真菌镜检的实验室操作课件
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微生物检验常用技术与方法—临床真菌检验技术与方法(微生物检验课件)
临床真菌检验 技术与方法
掌握真菌的检验方法。 熟悉真菌标本采集及注意事项； 熟悉真菌的鉴定程序；真菌药物 敏感试验方法。
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集—— 根据真菌感染部位采集不同的标本。 浅部真菌感染 取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
代谢基质 产色基团
原
真菌的酶
理
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离 （显色）
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断。
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定。
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法。
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断。
返回章内容
第四节 真菌检验G试验、GM试验
应用背景
• 侵袭性真菌病临床表现不典型，确 诊通常需要侵入性的组织标本，因 此有较高的漏诊率。目前国内大多 数医院都在开展非侵袭性实验室技 术如G试验和GM试验，成为真菌 感染的诊断标准之一，以提高真菌 感染的阳性率。
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主 要用于鉴定酵母菌。
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋 白，使其失去凝胶性质而不能凝固。
尿素分解试验
• 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素。
第三节 真菌的鉴定方法
掌握真菌的检验方法。 熟悉真菌标本采集及注意事项； 熟悉真菌的鉴定程序；真菌药物 敏感试验方法。
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集—— 根据真菌感染部位采集不同的标本。 浅部真菌感染 取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
代谢基质 产色基团
原
真菌的酶
理
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离 （显色）
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断。
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定。
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法。
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断。
返回章内容
第四节 真菌检验G试验、GM试验
应用背景
• 侵袭性真菌病临床表现不典型，确 诊通常需要侵入性的组织标本，因 此有较高的漏诊率。目前国内大多 数医院都在开展非侵袭性实验室技 术如G试验和GM试验，成为真菌 感染的诊断标准之一，以提高真菌 感染的阳性率。
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主 要用于鉴定酵母菌。
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋 白，使其失去凝胶性质而不能凝固。
尿素分解试验
• 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素。
第三节 真菌的鉴定方法
真菌感染实验室检测讲解PPT共62页
真菌感染实验室检测讲解
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进这是不 容忽视 的。— —爱献 生
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进这是不 容忽视 的。— —爱献 生
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
真菌学检验ppt课件
外阴炎。男性念珠菌龟头炎、包皮炎。
❖ 体弱婴儿鹅口疮；
❖ 假丝酵母菌性肠炎、肺炎等。
❖ AIDS最常见并发症之一。
白假丝酵母菌皮肤黏膜感染 （鹅口疮）
67
微生物特性：
： 典 型❖类圆酵形母或型 卵菌 落园，形表；面 光 滑 ， 呈
