第九节 肉毒梭菌
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肉毒梭菌
4.2.7
肉毒梭菌
制作：白俊强
本节主要内容：
肉毒梭菌的主要特征 肉毒梭菌致病机理 肉毒梭菌的检验
一、生物学特性：
1.形态及染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌 是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链， 两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于 菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于 中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚 膜。
酸盐缓冲液。
试剂：肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力 1:250）、革兰氏染色液。
实验动物：小白鼠
检验程序
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以
及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一
毒素检测
检 样
增菌、产毒培养 30℃，5 d
方面做生长特性观察，同时检测肉毒
（1）毒素检测：试验方法同上。 （2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成两份 ，分别在35℃的需氧和厌氧条件下培养48 h，观察生 长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而 在需氧条件下不生长。
肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）
取庖肉培养基三支，煮沸10min～15min，做如下处理： 第一支：急速冷却，接种检样均质液1 mL～2 mL； 第二支：冷却至60℃，接种检样，继续于60℃ 保温10 min，急速冷却；
抵抗力：
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、 E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素 对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才 能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
肉毒梭菌
制作：白俊强
本节主要内容：
肉毒梭菌的主要特征 肉毒梭菌致病机理 肉毒梭菌的检验
一、生物学特性：
1.形态及染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌 是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链， 两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于 菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于 中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚 膜。
酸盐缓冲液。
试剂：肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力 1:250）、革兰氏染色液。
实验动物：小白鼠
检验程序
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以
及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一
毒素检测
检 样
增菌、产毒培养 30℃，5 d
方面做生长特性观察，同时检测肉毒
（1）毒素检测：试验方法同上。 （2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成两份 ，分别在35℃的需氧和厌氧条件下培养48 h，观察生 长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而 在需氧条件下不生长。
肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）
取庖肉培养基三支，煮沸10min～15min，做如下处理： 第一支：急速冷却，接种检样均质液1 mL～2 mL； 第二支：冷却至60℃，接种检样，继续于60℃ 保温10 min，急速冷却；
抵抗力：
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、 E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素 对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才 能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
肉毒梭菌——精选推荐
学院：集美大学诚毅学院专业：食品科学与工程年级：2010级班级：1091学号：**********姓名：***肉毒梭菌【摘要】：肉毒神经毒素是迄今为止所发现的生物毒素中毒性最强的物质,能引起人和动物以松弛性麻痹为主症的肉毒中毒,同时也是最重要的生物毒素战剂和生物恐怖剂之一。
研究和建立检测与鉴定方法具有十分重要的军事和医学意义。
【关键词】：肉毒梭菌检测食物中毒控制Abstract：Botulinum neurotoxin,which is produced by anaerobic bacterium Clostridium botulinum, is the most toxic substance known. It could also be used as biological warfare and biothreat agents. Hence, it is necessary to develop technologies for detecting and identifying BoNT in both military and medical sciences. This review covers reported detection assays of BoNT.Key words：Clostridium botulinum Detection Food poisoning Control1.肉毒梭菌简介1.1肉毒梭菌——基本概述肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，具有该菌的基本特性，即厌氧性的杆状菌，形成芽胞，芽胞比繁殖体宽，呈梭状，新鲜培养基的革兰氏染色为阳性，产生剧烈细菌外毒素，即肉毒毒素。
肉毒梭菌生长时，可形成一种强力的毒素抑制呼吸导致死亡，这是迄今为止所知的最毒的自然生成的毒素之一。
1.2肉毒梭菌——类型一种是蛋白分解型（就是分解蛋白质的类型），另一种是非蛋白分解型（就是不能分解蛋白质的类型）。
肉毒梭菌与肉毒素及其临床应用
A、B型——分布最广，广泛分布于自然界 C、D型——一般多存在于动物的尸体或在腐尸附近的 土壤中
E型——存在于海洋的沉积物、水产品的肠道内 F型——适应于深水的低温，在海洋地区分布广泛 G型——分布较少
Page 7
二、肉毒毒素
Botulinum Toxin
Page 8
Generation
肉毒梭状芽胞杆菌产生的外毒素（蛋白质毒素） 先在肉毒杆菌细胞内产生无毒的前体毒素 在肉毒杆菌死亡自溶后前体毒素游离出来 经肠道中的胰蛋白酶或细菌产生的蛋白酶激活后
Page 23
Mechanism of Action （BTX-A ）
阻断（Blocking）：A型肉毒毒素通过裂解SNAP-25而阻止乙
酰胆碱的释放。
SNAP-25是一种在细胞膜上促使神经末梢内囊泡与突触前膜顺利融合 并释放乙酰胆碱的必须蛋白质。这一过程阻止肌肉收缩，但并不影响 神经递质的分泌和储存，也不影响电信号沿神经纤维的传导。
Page 3
Fundamental Characteristics
革兰氏阳性菌 专性厌氧 梭状芽胞杆菌 典型的腐物寄生菌 低温生长产毒 分布广泛
主要存在于土壤及海洋沉淀物中，偶尔存在 于动物的粪便中
Page 4
Form & Structure
多形态细菌 约为4×1μm的大杆菌，两侧平行，两端钝园，直杆
肉毒梭菌与肉毒素及其临床应用
Clostridium Botulinum & Botulinum Toxin & Its Clinical Application
1
肉毒梭菌
2
肉毒毒素
3
肉毒毒素的临床应用
4
E型——存在于海洋的沉积物、水产品的肠道内 F型——适应于深水的低温，在海洋地区分布广泛 G型——分布较少
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二、肉毒毒素
Botulinum Toxin
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Generation
肉毒梭状芽胞杆菌产生的外毒素（蛋白质毒素） 先在肉毒杆菌细胞内产生无毒的前体毒素 在肉毒杆菌死亡自溶后前体毒素游离出来 经肠道中的胰蛋白酶或细菌产生的蛋白酶激活后
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Mechanism of Action （BTX-A ）
阻断（Blocking）：A型肉毒毒素通过裂解SNAP-25而阻止乙
酰胆碱的释放。
SNAP-25是一种在细胞膜上促使神经末梢内囊泡与突触前膜顺利融合 并释放乙酰胆碱的必须蛋白质。这一过程阻止肌肉收缩，但并不影响 神经递质的分泌和储存，也不影响电信号沿神经纤维的传导。
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Fundamental Characteristics
革兰氏阳性菌 专性厌氧 梭状芽胞杆菌 典型的腐物寄生菌 低温生长产毒 分布广泛
主要存在于土壤及海洋沉淀物中，偶尔存在 于动物的粪便中
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Form & Structure
多形态细菌 约为4×1μm的大杆菌，两侧平行，两端钝园，直杆
肉毒梭菌与肉毒素及其临床应用
Clostridium Botulinum & Botulinum Toxin & Its Clinical Application
1
肉毒梭菌
2
肉毒毒素
3
肉毒毒素的临床应用
4
肉毒梭菌医学课件课件
这个成功案例表明，肉毒梭菌疫苗可以有 效地预防肉毒梭菌感染，并且接种疫苗是 预防肉毒梭菌中毒的有效方法之一。
06
相关词汇解释和参考 文献
相关词汇解释
肉毒梭菌
一种革兰氏阳性梭菌，属于厌氧菌，广 泛分布于自然界，是引起食物中毒和肉
毒症的主要病原菌。
厌氧菌
指在无氧环境下生长繁殖的细菌，包 括革兰氏阳性梭菌、芽孢杆菌等。
肉毒梭菌的疫苗接种
目前没有针对肉毒梭菌的特异性疫苗，但可以通过接种针对其他梭状芽胞杆菌的 疫苗，如炭疽疫苗和气荚膜梭菌疫苗，以增强机体对肉毒梭菌的抵抗力。
对于存在肉毒梭菌感染高风险的人群，如从事肉类加工、食品加工等行业的人员 ，可以接种炭疽疫苗以预防感染。
03
肉毒梭菌的流行病学 和公共卫生意义
肉毒梭菌的流行病学研究
肉毒毒素
由肉毒梭菌产生的一种外毒素，是引 起食物中毒和肉毒症的主要致病因子 。
细菌毒素
由细菌产生的一种有毒物质，可引起 机体一系列病理生理变化。
参考文献
[1] 王陇德. 肉毒梭菌中毒诊断标准及处 理原则[J]. 中华流行病学杂志, 1997, 18(4):299-302.
