通则0401紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法
第三节 紫外可见分光光度计
一、主要部件
(一)光源 (二)单色器
(三)吸收池 (四)检测器
1.光电池 2.光电管 3.光电倍增管 4.光二极管检测器
第三节 紫外可见分光光度计
一、主要部件
(一)光源 (二)单色器 (三)吸收池 (四)检测器 (五)讯号处理与显示器
第三节 紫外可见分光光度计
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第一节 基本概念
第一节 基本概念
一、紫外光谱的产生及表示方法
• 通常以波长（ ，nm）为横坐标；以吸 光度（A）或透光率（T）为纵坐标
• 描述术语 吸收峰、谷、肩峰、末端吸收
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1.化学因素 2.光学因素 3.透光率测量误差
噪音(noise)
暗噪音(dark noise) 讯号噪音(signal shot noise)
第二节 基本原理
二、偏离Beer定律因素
3.透光率测量误差
c A 1 lg 1 1 lgT E•l E•l T E•l
dc 1 • 1 lg e • dT 0.434dT
Ix s
第二节 基本原理
0401 紫外-可见分光光度法
0401紫外-可见分光光度法❶紫外-可见分光光度法是在190~800n m波长范围内测定物质的吸光度,用于鉴别㊁杂质检查和定量测定的方法㊂当光穿过被测物质溶液时,物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化㊂因此,通过测定物质在不同波长处的吸光度,并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱㊂从吸收光谱中,可以确定最大吸收波长λm a x和最小吸收波长λm i n㊂物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性㊂因此,可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较,或通过确定最大吸收波长,或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质㊂用于定量时,在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度,并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的含量㊂仪器的校正和检定1.波长由于环境因素对机械部分的影响,仪器的波长经常会略有变动,因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外,还应于测定前校正测定波长㊂常用汞灯中的较强谱线237.83n m,253.65n m,275.28n m,296.73n m, 313.16n m,334.15n m,365.02n m,404.66n m,435.83n m, 546.07n m与576.96n m;或用仪器中氘灯的486.02n m与656.10n m谱线进行校正;钬玻璃在波长279.4n m, 287.5n m,333.7n m,360.9n m,418.5n m,460.0n m, 484.5n m,536.2n m与637.5n m处有尖锐吸收峰,也可作波长校正用,但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化,使用时应注意;近年来,常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器,以10%高氯酸溶液为溶剂,配制含氧化钬(H o2 O3)4%的溶液,该溶液的吸收峰波长为241.13n m, 278.10n m,287.18n m,333.44n m,345.47n m,361.31n m, 416.28n m,451.30n m,485.29n m,536.64n m 和640.52n m㊂仪器波长的允许误差为:紫外光区ʃ1n m,500n m附近ʃ2n m㊂2.吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定㊂取在120ħ干燥至恒重的基准重铬酸钾约60m g,精密称定,用0.005m o l/L硫酸溶液溶解并稀释至1000m l,在规定的波长处测定并计算其吸收系数,并与规定的吸收系数比较,应符合表中的规定㊂波长/n m235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)吸收系数(E1%1c m)的规定值124.5144.048.6106.6吸收系数(E1%1c m)的许可范围123.0~126.0142.8~146.247.0~50.3105.5~108.53.