牛血清蛋白提取
牛血清免疫球蛋白的盐析法提取与纯化
牛血清免疫球蛋白的盐析法提取与纯化
牛血清免疫球蛋白的盐析法提取与纯化是一个复杂的过程，包括多个步骤。
以下是一个基本的流程：1. 盐析：首先，需要将牛血清中的免疫球蛋白通过盐析的方法进行提取。
这一步通常使用饱和硫酸铵溶液，通过调节溶液的pH值和离子强度，使得免疫球蛋白在盐析过程中沉淀下来。
2. 洗涤：将沉淀的免疫球蛋白进行洗涤，去除其中的盐分和其他杂质。
3. 溶解：将洗涤后的免疫球蛋白溶解在适当的缓冲液中，以保持其生物活性。
4. 纯化：通过凝胶过滤、离子交换等层析技术对免疫球蛋白进行纯化，去除其中的杂质和不同种类的免疫球蛋白。
5. 浓缩和干燥：将纯化的免疫球蛋白溶液进行浓缩，然后进行干燥处理，得到最终的产品。
需要注意的是，具体的提取和纯化步骤可能会因为实验条件、设备、原材料等因素而有所不同。
同时，为了保证免疫球蛋白的生物活性，需要在整个过程中保持适当的pH值、温度和离子强度等条件。
牛血清白蛋白的提取与鉴定
第八次实验：牛血清白蛋白的提取与鉴定一、实验名称牛血清白蛋白的提取与鉴定二、实验目的1、掌握盐析法提取牛血清白蛋白2、掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定牛血清白蛋白3、了解用溴甲酚绿鉴定血清蛋白三、实验原理1，蛋白质是水化作用较强的高分子物质，向其加入碱土金属的中性盐类可是蛋白质胶粒脱水并失去电荷，从溶液中沉淀出来。
球蛋白在半饱和的硫酸铵溶液中可析出，而清蛋白则需在饱和的硫酸铵溶液中可析出。
可将血清中白蛋白与其它球蛋白分离，最后用透析法除盐，即可提取白蛋白。
2，利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关，可对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。
3，血清中的白蛋白与溴甲酚绿在ph=4.2的条件下结合生成绿色化合物，溶液由黄色变为绿色，而球蛋白基本不与之反应，缩短反应时间可去除干扰，其颜色的深浅与白蛋白浓度成正比，可用于鉴定牛血清白蛋白。
四、实验步骤（一）盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS磷酸盐缓冲生理盐水稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（4000r/min）10min，将上清液倾入试管中。
（二）透析取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。
更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化，直至袋内盐分透析完毕。
将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。
（三）BCG法鉴定白蛋白+溴甲酚绿ph=4.2 绿色复合物或（三）电泳鉴定（1）点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位臵点样。
牛血清白蛋白的提取与鉴定实验讨论
一、概述1.1 背景介绍1.2 研究意义1.3 实验目的二、牛血清白蛋白提取实验2.1 实验材料与方法2.1.1 实验材料清单2.1.2 实验步骤2.2 实验结果2.3 实验讨论2.3.1 实验中可能出现的问题 2.3.2 实验结果的解释三、牛血清白蛋白鉴定3.1 实验材料与方法3.1.1 实验材料清单3.1.2 实验步骤3.2 实验结果3.3 实验讨论3.3.1 实验中可能出现的问题 3.3.2 实验结果的解释四、实验结果比较与分析4.1 提取实验和鉴定实验结果的比较4.2 实验结果的可能影响因素4.3 结果分析与讨论五、结论和展望5.1 实验总结5.2 结论5.3 下一步研究方向六、参考文献---在牛血清白蛋白的提取与鉴定实验中，我们希望探讨牛血清白蛋白的提取方法以及鉴定过程中的实验结果和可能的影响因素。
通过该实验，我们可以更好地了解牛血清白蛋白的特性和应用，为进一步研究提供参考和指导。
1.概述1.1背景介绍牛血清白蛋白是一种重要的蛋白质，在生物医学和生物工程领域有着广泛的应用。
其提取和鉴定方法对于研究人员来说至关重要。
1.2研究意义通过对牛血清白蛋白的提取和鉴定实验，可以为相关领域的研究提供重要数据支持，为医学和工程应用提供可靠依据。
