第四章体内药物分析方法的建立与验证
体内药物分析方法的建立与验证课件
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建立分析检测方法的主要依据有： 一、待测药物的理化性质及体内存在状况
准确测定生物样品中的药物或其特定代谢物 通过一定的生物样品预处理使待测物从结合物或 缀合物中释放出来。故此，应首先考虑样品预处 理方法 待测药物的理化性质 药物在生物体内的存在状况 药物在生物体内的生物转化(代谢)途径
另一个“两弹一星”：拯救5亿 人的“中国神药” ---青蒿素
疟疾是危害人类最大的疾病之一。全球每年疟 疾病人超过5亿，死亡100万人以上。
屠呦呦：古医书中有青蒿治疗疟疾的记录。起初青 蒿的有机溶剂提取物对疟疾的抑制率很低，不甘愿， 又翻出古医书： “青蒿一握，以水二升渍，绞取汁， 尽服之。” 和中药常用的煎熬法不同？原来里面 用的是青蒿鲜汁！ 温度！！！！ 改用沸点较低的乙醚提取，抑制率达100%
三、生物样品的类型与预处理方法
生物样品的类型与预处理方法—决定分析方法的应用
以血浆或血清为分析样品 采用蛋白沉淀、溶剂萃取预处理技术 —分析样品较为“干净”，可用HPLC检测 用RIA分析 ？FPIA法
—样品的预处理方法可较为粗放
— 经过简单的蛋白沉淀或不经任何预来自理直接测 定四、实验室条件
第一节
分析方法的设计依据
在建立分析方法之前，应充分利用现代科技成就和前 人的研究成果，系统检索国内外的科技文献，对药物在生 物体内的存在状况、药代动力学参数、分析检测方法等相 关资料加以分析和研究，以供借鉴。对于尚无文献报道的 药物，亦可参考同类药物的相关文献。
检索文献，可在最短时间、最小的花费（磨刀不 误砍柴工）建立一个好的分析方法！这是试验前要做 的第一件事！
(二)待测药物的体内存在状态
最新体内药物分析 课件ppt课件
分析方法的建立步骤 ➢ 第一步：检测条件的筛选 ➢ 第二步：分离条件的筛选
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(一)检测条件的筛选
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
标准物质 —— 照拟定的分析方法(不包括生物基质的预处理)测定
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第四章 分析方法的建立与验证
第二节 分析方法 建立的一般步骤
一、分析方法的选择 二、分析方法的建立
(一) 检测条件的筛选 (二) 分离条件的筛选
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一、分析方法的选择
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
体内药物分析方法的设计
以血浆或血清为分析样品 采用蛋白沉淀-溶剂萃取预处理技术 ——分析样品较为“干净”，可用HPLC检测
用RIA分析 ——样品的预处理方法可较为粗放 ——经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测定
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四、实验室条件
第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑 到实验室现有的或有可能在其它实验室使用的仪 器装备，合理选择可行的分析方法。
➢ 分析方法建立之前
查阅文献资料——充分了解药物在体内的动力学过程，使所 拟定的分析方法
——避免受到代谢产物的干扰适用于实际生物样品测定
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二、分析方法的建立
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
体内药物分析方法
（二）临床合理用药中的意义
1．血药浓度与药理作用
（7）药物的吸附 ①玻璃容器吸附 1%三甲一氯硅烷 10%二甲二氯
硅烷 ②血浆
2．液固萃取
固相萃取[solid phase extraction SPE] 针管式 抽空减压 加压 过滤
（1）固相萃取步骤
①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理
反相C18 固定相的6~10倍体积甲醇洗柱，使溶剂化 6~10倍水缓冲服液冲洗达分离状态 ③上样 ④分离 用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通N2干燥固相 ⑤洗脱待测物 改变pH或极性
2．血浆蛋白结合率
Df+P
Db
K=
•[P]·[Df ] •Db
血浆蛋白结合率：
Β= •Db =
•1
•Db+Df