杂散光的检查可按下表所列的试剂和浓度,配制成水溶液,置1c m石英吸收池中,在规定的波长处测定透光率,应符合表中的规定㊂❶新增简述㊂试剂浓度/%(g/m l)测定用波长/n m透光率/%碘化钠亚硝酸钠1.005.00220340<0.8<0.8对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂,通常均具有很强的末端吸收㊂因此,当作溶剂使用时,它们的使用范围均不能小于截止使用波长㊂例如甲醇㊁乙醇的截止使用波长为205n m㊂另外,当溶剂不纯时,也可能增加干扰吸收㊂因此,在测定供试品前,应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求,即将溶剂置1c m石英吸收池中,以空气为空白(即空白光路中不置任何物质)测定其吸光度㊂溶剂和吸收池的吸光度,在220~240n m范围内不得超过0.40,在241~ 250n m范围内不得超过0.20,在251~300n m范围内不得超过0.10,在300n m以上时不得超过0.05㊂测定法测定时,除另有规定外,应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照,采用1c m的石英吸收池,在规定的吸收峰波长ʃ2n m以内测试几个点的吸光度,或由仪器在规定波长附近自动扫描测定,以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确㊂除另有规定外,吸收峰波长应在该品种项下规定的波长ʃ2n m以内,并以吸光度最大的波长作为测定波长㊂一般供试品溶液的吸光度读数,以在0.3~0.7之间为宜㊂仪器的狭缝波带宽度宜小于供试品吸收带的半高宽度的十分之一,否则测得的吸光度会偏低;狭缝宽度的选择,应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准㊂由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收,因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数,或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量㊂当溶液的p H值对测定结果有影响时,应将供试品溶液的p H值和对照品溶液的p H值调成一致㊂1.鉴别和检查分别按各品种项下规定的方法进行㊂2.含量测定一般有以下几种方法㊂(1)对照品比较法按各品种项下的方法,分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液中所含被测成分的量应㊃06㊃0401紫外-可见分光光度法0401紫外-可见分光光度法为供试品溶液中被测成分规定量的100%ʃ10%,所用溶剂也应完全一致,在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后,按下式计算供试品中被测溶液的浓度:c X=(A X/A R)c R式中c X为供试品溶液的浓度;A X为供试品溶液的吸光度;c R为对照品溶液的浓度;A R为对照品溶液的吸光度㊂(2)吸收系数法按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸光度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量㊂用本法测定时,吸收系数通常应大于100,并注意仪器的校正和检定㊂(3)计算分光光度法计算分光光度法有多种,使用时应按各品种项下规定的方法进行㊂当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响,故对照品和供试品的测试条件应尽可能一致㊂计算分光光度法一般不宜用作含量测定㊂(4)比色法供试品本身在紫外-可见光区没有强吸收,或在紫外光区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度,可加入适当的显色剂,使反应产物的最大吸收移至可见光区,这种测定方法称为比色法㊂用比色法测定时,由于显色时影响显色深浅的因素较多,应取供试品与对照品或标准品同时操作㊂除另有规定外,比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液,然后依次加入等量的相应试剂,并用同样方法处理㊂在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后,按上述(1)法计算供试品浓度㊂当吸光度和浓度关系不呈良好线性时,应取数份梯度量的对照品溶液,用溶剂补充至同一体积,显色后测定各份溶液的吸光度,然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线,再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度,并求出其含量㊂㊃16㊃。
第10章紫外-可见分光光度法 [兼容模式]
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O
• 指非共轭基团之间的相互作用。 • 当分子中两个非共轭发色团处于一 定的空间位置（环状体系）→发色 团分子轨道间相互作用 团分子轨道间相互作用。 • 产生的光谱既非两个发色团的加合， 也不同于二者共轭的光谱。
结论：Ⅲ、Ⅳ有位阻， λmax和ε均有改变。
39 40
例：
..
溶剂效应
• 有机化合物在溶液中的紫外吸收光谱易受 溶剂的影响，可引起其吸收峰位置、吸收 强度和光谱形状的改变。其中： • n→π* 随溶剂极性的增大， 吸收峰向短波移动 吸收峰向短波移动。 • π→π* 随溶剂极性的增大， 吸收峰向长波移动。 • 用途：可区别两种跃迁引起的吸收谱带
在吸收曲线上一个吸收峰旁边产生 的一个曲折，称为肩峰。
• 末端吸收：
吸收曲线上短波端只呈现强吸收而 不成峰形的部分 。
• 弱带：
紫外可见光谱中摩尔吸光系数 ε＜102的吸收峰
23 24
4
2012-05-08
• 生色团（发色团） 有机化合物分子结构中含有 π→π*或n→π*跃迁的基团，能 在紫外可见光范围内产生吸收 在紫外可见光范围内产生吸收。
15
16
电子跃迁类型及特点
跃迁 类型 出现波段 吸收 强度 化合物 结构 单键 C－ C C－ H 不饱和键 C＝ C C≡C C＝ O C＝ N等
C－OH C－NH2 C－ S C－ X
特点 饱和烃类，对紫外无贡献， 但可作溶剂 有共轭双键存在时，π→π* 跃迁所需能量降低，波长 跃迁所需能量降低 波长 红移 必须是杂原子直接连在双 键上
41 42
H2C
O
O C .. S ..
