肉毒梭菌

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

葡萄糖鲜血琼脂(A型)
(C型)
3.生化特性
肉毒梭菌能分解葡萄糖,麦芽糖及果糖,产酸产气, 能液化明胶,缓慢液化凝固血清,使牛乳消化,产生 H2S,但不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐。肉毒梭菌的生 化性状很不规律,即使同型,也常见到株间的差异。
分类:
4.抵抗力
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素(大分子蛋白),根据毒 素的抗原特异性将其分为A、B、C (1、2) 、D、E、F、G 七个型别。
二. 致病机理
肉毒毒素是一种神经麻痹毒素,主要抑制神经末 梢释放乙酰胆碱,引起肌肉松弛麻痹,特别是呼 吸肌麻痹导致死亡。
肉毒毒素的毒性极强,是目前已知在天然毒素和 合成毒剂中毒性最强的生物毒素,据称,精制毒 素1克能杀死400万吨小白鼠,一个人的致死量大 概1微克左右。
三、检验方法
培养基:庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷 酸盐缓冲液。
2、培养特性
1.最严格的厌氧菌
welcome to use these PowerPoint templates, New
2.生长最适温度:28 ℃ ~37 ℃ :pH为6.8~7.6,产毒的最适
pH为C7o.8nt~e8n.2t。design, 10 years experience
3.产毒培养温度:不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。 C、D型温度高些为宜,35℃ 培养3d即可,而E型菌低温度长 时间培养效果较好。 4.对营养要求不高 :在普通培养基上都能生长。
Thank you!
源自文库
第二支:冷却至60℃,接种检样,继续于60℃ 保温10 min,急速冷却; 第三支:接种检样,继续煮沸加热10 min,急速冷却。
以上3支试管于30℃厌氧培养5d,若无生长,可再培 养10d。培养到期,若有生长,取培养液离心,以其 上清液进行毒素检测试验,方法同上,阳性结果证 明检样中有肉毒梭菌存在。
4.2.7 肉毒梭菌
制作:白俊强
本节主要内容:
肉毒梭菌的主要特征 肉毒梭菌致病机理 肉毒梭菌的检验
一、生物学特性:
1.形态及染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属,革兰氏染色阳性(老龄菌 是阴性),约为4×1μm的大杆菌, 多单在,偶见成双或短链, 两侧平行,两端钝园,直杆状或稍弯曲,芽胞为卵圆形,大于 菌体宽度,位于次极端,使菌体呈匙形或网球拍状,偶有位于 中央,常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛,运动迟缓,无荚 膜。
试剂:肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶(活力 1:250)、革兰氏染色液。
实验动物:小白鼠
检验程序
检样
①报告(一):检样中有无肉毒毒素以 及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断,即可结束检验) ②报告(二):对增菌产毒培养物,一 方面做生长特性观察,同时检测肉毒 毒素。报告检样中有无肉毒梭菌以及 有何型肉毒梭菌。(有些样品如土壤、 泥沙等基本上不可能含有毒素,则应 从培养着手) ③报告(三):欲获纯菌株,可用增菌 产毒培养物进行分离培养,对所得纯 菌株进行形态、培养特性等观察及毒 素检测,其结果可证明所得纯菌为何 型肉毒梭菌。(一般情况下,没有必 要从检样中分离纯的菌株,但研究或 特殊需要例外)
(1)毒素检测:试验方法同上。 (2)培养特性检查:接种卵黄琼脂平板,分成两份 ,分别在35℃的需氧和厌氧条件下培养48 h,观察生 长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而 在需氧条件下不生长。
肉毒梭菌的检出(增菌产毒培养试验)
取庖肉培养基三支,煮沸10min~15min,做如下处理: 第一支:急速冷却,接种检样均质液1 mL~2 mL;
2、培养特性
5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中,肉毒梭菌生 长旺w盛el且co产me生t大o u量se气th体e,seAP、owBe、rPFo三in型t t表em面pl浑at浊es,, N底ew部 有粉C状on和te颗nt粒de状si沉gn淀, 1,0 并ye能ar消s e化xp肉er块ie,nc变e 黑有臭味;而 C、D、E三型表明清亮,絮片状生长,粘贴于管壁。 6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上,菌落较小,扁平,颗粒状 。中央低落,边缘不规则,有的菌落还有大的溶血环。 7.在卵黄琼脂平板上生长,菌落及其培养基周围表面覆 盖着特有的彩虹样薄层,但G型没有
毒素检测 报告
(一)
毒素检测
增菌、产毒培养 30℃,5 d
毒素检测 报告(二)
观察生长性状, 染色镜检
分离培养
增菌产毒培养 30℃,5 d
观察菌落性状 染色镜检
培养检查
报告(三)
肉毒毒素检测
液态或固体(明胶磷酸盐缓冲液)样品经过适当处理后离心,取上清液实验 上清液及其胰酶激活处理液
分别进行小白鼠腹腔注射,各3只,每只0.5 mL,观察4 d 注射液中若有肉毒毒素存在,小白鼠一般多在注射后24 h内发病、死亡。
确证试验 毒力测定 定型试验
分离培养
选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物(必要时可重复一次适宜 的加热处理)接种卵黄琼脂平板,35℃厌氧培养48 h。肉毒梭菌在卵黄 琼脂平板上生长时,菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠 层样)薄层,但G型菌无此现象。
根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落,接种庖肉培养基,于30℃ 培养5d,进行毒素检测及培养特性检查确证试验。
抵抗力:
A型毒素经60℃2分钟加热,差不多能被完全破坏,而B 、E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏;C、D二型毒 素对热的抵抗更大些;C型毒素要经过90℃2分钟加热 才能完全破坏,不论如何,只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟,毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定,对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下,毒性能被胰酶激活和加强。
相关文档
最新文档