[2] 何剑峰, 梁秀丽, 王惠榕. 肉毒梭菌 及其毒素的研究进展[J]. 中国食品卫生
结局
经过及时治疗，患者的症状逐 渐减轻，并在1周后康复出院 。
案例三：肉毒梭菌疫苗接种的成功案例
患者
接种
一位20岁的男性，因即将前往肉毒梭菌高 发区域生活而接种肉毒梭菌疫苗。
患者在接种疫苗后接受了全剂量的免疫接 种，并在规定时间内完成了所有接种程序 。
保护效果
结论
患者在接种后接受了抗体检测，结果显示 抗体水平升高，并且没有出现任何不良反 应或疾病症状。
肉毒杆菌 ppt课件
ppt课件 27
• 全身中毒性毒剂 这是一类破坏人体组织细胞氧化功能，引起组织急性缺 氧的毒剂，主要代表物有氢氰酸、氯化氢等。 • 刺激性毒剂 这是一类刺激眼睛和上呼吸道的毒剂。按毒性作用分为 催泪性和喷嚏性毒剂两类。催泪性毒剂主要有氯苯乙酮、 西埃斯。喷嚏性毒剂主要有亚当氏气。 • 失能性毒剂 • 这是一类暂时使人的思维和运动机能发生障碍从而丧 失战斗力的化学毒剂。其中主要代表物是1962年美国研制 的毕兹(二苯基羟乙酸-3-奎宁环酯)。
ppt课件 29
•
不仅如此，肉毒杆菌的存在极广，尤其是土壤 和海洋沉积物中。病菌经常存在于水果、蔬菜和 海鲜中。在这种状况下，它们是无害的。只有当 它们开始生长时，毒素才会生成。人类接触这种 毒素的主要方式，是误食带菌的食物。比如，储 存不当的食物的温度和环境往往为肉毒杆菌孢子 繁殖提供良好条件。严重的外伤和婴儿的消化道 也是类似的环境。
ppt课件
31
• 有些国家，特别是美国和俄罗斯，已经在 大力研究以食品作物为目标的疾病，甚至 昆虫。现代农业重视大规模生产单一作物 的现状，使虫害和饥荒变得更容易。
• 稻瘟病并不能像天花或肉毒杆菌那样杀人 。但它可以引起贫穷国家的严重饥荒以及 经济困难，和其他重大问题。
ppt课件
32
生化武器 生化武器是指以细菌、病毒、毒素等使人、 动物、植物致病或死亡的物质材料制成的武 器。它包括生物武器和化学武器。 生物武器是生物战剂及其施放装置的总称， 它的杀伤破坏作用靠的是生物战剂。 生物战剂是军事行动中用以杀死人、牲畜 和破坏农作物的致命微生物、毒素和其他生 物活性物质的统称。
ppt课件 22
Fish product Lightly preserved Process used smoked fermented Semi-preserved salted No. of outbreaks 10 eserved
• 全身中毒性毒剂 这是一类破坏人体组织细胞氧化功能，引起组织急性缺 氧的毒剂，主要代表物有氢氰酸、氯化氢等。 • 刺激性毒剂 这是一类刺激眼睛和上呼吸道的毒剂。按毒性作用分为 催泪性和喷嚏性毒剂两类。催泪性毒剂主要有氯苯乙酮、 西埃斯。喷嚏性毒剂主要有亚当氏气。 • 失能性毒剂 • 这是一类暂时使人的思维和运动机能发生障碍从而丧 失战斗力的化学毒剂。其中主要代表物是1962年美国研制 的毕兹(二苯基羟乙酸-3-奎宁环酯)。
ppt课件 29
•
不仅如此，肉毒杆菌的存在极广，尤其是土壤 和海洋沉积物中。病菌经常存在于水果、蔬菜和 海鲜中。在这种状况下，它们是无害的。只有当 它们开始生长时，毒素才会生成。人类接触这种 毒素的主要方式，是误食带菌的食物。比如，储 存不当的食物的温度和环境往往为肉毒杆菌孢子 繁殖提供良好条件。严重的外伤和婴儿的消化道 也是类似的环境。
ppt课件
31
• 有些国家，特别是美国和俄罗斯，已经在 大力研究以食品作物为目标的疾病，甚至 昆虫。现代农业重视大规模生产单一作物 的现状，使虫害和饥荒变得更容易。
• 稻瘟病并不能像天花或肉毒杆菌那样杀人 。但它可以引起贫穷国家的严重饥荒以及 经济困难，和其他重大问题。
ppt课件
32
生化武器 生化武器是指以细菌、病毒、毒素等使人、 动物、植物致病或死亡的物质材料制成的武 器。它包括生物武器和化学武器。 生物武器是生物战剂及其施放装置的总称， 它的杀伤破坏作用靠的是生物战剂。 生物战剂是军事行动中用以杀死人、牲畜 和破坏农作物的致命微生物、毒素和其他生 物活性物质的统称。
ppt课件 22
Fish product Lightly preserved Process used smoked fermented Semi-preserved salted No. of outbreaks 10 eserved
食品安全——肉毒梭菌PPT课件
食品安全——肉毒杆菌
11/26/2019
.
1
目录
1 肉毒杆菌中毒案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
3 判断食物中毒理由 7 肉毒中毒预防
4 接诊处理应对措施 8 肉毒中毒调查处理
11/26/案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
肉毒毒素中毒症状
11/26/2019
.
10
目录
1 肉毒杆菌中毒案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
3 判断食物中毒理由 7 肉毒中毒预防
4 接诊处理应对措施 8 肉毒中毒调查处理
11/26/2019
.
11
接诊——判断食物中毒
中毒途径 消化、呼吸、 皮肤、注射
中毒活动 农药、咬 伤、食物、
• [6] 王馨,祁军.肉毒杆菌毒素中毒[J].口岸卫生控制,2008(05):62.
11/26/2019
.
29
谢谢！
11/26/2019
.
30
11/26/2019
.
15
处理
11/26/2019
.
16
食物中毒处理原则——细菌性诊断标准
11/26/2019
.
17
确诊
•按相关规范操作 •厌氧培养，检出毒素并定型 •实验室诊断——肉毒免疫胶体金快速检测
肉毒毒素(A/B/E/F 型)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
11/26/2019
.
18
目录
未充分加热和杀灭芽胞
病死率 30%
肉毒 梭菌
G+细菌
缺氧
11/26/2019
.
1
目录
1 肉毒杆菌中毒案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
3 判断食物中毒理由 7 肉毒中毒预防
4 接诊处理应对措施 8 肉毒中毒调查处理
11/26/案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
肉毒毒素中毒症状
11/26/2019
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10
目录
1 肉毒杆菌中毒案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
3 判断食物中毒理由 7 肉毒中毒预防
4 接诊处理应对措施 8 肉毒中毒调查处理
11/26/2019
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11
接诊——判断食物中毒
中毒途径 消化、呼吸、 皮肤、注射
中毒活动 农药、咬 伤、食物、
• [6] 王馨,祁军.肉毒杆菌毒素中毒[J].口岸卫生控制,2008(05):62.
11/26/2019
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29
谢谢！
11/26/2019
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30
11/26/2019
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15
处理
11/26/2019
.
16
食物中毒处理原则——细菌性诊断标准
11/26/2019
.