奶油色，有酵母气味。
， 可 看❖到出表芽层方为 式卵 圆繁形殖芽，生在细组胞织， 底 假 菌 丝 。内可见芽生孢子、假菌
观察真菌菌落的色素、鉴别深 部真菌，使二相型真菌呈酵母 型
刺激真菌孢子形成
血琼脂
多数病原性真菌
皮肤真菌实验培养基（DTM） 分离皮肤真菌
38
❖ 平皿培养：只能培养生长繁殖较快的真菌; ❖ 大试管培养:用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存; ❖ 玻片培养(微量、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。
39
观察菌落形态应注意：
起（如灰指甲可由毛癣菌或表皮癣菌引起）
51
红色毛癣菌
52
53
甲癣
54
微生物学检验
1、标本采集：70%乙醇消毒
55
2、直接镜检：
10%KOH（皮屑）； 25%KOH或 NaOH + 5%甘油（指甲）；
透明、有隔、有分支的菌丝及成链的关节孢子 发外型感染或发内型感染
56
57
断发毛癣菌引起的 发内型感染的头发
丝；
68
❖ 假菌丝 (pseudohypha): 指酵母菌菌种进行一 连串的芽殖后，长大的子细胞仍不脱落分离， 并继续出芽，细胞成串排列，在分隔处缢缩, 这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
微❖ 在生玉物米特粉性培养：基中可产生假菌丝和厚膜孢子。
70
厚膜孢子形成试验
微生物检验
❖ 体弱婴儿鹅口疮；
❖ 假丝酵母菌性肠炎、肺炎等。
❖ AIDS最常见并发症之一。
白假丝酵母菌皮肤黏膜感染 （鹅口疮）
67
微生物特性：
： 典 型❖类圆酵形母或型 卵菌 落园，形表；面 光 滑 ， 呈
奶油色，有酵母气味。
， 可 看❖到出表芽层方为 式卵 圆繁形殖芽，生在细组胞织， 底 假 菌 丝 。内可见芽生孢子、假菌
观察真菌菌落的色素、鉴别深 部真菌，使二相型真菌呈酵母 型
刺激真菌孢子形成
血琼脂
多数病原性真菌
皮肤真菌实验培养基（DTM） 分离皮肤真菌
38
❖ 平皿培养：只能培养生长繁殖较快的真菌; ❖ 大试管培养:用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存; ❖ 玻片培养(微量、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。
39
观察菌落形态应注意：
起（如灰指甲可由毛癣菌或表皮癣菌引起）
51
红色毛癣菌
52
53
甲癣
54
微生物学检验
1、标本采集：70%乙醇消毒
55
2、直接镜检：
10%KOH（皮屑）； 25%KOH或 NaOH + 5%甘油（指甲）；
透明、有隔、有分支的菌丝及成链的关节孢子 发外型感染或发内型感染
56
57
断发毛癣菌引起的 发内型感染的头发
丝；
68
❖ 假菌丝 (pseudohypha): 指酵母菌菌种进行一 连串的芽殖后，长大的子细胞仍不脱落分离， 并继续出芽，细胞成串排列，在分隔处缢缩, 这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
微❖ 在生玉物米特粉性培养：基中可产生假菌丝和厚膜孢子。
70
厚膜孢子形成试验
微生物检验
真菌实验室技术课件
方块法
小钢圈法
平皿培养
试管培养
方块小培养法
钢圈小培养法
真菌病病理检查法
标本切片的制作 标本组织染色法 真菌在组织中的形态
真菌病血清学检查法
真菌抗原检测
隐球菌乳胶凝集试验（隐球菌荚膜多糖抗原） G试验（β-1,3-葡聚糖试验）
主要检测念珠菌、曲霉侵袭性感染，及一些少见真菌（如镰 刀菌、毛孢子菌等）感染。
菌的检测困难
真菌药敏试验的方法
微量液体稀释法
是多量液体稀释法的改良，将试管改为96孔 微孔板，标本及试剂体积减少至0.2ml，培养时间 也缩短至24小时，并以肉眼或分光光度计判断终 点。
优点：简单易行，省时，损耗少 缺点：终点难以确定，标准化问题， 对丝状真菌的检测困难。
微量液体稀释法
琼脂扩散法
ROSCO纸片法
真菌药敏试验的方法
E试验（E-test）法
为一种琼脂扩散法的改良，采用标准培养基，将
待测菌液涂抹于培养基表面后，臵入含有以梯度浓度 排列的药液条，经孵育后观察药液条周围出现的椭圆
形抑菌区，以达到抑菌的最小药物浓度为MIC终点。
优点：简单易行，判断抑制终点清晰，可以进行 定量测定
合成培养基（如察氏培养基）
常规培养基：沙氏琼脂（SDA）、改良沙氏琼脂（SAB）、
脑心浸膏琼脂（BHIA）、脑心浸膏肉汤（BHIB）、
马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）等
抗生素：常用氯霉素（50μg/ml）、放线菌酮（500 μg/ml）
真菌培养鉴定
培养方法
试管培养 平皿培养（大培养） 小培养 玻片法
缺点：价格昂贵
E-test 法
真菌的实验诊断PPT.
