蝉拟青霉中虫草素提取工艺研究
虫草素提取工艺的优化
虫草素提取工艺的优化虫草素，又称冬虫夏草素，是一种珍贵的中草药成分，具有抗炎、抗氧化、免疫调节等多种生物活性。
虫草素的提取工艺对其品质和产量具有重要影响。
本文将探讨虫草素提取工艺的优化方法，以期提高虫草素的提取效率和纯度。
一、提取溶剂的选择虫草素是一种多环结构天然产物，具有较强的极性。
因此，在虫草素提取过程中，选择合适的溶剂对提取效果至关重要。
常用的溶剂包括乙醇、丙酮、醚类等。
经实验比较，乙醇是一种较为理想的提取溶剂，既具有良好的溶解性，又能保持虫草素的化学稳定性。
二、提取温度的控制提取温度是影响虫草素提取效果的重要因素之一。
一般来说，提取温度越高，虫草素的提取效率越高。
但过高的温度也会导致虫草素的分解，从而降低提取效果。
因此，需要在提取过程中控制合适的温度，一般在60-80摄氏度范围内进行提取。
三、提取时间的控制虫草素的提取过程是一个动态平衡的过程，提取时间的长短对提取效果有着直接影响。
一般来说，提取时间越长，虫草素的提取效果越好。
但过长的提取时间会导致其他杂质的提取，从而影响虫草素的纯度。
因此，需要在实际操作中选择合适的提取时间，一般在6-8小时为宜。
四、提取pH值的调控虫草素的溶解度随pH值的变化而变化，提取过程中合适的pH值对提取效果也有一定影响。
一般来说，虫草素在中性或弱碱性条件下的溶解度较高。
因此，在提取过程中，可以通过调节提取液的pH 值来增加虫草素的溶解度，提高提取效果。
五、提取工艺的优化除了以上几个方面的优化外，还可以通过优化提取工艺来提高虫草素的提取效果。
例如，可以采用超声波辅助提取、微波辅助提取等新型技术，提高虫草素的提取效率。
同时，还可以通过反复提取、浸提、萃取等多种工艺组合，提高虫草素的产量和纯度。
虫草素提取工艺的优化是提高虫草素提取效果的重要途径。
通过选择合适的提取溶剂、控制合适的提取温度和时间、调控提取液的pH 值以及优化提取工艺等方法，可以提高虫草素的提取效率和纯度，从而提高虫草素的应用价值。
虫草素的研究开发现状与思考
M ycosystema菌 物 学 报15 March 2011, 30(2): 180-190jwxt@ISSN1672-6472 CN11-5180Q©2011 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.虫草素的研究开发现状与思考杨涛1,2 董彩虹1*1中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学重点实验室 北京 1001012中国科学院研究生院生命科学学院 北京 100049摘 要：虫草素是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素，具有抑菌、抗肿瘤、抗炎等非常广谱的生物学活性，目前已经成为一个研究热点。
对虫草素的菌株来源、生物合成、提取纯化、分子生物学研究现状等方面进行了总结，对有关专利进行了评价和分析，提出从种质资源入手拓宽虫草素来源，优化虫草素的提取纯化方法，深入研究其生物合成途径，并呼吁重视真菌研究中所用材料的科学名称。
关键词：虫草素，蛹虫草，纯化，产率，开发Cordycepin research and exploitation: progress and problemsYANG Tao1, 2 DONG Cai-Hong1*1Key Laboratory of Systematic Mycology and Lichenology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China2School of Life Sciences, Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, ChinaAbstract: Cordycepin, the first nucleoside antibiotic isolated from Fungi, has been a hotspot nowadays due to a variety of bio-activities, such as antimicrobial, anti-tumor, anti-inflammatory activities and so on. The previous studies on cordycepin, including the fungal sources, extraction, purification and molecular biology, were summarized in the present