λmax 214nm，284nm（R带）
λmax 238nm，ε2535
《中国药典》2020年版四部通则 0401 紫外-可见分光光度法
《中国药典》2020年版四部通则0401 紫外-可见分
光光度法
《中国药典》2020年版四部通则0401紫外-可见分光光度法主要包括以下内容：
1.定义：紫外-可见分光光度法是一种通过测定物质在紫外-可见光区的吸收光谱，
对物质进行定性和定量分析的方法。
2.适用范围：适用于具有紫外-可见光吸收特性的物质的定性和定量分析。
该方法
广泛应用于药品、食品、环境等领域。
3.原理：基于物质吸收紫外-可见光后，其吸收光谱的波长和强度与物质的浓度和
种类有关，通过测量物质的吸收光谱，可以对其进行定性和定量分析。
4.操作方法：包括直接比较法、标准曲线法、差示光谱法、差示光谱比率法等。
根据不同情况选择合适的方法进行操作。
5.注意事项：
•在操作过程中应注意避免光的散射和干扰因素的影响。
•应注意控制实验条件，如温度、湿度、气压等，以确保实验结果的准确性和可靠性。
•对于某些特定物质，可能需要采用其他方法进行测定，如络合滴定法、离子交换法等。
总之，《中国药典》2020年版四部通则0401紫外-可见分光光度法为药品、食品、环境等领域提供了重要的分析手段，有助于保证分析结果的准确性和可靠性。
紫外-可见分光光度法
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3 吸收池
吸收池又称比色皿或比色杯，按材 料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前 者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其光径可在 0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池 最为常用。
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2. d电子跃迁吸收光谱
过渡金属的电子跃迁类型为d电子在不同d轨 道间的跃迁，吸收紫外或可见光谱。这些峰 强烈受配位环境的影响。
例如 cu2+以水为配位体，吸收峰在794nm 处，而以氨为配位体，吸收峰在663nm处。此 类光谱吸收强度弱，较少用于定量分析。
最新修正版
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3. 电荷迁移光谱 某些分子既是电子给 体，又是电子受体，当电子受辐射能激发 从给体外层轨道向受体跃迁时，就会产生 较强的吸收，这种光谱称为电荷迁移光谱。 如 苯酰基取代物在光作用下的异构反应。
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红移和紫移
在有机化合物中，常常因取代基的变更 或溶剂的改变，使其吸收带的最大吸收波长 λmax发生移动。向长波方向移动称为红移(表33)，向短波方向移动称为紫移。
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热辐射光源用于可见光区，如钨灯和 卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如 氢灯和氘灯。
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2 单色器
单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭 缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于 色散元件的质量。色散元件常用棱镜 和光栅。
单波长单光束分光光度计还有国产 751型、XG-125型、英国SP500型和伯 克曼DU-8型等。
2015年版《中国药典》通则0721 维生素A测定法通则
0721维生素A测定法本法是用紫外-可见分光光度法（通则0401）或高效液相色谱法（通则0512）测定维生素A 及其制剂中维生素A的含量，以单位表示,每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344μg或全反式维生素A醇0.300μgo测定应在半暗室中尽快进行。
第一法（紫外-可见分光光度法）由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A独有的吸收。
在以下规定的条件下，非维生素A物质的无关吸收所引人的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。
校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长应准确，在测定前，应对仪器波长进行校正。
测定法取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每ImI中含9〜15单位的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）,测定其吸收峰的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长328nm处吸光度的比值和波长328nm处的（E陵）值。
如果吸收峰波长在326〜329nm之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02,可用下式计算含量：每Ig供试品中含有的维生素A的单位=（E怂）（328nm）×1900如果吸收波长在326〜329nm之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02,应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：4328（校正）=3.52（2A321-A3K-A340）如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0%,则不用校正，仍以未经校正的吸光度计算含量。
如果校正吸光度与未校正吸光度相差在一15%至一3%之间，则以校正吸光度计算含量。
如果校正吸光度超出未校正吸光度的一15%至一3%的范围，或者吸收峰波长不在326〜329nm 之间，则供试品须按下述方法测定。
紫外—可见分光光度法
第一节 紫外—可见吸收光谱
大多数的分子光谱分析，都是用液体样品，加之 仪器的分辨率有限，因而使记录所得电子光谱的 谱带变宽。 由于氧、氮、二氧化碳、水等在真空紫外区 （60 ~ 200 nm）均有吸收，因此在测定这一范围 的光谱时，必须将光学系统抽成真空，然后充以 一些惰性气体，如氦、氖、氩等。鉴于真空紫外 吸收光谱的研究需要昂贵的真空紫外分光光度计， 故在实际应用中受到一定的限制。我们通常所说 的紫外—可见分光光度法，实际上是指近紫外、 近紫外、 近紫外 可见分光光度法。 可见分光光度法。