17
确诊
•按相关规范操作 •厌氧培养，检出毒素并定型 •实验室诊断——肉毒免疫胶体金快速检测
肉毒毒素(A/B/E/F 型)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
11/26/2019
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18
目录
未充分加热和杀灭芽胞
病死率 30%
肉毒 梭菌
G+细菌
缺氧
肉毒梭菌的主要特征
度不完全相同。C、D型温度高些为宜，35℃
培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果
较好。
4.对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
2、培养特性
5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生 长旺w盛elc且om产e生to大us量e t气he体se，PoAw、erBPo、inFt三tem型p表lat面es,浑N浊ew，C底on部tent 有粉d状esi和gn颗, 1粒0 y状ea沉rs淀ex，pe并rie能nc消e 化肉块，变黑有臭味；而 C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。 6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。 中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。 7.在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆 盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有
葡萄糖鲜血琼脂（A型） （C型）
3．生化特性 肉毒梭菌能分解葡萄糖，麦芽糖及果糖，产酸产气
，能液化明胶，缓慢液化凝固血清，使牛乳消化，产生 H2S，但不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐。肉毒梭菌的生 化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。
分类： 4.抵抗力
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋
白），根据毒素的抗原特异性将其分为A、B、
C （1、2） 、D、E、F、G七个型别。
抵抗力：
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、 E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素 对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才 能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
2、培养特性
培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果
较好。
4.对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
2、培养特性
5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生 长旺w盛elc且om产e生to大us量e t气he体se，PoAw、erBPo、inFt三tem型p表lat面es,浑N浊ew，C底on部tent 有粉d状esi和gn颗, 1粒0 y状ea沉rs淀ex，pe并rie能nc消e 化肉块，变黑有臭味；而 C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。 6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。 中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。 7.在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆 盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有
葡萄糖鲜血琼脂（A型） （C型）
3．生化特性 肉毒梭菌能分解葡萄糖，麦芽糖及果糖，产酸产气
，能液化明胶，缓慢液化凝固血清，使牛乳消化，产生 H2S，但不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐。肉毒梭菌的生 化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。
分类： 4.抵抗力
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋
白），根据毒素的抗原特异性将其分为A、B、
C （1、2） 、D、E、F、G七个型别。
抵抗力：
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、 E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素 对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才 能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
2、培养特性
肉毒梭菌及其毒素检验
肉毒梭菌及其毒素检验
检验方法（GB4789.12）
肉毒毒素 检验
肉毒梭菌 检出
分离 培养
结果 报告
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
肉毒梭菌及其毒素检验
（一）肉毒毒素检验
1
样品的处理
2
检出试验
3
确证试验
4
毒力测定
5
定型试验
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
肉毒梭菌及其毒素检验
1.样品的处理
液体检样可直接离心，固体或半流动检样须加适量（例 如等量、倍量或5倍量、10倍量）明胶磷酸盐缓冲液，浸 泡、研碎，然后，取上清液进行检测。
血液琼脂：菌落周围有溶血区。
血液琼脂
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
肉毒梭菌及其毒素检验
培养特性： 普通琼脂：形成灰白色、半透明、边缘不整齐。呈绒毛网
状、向外扩散的菌落。直径约为3～5mm。 肉渣肉汤：呈均匀混浊生长，肉渣可被A、B和F型菌消化溶
解成烂泥状，并发黑，产生腐败恶臭味，从第三天起，菌体 下沉，肉汤变清。在肉渣培养基和半固体培养基，大量产气。
肉毒梭菌产生的毒素是一种神经毒素，是目前已知的化学毒物与生物毒素中毒性 最强的一种，对人的致死量为10-9mg/Kg体重。其毒力比氰化钾还要大一万倍。
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
肉毒梭菌及其毒素检验
二、致病性
肉毒毒素是一种与神经亲和力较强的毒素，肉毒毒素经肠道吸收后， 作用于外周神经肌肉接头，植物神经末梢以及颅脑神经核，毒素能阻 止乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹和神经功能不全。在临床上表现以 中枢神经系统中毒症状为主，肉毒毒素中毒潜伏期长短不一，短者2小 时，长者可达数天，一般为12～24小时。中毒症状，早期为瞳孔放大 、明显无力、虚弱、晕眩，继而出现视觉不清和雾视，愈来愈感到说 话和吞噬困难，通常还可见到呼吸困难，体温一般正常，胃肠道症状 不明显。病程一般为2～3天，也有的长达2周之久。肉毒中毒死亡率较 高，据报导可达30%～50%，死亡主要是由于呼吸麻痹及心肌痪瘫。如 早期使用型特异或多价抗血清治疗，死亡率可降至10%～15%。
