创伤弧菌

生物学特性：
1、形态与染色：同前。 2、生化反应：能产吲哚，发酵B一 半乳糖苷、纤维二糖、乳糖、葡萄糖、赖氨 酸脱羧酶 、鸟氨酸脱羧酶、液化明胶、苦杏仁苷、氧化酶、触酶均为阳性、 精氨酸双水解酶、硫代硫酸钠、尿素、色氨酸 、V— P试验 、肌醇、山梨醇、 鼠李糖、蔗糖、密二糖和阿拉伯糖为阴性。 3、抵抗力及药物敏感试验： 水温较高,有利于创伤弧菌生长，而在水温低 于 8℃的环境中检测不到该菌存 在。最适合该菌生长的条件为30℃，pH 7.0。可自然生长于 > 2 0 ℃，盐度 为0.7 ％ ～1.6 ％的海水中，当海水盐度超过3.8％时则不易生长。创伤弧菌 抵抗力不强，在 > 52 ℃、NaCl<0．04％或>8％ 、12％胆汁及pH<3．2的环 境中不生长，煮沸3min或120℃干式烘烤10min即可死亡 。
Vibrio vulnificus sepsis
主讲人：
内容
•Etiological features •Epidemiological Features •Clinical manifestations •Pathogenesis
•Clinical diagnosis and differential diagnosis
Epidemiological Features
• • • • • Regional distribution Seasonal distribution Source of infection and the route of infection Population susceptibility Population distribution
• 脉搏细速、心动过速，出汗、皮肤湿冷，口唇发绀、呼吸 急促，两肺可闻及干湿性啰音，少尿、无尿，巩膜皮肤黄 染，烦躁不安，严重者出现皮肤、黏膜、消化道、呼吸道 出血，昏迷等。
实验室检查
白细胞↑或↓，中性粒细胞↑，血红蛋白和血小板↓。 Cr和BUN升高↑。 PT、APTT、TT延长及肝功能损害。 血清肌酸磷酸激酶（CPK）↑。 血气分析：代谢性酸中毒，低氧血症，低碳酸血 症。 • 血液中可培养分离出VV，还可以从渗出液、脑脊 液中找到或培养出VV。应用抗菌药物后，血培养 的阳性率明显降低，而组织液或血疱液培养阳性 率仍很高。 • • • • •
生物学特性
• 4、培养特性： 创伤弧菌在需氧和厌氧条件下均能生长，在5％羊血琼脂平板上菌落呈细小 、 光滑 、边缘整齐 、 圆形微凸、湿润 、色 黄，直径 2m m～3m m，草绿色溶 血环；在 硫代硫酸 盐 一 柠檬酸盐一胆盐 一 蔗糖 (TCBS ) 琼脂上呈凸面、 平滑乳脂状的蓝绿色菌落，直径 2mm～3mm；在纤维二糖 一 多粘菌素 B一 多粘菌素E(CPC) 琼脂和纤维二糖 一 多粘菌素E(CC) 琼脂上，呈现为圆形、 扁平 、 边缘透明、带黄色晕环的黄色菌落直径1mm 一2mm；在创伤弧菌计 数 (VVE)琼脂上，菌落呈蓝绿 色；在创伤弧菌培养基 (VVM)上，呈现为扁平、 带黄色晕环的嫩黄色菌落；在创伤弧菌(VV)琼脂上， 呈浅灰色、半透明状， 中心深灰或黑色，直径2mm～4mm；在3％氯化钠三糖铁琼脂上，底层产酸 变黄不产气，不产硫化氢不变黑，斜面颜色不变或红色加深，偶尔斜面变黄。 创伤弧菌在碱性蛋白胨水中均匀混浊生长，无明显菌膜形成。加入纤维二糖 增菌效果更佳 ， Hsu等发现蛋白胨-NaCL-纤维二糖 (PNC)肉汤的增菌效果优 于APW；添加多黏菌素E的PNC肉汤不仅能抑制副溶血性弧菌和溶藻弧菌等 非目标菌的生长，还能促进低浓度创伤弧菌的生长 。
病理学特点
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致病机制研究
• VV致病机制复杂，至今尚未阐明。目前认为创伤弧菌脓 毒症是多致病因子、多途径共同作用的结果。 • VV的致病因子： • ①溶细胞素（cytolysin） • ②金属蛋白酶（VVP） • ③荚膜多糖（CPS） • ④铁过载 • ⑤脂多糖（LPS）
•
⑥其他：肠毒素、粘附因子、血凝素
目标
• 为提高创伤弧菌的分离率，根据VV本身的生物学特性， 研制一种培养液，最好能模拟体内环境，以此来增加检测 的阳性率、降低假阳性率和提高培养的稳定性。
根据多种弧菌种类的特征性菌落颜色在三种常用的培养基上确定那些不同于VV的假阳性菌落 再研制一种“triple-plating”方法利用三种组合介质可以大量减少假阳性菌落的数量
•Clinical studies and preventive treatment
Etiological features
• VV belonging to Vibrio, is mesophilic, basophils, halophilic Gram-negative bacteria, for the marine environment of normal microflora, cell length 1.42.6μm, width 0.5-0.8μm, was comma-shaped, single extreme single flagellum, no spores, the same dye particles encapsulated, sports and lively. Are conditional pathogens. Under aerobic and anaerobic conditions could grow, but the resistance is weak.