1.3实验目的本次实验的主要目的是通过提取和鉴定牛血清白蛋白，验证提取方法的有效性，并探讨鉴定结果的可能影响因素。
2.牛血清白蛋白提取实验2.1实验材料与方法2.1.1实验材料清单- 牛血清样品- 离心管- 超声波破碎机- 离心机2.1.2实验步骤- 将牛血清样品放入离心管中- 使用超声波破碎机进行细胞破碎- 离心离心管，收集上清液作为提取的牛血清白蛋白2.2实验结果实验结果显示，通过超声波破碎和离心的方法，成功提取到了牛血清白蛋白。
2.3实验讨论2.3.1实验中可能出现的问题在超声波破碎过程中，可能会对蛋白质产生热性变性，影响提取效果。
2.3.2实验结果的解释通过超声波破碎和离心的方法，成功提取到了牛血清白蛋白，但可能存在蛋白质的变性情况，需要进一步鉴定确认。
牛血清蛋白含量实验报告
一、实验目的1. 掌握牛血清蛋白提取的基本原理和方法。
2. 学习双缩脲试剂法测定牛血清蛋白含量的原理和操作。
3. 了解牛血清蛋白在生物医学研究中的重要性。
二、实验原理牛血清蛋白（BSA）是一种重要的生物大分子，广泛用于生物化学、分子生物学和免疫学等领域。
本实验采用双缩脲试剂法测定牛血清蛋白含量，其原理是：蛋白质分子中含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），在碱性条件下能与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
生成的紫红色络合物在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内具有良好的线性关系。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 牛血清- 双缩脲试剂：硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾- 6.0mol/L NaOH 溶液- 0.1mol/L HCl 溶液- 比色皿- 移液器- 紫外可见分光光度计2. 实验仪器：- 电子天平- 磁力搅拌器- 酶标仪四、实验步骤1. 牛血清蛋白提取：（1）取一定量的牛血清，用0.1mol/L HCl溶液调节pH值至4.7；（2）加入等体积的丙酮，充分混合，静置过夜；（3）离心，取上清液，即为牛血清蛋白溶液。
2. 牛血清蛋白含量测定：（1）取一定量的牛血清蛋白溶液，用0.1mol/L HCl溶液调节pH值至4.7；（2）加入适量的双缩脲试剂，混匀；（3）将溶液置于酶标仪中，在540nm波长处测定吸光度；（4）根据标准曲线计算牛血清蛋白含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：（1）分别取不同浓度的牛血清蛋白标准溶液，用0.1mol/L HCl溶液调节pH值至4.7；（2）加入适量的双缩脲试剂，混匀；（3）将溶液置于酶标仪中，在540nm波长处测定吸光度；（4）以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 牛血清蛋白含量测定：（1）根据标准曲线，计算牛血清蛋白溶液的浓度；（2）根据实验测定的牛血清蛋白溶液浓度，计算牛血清蛋白含量。
六、实验讨论1. 本实验采用双缩脲试剂法测定牛血清蛋白含量，操作简便、快速、准确。
牛血清白蛋白的提取与鉴定
牛血清白蛋白的提取与鉴定第八次实验：牛血清白蛋白的提取与鉴定一、实验名称牛血清白蛋白的提取与鉴定二、实验目的1、掌握盐析法提取牛血清白蛋白2、掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定牛血清白蛋白3、了解用溴甲酚绿鉴定血清蛋白三、实验原理1，蛋白质是水化作用较强的高分子物质，向其加入碱土金属的中性盐类可是蛋白质胶粒脱水并失去电荷，从溶液中沉淀出来。
球蛋白在半饱和的硫酸铵溶液中可析出，而清蛋白则需在饱和的硫酸铵溶液中可析出。
可将血清中白蛋白与其它球蛋白分离，最后用透析法除盐，即可提取白蛋白。
2，利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关，可对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。
3，血清中的白蛋白与溴甲酚绿在ph=4.2的条件下结合生成绿色化合物，溶液由黄色变为绿色，而球蛋白基本不与之反应，缩短反应时间可去除干扰，其颜色的深浅与白蛋白浓度成正比，可用于鉴定牛血清白蛋白。