•1+K/np+Df/np
解离常数
结合力强的药物可以置换结合力弱的药物，通过竞 争蛋白是药物相互作用类型之一。 由此可见，K、np是影响β的重要因素
np↓ β↓ K↓ β↑ 药物在足够高浓度时使结合部位饱和，浓度再增高 ，多余的药物均呈游离状态，结合部分比率降低，药物 血浆蛋白结合率是药代动力学的重要参数之一。
五、药物代谢与体内药物分析的关系
1．样品的保存 样品可能会分解，如血浆酯酶可使酯类药物水解，
酶类可使药物继续代谢，加入酶抑制剂和冷藏保存。 2．分析方法选择 光谱法 色谱法 免疫法 3．样品的提取、分离法
体内药物分析方法验证主要有哪些内容
体内药物分析方法验证主要有哪些内容
一、线性度验证
1.直线回归分析：检查溶出物的定量测定结果是否与应用的参考标准物或其它分析方法的结果服从一定的线性关系；
2.拟合度检查：应用样条拟合法拟合出的曲线的 R平方值，该值的要求为r2值大于0.99；
3.加标重现性：检查加标样品与原始样品的定量测定结果之间的差异是否在一定的统计学水平上；
4.偏差检查：计算偏差用于衡量实验测定值与理论参考值之间的差异，如果偏差落入指定范围，则认为测定结果是可靠的；
二、特异性验证
1.特异性检查：检查所开发的测定方法是否对待测药物具有良好的特异性；
2.干扰物检查：应用检测方法对溶出物中相干物、有机溶剂等其他物质的影响检查，其方法包括加标回收率等。
三、稳定性验证
1.热稳定性检查：将待测物加热处理，检查溶出物在热处理后含量大小以及定量分析方法的稳定性；
2.光稳定性检查：检查溶出物对光及其他辐射能线的稳定性；
3.溶出稳定性检查：检查溶出物在多次溶出条件下的稳定性。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
为：毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱、
毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦、毛细管等
速电泳和毛细管电色谱法。上述这些方法近几
年来在体内药品分析中均得到不一样程度应
用。 体内药物分析方法和方法的设计和评价
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体内药物分析方法和方法的设计和评价
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• 选取何种方法进行体内药品分析为好呢？普通 要依据药品理化性质、结构持征、药品浓度大 小、干扰成份多少、预处理方法、试验目标以 及试验室条件等原因综合起来进行考虑。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
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1、HPLC法
• HPLC法在体内药品分析中应用已大大超出其 它分析方法，成为体内药品分析中应用最广泛 技术之一。与GC法相比，它含有以下优点：
• (1)适用范围广，可在室温下进行检测。对于 挥发性低，热稳定性差，分子量大以及离子型和评价
（一）以纯品进行测定
• 取药品或其代谢物纯品适量，按确定方法测 定，求得浓度与测定响应值之间关系，进行线 性范围、最适测定浓度、检测灵敏度、测定最 适 条 件 ( 如 pH 值 、 温 度 、 反 应 时 间 等 ） 等 选 择。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
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(二)空白样品测定
• 取空白生物样品，按确定方法进行处理，测定 空白值(或色谱图)。空白值高低或色谱图情况 将影响到方法灵敏度和专属性，应力争将空白 值降低。在色谱分析中应力争降低体内样品中 内源性杂质峰，对无法消除内源性杂质峰应设 法使其从待测物色谱区域内移开。能否取得良 好样品空白试验结果，是决定测定方法实际可 行性主要步骤，必须设法处理。
• 另外，还有一些含抗生素类药品生物样品，它 们可用微生物方法测定，利用抗生素在琼脂培 养基内扩散作用，比较样品与药品标准品二者 对接种试验菌产生抑菌圈大小，借以测定样品 内抗生素药品浓度。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证ppt课件
5 唾液
• 唾液中所含成分比较简单，且容 易获得，但是只有少数药物的唾 液浓度和血浆游离药物浓度具有 相关性，实际使用不多，当药物 血浆结合率高的时候，唾液中药 物的浓度极低，很难检测。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
生物样品的保存：