食品中肉毒梭菌的检验
。
案例：肉毒毒素的毒性极强，是最强的神经麻痹 毒素之一，据称，精致毒素1μg的毒力为200000小白 鼠（20g）致死量，也就是说，1g毒素能杀死400万t 小白鼠，一个人的致死量大概1μg左右。 危害：肉毒中毒是由于误食含有肉毒毒素的食 品而引起的食物中毒。人的肉毒中毒发生并不多，但 是发病急、病程发展快、病死率高。肉毒中毒是毒素 型中毒，潜伏期较短，一般为6~36h，最长60h。主 要症状有：视力减弱、全身无力、神社和张口困难、 抬头费力、瞳孔散大、呼吸麻痹等。重症患者，如果 不及时治疗和抗毒素特异治疗，多在2~4天死亡。 肉毒中毒一年四季均可发生，发病主要与饮食 习惯有着密切关系。
。
1 2
毒素检测：试验方法同肉毒毒素检测。 培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成 2份， 。 分别在35 C的需氧和厌氧条件下培养48h，观 察生长情况及菌落形态。肉毒梭菌只有在厌氧 条件下才能在卵黄琼脂平板上生长并形成具有 上述特征的菌落，而在需氧条件下则不生长。
3、注意事项
（1）典型的肉毒中毒，小白鼠会在4~6h内死亡，而且 98%~99% 的小白鼠会在12h内死亡，因此，试验前 24h内的观察是非常重要的。 （2）24h后的死亡是可疑的，除非有典型的症状出现。 （3）如果小白鼠注射经1：2或1：5倍数稀释的样品后 死亡，但注射更高稀释度的样品后未死亡，这也 是非常可疑的现象，一般为非常特异性死亡。 （4）小白鼠要用不会抹去的颜料加以标记。
1
制胰酶激活处理液：领取一部分上清液，调pH6.2， 每9份加10%胰酶（活力 1：250）水溶液1份，混匀，经 。 常轻轻搅动，37 C作用60min，进行
2
肉毒毒素检测以小白鼠腹腔注射法为标准方法。
（2）检出实验 取上述离心上清液及其胰酶激活处理液分别注 射小白鼠2只，每只0.5mL，观察4天。注射液中若有 肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24h内发病、 死亡。主要症状为竖毛，四肢瘫软，呼吸困难，呼吸 呈风箱式，腰部凹陷，宛若蜂腰，最终死于呼吸麻痹。
案例：肉毒毒素的毒性极强，是最强的神经麻痹 毒素之一，据称，精致毒素1μg的毒力为200000小白 鼠（20g）致死量，也就是说，1g毒素能杀死400万t 小白鼠，一个人的致死量大概1μg左右。 危害：肉毒中毒是由于误食含有肉毒毒素的食 品而引起的食物中毒。人的肉毒中毒发生并不多，但 是发病急、病程发展快、病死率高。肉毒中毒是毒素 型中毒，潜伏期较短，一般为6~36h，最长60h。主 要症状有：视力减弱、全身无力、神社和张口困难、 抬头费力、瞳孔散大、呼吸麻痹等。重症患者，如果 不及时治疗和抗毒素特异治疗，多在2~4天死亡。 肉毒中毒一年四季均可发生，发病主要与饮食 习惯有着密切关系。
。
1 2
毒素检测：试验方法同肉毒毒素检测。 培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成 2份， 。 分别在35 C的需氧和厌氧条件下培养48h，观 察生长情况及菌落形态。肉毒梭菌只有在厌氧 条件下才能在卵黄琼脂平板上生长并形成具有 上述特征的菌落，而在需氧条件下则不生长。
3、注意事项
（1）典型的肉毒中毒，小白鼠会在4~6h内死亡，而且 98%~99% 的小白鼠会在12h内死亡，因此，试验前 24h内的观察是非常重要的。 （2）24h后的死亡是可疑的，除非有典型的症状出现。 （3）如果小白鼠注射经1：2或1：5倍数稀释的样品后 死亡，但注射更高稀释度的样品后未死亡，这也 是非常可疑的现象，一般为非常特异性死亡。 （4）小白鼠要用不会抹去的颜料加以标记。
1
制胰酶激活处理液：领取一部分上清液，调pH6.2， 每9份加10%胰酶（活力 1：250）水溶液1份，混匀，经 。 常轻轻搅动，37 C作用60min，进行
2
肉毒毒素检测以小白鼠腹腔注射法为标准方法。
（2）检出实验 取上述离心上清液及其胰酶激活处理液分别注 射小白鼠2只，每只0.5mL，观察4天。注射液中若有 肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24h内发病、 死亡。主要症状为竖毛，四肢瘫软，呼吸困难，呼吸 呈风箱式，腰部凹陷，宛若蜂腰，最终死于呼吸麻痹。
产气荚膜和肉毒梭菌致病PPT课件
• A亚单位有锌内肽酶活性。
3. 破伤风发病机制与免疫性
• 主要是痉挛毒素引起的骨骼肌痉挛（持续收缩）：角弓反 张（背肌痉挛）、牙关紧闭（咀嚼肌痉挛）、苦笑（表情 肌痉挛），死于窒息或呼吸衰竭（呼吸肌痉挛）。
• 神经系统功能紊乱所致心律失常，大量出汗所致脱水。 • 一旦发病且未及时治疗，有很高的病死率。 • 主要依赖体液免疫（痉挛毒素抗体）：特异性抗体与游离
医学微生物学
（第9章：厌氧性细菌）
引起感染的厌氧性细菌
• 厌氧性细菌（anaerobic bacteria）是一群在无氧条件下 才能生长繁殖的细菌，其中少数厌氧菌可引起疾病。
• 厌氧性细菌可分为有芽胞和无芽胞两大类。 • 对人致病的有芽胞厌氧菌仅涉及革兰阳性厌氧芽胞梭菌
属（Clostridum），该属细菌多为腐生菌，但破伤风、产 气荚膜和肉毒梭菌致病。 • 对人致病的无芽胞厌氧菌有10个属，一般为正常菌群成 员，但在一定条件下可引起疾病（条件致病）。
• 汹涌发酵：分解多种糖类产酸，使牛乳培养基中酪蛋白 凝固，然后酸分解产生大量气体，将凝固酪蛋白冲开， 气势凶猛，称为汹涌发酵（stormy fermentation）。
• 产气荚膜梭菌双层溶血和汹涌发酵
2. 致病物质与细菌分型
• 毒素众多（细胞毒素、侵袭性酶类、肠毒素等）：4种主要 毒素、6种次要毒素以及肠毒素、神经氨酸酶。
• 肠毒素引起食物中毒。
3. 所致疾病及发病机制
• 气性坏疽（Gas gangrene）：皮肤创口感染，其中约75% 病人由A型产气荚膜梭菌感染所致，感染局部组织严重水 肿、剧烈胀痛、液体渗出、水气夹杂（捻发音）、组织迅 速坏死恶臭，因毒血症、中毒性休克有较高死亡率。
• 食物中毒（food-poisoning）：主要由A型菌引起，在肠毒 素作用下腹痛、腹泻，无恶心、呕吐，水样便，可自愈。
3. 破伤风发病机制与免疫性
• 主要是痉挛毒素引起的骨骼肌痉挛（持续收缩）：角弓反 张（背肌痉挛）、牙关紧闭（咀嚼肌痉挛）、苦笑（表情 肌痉挛），死于窒息或呼吸衰竭（呼吸肌痉挛）。
• 神经系统功能紊乱所致心律失常，大量出汗所致脱水。 • 一旦发病且未及时治疗，有很高的病死率。 • 主要依赖体液免疫（痉挛毒素抗体）：特异性抗体与游离
医学微生物学
（第9章：厌氧性细菌）
引起感染的厌氧性细菌
• 厌氧性细菌（anaerobic bacteria）是一群在无氧条件下 才能生长繁殖的细菌，其中少数厌氧菌可引起疾病。
• 厌氧性细菌可分为有芽胞和无芽胞两大类。 • 对人致病的有芽胞厌氧菌仅涉及革兰阳性厌氧芽胞梭菌
属（Clostridum），该属细菌多为腐生菌，但破伤风、产 气荚膜和肉毒梭菌致病。 • 对人致病的无芽胞厌氧菌有10个属，一般为正常菌群成 员，但在一定条件下可引起疾病（条件致病）。
• 汹涌发酵：分解多种糖类产酸，使牛乳培养基中酪蛋白 凝固，然后酸分解产生大量气体，将凝固酪蛋白冲开， 气势凶猛，称为汹涌发酵（stormy fermentation）。
• 产气荚膜梭菌双层溶血和汹涌发酵
2. 致病物质与细菌分型
• 毒素众多（细胞毒素、侵袭性酶类、肠毒素等）：4种主要 毒素、6种次要毒素以及肠毒素、神经氨酸酶。
• 肠毒素引起食物中毒。
3. 所致疾病及发病机制
• 气性坏疽（Gas gangrene）：皮肤创口感染，其中约75% 病人由A型产气荚膜梭菌感染所致，感染局部组织严重水 肿、剧烈胀痛、液体渗出、水气夹杂（捻发音）、组织迅 速坏死恶臭，因毒血症、中毒性休克有较高死亡率。