paper. The patents on cordycepin both at home and abroad have also been analyzed and evaluated. It was suggested that broadening the fungal strain sources, optimizing the method of extraction and purification as well as deepening the research on biosynthesis pathway are useful to overcome the bottleneck in cordycepin production. In addition,the importance of the scientific names used in the study of mycology was emphasized.Key words: cordycepin, Cordyceps militaris, purification, productivity, exploitation*Corresponding author. E-mail: dongch@收稿日期: 2010-11-28, 接受日期: 2011-02-23Vol.30 No.2 181菌物学报虫草素（cordycepin ）又称虫草菌素、蛹虫草菌素、3′-脱氧腺苷（3′-deoxyadenosine ），是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素。
虫草素的分离纯化研究进展
2019年第2020年第专dible 虫草素学名为3'-脱氧腺苷，分子式为C 10H 13N 5O 3，可以溶于水、乙醇、甲醇，但不溶于苯、乙醚等溶剂，属于嘌呤类生物碱。
1951年，CUNNINGHAM 等[1]从蛹虫草的培养滤液中，用离子交换树脂柱和活性炭柱层析法首次分离虫草素。
虫草素具有抑菌[2]、抗病毒[3-4]、调节机体免疫力[5]、抗恶性肿瘤[6]与治疗白血病[7]等多种功效。
虫草素的研究已成为生物医药及保健食品等领域中一个热点，尤其在临床抗肿瘤方面更为突出。
YOSHIKAWA 等[8]深入研究了虫草素对接种B16-BL6黑色素瘤细胞小鼠的影响，结果表明，将15mg /kg 的虫草素通过灌胃给药，可以有效抑制瘤块的生长，抑制率高达36%，而且并未在体内引发毒性反应，说明虫草素作为肿瘤药物制剂很安全。
丁蔚等[9]对40只小鼠做了对照试验，结果表明，虫草素可能通过PI3K/AKT/mTOR 通路有效抑制炎症反应，对亚硝基二乙基胺诱导的小鼠出现的原发性肝癌现象表现出了明显的防护作用。
LEE 等[10]进行了虫草素对促进人类结肠癌细胞凋亡的研究，结果显示，在虫草素治疗后的18h ，p53、Bax 、DR3、caspase-8、caspase -1、裂解的caspase-3、裂解的PARP 表达增加，表明虫草素可以诱导人类结肠癌细胞HT-29凋亡。
目前，虫草素主要通过以下几个方面获取：一是从蛹虫草或九州虫草等天然虫草的菌虫复合体中直接提取[11]；二是从固体或液体发酵培养物中提取[12]；三是人工化学合成，但化学合成工艺复杂，且投入的设备和化学试剂等成本相对昂贵[13]，产率也比较低[14]，所以很难实现大规模生产。
虫草素的广泛应用及在现代医药学上的卓著功效，使之价格越来越高。
当前，市场价格已达上千元每克（纯度98%以上）。
正因虫草素的贵而稀，其提取和分离纯化的研究成为当今的热点。
1虫草素的提取方法目前，虫草素较好的提取方法有微波辅助法、超声辅助法、超临界萃取法和加速溶剂萃取法等。
蝉拟青霉多糖的提取纯化工艺研究
蝉拟青霉多糖的提取纯化工艺研究
蔡菊芬;芦柏震;侯桂兰
【期刊名称】《中华中医药学刊》
【年(卷),期】2007(25)10
【摘要】目的:确定蝉拟青霉多糖的最佳提取纯化工艺。
方法:用苯酚—硫酸紫外分光光度法测定蝉拟青霉多糖含量,采用正交实验设计,以多糖含量为指标,优化蝉拟青霉多糖水提取和醇沉淀工艺。
结果:蝉拟青霉多糖水提取最佳条件:加水量1:7,提取时间1h,提取次数3次;醇沉淀最佳条件:水提液浓度0.15g生药/mL,醇浓度60%,醇沉时间72h。
结论:优化的蝉拟青霉多糖水提醇沉工艺简便、合理、可行。
【总页数】3页(P2069-2071)
【关键词】紫外分光光度法;蝉拟青霉多糖;提取;纯化
【作者】蔡菊芬;芦柏震;侯桂兰
【作者单位】浙江省肿瘤医院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.淡紫拟青霉多糖提取工艺研究 [J], 刘青娥