四、实验步骤（一）盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS磷酸盐缓冲生理盐水稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（4000r/min）10min，将上清液倾入试管中。
（二）透析取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。
更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化，直至袋内盐分透析完毕。
将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。
（三）BCG法鉴定白蛋白+溴甲酚绿ph=4.2 绿色复合物或（三）电泳鉴定（1）点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位臵点样。
牛血清蛋白提取
牛血清蛋白试验【摘要】本次历时三周的实验，主要是通过一系列提纯，分离，得到牛血清蛋白，并电泳，在此过程中学习一些基础的医学生化实验知识，比如盐析，凝胶过滤层析，DEAE-纤维素离子交换层析，α1-AT活力测定及蛋白定量，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等，另外，还学习了一些实验仪器的使用，如分光光度计，离心机，电泳胶的制作等【关键字】牛血清蛋白，电泳，盐析，凝胶过滤层析，比色【Abstract】The experiment lasted three weeks, mainly through a series of purification, separation, obtained bovine serum albumin, and electrophoresis, in the process learn some basic medical knowledge of biochemical experiments, such as salt precipitation, gel filtration, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, α1-AT activity assay and protein quantification, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, etc. in addition, a number of experiments studying the use of instruments such as spectrophotometer, centrifuges, gel electrophoresis of production, etc.【Key words】Bovine serum albumin, electrophoresis, salt precipitation, gel filtration chromatography，colorimetric正文前言：血清是血液的组成成分，是血液经离心或凝固后析出来的液体成分。
双水相萃取技术在提取牛血清白蛋白中的应用
牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基。
分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。
其在血液中的主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。
在动物细胞无血清培养中，可起到生理和机械保护作用和载体作用。
目前，石家庄鼎晨科技有限公司致力于研究牛血清白蛋白的溶液标准物质。
此外，纽邦生物科技有限公司也专业提供牛血清白蛋白。
双水相萃取技术主要技术特征是条件温和，两相间界面张力小，生物相容性高，萃取后目标产物的后处理简便，一般不存在有机溶剂残留问题，易于放大工艺，可获得较高收率和纯度，已经在生物化学、细胞生物学以及生物化工等领域得到了广泛的应用。
国内双水相萃取技术在提取牛血清白蛋白中的应用十分广泛。
邓凡政等建立了由亲水性离子液体四氟硼酸1-甲基-3-丁基咪唑和KH2PO4形成的双水相体系萃取分离牛血清白蛋白(BSA)的新方法，结果表明,磷酸二氢钾盐浓度为80g/L,离子液体浓度在160~240 mL/L,BSA的浓度为30~50 mg/L,溶液酸度在pH 4~8范围,离子液体双水相体系对BSA有较高的萃取率；林潇利用双水相技术萃取牛血清白蛋白回收率为96.90%。