• 食物中毒（food-poisoning）：主要由A型菌引起，在肠毒 素作用下腹痛、腹泻，无恶心、呕吐，水样便，可自愈。
关于肉毒梭菌的研究进展
关于肉毒梭菌毒素的研究进展（甘肃农业大学动物医学院动物医学专业，甘肃兰州，730070）前言肉毒毒素是肉毒梭菌产生的一种神经毒素，能够通过抑制神经肌肉接头处的乙酰胆碱释放而引起肌肉麻痹。
肉毒毒素在培养液中以复合物形式存在，其中的毒性组分由3个非同源性结构域组成，是一种新型的金属蛋白酶。
不同血清型的肉毒毒素能够特异性地作用于不同底物，这些底物在神经细胞的胞外分泌过程中发挥重要作用。
肉毒毒素在胞吞胞吐机制的研究以及临床医学应用方面具有宝贵的价值。
正文肉毒梭菌（Clostrdium botulium）是一种革兰氏阳性厌氧芽胞梭菌，其产生的肉毒毒素能引起人畜严重的中毒症状，甚至导致死亡。
肉毒梭菌具有厌氧生长、低温生长产毒的特点，使其在日益普及的真空包装、冷冻食品及罐装食品中具有生长优势，从而成为这类食品中毒的主要原因之一。
此外，肉毒毒素的神经毒作用，在当今肌肉痉挛、腺体分泌过度以及美容外科领域中正被广泛利用。
因此，对肉毒梭菌的研究引起了广泛关注，研究的重点主要集中在肉毒毒素的相关领域，近年来，毒素的研究已经取得了长足的进步。
1 毒素基因簇及其调控组成肉毒毒素复合物的蛋白编码基因通常成簇排列，不同的血清型、不同的株，其基因簇的组成和排列也不完全相同，A1型毒素基因簇的排列就有两种不同的方式。
毒素基因簇位于A、B、E、F血清型的染色体上，位于C、D血清型的假溶原性噬菌体成分中，位于G型的大质粒上。
在迄今分析的所有肉毒毒素基因簇排列中，非毒素非血凝素基因(ntnh)全部位于紧邻毒素基因（bont）的上游区域，与毒素基因位于同一个操纵子中，并且此基因在小同血清型间的保守性很高，比相应的毒素基因的序列还要保守。
编码血凝素组分的基因位于ntnh基因的上游区域，多个相邻血凝素基因构成一个操纵子。
此外，大多数毒素基因簇都包含1个正调控基因botR(除E型外)，以及几个未知功能的开放阅读框。
这些基因的排列在不同的血清型间存在差异。
肉毒梭菌医学课件-课件
分布与传播
分布
肉毒梭菌广泛分布于自然界和人类环境中，特别是在土壤、动物粪便、食品和加工制品中。
传播
肉毒梭菌的传播主要通过食物链，如被污染的食品和水源等。此外，该菌还可通过人与人之间的接触传播，如 伤口感染等。
02
肉毒梭菌中毒症状
食物中毒
摄入大量污染食物是本病的主要病因。 临床表现为急性胃肠炎症状，如恶心、呕吐、腹痛、水样腹泻等。 发病后24小时内可出现严重的水电解质紊乱和脱水症状。
对食品进行加热和冷藏
为了杀灭肉毒梭菌，应对食品进行充分的加热和冷藏。一般情况下，肉毒梭菌在高温下容易死亡，冷藏可抑制其生长。
免疫接种
接种疫苗
针对肉毒梭菌的疫苗包括 A型、B型、E型三种，可 有效预防肉毒梭菌感染。
接种对象
疫苗接种对象主要是从事 食品加工、餐饮业、卫生 行业等职业人群，以降低 职业感染风险。
02
微生物学检查
将采集的标本接种于肉汤培养基中进 行微生物学检查，以分离和鉴定肉毒 梭菌。
03
毒素检测
采用免疫学方法检测患者标本中的肉 毒毒素，以确定中毒的诊断。
鉴别诊断
食物中毒
与其他食物中毒症状相似，需要 进行鉴别诊断。
神经肌肉疾病
部分神经肌肉疾病也可能引起眼 肌麻痹、吞咽困难等症状，需要 加以鉴别。
05
肉毒梭菌病例报告
病例一：长期便秘患者
患者主诉
长期便秘症状严重，服用泻药效果不佳。
诊断
对患者进行神经传导速度检测和肌肉活检，发现患者存在肉毒中毒症状。
治疗
对患者进行支持和对症治疗，包括静脉输液、维持电解质平衡、预防感染等措施，同时对患者进行心理治疗以减轻其心理 负担。
病例二：老年痴呆症患者
厌氧性病原梭菌肉毒梭菌.ppt
2．细菌分离鉴定 利用本菌芽孢耐热性强的特性， 接种检验材料悬液于疱肉培养基，于80℃加热30min，置 30℃增菌产毒培养5～10d，对上清液进行毒素检测。
五、防治
在动物肉毒中毒多发地区，可用明矾沉淀类毒素做预防 注射，有效免疫期可持续半年至一年，也可用氢氧化铝或 明矾菌苗接种。
人畜一旦出现肉毒中毒症后，可立即用多价抗毒素血清 进行治疗。若毒素型别已确定，则应用同型抗毒素血清。 预防肉毒梭菌食物中毒，主要是要加强食品卫生管理和监
厌氧性病原梭菌-肉毒梭菌
主要内容
一、概述 二、生物学特性 三、致病性 四、微生物学诊断 五、防治
一、概述
肉毒梭菌是一种腐生菌，广泛分布于土壤、海洋和湖 泊的沉积物、哺乳动物和鱼等动物的肠道、饲料和食品中。 此菌不能在活的机体内生长繁殖，即使进入人畜消化道，亦 随粪便排出。当有适宜营养且获得厌氧环境时，即可生长繁 殖并产生肉毒毒素，人畜食入含此毒素的食品、饲料或其他 物品，即可发生中毒。
二、生物学特性
1.形态与培养 肉毒梭菌多呈直杆状，单在或成双，革兰氏染色阳性。周 鞭毛，能运动。芽孢椭圆形，大于菌体宽度，位于偏端，使
菌体呈汤匙状或网球拍状。
本菌专性厌氧生长，在血液琼脂平板上菌落较大且不规则 ，有β溶血现象。在疱肉培养基中，能消化肉渣，使之变黑 并有腐败恶臭 。
2. 抵抗力 肉毒梭菌的芽孢抗力很强，干热180℃5～15min， 湿热100℃5h，但肉毒毒素不耐热，煮沸30min或75～ 85℃10～15min即被破坏 。
督，定期进行食品安全检查。
三、致病性
肉毒梭菌可产生毒性极强的肉毒毒素，该毒素是目前已 知毒素中毒性最强的一种。
在自然条件下，家畜对肉毒毒素很敏感，家畜中毒后， 出现特征性临诊症状，引起运动肌麻痹，从眼部开始，表现 为斜视，继而咽部肌肉麻痹，咀嚼吞咽困难，膈肌麻痹，呼 吸困难，心力衰竭而死亡。
五、防治
在动物肉毒中毒多发地区，可用明矾沉淀类毒素做预防 注射，有效免疫期可持续半年至一年，也可用氢氧化铝或 明矾菌苗接种。
人畜一旦出现肉毒中毒症后，可立即用多价抗毒素血清 进行治疗。若毒素型别已确定，则应用同型抗毒素血清。 预防肉毒梭菌食物中毒，主要是要加强食品卫生管理和监
厌氧性病原梭菌-肉毒梭菌
主要内容
一、概述 二、生物学特性 三、致病性 四、微生物学诊断 五、防治
一、概述
肉毒梭菌是一种腐生菌，广泛分布于土壤、海洋和湖 泊的沉积物、哺乳动物和鱼等动物的肠道、饲料和食品中。 此菌不能在活的机体内生长繁殖，即使进入人畜消化道，亦 随粪便排出。当有适宜营养且获得厌氧环境时，即可生长繁 殖并产生肉毒毒素，人畜食入含此毒素的食品、饲料或其他 物品，即可发生中毒。
二、生物学特性
1.形态与培养 肉毒梭菌多呈直杆状，单在或成双，革兰氏染色阳性。周 鞭毛，能运动。芽孢椭圆形，大于菌体宽度，位于偏端，使
菌体呈汤匙状或网球拍状。
本菌专性厌氧生长，在血液琼脂平板上菌落较大且不规则 ，有β溶血现象。在疱肉培养基中，能消化肉渣，使之变黑 并有腐败恶臭 。
2. 抵抗力 肉毒梭菌的芽孢抗力很强，干热180℃5～15min， 湿热100℃5h，但肉毒毒素不耐热，煮沸30min或75～ 85℃10～15min即被破坏 。
督，定期进行食品安全检查。
三、致病性
肉毒梭菌可产生毒性极强的肉毒毒素，该毒素是目前已 知毒素中毒性最强的一种。
在自然条件下，家畜对肉毒毒素很敏感，家畜中毒后， 出现特征性临诊症状，引起运动肌麻痹，从眼部开始，表现 为斜视，继而咽部肌肉麻痹，咀嚼吞咽困难，膈肌麻痹，呼 吸困难，心力衰竭而死亡。
医学微生物学重点：肉毒梭菌
医学微生物学重点：肉毒梭菌2017医学微生物学精选重点：肉毒梭菌肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌，在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力，是毒性最强的细菌之一。
以下是店铺带来的详细内容，欢迎参考查看。
中毒症状摄食肉毒杆菌的食品可引发食物中毒，如pH>4.6的低酸性罐头食品(含铁罐，玻璃罐) 或香肠、火腿。
人感染肉毒杆菌后会出现视觉模糊、呼吸困难、肌肉乏力等症状，如病情严重可能导致死亡。