2.蝉拟青霉多糖的纯化工艺 [J], 刘芸;谭艾娟;黄锴;王珂佳
3.酶法提取蝉拟青霉多糖的研究 [J], 刘芸;谭艾娟;吕世明
4.利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺 [J], 熊中奎;金丽琴;吕建新
5.利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺 [J], 熊中奎;金丽琴;吕建新
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利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺
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虫草素的研究应用进展_汪泰初
《现代农业科技》2009年第16期早在1950，Cuningham等从蛹虫草（Cordyceps militaris）的原浆液中分离到一种腺苷类活性物质，命名为cordycepin，它是由腺苷和有碳支键的脱氧戊糖组成的一种核苷酸，被称为3’-脱氧腺苷（3’-deoxyadenosine，3’-dA），是第1个从真菌中分离出来的核苷类抗生素[1]。
后来该物质被证实是我国传统中药冬虫夏草（C.sinensis）的有效成分，其中文名称为虫草素，又称蛹虫草菌素、虫草菌素。
其分子式为C10H13N5O3，分子量为251D，熔点230~231℃，溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿，紫外光的最大吸收波长为259nm[2]。
1虫草素的产生蛹虫草、冬虫夏草、香棒虫草（C.barnessii）等虫草产虫草素。
野生虫草生长环境非常特殊，多生于高寒山区、草原、河谷中，数量非常稀少，再加上当前人们对虫草的需求增加，对虫草的采集挖掘力度加大，导致虫草资源枯竭，并对生态环境造成极大的破坏。
近年来，国内外不少科研生产单位开发以人工培养生产虫草的方法。
虫草素的存在与否因虫草及其无性型菌种不同而异，目前研究多集中于蛹虫草，冬虫夏草亦有相关报道。
Kaczha等1964年就已经从无冠构巢曲霉（Spergillus nidulans）中分离出虫草素，但对于无冠构巢曲霉产虫草菌素能力的菌株差别，培养条件的影响等并未进行进一步的研究[3]。
通过固体、液体培养蛹虫草来生产虫草素，已取得较好效果；目前有些科研单位用蚕蛹培育冬虫夏草、蛹虫草，在江苏、浙江及广东均取得成功，蛹虫草的药用效果及滋补作用已得到食品及卫生部门的肯定，柞蚕蛹虫草在吉林辽宁等省均有生产，其中子实体的虫草素与天然虫草比，略有优胜[4]。
安徽农业大学在虫草研究中发现，一些虫草的无性型产虫草素，像细脚拟青霉（Paecilomyces tenuipes）、轮枝孢（Vertici-llium）等，但产量不高[5]。
蝉拟青霉杀虫作用的研究的开题报告
蝉拟青霉杀虫作用的研究的开题报告一、研究背景青霉菌是一种常见的真菌，已被广泛应用于农药、医药、食品等领域。
其代表性代谢产物――青霉素被称为“抗生素之王”，已拯救了无数人类的生命。
除此之外，青霉菌还是一种有着广泛杀虫活性的生物制剂，已被广泛应用于害虫防治领域。
而近年来，研究者们发现，在青霉菌中还存在其他具有杀虫作用的化合物，如蝉拟青霉素。
蝉是夏季常见的昆虫，其繁殖能力极强，数量也较为庞大。
蝉对农作物的危害非常严重，经常发生大面积的蝉害，给农民带来巨大的经济损失。
目前，对于蝉的防治方法主要是采用化学合成农药，但其对生态环境的影响较大，还存在一定的安全隐患。
因此，寻找一种高效、绿色的蝉害防治方法变得极为重要。
二、研究目的本研究旨在探究蝉拟青霉素的杀虫作用，为其在蝉害防治领域的应用提供理论基础和技术支持。
具体包括：1、筛选蝉拟青霉素对蝉的杀虫作用，确定其最佳使用浓度和时间。
2、研究蝉拟青霉素对农作物的安全性及不良反应。
3、对蝉拟青霉素进行物理、化学性质及结构鉴定，进一步了解其杀虫机理。
三、研究内容本研究将执行以下任务：1、采集蝉样本，以实验室蝉为基础，构建并优化蝉拟青霉素的处理方法。
2、通过药液喷雾、接触、食饵毒杀等方式，探究不同浓度蝉拟青霉素的杀虫效果，确定其最佳使用浓度和时间。
3、对蝉拟青霉素进行毒理学安全性评估，研究其对目标农作物、作物用地土壤的影响。
4、运用化学分析技术，对蝉拟青霉素进行结构鉴定，探究其杀虫机理。
四、研究意义本研究将进一步完善蝉害防治技术体系，提高农作物生产的质量和效益，并为推广“绿色防治”理念提供技术支持。
同时，为生物制剂在农业领域的应用提供了新的思路和方法，为推动农业可持续发展作出了贡献。