• 采样后除立即分析外，为防止药物发生变化，应：短 期保存，可 4℃冷藏；长期保存，可-20℃冷冻，不要 反复冻融，必要时可以加入酶抑制剂和抗氧化剂。
• 全血不易保存，且血细胞中含有 更多的干扰物质，影响测定，故 很少采用全血测定药物浓度。仅 适用于血浆药物浓度太低或者血 浆药物浓度波动大，且难以控制 的药物如：环孢霉素A。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
2 血浆
• 测定血中药物浓度通常是指测定血浆或血 清中的药物浓度，而不是指含有血细胞的 全血中的药物浓度。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
③加入强酸 当pH低于蛋白质的等电点时，蛋白质以阳离子形
式存在，加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶性盐 而沉淀。常用的强酸有：10%三氯醋酸等。血清与强 酸的比例为1:0.6混合，高速离心,就可除去蛋白质。 在酸性下分解的药物不宜用本法除蛋白。
体内药物分析常用生ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ样品处理方法和方法学验证
的氢键发生变化而使蛋白质凝聚。常用的有机溶剂有：乙 睛、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。
血浆或血清与有机溶剂的体积比为1:3时，就可以将90% 以上的蛋白质除去，采用低温高速速离心机16000r/min离 心10min 便可将析出的蛋白质完全沉淀。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
• 实际应用中，多是取50uL的血浆，加入500uL的有机溶 剂，涡旋离心后，取上清进样；
体内药物分析方法的建立与验证课件
第四章 分析方法的建立与验证
分析方法的设计依据 分析方法建立的一般步骤 分析方法验证的内容与要求 体内药物分析应用示例
2020/10/12
体内药物分析
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《规范》及指导原则适用于食品药品 监管部 门对第 三类医 疗器械 批发/零 售经营 企业经 营许可 （含变 更和延 续）的 现场核 查，第 二类医 疗器械 批发/零 售经营 企业经 营备案 后的现 场核查 ，以及 医疗器 械经营 企业的 各类监 督检查
第四章 分析方法的建立与验证
第一节 分析方法的设计依据
建立分析检测方法的主要依据 ➢ 待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况 ➢ 分析测定的目的与要求 ➢ 生物样品的类型与预处理方法 ➢ 实验室条件
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《规范》及指导原则适用于食品药品 监管部 门对第 三类医 疗器械 批发/零 售经营 企业经 营许可 （含变 更和延 续）的 现场核 查，第 二类医 疗器械 批发/零 售经营 企业经 营备案 后的现 场核查 ，以及 医疗器 械经营 企业的 各类监 督检查
(二)待测药物的体内存在状态
与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低 ——分离萃取方法 蛋白结合较强——不宜直接采用溶剂萃取
体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物 ——分析检测技术 浓度较低（尤其有代谢产物共存） ——代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定 ——采用LC-MS、EIA等分析检测技术
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《规范》及指导原则适用于食品药品 监管部 门对第 三类医 疗器械 批发/零 售经营 企业经 营许可 （含变 更和延 续）的 现场核 查，第 二类医 疗器械 批发/零 售经营 企业经 营备案 后的现 场核查 ，以及 医疗器 械经营 企业的 各类监 督检查
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证讲解
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萃取小柱一次性使用，防止交叉污染！ 33
固相萃取操作一般有五步：
? 活化——甲醇/乙腈 润湿小柱，活化填料； ? 平衡——水或适当缓冲液冲洗平衡小柱； ? 上样——将样品转移上柱，抽去废液； ? 淋洗——水或缓冲液最大程度洗去干扰物； ? 洗脱——用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。