临床应用毒素除皱在了解了毒素的结构与功能以及作用机制后，人类开始用毒素来作为有效药物。
肉毒毒素被助恶治疗眼睑痉挛、痉挛性斜颈、痉挛性发音困难等疾病。
1992年有人尝试将肉毒杆菌毒素注射除皱法引进到美容医学的治疗上，就是我们所说的除皱术。
肉毒杆菌除皱术也称为生物素除皱，肉毒杆菌A的商品名为“Botox”。
美容界这阵子的大热门肉毒杆菌(Botox)可说是一种既不费时又不用开刀的整型治疗，这让许多爱美人士都跃跃欲试，英国版ELLE报导，对于演艺娱乐界来说，任何的整容都已经过时，新世纪最流行的是自然的长相。
“肉毒杆菌素”是肉毒杆菌所分泌的毒素。
它的作用是可以阻断神经末梢分泌能使肌肉收缩的「乙酰胆碱」，达到使肌肉麻痹的效果。
“肉毒杆菌素”，在美容方面，主要是用来去除动态的皱纹(如皱眉纹、鱼尾纹、抬头纹)及改善国字脸及萝卜腿。
祛皱原理动态皱纹产生的原因：常见的动态皱纹包括：额头纹、鱼眼纹、脸颊纹以及颈纹。
常常我们会发现，在我们不做面部表情的时候，一般动态皱纹是无法体现的，而当笑脸或者是睁眼等其它面部肌肉活动的时候，就产生了动态皱纹。
而出现这些情况的因素包括先天性因素、衰老、皮肤松弛以及后天性养成(例如痤疮疤痕导致的面部纹理)。
去除动态皱纹的原理，是将收缩造成皱纹的肌肉麻痹掉，使肌肉不收缩，连带的也去除了皱纹。
一般在注射后三、四天就可以看到效果，一周后效果就很明显。
效用期约三至六个月，平均四个月。
若皱纹再出现，视个人需要，可重复施打。
第九节 肉毒梭菌 PPT课件
二、肉毒梭菌的致病性
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据 毒素的抗原特异性将其分为A、B、C （1、2） 、D、E、F、 G七个型别。与毒素型别相对应，肉毒梭菌也分为同样的七个 型别。其中A、B、E、F四型毒素对人有不同程度的致病性。
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、E 二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵 抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才能完全破坏，不论 如何，只要煮沸1分钟或75℃加热5~10分钟，毒素都能被完全 破坏。肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。 某些型的肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
第九节、肉毒梭状芽孢杆菌检验
一、肉毒梭状芽孢杆菌的生物学特性 1、形态与染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性 (老龄菌是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成 双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为 卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球 拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛， 运动迟缓，无荚膜。
以上3支试管于30℃厌氧培养5d，若无生长，可再培养10d。培养到期， 若有生长，取培养液离心，以其上清液进行毒素检测试验，方法同上，阳性 结果证明检样中有肉毒梭菌存在。
（3）、分离培养
选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜 的加热处理）接种卵黄琼脂平板，35℃厌氧培养48 h。肉毒梭菌在卵黄 琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠 层样)薄层，但G型菌无此现象。
4、结果报告
报告(一)：检样含有某型肉毒毒素。 报告(二)：检样含有某型肉毒梭菌。 报告(三)：由样品分离的菌株为某型肉毒梭菌。
肉毒梭菌医学课件
与有机磷农药中毒的鉴别
有机磷农药中毒常表现为呼吸困难、瞳孔缩小、 大汗、呕吐等症状，与肉毒梭菌中毒症状相似， 但病因不同。
并发症与后遗症
呼吸衰竭
肉毒梭菌中毒可能导致呼吸肌麻 痹，引起呼吸衰竭，严重时可危
及生命。
败血症
肉毒梭菌感染可能导致败血症，引 起全身感染、多器官功能衰竭等严 重后果。
后遗症
部分患者治愈后可能出现视力障碍 、肌肉无力等后遗症。
防控措施
食品生产加工过程严格控制：通过实施 良好的卫生规范和加工工艺，减少食品 污染的机会。
06
肉毒梭菌相关研究进展与展望
研究现状及成果
肉毒梭菌与神经麻痹症
近期研究发现，肉毒梭菌在神经麻痹症的发生中起到了重要作用 ，为治疗该病症提供了新思路。
肉毒梭菌与食物中毒
研究表明，肉毒梭菌是导致食物中毒的主要细菌之一，对其毒素的 研究有助于预防和治疗食物中毒。
肉毒毒素是一种神经毒素，可抑制神 经细胞释放乙酰胆碱，从而引起肌肉 麻痹、呼吸困难等症状，严重时可导 致死亡。
02
肉毒梭菌中毒症状
胃肠道症状
01
02
03
恶心
肉毒梭菌中毒后，患者可 能会出现恶心、呕吐等症 状，有时甚至会频繁呕吐 。
腹泻
中毒后，患者可能会出现 腹泻，大便可能呈水样或 稀便。
腹痛
部分患者可能会出现腹部 疼痛，疼痛部位可能不固 定。
实验室诊断
通过分离培养肉毒梭菌、检测毒素等 方法进行确诊。
鉴别诊断
1 2 3
与食物中毒的鉴别
食物中毒通常表现为急性胃肠炎症状，与肉毒梭 菌中毒症状相似，但无神经麻痹等神经系统症状 。
与神经型细菌性食物中毒的鉴别
神经型细菌性食物中毒常表现为头痛、眩晕、恶 心、呕吐、视力模糊等症状，与肉毒梭菌中毒症 状相似，但病原菌不同。
有机磷农药中毒常表现为呼吸困难、瞳孔缩小、 大汗、呕吐等症状，与肉毒梭菌中毒症状相似， 但病因不同。
并发症与后遗症
呼吸衰竭
肉毒梭菌中毒可能导致呼吸肌麻 痹，引起呼吸衰竭，严重时可危
及生命。
败血症
肉毒梭菌感染可能导致败血症，引 起全身感染、多器官功能衰竭等严 重后果。
后遗症
部分患者治愈后可能出现视力障碍 、肌肉无力等后遗症。
防控措施
食品生产加工过程严格控制：通过实施 良好的卫生规范和加工工艺，减少食品 污染的机会。
06
肉毒梭菌相关研究进展与展望
研究现状及成果
肉毒梭菌与神经麻痹症
近期研究发现，肉毒梭菌在神经麻痹症的发生中起到了重要作用 ，为治疗该病症提供了新思路。
肉毒梭菌与食物中毒
研究表明，肉毒梭菌是导致食物中毒的主要细菌之一，对其毒素的 研究有助于预防和治疗食物中毒。
肉毒毒素是一种神经毒素，可抑制神 经细胞释放乙酰胆碱，从而引起肌肉 麻痹、呼吸困难等症状，严重时可导 致死亡。
02
肉毒梭菌中毒症状
胃肠道症状
01
02
03
恶心
肉毒梭菌中毒后，患者可 能会出现恶心、呕吐等症 状，有时甚至会频繁呕吐 。
腹泻
中毒后，患者可能会出现 腹泻，大便可能呈水样或 稀便。
腹痛
部分患者可能会出现腹部 疼痛，疼痛部位可能不固 定。
实验室诊断
通过分离培养肉毒梭菌、检测毒素等 方法进行确诊。
鉴别诊断
1 2 3
与食物中毒的鉴别
食物中毒通常表现为急性胃肠炎症状，与肉毒梭 菌中毒症状相似，但无神经麻痹等神经系统症状 。
与神经型细菌性食物中毒的鉴别
神经型细菌性食物中毒常表现为头痛、眩晕、恶 心、呕吐、视力模糊等症状，与肉毒梭菌中毒症 状相似，但病原菌不同。
肉毒梭菌及其毒素检验
－－增菌用，含牛肉碎块、葡萄糖和淀粉等的液体或半流 动培养基
－－A、B型肉毒梭菌生长旺盛，而且表面浑浊，产大量气 体，底有粉状或颗粒状沉淀，并能消化肉块，变黑有臭味。
4.2 卵黄琼脂培养基：GB／T 4789.28--2003中4.68
含葡萄糖和卵黄 －－鉴别培养
本菌含脂肪酶，分解脂肪，产生 甘油，使菌落及其周围表面覆盖 着特有的彩虹样(或珍珠层样)薄 层
学习文档
2、菌体和毒素生物学特性
1）形态及染色
形态：肉毒梭菌为专性厌氧性G+周身鞭毛 网球拍样梭状芽孢大杆菌.