五、研究方法1、实验室育成蝉样本，制备蝉拟青霉素药液。
2、采用药液喷雾、接触、食饵毒杀等方式进行杀虫实验，并对结果进行统计分析。
3、采用体外毒理实验对蝉拟青霉素的安全性进行评估，并运用现代分析方法对样品进行测试分析。
虫草素提取工艺的优化
虫草素提取工艺的优化
虫草素是一种天然的生物活性物质，具有广泛的药用价值。
虫草素的提取工艺对于其药用价值的发挥具有重要的影响。
本文将从虫草素提取工艺的优化方面进行探讨。
虫草素的提取工艺主要包括原料处理、提取溶剂的选择、提取时间、提取温度、提取压力等方面。
其中，原料处理是提取工艺的关键环节。
在原料处理过程中，应注意去除杂质和不良部分，保证原料的纯度和质量。
此外，还应注意原料的粉碎程度，以便提高提取效率。
提取溶剂的选择也是提取工艺的重要环节。
常用的提取溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等。
不同的提取溶剂对虫草素的提取效率和纯度有着不同的影响。
因此，在选择提取溶剂时，应根据实际情况进行选择。
提取时间、提取温度、提取压力等因素也对虫草素的提取效率和纯度有着重要的影响。
在提取时间方面，应根据实际情况进行调整，以保证提取效率和纯度的最大化。
在提取温度方面，应注意控制温度，避免过高或过低的温度对虫草素的影响。
在提取压力方面，应根据实际情况进行调整，以保证提取效率和纯度的最大化。
虫草素的提取工艺是一个复杂的过程，需要综合考虑多个因素。
在实际操作中，应根据实际情况进行调整，以保证提取效率和纯度的最大化。
通过对虫草素提取工艺的优化，可以提高虫草素的药用价
值，为人类健康事业做出更大的贡献。
蝉拟青霉高产虫草素菌株液体培养工艺的研究
１ １１ 菌 种 ． ．
蝉 花无性 型 ～蝉 拟青 霉 Ｒ Ｅ １ ８ Ｃ Ｆ ０ １由安 徽农 业 大学微 生 物 防治省 级重 点 实验 室提 供．
１ １ ２ 培 养基 ： 白胨 １ ， ． ． ． 蛋 酵母 粉 １ ， 萄糖 ４／， 馏 水定 容． 葡 ６蒸 ９
ＲＣ Ｆ ０ １最佳 液体 培 养 基 配 方 为 ： 皮 ３ ， Ｅ １８ 麸 酵母 粉 ４ ， 氨 酸 ０ １ ， 丝 ． ５ ＫＨｚ Ｏ ． ５ ， — Ｐ ０ ０ Ｍｇ Ｓ ・ Ｈ。 ． １ ， ａ １ ０ ０ ； 佳培 养条 件 为 ： 始 ｐ 值 ６ ０ 装 液量 ８ ／ ５ Ｏ ７ Ｏ ０ ０ Ｇ Ｇ 。 ． ２ 最 起 Ｈ ．， ｏ ２ ｏ ｍＬ （ Ｖ） Ｖ／ ，
【 关键 词】 蝉拟 青霉 ； 虫草素 ； 液体 培养
【 中图分类 号】 ￥ ７ 【 ４ ６ 文献 标识 码】 Ａ 【 文章编 号】 １７ —７ ４ ２ ０ ）００ ２ —８ ６ ３０ ０ （０ ７ １ —０ ３０
蝉 拟青 霉 （ ｅｉ ｍｙ ｅ ｉ ｄ ｅ ， 名 蝉 棒 束 孢 菌 （ ） Ｉａ ｉ ｉａ ａ ） 是 我 国 传 统 中 药 材 蝉 花 Ｐａｃｌ ｃｓｃ ａ ａ ） 又 ｏ ｃ 霉 （ ｓｒａ ｃｃ ｄ ｅ ，
（ ｏｄ ｃｐ ｂｌＪ ｒ ） Ｃ ｒ ｙ ｅ ｓ ｏｏｉ’ ａ 的无 性型 菌株 ， 名 贵 中药 冬 虫 夏 草 的无 性 型 为 同属 真 菌 ． 拟 青 霉 的人 工 培养 物 ｓ ｅ 与 蝉
（ 菌丝 体）具有 镇 静 、 痛 、 镇 抗辐 射 、 惊厥 和解 热 作 用 抗
等 ． 。
接种 量 ５ （ Ｖ） 培养 温度 ２ ℃ ， Ｖ／ ， ５ 摇床 转速 １ ０ｒｍｉ， ３ ／ ｎ 培养 时间 ４ ， 此条 件 下培养 其 虫草 素含 ｄ在
正交设计优选蛹草拟青霉中虫草素和虫草多糖的提取工艺
正交设计优选蛹草拟青霉中虫草素和虫草多糖的提取工艺黄婷婷;马云淑;阳丹;王维丽;谭麒冉【摘要】目的：采用正交设计优化蛹草拟青霉菌丝体中虫草素和虫草多糖的提取工艺。
方法：建立高效液相色谱测定指标成分虫草素含量的方法，采用正交试验法考察醇浓度、加醇量、提取次数与时间的组合3个因素对虫草素乙醇提取率的影响。
醇提后残渣以水提取多糖，采用苯酚-浓硫酸比色法在490 nm 处测定虫草多糖的含量，以单因素法筛选多糖提取工艺。
结果：HPLC 色谱条件下精密度的RSD 为0.30％，稳定性的 RSD 为1.27％，重复性的RSD 为2.93％。
以乙醇浓度为90％，加醇量为10倍量，提取3次，每次1 h 虫草素的提取率最高；而以乙醇浓度为95％，加醇量为6倍量，提取3次，每次1 h 提取虫草素后的残渣再以水提取，虫草多糖得率最高。
结论：所优化的提取工艺虫草素和虫草多糖提取率均较高，采用的含量测定方法稳定可靠。