17
092
18
区分酵母样或霉样菌落
19
Aspergillus fumigatus - Colonial Morphology, Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌
20
Aspergillus fumigatus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue (单列) 分生孢子头、分生孢 子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
1
医学重要的酵母菌分类
Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64
条件致病的酵母菌
21
Aspergillus flavus - 在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌 生长快黄色表面粉末状
22
Aspergillus flavus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌( 二列为主)分生孢子头、 分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子
23
Penicillium species - Colonial Morphology, Sabouraud agar 青霉属 气生菌丝密毯状
24
1.6.1设定标准 1.5.3留心简历中的空白时间和前后矛盾之处 2.6.4感谢应聘者 （2）如果摔伤后，在四肢部位有大血管破裂，出血量很能多，应马上找些橡皮管、布带、绷带作为止血带在大腿根部上肢腋窝处勒紧 止血。 4、总结
6
092
18
区分酵母样或霉样菌落
19
Aspergillus fumigatus - Colonial Morphology, Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌
20
Aspergillus fumigatus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue (单列) 分生孢子头、分生孢 子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
1
医学重要的酵母菌分类
Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64
条件致病的酵母菌
21
Aspergillus flavus - 在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌 生长快黄色表面粉末状
22
Aspergillus flavus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌( 二列为主)分生孢子头、 分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子
23
Penicillium species - Colonial Morphology, Sabouraud agar 青霉属 气生菌丝密毯状
24
1.6.1设定标准 1.5.3留心简历中的空白时间和前后矛盾之处 2.6.4感谢应聘者 （2）如果摔伤后，在四肢部位有大血管破裂，出血量很能多，应马上找些橡皮管、布带、绷带作为止血带在大腿根部上肢腋窝处勒紧 止血。 4、总结
6
真菌检验【送检】 ppt课件
e) 标本保存方式不恰当或保存时间超过规定； g) 血 培 养 瓶 破 碎 、 渗 漏 或 过 有 效 期 ； i) 稀薄唾液或低倍镜下上皮细胞数大于 10
j) 尿液采集未清洗会阴部及尿道口。
ppt课件
29
参 考 文 献 ： [1] 秦 启 贤 主 编 ： 临 床 真 菌 学 . 复 旦 大 学 出 版 社 ， 2001. [2] 王 端 礼 主 编 ： 医 学 真 菌 学 － 实 验 室 检 验 规 范 . 人 民 卫 生 出 版 社 ， 2005. [3] 吴 绍 熙 主 编 ： 现 代 医 学 真 菌 检 验 手 册 （ 第 二 版 ） . 中 国 协 和 医 科 大 学 出 版 社 ， 2005. [4] 周 庭 银 ， 倪 语 星 。 临 床 微 生 物 检 验 标 准 化 操 作 . 上 海 科 学 技 术 出 版 社 ， 2009. [5] 周 庭 银 . 临 床 微 生 物 学 诊 断 与 图 解 （ 第 三 版 ） . 上 海 科 学 技 术 出 版 社 ， 2012. [6] James V. Manual of Clinical Microbiology [M], 10th ed. Washington, DC: ASM Press, 2011. [7] Sybren de Hoog, Guarro J, Gene J, et al. Atlas of clinical fungi [M]. CBS,Electronic Version 3.1, 2011. [8] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2009, M27-A3, vol.28, No14. [9] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2012, M27-S4, vol.28, No15. [10] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi, 2009, M38-A2, vol.28, No16. [11] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, principles and procedures for blood cultures; approved guideline, 2009, M47-A2, vol.28, No16. [12] EUCAST.The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing.Breakpoint tables for interpretation of MICs. Version 6.1,2013. [13] 抗酵样真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,421 -2013,2013-07-16 发布， 1-14 [14] 抗丝状真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,411-2013,2013-06-03 发布， 1-14