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第二节 化合物紫外—可见光谱的产生
2，不饱和烃及共轭烯烃 ， 在不饱和烃类分子中，除含有σ键外，还含有π键， 它们可以产生σ→σ*和π→π*两种跃迁。 π→π*跃迁的能 量小于 σ→σ*跃迁。例如，在乙烯分子中， π→π*跃迁最 大吸收波长为180nm 在不饱和烃类分子中，当有两个以上的双键共轭时， 随着共轭系统的延长， π→π*跃迁的吸收带 将明显向长 波方向移动，吸收强度也随之增强。在共轭体系中， π→π*跃迁产生的吸收带又称为K带。
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第二节 化合物紫外—可见光谱的产生
例如某些取代芳烃可产生这种分子内电荷迁移跃 迁吸收带。 电荷迁移吸收带的谱带较宽，吸收 强度较大，最大波长处的摩尔吸光系数εmax可大 于104。 ）、常用术语 （二）、常用术语 1. 生色团 从广义来说，所谓生色团，是指分子中可以 吸收光子而产生电子跃迁的原子基团。但是，人 们通常将能吸收紫外、可见光的原子团或结构系 统定义为生色团。 下面为某些常见生色团的吸收光谱。
3
第一节 紫外—可见吸收光谱
当用频率为ν的电磁波照射分子，而该分子的较高能 级与较低能级之差△E恰好等于该电磁波的能量 hν时，即 有 △E = hν （ h为普朗克常数） 此时，在微观上出现分子由较低的能级跃迁到较高 的能级；在宏观上则透射光的强度变小。若用一连续辐 射的电磁波照射分子，将照射前后光强度的变化转变为 电信号，并记录下来，然后以波长为横坐标，以电信号 （吸光度 A）为纵坐标，就可以得到一张光强度变化 光强度变化对 光强度变化 波长的关系曲线图——分子吸收光谱图。 波长
(完整word版)紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法1 简述紫外-可见分光光度法是在190-800nm 波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和含量测定的方法。
定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若该物质本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查。
物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200~400nm ）或可见光区（400~850nm ）产生吸收。
通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190~900nm 。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯-比尔（Lambert-Beer ）定律为光的吸收定律，它是紫外-可见分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为: A=logT1=ECL 式中 A 为吸光度;T 为透光率;E 为吸收系数;C 为溶液浓度;L 为光路长度。
如溶液的浓度（C ）为1%（g/ml ），光路长度（L ）为lcm ，相应的吸光度即为吸收系数以%11cm E 表示。
如溶液的浓度（C ）为摩尔浓度（mol/L ），光路长度为lcm 时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
2 仪器紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。
单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件，聚焦透镜或反射镜等组成。
色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200~40Onm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。
紫外-可见分光光度法(通则0401)培训试题及答案
依据：1、《中国药典》2015年版四部2、《中国药典分析检测技术指南》（2017年7月第一版）紫外-可见分光光度法（通则0401）培训试题及答案 2018.6姓名： 成绩：一、单选题（每题4分，共20分） 1、紫外-可见分光光度法是在 波长范围内测定物质的吸光度。
（A ）A 、190～800nmB 、0.7～2.5μmC 、2500～4000nmD 、780～2500nm 2、紫外-可见分光光度法属于： 。
（B ）A 、原子光谱法B 、分子光谱法C 、电子光谱法D 、离子光谱法3、维生素B 12的水溶液在361nm 的吸收系数值为207，若用1cm 吸收池测得某维生素B 12溶液的吸光度为0.621A ）A 、30μg/mlB 、25μg/mlC 、20μg/mlD 、15μg/ml4、紫外光谱含量测定供试品应称取两份，平行操作，每份结果对平均值的偏差一般应在： 以内。
（A ）A 、±0.5%B 、±1.0%C 、±2.0%D 、±1.5%5、围内误差较小。
（C ）A 、0.3-0.9B 、0.7-1.0C 、0.3-0.7D 、0.2-0.5二、多选题（每题4分，共20分） 1、紫外吸收光谱一般具有下列特征： 。
（ABCD ）A 、吸收峰B 、吸收谷C 、末端吸收D 、肩峰2A 、取代基的影响B 、共轭效应C 、超共轭效应D 、立体效应 3、分子能级之差也具有： 。
（ABC ）A 、电子能级B 、振动能级C 、转动能级D、波尔能级4、紫外-可见分光光度法定量测量方法包括： 。
（ABCD ）A 、对照比较法B 、吸收系数法C 、计算分光光度法D 、比色法A 、红外光谱法B 、核磁共振谱法C 、质谱法D 、紫外光谱法三、判断题（每题 4分，共20 分）1、百分吸收系数多用于研究分子结构。
（×）2、分子光谱是一种带状光谱。
（√）3、在紫外区测量吸光度时可使用玻璃材质的比色皿。
项目：维生素B12注射液含量测定
（通则0401） P56
13
三、实验实施
1
2 3 34
在给定波长±2nm处 测样品吸光度，选择 实际最大吸收波长
34
测定波长是多少？
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用 4.确定测定波长
测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的
吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长
作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波
W样（V样）：
品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数 后再计算含量。
37
（通则0401）
37
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