结果表明，此方法回收率、重现性好，且适用于牛血清白蛋白和牛血红蛋白混合样品的检测，为蛋白质分离提取提供了一种新思路；田明玉考察了多种单羟基的短链醇/无机盐双水相体系对牛血清白蛋白的萃取能力。
结果表明，多种体系对牛血清白蛋白都有较好的萃取效果，在磷酸二氢钾18%（W/W）/乙醇18%（W/W）、碳酸钠13%（W/W）/乙醇18%（W/W）时，收率达到最大分别为94.0%、93.6%，此时其分配系数分别为11.52、11.24，这与传统的低分子量聚乙二醇/磷酸氢二钾体系萃取效果相似。
国外在双水相提取牛血清白蛋白中也取得了长足的发展。
LouwrerA用乙醇/磷酸氢二钾体系萃取分离牛血清白蛋白,酪蛋白，核糖核酸酶等蛋白质，实验结果表明：被萃取物在该体系能得到较好的分离，而且部分稳定性较高的蛋白的生物活性得到了很好的保持；E-Kiss等人采用硫酸铵/叔丁醇双水相体系对牛血清白蛋白进行分离提取，结果表明，牛血清白蛋白能保持较高活性沉淀到两相界面处；据外文文献记载，牛血清白蛋白在聚乙二醇/葡聚糖双水相体系中分配特性的研究实验中，结果表明：pH对其影响主要为任一NaCl浓度下，pH=5.0处均出现一波峰。
牛血清蛋白分离纯化及鉴定的原理和流程
牛血清蛋白分离纯化及鉴定的原理和流程The principle of bovine serum albumin (BSA) separation, purification, and identification involves several key steps. Firstly, the protein sample, which contains BSA along with other components, is obtained. The separation process aimsto isolate BSA from these other components. This istypically achieved through techniques like salting out or chromatography.牛血清蛋白（BSA）的分离、纯化和鉴定的原理涉及几个关键步骤。
获取含有BSA和其他成分的蛋白样品。
分离过程旨在将BSA与其他成分隔离开来。
通常通过盐析或层析等技术实现。
Salting out is a widely-used method for separating proteins based on their solubilities in salt solutions. By adding a high concentration of salts like ammonium sulfate or sodium chloride to the protein solution, the solubility of BSA decreases while the solubility of other proteins remains higher. This leads to precipitation of BSA, allowing forits isolation.盐析是一种广泛使用的基于蛋白质在盐溶液中溶解度差异的方法进行分离。
牛血清白蛋白的提取与鉴定自主设计实验
牛血清白蛋白的提取与鉴定自主设计实验实验目的：本实验的目的是通过自主设计实验，探究牛血清中白蛋白的提取和鉴定方法。
实验原理：牛血清中的白蛋白是一种重要的血浆蛋白，提取牛血清白蛋白一般采用碳酸铵沉淀法。
实验步骤：1.首先，将牛血液收集到干净的离心管中，然后离心10分钟，以分离血浆和红细胞。
2.将分离得到的血浆转移至一个新的离心管中，并加入2mL的碳酸铵溶液，充分混合。
3.将混合液在4℃下孵育30分钟，然后在3000g下离心20分钟。
4.倒掉上清液，得到沉淀。
5.使用0.9%的氯化钠溶液将沉淀洗涤3次，每次离心10分钟。
6.吸去上清液，将沉淀溶解在适量的生理盐水中，得到白蛋白溶液。
鉴定牛血清白蛋白的方法有很多，这里我们以SDS-电泳为例进行鉴定：1. 准备1.5mm厚度的10%分离凝胶和4%集中凝胶。
2.将提取得到的牛血清白蛋白样品和已知浓度的蛋白标准品分别加入适量的2×样品缓冲液，进行蛋白样品的变性处理。
将样品在100℃水浴中加热10分钟。