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? HPLC中化学衍生化法，包括柱前衍生化和柱后衍生化两 种方法。
? 柱前衍生化分析前尽可能将药物进行提取分离后再衍生 化，防止其他含有相同的功能基团的杂质也被衍生化， 影响分离。柱后衍生化是药物经色谱柱分离之后进行的， 所以可形成对检测器具有高灵敏度的衍生物。
? HPLC法常用的衍生化试剂有邻苯二醛、丹磺酰氯、荧胺 等。
式存在，加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶性盐 而沉淀。常用的强酸有： 10%三氯醋酸等。血清与强 酸的比例为1:0.6混合，高速离心,就可除去蛋白质。 在酸性下分解的药物不宜用本法除蛋白。
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④加入锌盐或铜盐沉淀剂 ? 当pH高于蛋白质的等电点时，金属阳离子与蛋白
质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。常用 的沉淀剂有：CuS04-Na2W04 ,ZnS04-NaOH等。含药物血 清与沉淀剂的比例为1:2混合，高速离心、分离后得上 清液。
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一般认为，当药物在体内达到稳定状态时，血浆中药 物浓度与药物在作用点的浓度紧密相关，即血浆中的药物浓 度反映了药物在体内（靶器官）的状况，因而血浆浓度可作 为作用部位药物浓度的可靠指标。
血浆和血清可以稳定的冰冻保存，一般储存在-20℃的 条件，长期保存时可以保存在-80℃的条件下，是生物样品 检测中最常用的样本。
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2．生物样品的介质组成比较复杂。如在血清中既含有高 分子的蛋白质和低分子的糖、脂肪、尿素等有机化合物， 也含有Na＋、K＋、Cl-等无机化合物。这些成分会严重影响 测定的准确性和灵敏度，同时会污染仪器。因此， 为了保 护仪器，提高测定的灵敏度，保证检测结果的准确性和可 靠性，必须对样品进行前处理。
[医学]体内药物分析
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(二)分离条件的筛选
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
在进行分离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢 产物对分离与检测的干扰，步骤如下：
1．空白溶剂试验 ——溶剂(方法特异性) 2．空白生物基质试验 —— endogenous compounds(方法特异性) 3．模拟生物样品试验 —— 方法效能指标 4．实际生物样品测试 —— 代谢产物(方法特异性)
中毒患者的临床抢救 药物浓度极高
方法——不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性和分析速度 ——大多采用色谱及其联用技术GC、GC-MS、RIA或EIA
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
三、生物样品的类型与预处理方法
生物样品的类型与预处理方法——决定分析方法的应用
性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的分离) 方法 ——不必强调方法的简便、快速；
——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
临床治疗药物监测 有效治疗浓度范围内药物浓度
方法——尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的测定 ——大多采用UV、RIA或EIA等
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第四章 分析方法的建立与验证
第二节 分析方法 建立的一般步骤
一、分析方法的选择 二、分析方法的建立
(一) 检测条件的筛选 (二) 分离条件的筛选
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一、分析方法的选择
体内药物分析方法的建立和验证
2）标准系列模拟生物样品高低浓度比1/10-1/20 3）同时配制空白样C=0 4）防止生物基质中加入过多溶剂，干扰测定，可将标准液和 内标液先加到试管中，蒸干后加生物基质 4.标准曲线的绘制 1）以待测物的响应值（A；h）或与内标物的响应值的比（A1/A2；h1/h2）为（y）对浓度（x），回归得y=a+bx及r。绘 制标准曲线。 2）回归分析时在至少7个浓度构成的标准曲线中，至多2个浓度点数据因确切原因“离群”，可剔出，余至少5点数据线性良好。