病原学快速检测技术的研究
• 传统的生化检查耗财费时，不利于创伤弧菌的早 期诊断。免疫检测技术及分子生物学技术具有快 速、特异、简单、敏感的优点。 • 一、脂肪酸气相色谱分析技术 • 二、免疫学检测技术（酶免疫测定、胶体金免疫 层析法） • 三、分子诊断技术（PCR法、基因探针技术、环 介导恒温扩增技术、变相高效液相色谱技术）
• Question： 为何慢性肝病患者的创伤弧菌 感染率和病死率特别高？
• 慢性肝病患者易患创伤弧茵脓毒症的可能机制：
(1) 门脉高压。由于解剖上分流的存在，使得细菌避开了肝脏内网状内皮细胞的 吞噬作用。动物实验表明，以创伤弧菌进行灌胃，4小时后可以在血循环中找 到细菌，提示创伤弧菌可迅速经消化道入血。这也是临床上创伤弧菌脓毒症 患者的主要感染途径。所以肝脏网状内皮细胞对细菌的吞噬作用，在防治脓 毒症的发生中具有重要作用。这一吞噬系统对革兰阴性菌感染尤为有效。 (2) 血清中铁浓度的增高。慢性肝病患者如肝硬化、病毒性肝炎等，肝脏合成铁 结合蛋白减少，造成机体内游离铁离子浓度的增高(即铁超载)。结果，一方面 会抑制吞噬细胞的吞噬能力，促进致炎因子如TNF-a，IL-10、IL-6等的释放； 另一方面，使得创伤弧菌容易从机体得到细菌生长必需的铁离子，迅速增殖 到致死浓度，诱发脓毒症。 (3) 肝病导致的胃酸缺乏或治疗药物导致的胃酸减少，增加了创伤弧菌的易感性。 长时间抗酸药物的应用，削弱胃酸保护屏障，容易感染创伤弧菌。 (4) 机体TNF-a和谷胱甘肽水平升高。 (5) ?