%Objective:To optimize the extraction processes of cordycepin and cordycepic polysaccharides from mycelia of Paecilomyces militaris by using Orthogonal design.Methods:A HPLC method was established to determine the content of cordycepin which was taken as indexes,and orthogonal test method was used to investigate three factors of alcohol concentration,alcohol volume ratio,and the combination of extraction times with time to influence on the extraction efficiency of cordycepin.Detection was performed at wavelength of 260 nm.The column temperature was 30 ℃ and the injection volume was 1 0 μL.After extracted by alcohol,the residue of mycelia was dealt with water to extracted cordycepic polysaccharides, and colorimetric method by using phenol—concentrated sulfuric acid as chromogenic agent was usedto determine the content of cordycepic polysaccharides in the extract under 490 nm.Results:Under the condition of HPLC,the precision of RSD was 0.30%,the stability of RSD was 1 .27% and the RSD of reproducibility was 2.93%.The results showed the extract ratio of cordycepin was the highest with the process parameters of 90% alcohol,1 0 times of alcohol volume ratio,3 times with 1 h for every time.And the water extract ratio of Cordyceps polysaccharide in the mycelia residue was the highest after cordycepin was extracted from mycelia with 95% alcohol,6 times of alcohol volume ratio,3 times,with 1 h each time.Conclusion:The extraction efficiency of cordycepin and Cordyceps Polysaccharide was high under the optimum process,and the methods of the content determination were stabile and reliable.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2016(018)002【总页数】5页(P203-207)【关键词】蛹草拟青霉菌丝体;正交试验;虫草素;虫草多糖;高效液相色谱法【作者】黄婷婷;马云淑;阳丹;王维丽;谭麒冉【作者单位】云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500【正文语种】中文蛹草拟青霉(Paecilomyces mil itaris Liang sp.nov.)是从蛹虫草Cordyceps milltaris(ex Fr)Link中分离而得的一种真菌，现多用作蛹虫草的代用品。
蝉拟青霉高产虫草素菌株液体培养工艺的研究