3. 将蛋白样品和蛋白标准品以及预染色标记的蛋白质分子量标记物（Marker）加载到凝胶孔中，并进行电泳。
4.样品电泳结束后，将凝胶转移到显色/脱色缓冲液中，进行凝胶染色。
5.在染色后，观察凝胶中蛋白质的迁移情况，并用相应的软件或图像分析系统进行分析。
根据分子量标记物的迁移位置，可以确定牛血清白蛋白的迁移位置，并据此进行鉴定。
实验注意事项：1.实验操作货真价实，遵守实验室安全规定，注意个人防护。
2.实验过程中要注意消毒操作，避免细菌的污染。
3.实验设备及试剂用前要检查是否完好，避免实验过程中的故障。
4.实验室操作要注意卫生，实验后要做好清洁工作。
实验结果分析：根据实验结果，我们可以通过SDS-电泳方法成功提取并鉴定牛血清白蛋白，并确定其迁移位置。
根据其迁移位置可以进一步研究牛血清白蛋白的性质和功能。
实验改进及扩展：1.可以尝试不同的提取方法，如层析法、电泳法等，比较不同方法的效果。
醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白
一、原理 蛋白质是两性电解质。当PH>PI时，蛋白质为负离子，在电场 中向阳极移动；当PH<PI时，蛋白质为正离子，在电场中向阴极 移动。血清中含有数种蛋白质，在同一PH值时，因所带电荷不同， 而在电场中的移动速度也不相同，故可用电泳法将其分离。 本试验以牛血清为材料，醋酸纤维薄膜为支持物，通过点样、 电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱，再进行观 察和薄膜一条，浸入缓冲液中，完全浸透后（大约3-5分 钟），用镊子取出，将无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，将滤 纸对折，吸取多余的缓冲液。 2、点样：取载玻片一块，用点样管将血清均匀的涂在载玻片的一端面 上，在薄膜一端1/3处点样。 3、电泳：将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上，无光 泽面要向下放置，点样端放在阴极，进行电泳。电泳条件：电压90110V，电流0.4-0.6A,通电60分钟。 4、 染色：电泳完毕，将薄膜浸入染色液中5-10分钟，进行染色。 5、漂洗：染色完毕，将薄膜取出，放入漂洗液中漂洗至背景无色，在 浸入蒸馏水中。 6、图谱观察：观察图谱，将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验 报告纸上。
二、实验仪器 1、 牛血清 2、 醋酸纤维薄膜 3、 镊子 4、 电泳仪 5、 电泳槽 6、 载玻片
三、实验试剂
1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（离子强度，PH8.6）：称取 巴 比 妥 1.66g 和 巴 比 妥 钠 12.76g ， 溶 于 蒸 馏 水 并 稀 释 至 1000ml。用pH计较正后使用。 2、 染色液：氨基黑10B0.5g,甲醇50ml，冰乙酸10ml，蒸馏 水40ml混匀即可。 3、 漂洗液：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀 即可。
牛血清白蛋白制备
牛血清白蛋白制备一、牛血清白蛋白的概述牛血清白蛋白是一种由牛血浆提取得到的蛋白质，属于血浆蛋白家族中的一员。
它是一种重要的生物学试剂，具有多种生物学功能，如携带营养物质、调节渗透压、参与免疫反应等。
二、牛血清白蛋白的制备方法1. 收集牛血浆：选取健康的牛，经过一系列的消毒处理后，采集其血液。
2. 离心分离：将采集到的血液进行离心分离，将血浆与红细胞分离开来。
3. 酸洗：将获得的血浆加入适量的酸中，进行酸洗处理，以去除血浆中的杂质。
4. 稳定处理：将经过酸洗的血浆进行稳定处理，使其达到一定的稳定性。
5. 脱盐处理：通过透析或其他脱盐方法，将血浆中的盐类去除，得到纯净的牛血清白蛋白。
6. 浓缩：将脱盐后的牛血清白蛋白进行浓缩处理，得到高浓度的制剂。
三、牛血清白蛋白的应用领域1. 细胞培养：牛血清白蛋白可以作为细胞培养基的一部分，提供细胞所需的营养物质和生长因子，促进细胞的生长和繁殖。
2. 药物制剂：牛血清白蛋白可以作为药物的载体或稳定剂，增加药物的溶解度和稳定性，提高药物的生物利用度。
3. 生物工程：牛血清白蛋白可以作为生物反应器中的载体，用于表达和产生重组蛋白。