感染真菌的实验室诊断课件
小分生孢子 ：无
大分生孢子形态 ( × 400)
19
皮肤癣菌的孢子形态
C.表皮癣菌 ⑤大分生孢子：侧生
或顶生，棍棒状， 壁薄 小分生孢子 ：无
20
三、形态和培养特征
毛癣菌属
大分生孢子 ：细长 、薄壁 、棒状 、两端钝圆
小分生孢子：侧生、散在， 呈葡萄状
毛癣菌的菌落
21
三、形态和培养特征
皮肤癣菌的孢子形态 A.毛癣菌 ①大分生孢子：细长 、 薄壁 、棒状 、两端钝圆 ②小分生孢子：侧生、 散在，呈葡萄状
二 临床意义 三 形态和培养特征 四 实验诊断
7
一、 分类
主要为皮肤丝状菌(Dermatophytes)，侵犯皮肤、 毛发、指甲等角化组织引起癣症，又称癣菌 (Ringworm)，分为三属，共37个种。
三个属 ：表皮癣菌属 (Epidermophyton) 毛癣菌属 (Trichophyton) 小孢子癣菌属 (Microsporum)
69
(2)脲酶试验
新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂培养基 的尿素形成NH3和CO2 ，使培养基由黄色变为粉红色 白假丝酵母菌则为阴性。
70
(3)糖同化及发酵试验
新生隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇 不能发酵糖类、不同化硝酸盐 非致病性隐球菌则不能同化肌醇
71
(4)动物试验
将新生隐球菌悬液0.5ml接种小白鼠腹腔或0.2ml 接种小鼠脑内， 5~30d动物可死亡，尸检可见各 器官均发现菌体 以脑和肺多见
(三)标本的直接检查
• 厚膜孢子形成试验：将假丝 酵母菌接种于玉米粉培养基， 仅白假丝酵母菌在菌丝顶端、 侧缘或中间形成厚膜孢子。
51
四、实验室诊断
大分生孢子形态 ( × 400)
19
皮肤癣菌的孢子形态
C.表皮癣菌 ⑤大分生孢子：侧生
或顶生，棍棒状， 壁薄 小分生孢子 ：无
20
三、形态和培养特征
毛癣菌属
大分生孢子 ：细长 、薄壁 、棒状 、两端钝圆
小分生孢子：侧生、散在， 呈葡萄状
毛癣菌的菌落
21
三、形态和培养特征
皮肤癣菌的孢子形态 A.毛癣菌 ①大分生孢子：细长 、 薄壁 、棒状 、两端钝圆 ②小分生孢子：侧生、 散在，呈葡萄状
二 临床意义 三 形态和培养特征 四 实验诊断
7
一、 分类
主要为皮肤丝状菌(Dermatophytes)，侵犯皮肤、 毛发、指甲等角化组织引起癣症，又称癣菌 (Ringworm)，分为三属，共37个种。
三个属 ：表皮癣菌属 (Epidermophyton) 毛癣菌属 (Trichophyton) 小孢子癣菌属 (Microsporum)
69
(2)脲酶试验
新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂培养基 的尿素形成NH3和CO2 ，使培养基由黄色变为粉红色 白假丝酵母菌则为阴性。
70
(3)糖同化及发酵试验
新生隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇 不能发酵糖类、不同化硝酸盐 非致病性隐球菌则不能同化肌醇
71
(4)动物试验
将新生隐球菌悬液0.5ml接种小白鼠腹腔或0.2ml 接种小鼠脑内， 5~30d动物可死亡，尸检可见各 器官均发现菌体 以脑和肺多见
(三)标本的直接检查
• 厚膜孢子形成试验：将假丝 酵母菌接种于玉米粉培养基， 仅白假丝酵母菌在菌丝顶端、 侧缘或中间形成厚膜孢子。
51
四、实验室诊断
真菌镜检PPT课件
9
瑞氏染色组织胞浆菌
10
PAS染色甲真菌病黄曲霉甲床病理
11
培养检查
可提高真菌检出率，并能确定菌种。 方法：标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基
（Sabouraud agar/沙氏琼脂）上，置室温或37℃培 养1～3周。 必要时可行小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌 落的形态及显微镜下形态判断。对某些真菌，有 时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生 物学方法确定。
真菌镜检
.
1
一. 采集标本
浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标 本在分离前常先用75%乙醇处理。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、 脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种 穿刺液和活检组织，采集时应注意无菌操作。
2
二. 检查方法
直接涂片 墨汁涂片 染色 培养
12
真菌培养
13
谢谢！
14
3
直接涂片
最简单而重要的诊断方法 方法：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，
盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质后， 轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。 用于检查有无菌丝或孢子，不能确定菌种。
4
直接检测隐球菌及其它有荚膜的孢子 方法：取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，
盖上盖玻片后直接镜检。
6
墨汁涂片
7
涂片或组织切片染色
染色可更好地显示真菌形态和结构 革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等 瑞氏染色（美蓝-伊红Y 染料）适用于组织胞浆菌 PAS（Periodic Acid-Schiff stain ）染色（糖原染色 ）
常用于组织切片
8
革兰染色白色念珠菌
瑞氏染色组织胞浆菌
10
PAS染色甲真菌病黄曲霉甲床病理
11
培养检查
可提高真菌检出率，并能确定菌种。 方法：标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基
（Sabouraud agar/沙氏琼脂）上，置室温或37℃培 养1～3周。 必要时可行小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌 落的形态及显微镜下形态判断。对某些真菌，有 时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生 物学方法确定。
真菌镜检
.