第22卷第10期徐州工程学院学报2007年10月Vol.22No.10Journal of Xuzhou Institute of Technology OCT12007蝉拟青霉高产虫草素菌株液体培养工艺的研究李瑞雪,胡 飞,陈安徽,樊美珍(安徽农业大学, 安徽 合肥 230036) 【摘 要】 为提高蝉拟青霉RCEF1081虫草素的代谢量,以虫草素含量为检测指标,用高效液相色谱法作为检测方法,通过正交试验对其高产虫草素的液体培养工艺进行优化.结果表明菌株RCEF1081最佳液体培养基配方为:麸皮3%,酵母粉4%,丝氨酸0.15%,KH2PO40.05%,Mg2 SO4・7H2O0.01%,CaCl20.02%;最佳培养条件为:起始p H值6.0,装液量80/250mL(V/V),接种量5%(V/V),培养温度25℃,摇床转速130r/min,培养时间4d,在此条件下培养其虫草素含量最高,可达2.7720mg/g,比优化前提高了144%,经统计学分析,差异极显著(P<0.01).【关键词】 蝉拟青霉;虫草素;液体培养【中图分类号】 S476 【文献标识码】A【文章编号】167320704(2007)1020023208蝉拟青霉(Paecilom yces cicadae),又名蝉棒束孢菌(霉)(Isari a cicadae),是我国传统中药材蝉花(Cor d yce ps soboli f era)的无性型菌株,与名贵中药冬虫夏草的无性型为同属真菌.蝉拟青霉的人工培养物(菌丝体)具有镇静、镇痛、抗辐射、抗惊厥和解热作用[1-2],而且蝉拟青霉对机体的毒性甚微.其主要化学成分与天然冬虫夏草相似,有虫草多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸、必需氨基酸和不饱和脂肪酸等[3-4].虫草素是虫草属多种真菌产生的一种重要的核苷类次生代谢产物,通常作为抗生素使用,具有广谱的抗菌活性.经研究表明虫草素具有抑制肿瘤、抗病毒、免疫调节、降血糖和抑制mRNA翻译的作用,其中治疗白血病已进入II期临床试验[5-8],除其药用外又具有滋补、保健作用,越来越受到人们的广泛重视.冬虫夏草(C.si nensis)、蛹虫草(it aris)等多种虫草属真菌均产虫草素,但产量较低,且由于虫草具有严格的寄生性和特殊的生长条件,产量相当有限.目前,人们主要是通过虫草的人工培养来获取虫草素.其中,多利用蛹虫草及其无性型蛹草拟青霉(itaris)[9-10],有文献报道其虫草素含量相对较高,但也仅为1.27mg/ g[9],且其生长周期较长.要充分利用虫草素这一有价值的资源,就必须找出高产虫草素的菌株并寻求提高产量的有效途径.在较大规模的活性成分筛选中,笔者首次发现在蝉拟青霉的人工培养菌丝体中含有虫草素,并从众多菌株中筛选得出一株虫草素含量相对较高的菌株-RCEF1081.本研究对其液体培养工艺进行了研究,来提高虫草素的产量,以期为虫草素的生产利用及其相关产品的开发提供参考.1 材料和方法1.1 材料1.1.1 菌种 蝉花无性型-蝉拟青霉RCEF1081由安徽农业大学微生物防治省级重点实验室提供.1.1.2 培养基1.1.2.1 优化前培养基:蛋白胨1%,酵母粉1%,葡萄糖4%,蒸馏水定容.收稿日期:2007209217基金项目:国家自然科学基金项目(30570004)、(30570189)和安徽高校省级自然科学研究重点项目(TD200708)资助.作者简介:李瑞雪(19602),女,山东济宁人,硕士研究生,主要从事微生物与生物制药研究.通讯作者:樊美珍(1944-),女,陕西西安人,教授,博士生导师,主要从事虫生真菌的研究.1.1.2.2 碳源优化基础培养基:蛋白胨1%,酵母粉1%,蒸馏水定容.1.1.2.3 氮源优化基础培养基:葡萄糖4%,蒸馏水定容.1.1.3 试剂虫草素(Cor d yce pi n)标准品购于美国Sigma公司,甲醇为国产H PL C级,碳、氮源及无机盐等生物试剂为国产化学纯,其它试剂均为国产分析纯.1.1.4 仪器HZP-250型全温振荡培养箱(上海精宏实验设备有限公司),电热鼓风干燥箱(南京实验仪器厂), 0.22μm过滤器(上海半岛实业有限公司),梅特勒电子天平(上海沪西分析仪器厂),KH5200DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器公司),ZK15型电热超速离心机(Sigma公司),微量注射器(上海安亭微量进样器厂),高效液相色谱系统(YOUN G L IN化学工作站Autochro).1.2 方法1.2.1 碳源筛选试验供试碳源:白砂糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、甘油、麸皮、玉米粉(其中麸皮、玉米粉煮沸20min,两层纱布过滤).将供试碳源按4%的比例分别与碳源优化基础培养基搭配,250ml三角瓶装入100ml培养基,按7%接种量分别接种,于25℃,140rp m的振荡培养箱培养5d,用H PL C法测定其虫草素含量.1.2.2 氮源筛选试验供试氮源:蛋白胨、酵母粉、牛肉膏、蚕蛹粉、豆粕、黄豆粉、NaNO3、(N H4)2SO4、N H4NO3(其中蚕蛹粉、豆粕、黄豆粉煮沸20min,两层纱布过滤).