4. 免疫学研究：牛血清白蛋白可以用于抗原抗体反应的研究，如酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组织化学等。
四、牛血清白蛋白的优势与不足1. 优势：a. 来源广泛：牛血清白蛋白可以从牛血浆中提取得到，牛血浆易于获取。
b. 生物相似性高：牛血清白蛋白与人类血清白蛋白在结构和功能上具有较高的相似性，因此在某些应用中可以代替人类血清白蛋白。
c. 生产成本低：由于牛血清白蛋白的来源广泛，生产成本相对较低。
2. 不足：a. 潜在风险：由于牛血清白蛋白的来源是动物，存在一定的感染风险，如牛传染性病毒等。
b. 免疫原性：部分人群对牛血清白蛋白存在过敏反应，因此在使用时需要注意个体差异。
牛血清白蛋白是一种重要的生物学试剂，其制备方法简单且应用领域广泛。
在细胞培养、药物制剂、生物工程和免疫学研究等领域都有着重要的应用价值。
双水相萃取技术在提取牛血清白蛋白中的应用
浅谈“双水相技术”在提取牛血清白蛋白中的应用牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。
白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。
白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。
血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。
在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。
目前，石家庄鼎晨科技有限公司致力于研究牛血清白蛋白的溶液标准物质。
此外，深圳纽邦生物科技有限公司也专业提供牛血清白蛋白。
双水相萃取技术的特征：双水相萃取技术条件温和，萃取后目标产物的后处理简便，已经在生物化学、细胞生物学以及生物化工等领域得到了广泛的应用。
双水相萃取技术具有许多其他分离技术没有的优势，是一种具有良好发展前景的生化分离技术。
目前，对于该技术大规模用于生物活性物质的萃取分离还有很多问题需要解决--开发廉价、性能好且无毒的成相聚合物；与其他分离提纯技术有效结合；开展双水相体系基本性质的研究；对双水相体系分离过程进行深入研究[1].(技术简介？？？）双水相萃取技术在国内的研究应用状况:双水相萃取技术最新应用的领域是生物产品的分离，目前已应用于蛋白质，生物酶，菌体细胞以及氨基酸，抗生素等生物小分子物质的分离纯化[2]。
其中双水相萃取技术在提取牛血清白蛋白中的应用十分广泛。
邓凡政等[3]建立了由亲水性离子液体四氟硼酸1-甲基-3-丁基咪唑([Bmim]BF4)和KH2PO4形成的双水相体系萃取分离牛血清白蛋白(BSA)的新方法，结果表明,磷酸二氢钾盐浓度为80 g/L,离子液体浓度在160~240 mL/L,BSA的浓度为30~50 mg/L,溶液酸度在pH 4~8范围,离子液体双水相体系对BSA有较高的萃取率；林潇[4]双水相萃取牛血清白蛋白、牛血红蛋白和溶菌酶的回收率分别为96.90%（RSD=2.8%）97.83%（RSD=2.9%）和97.14%（RSD=2.4%）。
牛血清蛋白的提取与鉴定
3、透析：穿过膜的选择性扩散过程。可用于 分离分子量大小不同的溶质，低于膜所截留 阈值分子量的物质可扩散穿过膜，高于膜截 留阈值分子量的物质则被保留在半透膜的另 一侧。 4、电泳：带电物质或细胞在电场中的泳动。 根据大分子或颗粒的电荷、大小和形状不同， 使其在通过电场中的凝胶或介质时发生分离 的方法。
设计性试验
牛血清蛋白的提取与鉴定
实验目的： 1、掌握血清蛋白的提取与鉴定方法。 2、掌握电泳法，盐析法、透析法以及正确的 点样方法。 3、了解设计性试验的基本构架，方便今后创 新性实验的进行
实验原理 ： （会用到的几种试验方法） 1、利用蛋白质的显色反应，对牛血清蛋白进 行定性染色，从而对分离的物质进行鉴定。 2、盐析：盐析一般是指溶液中加入无机盐类 （本次试验就采用“饱和的硫酸铵”）而 使溶解的物质（本次试验提取的是“牛血 清蛋白”）析出的过程 。
透析
用两支毛细管分别将标准液及测定液点在同一张醋酸纤维素 薄膜的无光泽面上（划好点样线并作好标记），标准液点一 次，测定液点三次。
点样
将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时无光泽面向下，点 样端置于阴极，平衡5分钟，开电源160伏60分钟，关闭电源 后用镊子将膜条取出。