1
一. 采集标本
浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标 本在分离前常先用75%乙醇处理。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、 脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种 穿刺液和活检组织，采集时应注意无菌操作。
2
二. 检查方法
直接涂片 墨汁涂片 染色 培养
12
真菌培养
13
谢谢！
14
3
直接涂片
最简单而重要的诊断方法 方法：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，
盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质后， 轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。 用于检查有无菌丝或孢子，不能确定菌种。
4
直接检测隐球菌及其它有荚膜的孢子 方法：取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，
盖上盖玻片后直接镜检。
6
墨汁涂片
7
涂片或组织切片染色
染色可更好地显示真菌形态和结构 革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等 瑞氏染色（美蓝-伊红Y 染料）适用于组织胞浆菌 PAS（Periodic Acid-Schiff stain ）染色（糖原染色 ）
常用于组织切片
8
革兰染色白色念珠菌
真菌ppt课件
毛霉菌
引起毛霉病，主要侵犯血管，常见于鼻脑毛霉病、肺胃毛霉病、皮肤毛霉病和播 散性毛霉病，病情凶险，死亡率高。
05
真菌与人类关系探 讨
食用真菌营养价值及开发利用现状
营养价值
食用真菌富含蛋白质、多糖、氨基酸等营养成分，具有提高 免疫力、抗肿瘤等功效。
开发利用现状
目前，市场上已有多种食用真菌产品，如蘑菇罐头、香菇酱 等，深受消费者喜爱。
灭菌处理。
真菌接种
02
从菌种保藏中心或实验室保藏的菌种中挑选目标真菌，进行接
种操作。
实验器材准备
03
准备显微镜、无菌操作台、接种环、培养皿等实验所需器材，
并进行清洗和消毒处理。
实验步骤和注意事项说明
无菌操作
在实验过程中，严格遵守无菌操作规程，避免杂菌污染。
培养条件控制
根据目标真菌的生长特性，控制好培养温度、湿度和光照等条件 ，确保真菌正常生长。
THANKS
感谢您的观看
观察真菌菌落、菌丝、孢子等 形态学特征进行分类鉴定。
培养特性
根据不同真菌在特定培养基上 的生长特性进行鉴定。
生理生化特性
利用真菌的生理生化反应特点 进行分类鉴定。
生物学特性
通过研究真菌与其他生物的互 作关系进行分类鉴定。
现代分子生物学技术在真菌分类鉴定中应用
DNA序列分析
通过比较真菌DNA序列差异进 行分类鉴定。
真菌繁殖方式及特点
无性繁殖
包括分生孢子、芽孢子等，繁殖 速度快，易产生变异。
有性繁殖
通过配子囊结合形成担子或子囊， 进行有性生殖，可产生新的遗传性 状。
准性生殖
介于无性和有性之间的一种生殖方 式，通过基因重组产生新的遗传变 异。
引起毛霉病，主要侵犯血管，常见于鼻脑毛霉病、肺胃毛霉病、皮肤毛霉病和播 散性毛霉病，病情凶险，死亡率高。
05
真菌与人类关系探 讨
食用真菌营养价值及开发利用现状
营养价值
食用真菌富含蛋白质、多糖、氨基酸等营养成分，具有提高 免疫力、抗肿瘤等功效。
开发利用现状
目前，市场上已有多种食用真菌产品，如蘑菇罐头、香菇酱 等，深受消费者喜爱。
灭菌处理。
真菌接种
02
从菌种保藏中心或实验室保藏的菌种中挑选目标真菌，进行接
种操作。
实验器材准备
03
准备显微镜、无菌操作台、接种环、培养皿等实验所需器材，
并进行清洗和消毒处理。
实验步骤和注意事项说明
无菌操作
在实验过程中，严格遵守无菌操作规程，避免杂菌污染。
培养条件控制
根据目标真菌的生长特性，控制好培养温度、湿度和光照等条件 ，确保真菌正常生长。
THANKS
感谢您的观看
观察真菌菌落、菌丝、孢子等 形态学特征进行分类鉴定。
培养特性
根据不同真菌在特定培养基上 的生长特性进行鉴定。
生理生化特性
利用真菌的生理生化反应特点 进行分类鉴定。