含3%氮的各供试氮源(不同氮源全氮含量如表1)分别与氮源优化基础培养基搭配,其它同上.表1 不同氮源全氮含量Table1 Total nitrogen contents of different nitrogenous sources氮源种类全氮含量(%)制1L培养基所需量(g)蛋白胨15.2110.00黄豆粉 6.5223.33酵母粉 5.4427.96蚕蛹粉8.2818.37牛肉膏 6.1824.61豆 粕7.6519.88NaNO316.479.23(N H4)2SO421.217.17N H4NO335.00 4.351.2.3 培养基浓度配比正交试验为了分析培养基中碳源、氮源和营养生长因子等各成分参数相互交叉影响,采用DPS统计分析软件设计了一个4因素3水平的正交表L9(34),各因素、水平如表2.表2 正交因素水平表Table2 Lists of factor and level indices for orthogonal analysis of mineral compounds水平A麸皮(%)B酵母粉(%)C丝氨酸(%)D复合VB(%)1 2.00 2.00 1.000.002 3.00 3.00 1.500.153 4.00 4.00 2.000.301.2.4 无机盐正交试验在1.1.2.1基础培养基中,针对K2H PO4、KH2PO4、CaCl2、FeSO4.7H2O、MgSO4.7H2O、MnSO4.H2O 徐州工程学院学报 2007年第10期六种无机盐采用DPS统计分析软件设计设计了一个6因素3水平的正交表L18(36),各因素、水平如表3.表3 正交因素水平表Table3 Lists of factor and level indices for orthogonal analysis of RCEF1081medium ingredients水平AK2HPO4(%)BKH2PO4(%)CCaCl2(%)DFeSOM4.7H2O(%)EMgSO4.7H2O(%)FMnSO4.H2O(%)100000020.0500.0500.0100.0050.0100.00530.1000.1000.0200.0100.0200.0101.2.5 非营养性因素对RCEF1081虫草素产量的影响1.2.5.1 培养时间对RCEF1081虫草素产量的影响利用1.1.2.1基础培养基培养,自培养第一天起,每隔24h测定一次RCEF1081虫草素产量,共8天.1.2.5.2 不同起始p H值对RCEF1081虫草素产量的影响利用1.1.2.1基础培养基培养,分别测定起始p H值为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0条件下RCEF1081虫草素产量.1.2.5.3 种龄、接种量、装液量及培养箱的转速对RCEF1081虫草素产量的影响为综合确定种龄、装液量、接种量和培养箱转速对RCEF1081虫草素产量的影响,利用1.1.2.1基础培养基,采用DPS统计分析软件设计了一个4因素3水平的正交表L9(34),各因素、水平如表4.表4 正交因素水平表Table4 Lists of factor and level indices for orthogonal analysis of non-nutrient factors水平A种龄dB装液量mlC接种量%D转速r/min12805130231001014034120151501.2.6 样品溶液的制备用布氏漏斗真空抽滤摇瓶发酵醪,收集菌丝体送入55℃电热鼓风干燥箱中烘干备用.准确称取RCEF1081菌丝体烘干样品1.0g,置于25mL容量瓶,加入75%乙醇20mL,超声提取60min,用75%乙醇定容至刻度,摇匀.取上清液10000r/min离心15min,取上清液即为核苷类物质的提取液.1.2.7 虫草素含量的检测虫草素的含量通过HPL C法测定.色谱条件:Waters Sp herisorb5μm ODS2(4.6×250mm)色谱柱;检测器:YOUN G L IN UV730D,韩国生产;泵:YOUN G L IN SP930高压泵,韩国生产;流动相:0.01M磷酸二氢钾溶液-甲醇(85:15);流速:1.0mL/min;UV检测波长:260nm;进样量:20μL;柱温:室温.精确称取虫草素标准品10mg,置于10mL的容量瓶,用75%乙醇溶解、摇匀,并定容至刻度,得标准品溶液1mg/mL.用75%乙醇稀释,使标准品浓度分别为100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL,测定.