5.限度要求 1）标准曲线5-8浓度，最高和最低浓度比1/10-1/20 2）回归方程a应近于零，斜率b接近1或大于1，系数R接近1， HPLC R>0.99；生物学法R>0.98。 3）需分区制备标准曲线（最高和最低浓度比>100） 三）准确度 指用该法测得的生物样；样品中待测药物的浓度与其真实浓 度的接近程度。 1.测定法 取空白生物基质数份，照“标准曲线下”配制，至少选标准 曲线的高、中、低3个浓度样品。每个浓度5个平行样，每个 样测定一次。与随行的标准曲线同测定
A:比较待测物的对照品、空白生物基质、模拟生物样品的检测 信号，确证内源性物质对分析物有无干扰 B:比较的内容 Tr；n；TБайду номын сангаасR 2.代谢产物干扰 比较模拟生物样品和实际生物样品的检测信号（Tr；n；T； R），确证代谢产物对分析物有无干扰 3.配伍用药的干扰 A:比较待测药物、同时服用的药物、空白生物样本、待测药物模拟生物样品、待测药物+同时服用的药物模拟生物样品的检测信号
体内药物分析方法验证的主要内容
体内药物分析方法验证的主要内容体内药物分析方法验证的主要内容包括：一、药理学研究，主要是在动物身上做各种实验，目的就是找出有效成份；二、临床研究，即在人体进行试验，用以确定对人类安全与否。
三、剂量-反应关系测定，也叫毒性筛选或者安全试验。
通过这些方面的工作，可以使我们知道哪个药对于哪些人群是比较安全和合适的。
只有经过严格检查后，才能放心地给病人服用。
当然这不仅需要医生和护士等专业人员来完成，更需要科学家们从事深入的基础研究工作，以提高新药的质量水平和疗效。
药品开发必须依靠现代化的科技手段，例如现代化的仪器设备和检测方法。
要想制造出优良的新药，必须加强创新意识。
而创新最重要的一条就是人才。
医院药师要具备相应的资格，必须经过专门训练并取得职称。
他们除了要懂本学科外，还要熟悉其它学科的理论知识，既要有很好的理论素养，又要有丰富的实践经验，才能真正胜任临床药学工作。
国际上流行的临床药学是在20世纪60年代兴起的。
随着社会的发展，医学模式由单纯治疗转向预防为主，药师不再被视为“万金油”。
许多国家都把“药学服务是第一重要的”列入医院管理纲要，开始普及推广新药。
美国于1970年颁布了《药学教育改革法》，规定每所医学院校都要开设临床药学课程。
日本、英国、德国、瑞典、法国、澳大利亚等西方发达国家均在高等医学院中设置了临床药学课程，许多发展中国家则在中等卫生学校和大专医学院里开设了临床药学课程。
一、药理学研究，主要是在动物身上做各种实验，目的就是找出有效成份；二、临床研究，即在人体进行试验，用以确定对人类安全与否。
三、剂量-反应关系测定，也叫毒性筛选或者安全试验。
通过这些方面的工作，可以使我们知道哪个药对于哪些人群是比较安全和合适的。
只有经过严格检查后，才能放心地给病人服用。
当然这不仅需要医生和护士等专业人员来完成，更需要科学家们从事深入的基础研究工作，以提高新药的质量水平和疗效。
药品开发必须依靠现代化的科技手段，例如现代化的仪器设备和检测方法。
体内药物分析方法的建立和验证护理课件
多组分同时检测
未来体内药物分析将更加注重多 组分同时检测，以全面了解药物
在体内的代谢和分布情况。
体内药物分析方法面临的挑战与机遇
挑战
随着药物种类和数量的增加，体内药物分析的复杂性也在增加，对分析方法的要求也越来越高。同时， 由于人体内环境的复杂性和动态变化，准确测定药物及其代谢物在体内的浓度和行为仍具有很大挑战 性。
机遇
随着新技术的不断涌现，如质谱技术、核磁共振技术等，为体内药物分析提供了更多的手段和工具， 使得更深入地了解药物在体内的行为成为可能。同时，随着临床对个体化治疗的需求增加，体内药物 分析在指导临床用药、评估治疗效果等方面的应用也将更加广泛。
体内药物分析方法未来的发展方向
跨学科融合
体内药物分析将与生物学、 医学、化学等多个学科进 行交叉融合，形成更全面、 系统的研究体系。
体内药物分析方法的 建立和验证护理课件
• 药物分析方法概述 • 体内药物分析方法建立 • 体内药物分析方法验证 • 体内药物分析方法的应用和案例
分析 • 体内药物分析方法的未来发展与
展望
01
药物分析方法概述
药物分析的定义和重要性
药物分析的定义
药物分析是对药物进行全面分析 的过程，旨在了解药物在体内的 性质、行为和作用。
个体化与精准医疗
随着个体化医疗的发展， 体内药物分析将更加注重 个体差异，为精准医疗提 供有力支持。
新技术应用
新技术如人工智能、大数 据等将在体内药物分析中 发挥重要作用，提高分析 的智能化和精准度。
感谢观看
药物分析方法的建立和验证过程
建立药物分析方法
根据研究目的和实验要求，选择合适的分析方法，建立可靠的检测方法和技术。
体内药物分析方法(精)
1. 标准曲线的建立 (1) 系列标准溶液: n≥6(不包括0点); 等比系列(2~3);