VV快速检测试纸条的研制:
原理：采用兔抗创伤弧菌多克隆抗体标记胶体金，以双抗体夹心法制备创伤弧菌胶体金免 疫层析试纸条，建立创伤弧菌快速检测方法。 组成：玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水纸。 结论：将试纸条插入样品溶液中，20-30min内即可显示结果，其检测灵敏度为 2×106CFU/ml；特异性检测显示试纸条与溶血性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、副溶血 弧菌等12中菌株均无交叉反应；稳定性检测表明试纸条可4℃保存4个月。
CPK在VV感染的早期诊断和预后判断中起重要的预示作用
入院时收缩压≤90mmHg、低白细胞计数、低分叶核白细胞计数、低血小板计数、 低白蛋白血症、高带状型白细胞
危险因素：出血性大疱皮损改变/坏死性筋膜炎、显著的败血症、严重的器官功能 障碍、白细胞减少、低白蛋白血症 保护因素：入院后24h内的外科干预和抗生素治疗
还有其他的治疗方法么？
环丙沙星和铁螯合剂合用在体外能有效结合铁，对抗亲铁性微生物VV的感染
用含有佐剂的重组RtxA1-C抗原接种在感染VV的小鼠体内产生强大的抗体反应和血液细菌 的大量减少，机体产生主动和被动免疫，在VV感染的干预和治疗中也许是一种有效的方法
VV免疫层析试纸条检测结果
不同浓度VV胶体金免疫层析试纸条检测结果
VV免疫层析试纸条特异性检测结果
参考文献：严智敏，郑晶，陈清.创伤弧菌快速检测试纸条的研制[J].南方医科大学学报，20反应
免疫学方法
最佳方法
？
分子生物学方法
？
传统的培养方法和不断发展的免疫、分子生物学检 测手段的结合。 增菌剂和实时荧光定量PCR的结合应用： 当样品中含有创伤弧菌时，增菌后提取的VVDNA通 过PCR成指数扩增，在反应过程中VV特异荧光特征 和靶核酸杂交，同时被Taq酶水解，把探针上的荧光 基团和淬灭基团分开，从而通过荧光增量来实时判 断VV的存在。该法检验周期短、灵敏度高，同时通 过光学系统检测荧光信号而省去了凝胶电泳的繁琐 操作，避免了实验过程中的污染，既减少了假阳性 的发生率，又缩短了检测时间。
临床特点
• Clinical manifestations：Primary sepsis, wound infections and gastroenteritis。有资料表明原发性创伤弧 菌脓毒血症出现发热伴寒战（84%）、腹泻（60%）、恶 心（55%）、痉挛性腹痛（55%）、呕吐(53%),继而出现 典型的血性大疱样皮损改变，下肢肿胀、皮肤局部瘀斑坏 死、蜂窝组织炎、坏死性筋膜炎、肌炎等。 • 该病发病急骤，病情进展迅速，24-48小时内出现MODS 的表现。
临床治疗学研究
• 抗生素：
*早期联合使用敏感的抗生素：三代头孢+喹诺 酮类、三代头孢+氨基糖苷类； *根据血液及分泌物培养结果选用抗生素。 • 外科减压清创或截肢：关键 *对坏死组织彻底清创； *必要时考虑感染肢体的截肢术； • 支持治疗： *抗休克及多个脏器功能支持 • 中草药治疗： *黄连、五倍子、丁香、石榴皮、地榆、丹参、黄芩等都 极为敏感
★创伤弧菌脓毒症的诊断★
• 2002年Morris提出创伤弧菌脓毒症临床诊断标准 主要包括：低血压、休克等脓毒症表现，典型的 大疱样皮损改变，生食海鲜史，慢性肝病及免疫 功能不全等基础疾病史。
参考文献：Morris JG."Non-cholear" Vibrio sepsis[M]//Blaser MJ,Smith PD,Ravdin JI,et al.Infections of the gastrointestinal tract.Philadelphia:Lippincott,Williams & Wilkins,2002:167-169.
(5):肠道菌群的失调。 正常肠道菌群以双歧杆菌、大肠杆菌、粪肠球菌、类杆菌等专性厌氧菌为主。 双歧杆菌和乳酸菌等益生菌可促进厌氧革兰阳性菌的生长，抑制革兰阴性菌 的生长，并可增强宿主吞噬细胞的活性，促进IgA分泌,从而增强细胞免疫功 能。 慢性肝病患者均有不同程度的肠道菌群失调，主要表现为双歧杆菌、乳杆菌 等数量减少，而革兰阴性菌等机会致病菌过度生长，其死亡后释放大量内毒 素，内毒素的主要成分为脂多糖(LPS）。而且患者消化道运动会减弱, 抗体、 溶菌酶等分泌减少，这更有利于细菌生长，并易出现细菌易位 。 当肠道菌群紊乱时,肠黏膜细胞之间紧密连接下降、通透性增高,使肠黏膜的屏 障功能减弱。
鉴别诊断
• 药疹 • 中毒性表皮坏死松解症
• 血管炎
• 下肢血栓性疾病 • 链球菌中毒性休克综合征（STSS）
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链球菌中毒性休克综合征：蜂窝织炎由链球菌感染引起，患者常有足癣感染 或外伤、溃疡等病史，下肢皮疹为略高于皮面的水肿性红斑，边界清楚，皮 肤表面紧张而光亮、发热，可出现大小不等的溃疡创面，水疱、红斑向周围 扩散的同时，中央部可消退呈暗红色，可伴有脱皮结痂。全身症状可先出现 发热、胃寒、关节酸痛等。