电泳
将膜条直接浸于盛有氨基黑10B（萘酚蓝黑）的染料中，染2 分钟取出，立即浸于漂洗液中，分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中 各漂洗5分钟材： 牛血清、PBS缓冲液、饱和硫酸铵、离心机、 试管、小烧杯、离心管、天平、电泳所需 的物件等
操作流程：
取小 牛血清0.5毫升、PBS液0.5毫升、饱和硫酸铵2.3毫升 充分混匀，静止20分钟，2500转/分离心10分钟。
盐析
取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用 线扎紧上口（注意要留有空隙），放入装有自来水的小烧杯 中透析，要不断振动，每隔2分钟换一次水，共换水15次。
双水相萃取牛血清蛋白
双水相萃取牛血清蛋白实验日期：2013年1月8日一、实验目的1、了解双水相系统的成相原理和方法；2、了解制作双水相系统相图的方法，加深对相图的认识；3、掌握双水相溶液配制与双水相萃取的操作；4、掌握分配系数和萃取收率的计算方法。
二、实验原理双水相系统是由两种互不相容的聚合物（如聚乙二醇（PEG）与葡聚糖（DX）或者互不相溶的聚合物溶液和盐溶液（如PEG与（NH4）2SO4）组成）。
双水相系统的制备一般是将两种溶质分别配制成一定浓度的水溶液，然后将两种溶液按照不同的比例混合，静置一段时间，当两中溶质的浓度超过某一浓度范围时，就会产生两相。
相图是研究双水相萃取的基础，双水相形成条件和定量关系常用相图来表示。
双水相萃取与有机溶剂萃取原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配原则。
当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力（如憎水性、氢键、离子键等）的存在，使得待分离的物质在上、下相中的浓度不同。
对于某一物质，只要选择合适的双水相体系，控制一定的条件就可以得到合适的分配系数，从而达到分离纯化的目的。
本实验选择PEG-硫酸铵双水相系统萃取牛血清蛋白。
利用双缩脲反应进行蛋白质的定量测定。
双缩脲反应是指蛋白质在碱性溶液中与二价铜离子结合生成紫色络合物的反应。
含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应，蛋白质含有多个肽键，因此有双缩脲反应，反应生成物颜色的深浅与蛋白质含量成正比。
三、实验试剂及仪器试剂：50%的PEG2000溶液（w/v），40%的硫酸铵溶液（w/v），牛血清蛋白（10mg/ml），双缩脲试剂仪器：紫外可见分光光度计，电子天平，台式高速离心机，漩涡混合仪，滴定管，大试管，离心试管（20ml）6只，移液管（1ml，5ml），试管（10ml），注射器（10ml）四、实验内容1、PEG2000-硫酸铵双水相体系相图的测定（1）取50%的PEG2000溶液（w/v）10ml于大试管中。
（2）用40%的硫酸铵溶液（w/v）装入滴定管中，向大试管滴加，并不断在旋涡混合器上混合，观察溶液的澄清程度，直至试管内液体出现混浊混浊为止，记录硫酸铵消耗的体积。
牛血清白蛋白的提取
牛血清白蛋白热乙醇法提取： 分离血浆，在牛血中加入枸橼酸钠离心，提 取，将收集的血浆放入夹层反应罐内，加热 加入辛酸钠，缓慢搅拌，温度在55℃～65℃， 加入盐酸调pH值至4.0～6.5，然后加乙醇， 过取新鲜牛血放入带制冷功能的离心机中，加入 血量的10％的浓度为3.8％的枸橼酸钠，离心，温度在2℃以 下，分离血浆、血球，收集血浆，血球另用； 2、提取，将血浆放入夹层反应罐内，夹层内加热水，边加热 边加入牛血清容积的0.2-0.3％的辛酸钠，缓慢搅拌，温度在 55℃～65℃，溶解后调PH值，加入浓度为1摩尔的盐酸，将 PH调至4.0～6.5，然后加入血清总量的5.5％的浓度为95％ 的乙醇，过滤，滤渣弃之； 3、脱盐和浓缩，将滤液用20000分子量以下的超滤器洗脱盐 类及其它小分子杂质，同时进行浓缩； 4、冻干，将浓缩液按冻干曲线冻干，即将浓缩液迅速冷却至40℃，持续1小时左右，升到-25℃，持续10-20小时，再缓 慢升温到0℃，再持续1-4小时升到保存温度20℃。，为成品。
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牛血清蛋白试验