大小:(4—6)μm X(0.9—1.2) μm 形状：两端钝圆，有芽胞，周身4—8根鞭毛，无荚膜。 芽孢：卵圆形大于菌体，位于菌体次末端，使细菌
呈匙形或网球拍状。 排列：一般单个存在，偶有成对或成短链状。 染色： G+
医学上利用麻痹肉毒素美容、治肌肉痉挛性收缩病症。
/i?ct=503316学4习8文0&档z=&tn
www.cho-obgy.co.kr
http://neurobtx.blog.so学hu习.文c档om/107783323.html
各型肉毒梭菌毒素为对人兽的致病情况及所通过的主要媒介
观察4d 部凹陷，宛若蜂腰，最终死于呼吸麻痹。 小鼠猝死：以至症状不明显时，则可将注射液做适当稀释， 重做试验。
/full/4054ae8f3ba d71a45872a313bc2e9cd7.jpg
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（2）确证试验：取致死样上清液分成三份
上清液＋等量多型抗毒素血清－混匀－37℃，30min －－ 0.5mL接种小鼠
剧毒神经麻痹外毒素(又称肉毒毒素),引起以神经麻痹为主要
症状且很高死亡率的食物中毒(又称肉毒中毒)。
－－A、B型肉毒梭菌生长旺盛，而且表面浑浊，产大量气 体，底有粉状或颗粒状沉淀，并能消化肉块，变黑有臭味。
4.2 卵黄琼脂培养基：GB／T 4789.28--2003中4.68
含葡萄糖和卵黄 －－鉴别培养
本菌含脂肪酶，分解脂肪，产生 甘油，使菌落及其周围表面覆盖 着特有的彩虹样(或珍珠层样)薄 层
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2、菌体和毒素生物学特性
1）形态及染色
形态：肉毒梭菌为专性厌氧性G+周身鞭毛 网球拍样梭状芽孢大杆菌.
大小:(4—6)μm X(0.9—1.2) μm 形状：两端钝圆，有芽胞，周身4—8根鞭毛，无荚膜。 芽孢：卵圆形大于菌体，位于菌体次末端，使细菌
呈匙形或网球拍状。 排列：一般单个存在，偶有成对或成短链状。 染色： G+
医学上利用麻痹肉毒素美容、治肌肉痉挛性收缩病症。
/i?ct=503316学4习8文0&档z=&tn
www.cho-obgy.co.kr
http://neurobtx.blog.so学hu习.文c档om/107783323.html
各型肉毒梭菌毒素为对人兽的致病情况及所通过的主要媒介
观察4d 部凹陷，宛若蜂腰，最终死于呼吸麻痹。 小鼠猝死：以至症状不明显时，则可将注射液做适当稀释， 重做试验。
/full/4054ae8f3ba d71a45872a313bc2e9cd7.jpg
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（2）确证试验：取致死样上清液分成三份
上清液＋等量多型抗毒素血清－混匀－37℃，30min －－ 0.5mL接种小鼠
剧毒神经麻痹外毒素(又称肉毒毒素),引起以神经麻痹为主要
症状且很高死亡率的食物中毒(又称肉毒中毒)。
肉毒中毒ppt课件
35
3 诊断标准 3.1 流行病学特点 3.1.1 中毒食品多为家庭自制发酵豆谷类制 品，其次为肉类和罐头食品。 3.1.2 中毒多发生在冬春季。 3.1.3 潜伏期一般为1～7d，病死率较高。
36
3.2 临床表现 主要症状有：头晕、无力、视力模糊、 眼睑下垂、复视、咀嚼无力、张口困难、 伸舌困难、咽喉阻塞感、饮水发呛、吞 咽困难、呼吸困难、头颈无力、垂头等， 患者症状轻重程度和出现范围可有所不 同。
毒食品。 ５.２.２ 追回已售出的中毒食品或疑似中毒
食品。 ５.２.３ 对中毒食品进行无害化处理或销毁。 ５.３ 对中毒场所采取的消毒处理 根据不同的中毒食品，对中毒场所采取相应的消
毒处理。
44
谢谢！
45
42
５ 技术处理总则 ５.１ 对病人采取紧急处理，并及时报
告当地食品卫生监督检验所。 ５.１.１ 停止食用中毒食品。 ５.１.２ 采取病人标本，以备送检。 ５.１.３ 对病人的急救治疗主要包括：
ａ.急救：催吐、洗胃、清肠； ｂ.对症治疗； ｃ.特殊治疗。
43
５.２ 对中毒食品控制处理 ５.２.１ 保护现场，封存中毒食品或疑似中
37
3.3 实验室诊断 3.3.1 从中毒食品(或患者粪便、血液)中 检出肉毒毒素，并确定其型别。 3.3.2 肉毒毒素的检测方法见GB 4789.12。
38
4 判定原则 4.1 符合本标准流行病学特点及临床表现。 4.2 实验室诊断须从中毒食品中检出肉毒毒 素，并确定其型别(如中毒食品未能采到，可 采取患者粪便或血液进行检测)。Biblioteka 11肉毒毒素进入人体的途径
食物：食品在制作过程中被肉毒梭菌芽胞污 染，芽胞在厌氧环境中繁殖，产生毒素，食 前又未加热，食入已产生的毒素而中毒。
3 诊断标准 3.1 流行病学特点 3.1.1 中毒食品多为家庭自制发酵豆谷类制 品，其次为肉类和罐头食品。 3.1.2 中毒多发生在冬春季。 3.1.3 潜伏期一般为1～7d，病死率较高。
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3.2 临床表现 主要症状有：头晕、无力、视力模糊、 眼睑下垂、复视、咀嚼无力、张口困难、 伸舌困难、咽喉阻塞感、饮水发呛、吞 咽困难、呼吸困难、头颈无力、垂头等， 患者症状轻重程度和出现范围可有所不 同。
毒食品。 ５.２.２ 追回已售出的中毒食品或疑似中毒
食品。 ５.２.３ 对中毒食品进行无害化处理或销毁。 ５.３ 对中毒场所采取的消毒处理 根据不同的中毒食品，对中毒场所采取相应的消
毒处理。
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谢谢！
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５ 技术处理总则 ５.１ 对病人采取紧急处理，并及时报
告当地食品卫生监督检验所。 ５.１.１ 停止食用中毒食品。 ５.１.２ 采取病人标本，以备送检。 ５.１.３ 对病人的急救治疗主要包括：
ａ.急救：催吐、洗胃、清肠； ｂ.对症治疗； ｃ.特殊治疗。
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５.２ 对中毒食品控制处理 ５.２.１ 保护现场，封存中毒食品或疑似中
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3.3 实验室诊断 3.3.1 从中毒食品(或患者粪便、血液)中 检出肉毒毒素，并确定其型别。 3.3.2 肉毒毒素的检测方法见GB 4789.12。
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4 判定原则 4.1 符合本标准流行病学特点及临床表现。 4.2 实验室诊断须从中毒食品中检出肉毒毒 素，并确定其型别(如中毒食品未能采到，可 采取患者粪便或血液进行检测)。Biblioteka 11肉毒毒素进入人体的途径
食物：食品在制作过程中被肉毒梭菌芽胞污 染，芽胞在厌氧环境中繁殖，产生毒素，食 前又未加热，食入已产生的毒素而中毒。
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确证试验 毒力测定 定型试验
（2）、肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）
取庖肉培养基三支，煮沸10min～15min，做如下处理： ➢ 第一支：急速冷却，接种检样均质液1 mL～2 mL； ➢ 第二支：冷却至60℃，接种检样，继续于60℃保温10 min，急速冷却； ➢ 第三支：接种检样，继续煮沸加热10 min，急速冷却。
在固体培养基表面上，形成类圆形， 边缘不整齐，约3毫米左右的菌落。菌落 半透明，表面一般比较光滑也有的呈颗粒 状，界线不明显，向外扩散。呈绒毛网状， 常常扩散成菌苔。
肉毒梭状芽孢杆菌菌落
2、培养特性
➢在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生长旺盛且产生大 量气体，A、B、F三型表面浑浊，底部有粉状和颗粒状沉淀，并能消化 肉块，变黑有臭味；而C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管 壁。
第九节、肉毒梭状芽孢杆菌检验
一、肉毒梭状芽孢杆菌的生物学特性 1、形态与染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性 (老龄菌是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成 双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为 卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球 拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛， 运动迟缓，无荚膜。
二、肉毒梭菌的致病性
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据 毒素的抗原特异性将其分为A、B、C （1、2） 、D、E、F、 G七个型别。与毒素型别相对应，肉毒梭菌也分为同样的七个 型别。其中A、B、E、F四型毒素对人有不同程度的致病性。
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、E 二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵 抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才能完全破坏，不论 如何，只要煮沸1分钟或75℃加热5~10分钟，毒素都能被完全 破坏。肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。 某些型的肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
2、培养特性
➢最严格的厌氧菌 ➢生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适pH为7.8 ~8.2。 ➢产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型 温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。 ➢对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于30℃ 培养5d，进行毒素检测及培养特性检查确证试验。
（1）毒素检测：试验方法同上。 （2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板 ，分成两份，分别在35℃的需氧和厌氧 条件下培养48 h，观察生长情况及菌落 形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而 在需氧条件下不生长。
毒素检测 报告
（一）
毒素检测
增菌、产毒培养 30℃，5 d
毒素检测 报告（二）
观察生长性状， 染色镜检
分离培养
增菌产毒培养 30℃，5 d
观察菌落性状 染色镜检培养检查报告（来自）（1）、肉毒毒素检测
液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液实验 上清液及其胰酶激活处理液
