〈3〉丙型(γ)链球菌：通称不溶血性链球菌，呈灰白色小菌落，在菌落周围无溶血环。
（2）根据链球菌细胞壁（C抗原）抗原构造分类3.抗原链球菌含有多种抗原且构造复杂，如乙型溶血性链球菌菌体抗原可分为三种：（1）群特异性抗原简称C抗原，常用Lancefield血清分解法，将乙型溶血性链球菌分为A、B、C、D……T等18个群（其中缺I、J），近年来又增加了U、V群，目前已发展到20个群。
（2）型特异性抗原简称表面抗原，是链球菌细胞壁的蛋白质抗原，位于C抗原的外层，其又分为M、T、R、S四种抗原。
M抗原与链球菌致病性有关。
根据M抗原的不同，可将A群链球菌分成80个型。
（3）非特异性抗原简称P抗原，无特异性，不能用作分类。
4.标本接种（1）血液标本，以无菌操作取两份血液各2~3ml，分别置需氧和厌氧环境中增菌，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。
（2）脓汁和咽拭标本接可直接种血平板。
5.培养特性本菌大多数为需氧或兼性厌氧，少数为专性厌氧。
对营养要求较高，在含有葡萄糖、血清、血液、腹水的培养基中生长良好。
生长温度范围为25~45℃，最适温度为37℃，最适PH7.4-7.6，在5% CO2环境下生长更好。
DNA中G+C含量：34-46%。
（1）在液体培养基如血清肉汤中，溶血性菌株在管底呈絮状或颗粒状沉淀生长，且链较长；不溶血的菌株则呈均匀生长。
（2）在血琼脂平板上，经37℃，18-24h培养，可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.1-0.75 um的细小菌落。
在菌落的周围由于链球菌种类的不同可见不同类型的溶血环。
如草绿色、透明或无溶血环。
6.生化反应（1）链球菌触酶实验阴性（-）（2）链球菌能分解葡萄糖产酸（乳酸）不产气（3）杆菌肽敏感实验 A群链球菌，此实验敏感（S）。
操作方法：挑取大量被检菌落，密涂于血平板上，以免出现假阳性。
贴上含0.04U/片的杆菌肽纸片，35℃孵育过夜。
观察结果：形成抑菌环为敏感。
A群链球菌的敏感率约占97%。
（4）CAMP实验 B群链球菌，此实验阳性（+）。
操作方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条直线，再将被检菌距金黄色葡萄球菌3mm处垂直种一条短线。
同样方法接种阴阳性对照菌。
35℃孵育过夜。
观察结果：阳性（+），在被检菌接种线与金黄色葡萄菌接种线之间有一个失形（半月形、箭头状）的加强溶血区。
即CAMP实验阳性。
（5）SXT敏感实验 A、B群链球菌耐药（R），其他群敏感（S）。
（6）七叶苷实验 G群链球菌此实验阳性（+）操作方法：接种生化管，35℃孵育18-24h。
观察结果：阳性（+），棕黑色；阴性（-），不变色。
（7）胆汁七叶苷实验 D群链球菌（非D群阳球菌）此实验阳性（+）因能在40%胆汁中生长，所以此实验阳性。
方法，结果同七叶苷实验。
（8）Optocian敏感实验操作方法：挑取被检菌落，密涂于平板上，贴Optocian纸片于接种处，35℃烛缸孵育18h。
观察结果：抑菌环直径≥14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。