通常为100~1000倍
(2) 内标溶液: 浓度相当于系列标准溶液的几何平均浓度 (二 ) (3) 系列标准样品 : 空白生物介质, 加入系列标准溶液 (4) 标准曲线的绘制: 药物浓度, 以单位体积(如血浆)或
①辅助试剂的使用 乙醚(1.2%水): 氯化钠 ②混合溶剂的使用
溶剂 正己烷 环己烷
紫外截止波长 (nm) 210 210
沸点(℃) 69 81
甲苯
↓ 极 性 增 加 ↓ 异丙醚* 乙醚* 醋酸戊酯
285
220 220 285
111
68 35 149
三氯甲烷
甲基异丁基酮 醋酸乙酯 正丁醇
245
230 260 215
(4) 自动化固相萃取法
对于单个样品处理, SPE操作省时 对于大量样品的处理 半自动SPE: 萃取过程机械化
全自动化仪器: 通过柱切换技术
实现固相萃取与HPLC联用
(5) 自动化固相萃取法 柱切换: 固相萃取-LC/MS/MS
3. 超滤法 ultrafiltration是一种膜分离技术
体液
血液; 唾液
脑脊液;胃液; 胆汁;乳汁;精 液;泪液
排泄物
尿液
粪便; 汗液
组织
胃;肠;肝;肾;肺, 脑;肌肉;头发
二、体内样品的采集与制备
1. 血样的采集
静脉, 1-5ml ≤1/10 TDM测定S代替P 进行临床监测
50-60％ 2. 血浆的制备
抗凝剂, 1000g离心 5-10min 淡黄色上清液
提取1次
若提取回收率较低(低于50%), 提取2~3次 脂溶性干扰物, 可进行小体积水溶液反提取
体内药物分析
体内药物分析第二章生物样品与样品制备1.体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物2．体内药物分析的特点：样品量少，不易重新获得；样品复杂，干扰杂质多；供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施；实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作；工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。
需相关学科参与。
3．体内药物分析样品的种类：最常用且易获得的分析样品有：血样、尿样、唾液和粪便。
特殊情况下：乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织4．血清：血清是由血液中纤维蛋白原等的影响引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，约为全血的30％～50％5．尿液：尿液的主要成分：水、含氮化合物、盐类；体内药物清除主要通过尿液排出，药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出；尿药测定主要用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究，并可推断患者是否按医嘱用药。
6．生物样品分析的前处理：是指测定生物样品中的药物及其代谢物时，对样品进行分离、纯化、浓集，必要时对待测组分进行衍生化，为测定创造良好的条件。
7．为何进行前处理？1）药物进入体内除原药外还有多种形式存在2）生物样品的介质组成比较复杂，尤其蛋白质严重影响分离效果，必须进行前处理3）除去介质中含有的大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物，同时浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围内。
8．生物样品处理方法选择的一般原则：待测药物的理化性质；待测药物测定的目的与浓度范围。
9．去除蛋白质的方法：加与水相混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法。
10．生物样品的分析由两步组成：样品的前处理（分离、纯化与浓集）和对提取物的仪器分析；提取法是应用最多的分离、纯化方法；提取的目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集，以供测定；提取法分为液-液提取法和液-固提取法。
体内药物分析教程
第一部分概述体内药物分析是对体内样本（包括生物体液、器官或组织）中的药物、代谢物或内源性物质的定量分析。
体内药物分析是药代动力学研究和治疗药物监测（TDM）的重要手段。
药物在临床前研究阶段，首先在试验动物体内进行药代动力学和毒代动力学研究；在临床研究阶段，要对药物作用于人体的安全性与有效性作出评价。
这些研究中，建立有效的体内药物分析方法是首要任务。
随着现代医学的不断进步，精准医疗和个体化治疗成为新的理念。
TDM 就是采用灵敏可靠的方法，检测患者体内的药物浓度，指导个体化用药方案的制定，保证用药的有效性与安全性。