生物学特性
通过研究真菌与其他生物的互 作关系进行分类鉴定。
现代分子生物学技术在真菌分类鉴定中应用
DNA序列分析
通过比较真菌DNA序列差异进 行分类鉴定。
真菌繁殖方式及特点
无性繁殖
包括分生孢子、芽孢子等，繁殖 速度快，易产生变异。
有性繁殖
通过配子囊结合形成担子或子囊， 进行有性生殖，可产生新的遗传性 状。
准性生殖
介于无性和有性之间的一种生殖方 式，通过基因重组产生新的遗传变 异。
真菌感染实验室检测PPT课件
株数
119 56 46 20 11 22
%
44 21 16 7 4 8
19
2006~2012年念珠菌分布
60%
2006
50%
2007 2008
2009
40%
2010
2011
30%
2012
20%
10%
0%
白色念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 清酒念珠菌 中间念珠菌 近平无滑名念念珠珠菌菌
20
念珠菌药敏试验结果
3 2.2
2
1
0 1978～1982 1983～1987 1988～1992
Grool A, et al. Trends in the postmortern epidemlology of invasive fungal infections at a
university hospital. [J]. J Infect, 1996, 33(1): 23．
8
中国3347例尸检结果IFI发病率
7
6
P<0.01
5
6.06 5.23
4
3
2.77
2
1
1.04
0
1953-1962
1963-1972
1973-1982
1983-1993
北京协和医院对1953-1993年共计3447例尸检进行回顾性调查分析
9
人类最常见的深部真菌病
念珠菌病（监护中心、白血病、烧伤、肿瘤、AIDS、 SARS） 隐球菌病（AIDS、移植、SLE） 曲霉病（白血病、移植、AIDS、SARS ） 接合菌病（白血病、糖尿病、烧伤） 马内菲青霉病（自然疫源）
Pfaller MA，Diekema DJ．Epidemiology of invasive candidiasis：a persistent public health problem E [J]. Clin Mi1cr6obiol Rev, 2007, 20 (1): 133-163.
真菌镜检的实验室操作参考PPT
梅毒TPHA 梅毒RPR
真菌药敏 真菌-D-葡聚糖检测（G试验）
支、衣原体、淋球菌检测 醋酸白试验
真菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）HPV分子学诊断
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20
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结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
柔软细腻 避免摩擦
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4
标本的采集方法
第一步：消毒
采集刀 采集部位 特殊部位
二次消毒（采集前、后）
1、防止采集部位感染 2、预防交叉感染 3、确保真菌培养环境
生理盐水（黏膜部位、创伤较大处）
第二步：采集
皮损界限清楚 皮损界限模糊 （腹股沟、手掌、脚掌、指/趾甲）
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5
头皮及毛发
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1
2
பைடு நூலகம்14
3
4
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醋酸白试验
方法：
用5％冰醋酸水溶液涂抹待检部位，3-5分钟观察，尖锐湿 疣病变处可观察到均匀的白色，以此作为一种筛查试验来鉴别 不典型病变及亚临床的皮疹。
要点：
1、醋酸白试验并非HPV感染的特异性试验，有假阳、阴性。
1、断发 2、结痂 3、鳞屑 4、脓液
并列
发内、外孢子、菌丝、糠秕孢子