5.供试品溶液的吸光度值的测定
供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸 光度以在0.3～0.7之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合
维生素B12注射液含量测定
一、 任务依据
【中国药典】2015版 二部 P1236
维生素B12注射液
本品为维生素B12的灭菌水溶液。含维生素B12（ C63H88CoN14O14P）应为标示量的90.0%~110.0%
【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定
量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液，照紫 外-可见分光光度法（通则02401），在361nm的波长处
紫外可见分光光度法(共73张PPT)
2022/11/21
分光光度计的类型
2022/11/21
3.紫外-可见吸收光谱及其特征
吸收光谱
用不同波长的紫外-可见光（200~ 760 nm）依次照一定浓度的被测样品溶液时，就 会发现部分波长的光被吸收。如果以波长λ为 横座标（单位nm），吸收度 （absorbance）A为纵座标作图，即得到紫 外-可见吸收光谱（ultraviolet-visible spectra，简称UV）。
对光波来说，产生感光作用与生理作用的是 电场强度 E 。
2022/11/21
光的波长越短（频率越高），其能量越 大。
紫外光区 可见光区
远紫外区 10-200 nm （真空紫外区）
近紫外区 200 - 400 nm （UV光谱的研究区域）
400 - 760 nm
2022/11/21
2022/11/21
能量最小，λ 200~400nm（近紫外区）
ε = 10~ 100，弱吸收
跃迁能量大小： σ→σ* > n→σ* > π→π* > n→π*
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∆E
n → σ*
σ→ σ*
π → π* n → π*
200
300
σ*反键轨道 π*反键轨道
n 非键轨道 π 成键轨道 σ 成键轨道
λ（nm）
第二节 紫外-可见分光度计
紫外-可见分 光光度计
2022/11/21
一、分光光度计的主要部件
Major Components of spectrometer
紫外-可见分光光度计的基本组成模块（ general process）
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1.光源
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连 续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、 较长的使用寿命。
药典苯扎氯铵
苯扎氯铵中国药典2015年版深于对照品溶液；或照紫外-可见分光光度法（通则0401)，在520nm波长处测定吸光度，供试品溶液的吸光度不得大于对照品溶液的吸光度(0.0025%)。
干燥失重取本品，在105°C干燥至恒重，减失重量不得过1.0%(通则0831)。
霣金厲取本品l.O g,加水23m l溶解后，加醋酸盐缓冲液（p H3.5)2m l，依法检查（通则0821第一法），含重金属不得过百万分之十。
砷盐取本品2.O g,加水22m l溶解后，加盐酸5m l,依法检査（通则0822第一法），应符合规定（0.0001%)。
【含量测定】取本品约0.16g，精密称定，加冰醋酸40m l,微温溶解后，放冷，加结晶紫指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.l m o l/L)滴定至溶液显绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。
每l m l高氯酸滴定液（0.l m o l/L)相当于20.12mg的C6H12N N a03S0【类别】药用辅料，甜味剂和矫味剂。
【贮廉】密封保存。
苯扎氯铵B e n zh a l u?a nBenzalkonium Chloride见二部品种正文。
【类别】药用辅料，抑菌剂。
苯扎溴铵巳e n z h a x i u’a nBenzalkonium Bromide见二部品种正文。
【类别】药用辅料，抑菌剂。
苯甲酸钠B e n j i a su a n n aSodium BenzoateoC7H5N a02144.11'[532-32-1]本品系由苯甲酸和碳酸氢钠反应制得。
按干燥品计算，含C7H5N a〇2不得少于99.0%。
【性状】本品为白色颗粒、粉末或结晶性粉末；无臭或微带臭气，味微甜带咸。
本品在水中易溶，在乙醇中略溶【鉴别】（1)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集234图）一致(通则0402)。
(2)取本品约0.5g，加水10m l溶解后，溶液显钠盐鉴别（1)的反应与苯甲酸盐的鉴别反应（通则0301)。
通则0401紫外-可见分光光度法
0401紫外—可见分光光度法紫外—可见分光光度法是在190nm～800nm波长范围内测定物质的吸光度,用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。
当光穿过被测物质溶液时,物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。
因此,通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。
从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax 和最小吸收波长λmin。
物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。
因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较,或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴定物质。
用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度.仪器的校正和检定1.波长由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长.常用汞灯中的较强谱线237。
83nm,253.65nm,275.28nm，296.73nm,313。
16nm， 334.15nm， 365.02nm, 404。
66nm, 435。
83nm，546.07nm与576.96nm；或用仪器中氘灯的486.02nm与656。
10nm谱线进行校正；钬玻璃在波长279。
4nm,287.5nm, 333.7nm, 360。
9nm, 418.5nm， 460。
0nm,484.5nm．536。