另外，监测和研究体内内源性物质的浓度变化，对于某些疾病的诊断及治疗具有重要意义；对于麻醉药品和精神药品滥用的检测和运动员体内违禁药物的监测，也必须依据体内药物分析手段和技术才能完成。
药物产生药理作用的强度与其在体内作用部位（受体组织）的浓度直接相关，而药物在体内主要依靠血液输送至作用部位，因此血药浓度可作为药物在作用部位浓度的表观指标，即血液是体内药物分析的主要样品。
另外，尿液、唾液、头发和脏器组织等也可作为体内样品。
药物在体内的某些代谢产物常具有一定的生理活性，它们在体内的变化规律对母体药物的药理学与毒理学评价极为重要；机体内源性生物活性物质往往参与机体重要的生理过程，其变化规律的异常改变也与某些疾病的发病机制密切相关。
所以，体内特定药物代谢物和机体内源性生物活性物质也是体内药物分析的目标。
在测定体内药物及其特定代谢物或内源性生物活性物质时，除少数情况将体液作简单处理后可直接测定外，通常在测定之前要对体内样品进行分离净化与浓集等样品前处理，从而为体内样品中药物的测定提供良好的环境与条件。
体内样品大都具有以下性质特点：①采样量少，采样量一般为数毫升至数十微升，且在特定条件下采集，不易重新获得。
②待测物浓度低，通常在10-9~10-6g/ml级，甚至低至10-12g/ml。
③干扰物质多，血样中含有蛋白质、脂肪、尿素等有机物和Na+、K+等大量内源性物质通常对测定构成干扰；且体内的内源性物质可与药物结合，也能干扰测定。
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三、生物样品的类型与预处理方法
生物样品的类型与预处理方法—决定分析方法的应用
以血浆或血清为分析样品 采用蛋白沉淀、溶剂萃取预处理技术 —分析样品较为“干净”，可用HPLC检测 用RIA分析 ？FPIA法
—样品的预处理方法可较为粗放
— 经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测 定
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四、实验室条件
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另一个“两弹一星”：拯救5亿 人的“中国神药” ---青蒿素
疟疾是危害人类最大的疾病之一。全球每年疟 疾病人超过5亿，死亡100万人以上。
屠呦呦：古医书中有青蒿治疗疟疾的记录。起初青 蒿的有机溶剂提取物对疟疾的抑制率很低，不甘愿， 又翻出古医书： “青蒿一握，以水二升渍，绞取汁， 尽服之。” 和中药常用的煎熬法不同？原来里面 用的是青蒿鲜汁！ 温度！！！！ 改用沸点较低的乙醚提取，抑制率达100%
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(一)待测药物的理化性质
药物的 pKa 值、亲脂性、溶解度、分配系数等 — 决定预处理方法及萃取方法 具有亲脂性—在适当的pH值下用溶剂萃取 具有强极性或亲水性 — 沉淀蛋白、固相萃取、 离子对萃取或衍生化后萃取等 具有挥发性—GC测定法 具有光谱或电化学特性—分析检测方法 药物的稳定性—萃取浓缩技术 对酸碱不稳定—避免使用强酸或强碱性溶剂 对热不稳定—避免高温蒸发溶剂---一个例子
在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑 到实验室现有的或有可能在其它实验室使用的仪
器装备，合理选择可行的分析方法。
此外，还应从方法的可行性、每个样品测定
耗时多少（10 min）、操作的难易及技术要求及
仪器、设备要求、费用多少等等方面加以考虑。
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例子 1
在阿齐霉素制剂生物等效性研究过程中，血样 中阿齐霉素的浓度范围为5 ng/ ml～1μg/ ml ， 其检测方法可采用HPLC 法、LC-MS 法和微生物法 等数种方法。若用HPLC 法来检测该样品，由于阿 齐霉素的紫外吸收较弱，必须对样品进行富集浓 缩，则样品的前处理方法采用液-液萃取法为佳； 若用LC-MS 法来检测该样品，则由于LC-MS 仪器 的灵敏度足以检测浓度为1ng/ml 以上的样品，故 样品的前处理只需采用蛋白沉淀法即可；若用微 生物法来检测该样品，则样品连蛋白也不需沉淀， 直接上样即可。
检索文献，可在最短时间、最小的花费（磨刀不 误砍柴工）建立一个好的分析方法！这是试验前要做 的第一件事！
大四的同学们，你们查过文献吗？
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血药浓度 94-2008 5122篇
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临床药学专业性的学术期刊有： 1992年创刊的《中国临床药学杂志》
2001年第二军医大学长海医院主办的《药学服务与研 究》
第四章
