第四章体内药物分析方法的建立与验证

检索文献，可在最短时间、最小的花费（磨刀不 误砍柴工）建立一个好的分析方法！这是试验前要做 的第一件事！
大四的同学们，你们查过文献吗？
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血药浓度 94-2008 5122篇
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临床药学专业性的学术期刊有： 1992年创刊的《中国临床药学杂志》
2001年第二军医大学长海医院主办的《药学服务与研 究》
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当然，用LC-MS 法来检测阿齐霉素时， 有些分析上作者采用了液-液萃取法，也 有另一些分析工作者采用了固相萃取法来 处理血样，这些做法虽然行得通，但显然 它们不但增加了样品处理的所需时间和工 作量，而且增加了样品处理的成本，因此 阿齐霉素的血样处理最好采用蛋白沉淀法。
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蛋白沉淀法中，高氯酸沉淀法、甲醇沉 淀法、乙腈沉淀法是最常用的方法，但从 样品的稳定性角度考虑，阿齐霉素遇酸不 稳定，故只能采用甲醇沉淀法或乙腈沉淀 法，考虑到乙腈沉淀蛋白效果优于甲醇， 且该方法阿齐霉素的回收率较高，故阿齐 霉素血浆样品的前处理方法以乙腈沉淀蛋 白法为最佳。
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二、分析测定的目的与要求
临床治疗药物监测 药物浓度通常在有效治疗浓度范围附近 方法 —尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的 测定，大多采用UV、RIA或EIA等。？ 中毒患者的临床抢救 药物浓度极高 方法 —不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性 和分析速度 — 大多采用色谱及其联用技术 GC 、 GC-MS 、 RIA或EIA ？
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(二)待测药物的体内存在状态
与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低 —决定分离萃取方法 指标：提取回收率 蛋白结合较强（ 非极性强 ） — 不宜直接采用溶剂 萃取 ？有机溶剂没选对？吲哒帕胺、伪麻黄碱！ 体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物 —决定分析检测技术 浓度较低（尤其有代谢产物共存） —代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定 —采用HPLC或LC-MS等分析检测技术 12
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三、生物样品的类型与预处理方法
生物样品的类型与预处理方法—决定分析方法的应用
以血浆或血清为分析样品 采用蛋白沉淀、溶剂萃取预处理技术 —分析样品较为“干净”，可用HPLC检测 用RIA分析 ？FPIA法
—样品的预处理方法可较为粗放
— 经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测 定
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四、实验室条件
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另一个“两弹一星”：拯救5亿 人的“中国神药” ---青蒿素
疟疾是危害人类最大的疾病之一。全球每年疟 疾病人超过5亿，死亡100万人以上。
屠呦呦：古医书中有青蒿治疗疟疾的记录。起初青 蒿的有机溶剂提取物对疟疾的抑制率很低，不甘愿， 又翻出古医书： “青蒿一握，以水二升渍，绞取汁， 尽服之。” 和中药常用的煎熬法不同？原来里面 用的是青蒿鲜汁！ 温度！！！！ 改用沸点较低的乙醚提取，抑制率达100%
在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑 到实验室现有的或有可能在其它实验室使用的仪
器装备，合理选择可行的分析方法。
此外，还应从方法的可行性、每个样品测定
耗时多少（10 min）、操作的难易及技术要求及
仪器、设备要求、费用多少等等方面加以考虑。
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例子 1
在阿齐霉素制剂生物等效性研究过程中，血样 中阿齐霉素的浓度范围为5 ng/ ml～1μg/ ml ， 其检测方法可采用HPLC 法、LC-MS 法和微生物法 等数种方法。若用HPLC 法来检测该样品，由于阿 齐霉素的紫外吸收较弱，必须对样品进行富集浓 缩，则样品的前处理方法采用液-液萃取法为佳； 若用LC-MS 法来检测该样品，则由于LC-MS 仪器 的灵敏度足以检测浓度为1ng/ml 以上的样品，故 样品的前处理只需采用蛋白沉淀法即可；若用微 生物法来检测该样品，则样品连蛋白也不需沉淀， 直接上样即可。
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(一)待测药物的理化性质
药物的 pKa 值、亲脂性、溶解度、分配系数等 — 决定预处理方法及萃取方法 具有亲脂性—在适当的pH值下用溶剂萃取 具有强极性或亲水性 — 沉淀蛋白、固相萃取、 离子对萃取或衍生化后萃取等 具有挥发性—GC测定法 具有光谱或电化学特性—分析检测方法 药物的稳定性—萃取浓缩技术 对酸碱不稳定—避免使用强酸或强碱性溶剂 对热不稳定—避免高温蒸发溶剂---一个例子
两刊于2004年同时成为中国科技核心期刊
6Fra Baidu bibliotek
不想当将军的士兵不是好士兵 看文献 写论文 提职称
容量大的U盘： 《中国临床药学杂志》、《药学服务与 研究》中大量的相关文献拷贝下来 另外以 “临床药学”、“临床药 师”、“合理用药”、“药学监护”、 “血药浓度”等为关键词，查找相关的
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这门课有两个实验，要求大家以论文的形式写实验报 告！！ 实验一 改进的柱前衍生-HPLC法测定丙戊酸钠的血药浓度 由老师提供文献。看完文献后，考虑一个问题：该如何设 计、优化实验条件？ 实验二 姜黄素-PVP固体分散体在兔体内的药代动力学参数的测定 大家到图书馆电子阅览室查阅文献！！！
关键词：姜黄素，血药浓度
或：姜黄素 ，（药代）动力学
要看PDF 文档，电脑要安装 ADOBE READER软件
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建立分析检测方法的主要依据有： 一、待测药物的理化性质及体内存在状况
准确测定生物样品中的药物或其特定代谢物 通过一定的生物样品预处理使待测物从结合物或 缀合物中释放出来。故此，应首先考虑样品预处 理方法 待测药物的理化性质 药物在生物体内的存在状况 药物在生物体内的生物转化(代谢)途径
建立分析检测方法的主要依据有： 二、分析测定的目的与要求
体内药物分析的目的—影响分析方法的应用 药代动力学—研究药物在体内吸收、分布、代谢和排 泄过程—血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢 产物 要求—同时测定原形药物和代谢产物 检测 — 宽线性范围 (Cmax ～ Cmax 的 1/20 ， 4-5 半衰 期 ) 、高灵敏度 (10-9g/ml) 和高专属性 ( 分离能力 )( 原 形药物及其代谢产物的分离) 方法—不必强调方法的简便、快速，按SOP，大多采用 色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS
第四章
体内药物分析
方法的建立与验证
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第一节
分析方法的设计依据
在建立分析方法之前，应充分利用现代科技成就和前 人的研究成果，系统检索国内外的科技文献，对药物在生 物体内的存在状况、药代动力学参数、分析检测方法等相 关资料加以分析和研究，以供借鉴。对于尚无文献报道的 药物，亦可参考同类药物的相关文献。