2nm 与637。
5nm处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意;近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器,以10%高氯酸溶液为溶剂，配制含氧化钬（Ho2O3） 4%的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm,278.10nm， 287。
18nm，333.44nm， 345。
47nm， 361.31nm，416.28nm， 451.30nm, 485.29nm, 536。
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0401紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法是在190nm～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。
当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。
因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。
从吸收光谱中，可以确
定最大吸收波长λ
max 和最小吸收波长λ
min。
物质的吸收光谱具有与其结构相关的
特征性。
因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴定物质。
用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。
仪器的校正和检定
1.波长由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm, 334.15nm, 365.02nm, 404.66nm, 435.83nm，546.07nm与576.96nm；或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正；钬玻璃在波长279.4nm，287.5nm, 333.7nm, 360.9nm, 418.5nm, 460.0nm,484.5nm．536.2nm与637.5nm处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意；近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10%高氯酸溶
液为溶剂，配制含氧化钬（Ho
2O
3
） 4%的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，
278.10nm, 287.18nm, 333.44nm, 345.47nm, 361.31nm,416.28nm, 451.30nm, 485.29nm, 536.64nm和640.52nm。
仪器波长的允许误差为：紫外光区±1nm，500nm附近±2nm。
2．吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。
吸收系数（）的
规定值
吸收系数（）的
许可范围
3．杂散光的检查可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
对溶剂的要求
含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。
因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。
例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。
另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。
因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度。
溶剂和吸收池的吸光度，在220～240nm范围内不得超过0.40，在241～250nm范围内不得超过0.20，在251～300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。
测定法
测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。
除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。
一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3～0.7之间为宜。
仪器的狭缝波带宽度宜小于供试品吸收带的半高宽度的十分之一，否则测得的吸光度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。
由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。
当溶液的pH值对测定结果有影响时，应将供试品溶液的pH值和对照品溶液的pH值调成一致。
1．鉴别和检查分别按各品种项下规定的方法进行。
2．含量测定一般有以下几种方法。
（1）对照品比较法按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度：
c x =（A
X
/A
R
）C
R
式中 c
x
为供试品溶液的浓度；
A
x
为供试品溶液的吸光度；
C
R
为对照品溶液的浓度；
A
R
为对照品溶液的吸光度。
（2）吸收系数法按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。
用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。
（3）计算分光光度法计算分光光度法有多种，使用时应按各品种项下规定的方法进行。
当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品的测试条件应尽可能一致。
计算分光光度法一般不宜用作含量测定。
（4）比色法供试品本身在紫外一可见光区没有强吸收，或在紫外光区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂，使反应产物的最大吸收移至可见光区，这种测定方法称为比色法。
用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准品同时操作。
除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。
在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后，按上述（1）法计算供试品浓度。
当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。