体内药物分析
方法的建立与验证
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第一节
分析方法的设计依据
在建立分析方法之前，应充分利用现代科技成就和前 人的研究成果，系统检索国内外的科技文献，对药物在生 物体内的存在状况、药代动力学参数、分析检测方法等相 关资料加以分析和研究，以供借鉴。对于尚无文献报道的 药物，亦可参考同类药物的相关文献。
关键词：姜黄素，血药浓度
或：姜黄素 ，（药代）动力学
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建立分析检测方法的主要依据有： 一、待测药物的理化性质及体内存在状况
准确测定生物样品中的药物或其特定代谢物 通过一定的生物样品预处理使待测物从结合物或 缀合物中释放出来。故此，应首先考虑样品预处 理方法 待测药物的理化性质 药物在生物体内的存在状况 药物在生物体内的生物转化(代谢)途径
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(二)待测药物的体内存在状态
与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低 —决定分离萃取方法 指标：提取回收率 蛋白结合较强（ 非极性强 ） — 不宜直接采用溶剂 萃取 ？有机溶剂没选对？吲哒帕胺、伪麻黄碱！ 体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物 —决定分析检测技术 浓度较低（尤其有代谢产物共存） —代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定 —采用HPLC或LC-MS等分析检测技术 1213二、分析测定的目的与要求
临床治疗药物监测 药物浓度通常在有效治疗浓度范围附近 方法 —尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的 测定，大多采用UV、RIA或EIA等。？ 中毒患者的临床抢救 药物浓度极高 方法 —不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性 和分析速度 — 大多采用色谱及其联用技术 GC 、 GC-MS 、 RIA或EIA ？
建立分析检测方法的主要依据有： 二、分析测定的目的与要求
体内药物分析的目的—影响分析方法的应用 药代动力学—研究药物在体内吸收、分布、代谢和排 泄过程—血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢 产物 要求—同时测定原形药物和代谢产物 检测 — 宽线性范围 (Cmax ～ Cmax 的 1/20 ， 4-5 半衰 期 ) 、高灵敏度 (10-9g/ml) 和高专属性 ( 分离能力 )( 原 形药物及其代谢产物的分离) 方法—不必强调方法的简便、快速，按SOP，大多采用 色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS
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当然，用LC-MS 法来检测阿齐霉素时， 有些分析上作者采用了液-液萃取法，也 有另一些分析工作者采用了固相萃取法来 处理血样，这些做法虽然行得通，但显然 它们不但增加了样品处理的所需时间和工 作量，而且增加了样品处理的成本，因此 阿齐霉素的血样处理最好采用蛋白沉淀法。
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蛋白沉淀法中，高氯酸沉淀法、甲醇沉 淀法、乙腈沉淀法是最常用的方法，但从 样品的稳定性角度考虑，阿齐霉素遇酸不 稳定，故只能采用甲醇沉淀法或乙腈沉淀 法，考虑到乙腈沉淀蛋白效果优于甲醇， 且该方法阿齐霉素的回收率较高，故阿齐 霉素血浆样品的前处理方法以乙腈沉淀蛋 白法为最佳。
两刊于2004年同时成为中国科技核心期刊
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不想当将军的士兵不是好士兵 看文献 写论文 提职称
容量大的U盘： 《中国临床药学杂志》、《药学服务与 研究》中大量的相关文献拷贝下来 另外以 “临床药学”、“临床药 师”、“合理用药”、“药学监护”、 “血药浓度”等为关键词，查找相关的
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这门课有两个实验，要求大家以论文的形式写实验报 告！！ 实验一 改进的柱前衍生-HPLC法测定丙戊酸钠的血药浓度 由老师提供文献。看完文献后，考虑一个问题：该如何设 计、优化实验条件？ 实验二 姜黄素-PVP固体分散体在兔体内的药代动力学参数的测定 大家到图书馆电子阅览室查阅文献！！！