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6
创伤性采集
1、疥疮
手缝、手掌、手腕屈侧（对应脚部）
2、水泡丘疹性皮损
皮损内侧（水疱型）、分泌物（毛囊炎）
3、毛囊虫
面部（鼻翼）背部（脊柱旁）
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要点：
1、醋酸白试验并非HPV感染的特异性试验，有假阳、阴性。
（非特异性龟头包皮炎、上皮增厚、外伤擦伤、尿道口炎）
2、醋酸白试验的特异性及敏感性尚未确定
醋酸白试验
结果判读 阳性结果：
涂抹处白色均匀 白色部位界限清楚 临近正常皮肤对比
阴性结果：
排除患者中途部位变化 不能排除HPV感染
北大真菌室开展项目
生理盐水（黏膜部位、创伤较大处）
第二步：采集
皮损界限清楚 皮损界限模糊 （腹股沟、手掌、脚掌、指/趾甲）
头皮及毛发
1、断发 2、结痂 3、鳞屑 4、脓液
发内、外孢子、菌丝、糠秕孢子
创伤性采集
1、疥疮
手缝、手掌、手腕屈侧（对应脚部）
2、水泡丘疹性皮损
皮损内侧（水疱型）、分泌物（毛囊炎）
3、毛囊虫
面部（鼻翼）背部（脊柱旁）
真菌镜检的实验室操作
真菌镜检的实验流程
采集标本 标本处理 真菌镜检 审核报告
标本的采集原则
躯干
一 般
皮
四肢
损 的
选
头皮及毛发
取
创伤性采集
大小 新旧 位置
小 新 相对内侧
柔软细腻 避免摩擦
标本的采集方法
第一步：消毒
采集刀 采集部位 特殊部位
二次消毒（采集前、后）
1、防止采集部位感染 2、预防交叉感染 3、确保真菌培养环境
标本处理
10％-15％KOHθ溶解角质细胞 加盖玻片，压薄涂片
压片厚 角质未溶
如果有必要可酒精灯上微热促溶
真菌镜检
审核报告
真菌镜检的报告为临床定性实验 镜下只有糠秕孢子无菌丝的标本应慎重 痰类标本应判断“痰标本是否合格” 口腔标本应排除长杆菌及放线菌的干扰
醋酸白试验
方法：
用5％冰醋酸水溶液涂抹待检部位，3-5分钟观察，尖锐湿 疣病变处可观察到均匀的白色，以此作为一种筛查试验来鉴别 不典型病变及亚临床的皮疹。
真菌培养 真菌鉴定
梅毒TPHA 梅毒RPR
真菌药敏 真菌-D-葡聚糖检测（G试验）
支、衣原体、淋球菌检测 醋酸白试验
真菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）HPV分子学诊断
1、醋酸白试验并非HPV感染的特异性试验，有假阳、阴性。
（非特异性龟头包皮炎、上皮增厚、外伤擦伤、尿道口炎）
2、醋酸白试验的特异性及敏感性尚未确定
醋酸白试验
结果判读 阳性结果：
涂抹处白色均匀 白色部位界限清楚 临近正常皮肤对比
阴性结果：
排除患者中途部位变化 不能排除HPV感染
北大真菌室开展项目
生理盐水（黏膜部位、创伤较大处）
第二步：采集
皮损界限清楚 皮损界限模糊 （腹股沟、手掌、脚掌、指/趾甲）
头皮及毛发
1、断发 2、结痂 3、鳞屑 4、脓液
发内、外孢子、菌丝、糠秕孢子
创伤性采集
1、疥疮
手缝、手掌、手腕屈侧（对应脚部）
2、水泡丘疹性皮损
皮损内侧（水疱型）、分泌物（毛囊炎）
3、毛囊虫
面部（鼻翼）背部（脊柱旁）
真菌镜检的实验室操作
真菌镜检的实验流程
采集标本 标本处理 真菌镜检 审核报告
标本的采集原则
躯干
一 般
皮
四肢
损 的
选
头皮及毛发
取
创伤性采集
大小 新旧 位置
小 新 相对内侧
柔软细腻 避免摩擦
标本的采集方法
第一步：消毒
采集刀 采集部位 特殊部位
二次消毒（采集前、后）
1、防止采集部位感染 2、预防交叉感染 3、确保真菌培养环境
标本处理
10％-15％KOHθ溶解角质细胞 加盖玻片，压薄涂片
压片厚 角质未溶
如果有必要可酒精灯上微热促溶
真菌镜检
审核报告
真菌镜检的报告为临床定性实验 镜下只有糠秕孢子无菌丝的标本应慎重 痰类标本应判断“痰标本是否合格” 口腔标本应排除长杆菌及放线菌的干扰
醋酸白试验
方法：
用5％冰醋酸水溶液涂抹待检部位，3-5分钟观察，尖锐湿 疣病变处可观察到均匀的白色，以此作为一种筛查试验来鉴别 不典型病变及亚临床的皮疹。
真菌培养 真菌鉴定
梅毒TPHA 梅毒RPR
真菌药敏 真菌-D-葡聚糖检测（G试验）
支、衣原体、淋球菌检测 醋酸白试验
真菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）HPV分子学诊断