【摘要】本次历时三周的实验，主要是通过一系列提纯，分离，得到牛血清蛋白，并电泳，在此过程中学习一些基础的医学生化实验知识，比如盐析，凝胶过滤层析，DEAE-纤维素离子交换层析，α1-AT活力测定及蛋白定量，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等，另外，还学习了一些实验仪器的使用，如分光光度计，离心机，电泳胶的制作等
【关键字】牛血清蛋白，电泳，盐析，凝胶过滤层析，比色
【Abstract】The experiment lasted three weeks, mainly through a series of purification, separation, obtained bovine serum albumin, and electrophoresis, in the process learn some basic medical knowledge of biochemical experiments, such as salt precipitation, gel filtration, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, α1-AT activity assay and protein quantification, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, etc. in addition, a number of experiments studying the use of instruments such as spectrophotometer, centrifuges, gel electrophoresis of production, etc.【Key words】Bovine serum albumin, electrophoresis, salt precipitation, gel filtration chromatography，colorimetric
正文
前言：血清是血液的组成成分，是血液经离心或凝固后析出来的液体成分。
血清的主要成分是免疫球蛋白和血清白蛋白，本系列实验采用牛血清提取蛋白质进行试验。
由于在蛋白质溶液中加入无机盐会破坏蛋白质的稳定结构，而使蛋白质析出，牛血清首先经过分段盐析进行蛋白质的粗提，得到α1-AT粗提蛋白成分。
之后通过凝胶过滤层析，利用分子两大小的差别，导致的经过凝胶形成的固定相的分子筛时流速不同而进一步分离除盐。
第三步，运用DEAE-纤维素离子交换剂对负电物质的吸引能力，除去溶液中的大部分球蛋白。
之后通过α-AT对胰蛋白酶的抑制力来测定α1-AT的活力。
最后，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定1
蛋白质分子量。
材料与方法
材料、主要仪器与主要试剂
材料：牛血清
主要仪器：离心机，真空泵，层析柱，分光光度计，恒温水浴箱，电泳仪器一套
主要试剂：牛血清待测液，牛血清样品，PBS，pH7.2饱和磷酸钠溶液，奈氏试剂
方法：1.盐析
取样→离心→弃上清，加硫酸铵后4°C30min→抽滤→得粗样
2.凝胶过滤层析
蛋白样用PBS溶解→装柱及平衡→上样→洗脱→凝胶再生
3.α1-AT活力测定及蛋白定量
α1-AT活力测定→蛋白定量——双缩脲法
4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
样品处理→配胶→组装电泳槽，灌胶，电泳→脱色→干胶
结果与分析
实验结果
各步纯化样品的检测结果列表
分离阶段 总体积（ml ） 蛋白浓度（mg/ml ） α1-AT 抑制活力（mg/ml ） α1-AT 总抑制活力 α1-AT 比活性mg/mg 纯化倍数
回收率（%） 血清 15 70 0.579 8.685 8.27*10-3 1 100 G-25 8.5 42.66 0.584 4.964 1.37*10-2 1.66 57.16 DEAE 2.4
13.13
0.564
1.3536
4.30*10-2
5.20
15.59
实验分析
由图像得到，上清蛋白量多且清晰，前清蛋白次之，α1-AT 抗胰蛋白最少且界限不清，比较其他几组数据及图像，相差不大，除实验过程操作问题外，认为本次试验比较成功。
参考文献
[1] /question/14614441.html?an=1&si=3
[2] /view/8a1bc27001f69e3143329418.html
上清蛋白
前清蛋白
α1-AT 抗胰蛋白。