分别进行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5 mL，观察4 d 注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24 h内发病、死亡。
在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。中央低 落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。
在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆盖着特有 的彩虹样薄层，但G型没有。
肉毒梭状芽孢杆菌菌落
3、肉毒梭菌的生化特性
肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株 间的差异。
表1 各型肉毒梭菌的生化反应
4、结果报告
报告(一)：检样含有某型肉毒毒素。 报告(二)：检样含有某型肉毒梭菌。 报告(三)：由样品分离的菌株为某型肉毒梭菌。
肉毒梭菌检验目标主要是毒素，不论食品中的肉毒毒素 检验还是肉毒梭菌检验，均以毒素的检测及定型试验为判定 的主要依据。
致病机理
肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末梢释放乙 酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼吸肌麻痹导致死亡。
������ 肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和合成毒剂 中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒素1克能杀死400万吨小 白鼠，一个人的致死量大概1微克左右。
肉毒中毒一年四季均可发生。美国以罐头发生中毒较多， 日本以水产品较多；我国以发酵食品（如：臭豆腐、豆瓣酱、 豆豉等）发生中毒较多。
三、检验方法
1、检验标准：GB 4789.12-2003 2、培养基和试剂 培养基： 庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。 试剂：
肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰 氏染色液。 另需实验动物（小白鼠）。
3、检验程序
检样
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以 及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一 方面做生长特性观察，同时检测肉毒 毒素。报告检样中有无肉毒梭菌以及 有何型肉毒梭菌。（有些样品如土壤、 泥沙等基本上不可能含有毒素，则应 从培养着手） ③报告(三)：欲获纯菌株，可用增菌 产毒培养物进行分离培养，对所得纯 菌株进行形态、培养特性等观察及毒 素检测，其结果可证明所得纯菌为何 型肉毒梭菌。（一般情况下，没有必 要从检样中分离纯的菌株，但研究或 特殊需要例外）
以上3支试管于30℃厌氧培养5d，若无生长，可再培养10d。培养到期， 若有生长，取培养液离心，以其上清液进行毒素检测试验，方法同上，阳性 结果证明检样中有肉毒梭菌存在。
（3）、分离培养
选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜 的加热处理）接种卵黄琼脂平板，35℃厌氧培养48 h。肉毒梭菌在卵黄 琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠 层样)薄层，但G型菌无此现象。
（2）、肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）
取庖肉培养基三支，煮沸10min～15min，做如下处理： ➢ 第一支：急速冷却，接种检样均质液1 mL～2 mL； ➢ 第二支：冷却至60℃，接种检样，继续于60℃保温10 min，急速冷却； ➢ 第三支：接种检样，继续煮沸加热10 min，急速冷却。
在固体培养基表面上，形成类圆形， 边缘不整齐，约3毫米左右的菌落。菌落 半透明，表面一般比较光滑也有的呈颗粒 状，界线不明显，向外扩散。呈绒毛网状， 常常扩散成菌苔。
肉毒梭状芽孢杆菌菌落
2、培养特性
➢在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生长旺盛且产生大 量气体，A、B、F三型表面浑浊，底部有粉状和颗粒状沉淀，并能消化 肉块，变黑有臭味；而C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管 壁。
第九节、肉毒梭状芽孢杆菌检验
一、肉毒梭状芽孢杆菌的生物学特性 1、形态与染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性 (老龄菌是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成 双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为 卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球 拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛， 运动迟缓，无荚膜。
二、肉毒梭菌的致病性
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据 毒素的抗原特异性将其分为A、B、C （1、2） 、D、E、F、 G七个型别。与毒素型别相对应，肉毒梭菌也分为同样的七个 型别。其中A、B、E、F四型毒素对人有不同程度的致病性。
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、E 二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵 抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才能完全破坏，不论 如何，只要煮沸1分钟或75℃加热5~10分钟，毒素都能被完全 破坏。肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。 某些型的肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
2、培养特性
➢最严格的厌氧菌 ➢生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适pH为7.8 ~8.2。 ➢产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型 温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。 ➢对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于30℃ 培养5d，进行毒素检测及培养特性检查确证试验。
（1）毒素检测：试验方法同上。 （2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板 ，分成两份，分别在35℃的需氧和厌氧 条件下培养48 h，观察生长情况及菌落 形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而 在需氧条件下不生长。
毒素检测 报告
（一）
毒素检测
增菌、产毒培养 30℃，5 d
毒素检测 报告（二）
观察生长性状， 染色镜检
分离培养
增菌产毒培养 30℃，5 d
观察菌落性状 染色镜检培养检查报告（来自）（1）、肉毒毒素检测
液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液实验 上清液及其胰酶激活处理液
分别进行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5 mL，观察4 d 注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24 h内发病、死亡。
在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。中央低 落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。
在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆盖着特有 的彩虹样薄层，但G型没有。
肉毒梭状芽孢杆菌菌落
3、肉毒梭菌的生化特性
肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株 间的差异。
表1 各型肉毒梭菌的生化反应
4、结果报告
报告(一)：检样含有某型肉毒毒素。 报告(二)：检样含有某型肉毒梭菌。 报告(三)：由样品分离的菌株为某型肉毒梭菌。
肉毒梭菌检验目标主要是毒素，不论食品中的肉毒毒素 检验还是肉毒梭菌检验，均以毒素的检测及定型试验为判定 的主要依据。
致病机理
肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末梢释放乙 酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼吸肌麻痹导致死亡。
������ 肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和合成毒剂 中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒素1克能杀死400万吨小 白鼠，一个人的致死量大概1微克左右。
肉毒中毒一年四季均可发生。美国以罐头发生中毒较多， 日本以水产品较多；我国以发酵食品（如：臭豆腐、豆瓣酱、 豆豉等）发生中毒较多。
三、检验方法
1、检验标准：GB 4789.12-2003 2、培养基和试剂 培养基： 庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。 试剂：
肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰 氏染色液。 另需实验动物（小白鼠）。
3、检验程序
检样
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以 及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一 方面做生长特性观察，同时检测肉毒 毒素。报告检样中有无肉毒梭菌以及 有何型肉毒梭菌。（有些样品如土壤、 泥沙等基本上不可能含有毒素，则应 从培养着手） ③报告(三)：欲获纯菌株，可用增菌 产毒培养物进行分离培养，对所得纯 菌株进行形态、培养特性等观察及毒 素检测，其结果可证明所得纯菌为何 型肉毒梭菌。（一般情况下，没有必 要从检样中分离纯的菌株，但研究或 特殊需要例外）
以上3支试管于30℃厌氧培养5d，若无生长，可再培养10d。培养到期， 若有生长，取培养液离心，以其上清液进行毒素检测试验，方法同上，阳性 结果证明检样中有肉毒梭菌存在。
（3）、分离培养
选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜 的加热处理）接种卵黄琼脂平板，35℃厌氧培养48 h。肉毒梭菌在卵黄 琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠 层样)薄层，但G型菌无此现象。