回归方程为:Y=16.214x-61.232,R=0.9999,线形范围0.0050-0.1250mg/mL.取1.2.1中RCEF1081提取液用75%乙醇适当稀释,经0.22μm微孔过滤膜过滤后,吸取20μL进样,外标法测峰面积计算虫草素含量.2 结果与分析2.1 碳、氮源筛选结果比较了8种不同碳源对RCEF1081虫草素产量的影响,结果见图1.由图1可知,培养液各种碳源中,以麸皮作为碳源时RCEF1081虫草素含量最高,达2.3224mg/g,其余依次为葡萄糖、麦芽糖、白砂糖、蔗糖、玉米粉、甘油、乳糖.同时麸皮作为碳源时生物量也较高,达1.2186g/100mL,略低于玉米粉、甘油和白砂糖,使李瑞雪,等:蝉拟青霉高产虫草素菌株液体培养工艺的研究得RCEF1081虫草素总产量最高,从生产成本考虑,麸皮价格也不高,故确定麸皮为RCEF1081液体培养最佳碳源.图1 不同碳源对RCEF1081 图2 不同氮源对RCEF1081虫草素含量的影响 虫草素含量的影响Fig.1 Effect of carbon sources Fig.2 Effect of nitrogen sources on cordycepin production of RCEF1081 on cordycepin production of RCEF1081从图2可以看出,氮源不同对RCEF1081虫草素含量有较大影响,其中以酵母粉作氮源时其虫草素含量最高,为2.4995mg/g ,远高于其它8种氮源,故虽其生物量略低,但其虫草素总产量仍最高,因此确定酵母粉为RCEF1081液体培养最佳氮源.另外豆粕作氮源虫草素含量也较高,黄豆粉作氮源生物量最高,使得两者虫草素总产量也较高,故从降低生产成本考虑也可用豆粕和黄豆粉作氮源.试验还发现无机氮源不利于RCEF1081虫草素的积累.2.2 培养基成分的确定从表5、6直观及方差分析结果可以看出,各因素对RCEF1081虫草素产量的影响程度由大到小依次为D 、C 、B 、A 因素,其中D 、C 因素有极显著意义(P <0.01),B 、A 因素有显著性意义(P <0.05).根据各因素k 的变化率可以看出各因素的最佳因素搭配为D 1C 2B 3A 2,即以虫草素产量为指标,RCEF1081液体培养的最佳培养基配方为:麸皮3%,酵母粉4%,丝氨酸0.15%.表5 以虫草素含量为指标的正交表及直观分析结果Table 5 The orthogonal table and objective analysis of cordycepin production试验号A B C D 虫草素含量(%)重复1重复2重复3平均虫草素含量(%)11111 1.74 2.06 1.78 1.86±0.1721222 1.89 1.96 1.87 1.91±0.05313330.690.340.530.52±0.1842123 1.160.92 1.08 1.05±0.1252231 1.44 1.13 1.35 1.31±0.1662312 2.20 1.93 1.97 2.03±0.14731320.440.650.590.56±0.11832130.600.450.390.48±0.1193321 2.182.282.272.24±0.05K112.9810.7613.2416.75K213.8612.1816.4114.85K39.9014.957.20 6.38k1 1.48 1.17 1.51 1.82k2 1.61 1.29 1.91 1.58k3 1.13 1.610.820.69R0.390.480.991.23徐州工程学院学报 2007年第10期表6 虫草素含量方差分析结果(完全随机模型)Table6 Variance analysis of cordycepin production(total random model)方差来源Variance source平方和Mean deviationsquare sum自由度Degree offreedom均方Mean squareF值F value显著水平A0.7904220.4015122.836183B 1.0328720.5202932.223843C 4.427002 2.29916125.6202533D 6.285692 3.12954181.0306833e0.33126180.01738 注:F0.01(2,2)=99.0;F0.05(2,2)=19.0;F0.1(2,2)=9.0;e为误差;3显著;33极显著.Notes:F0.01(2,2)=99.0;F0.05(2,2)=19.0;F0.1(2,2)=9.0;e stands for error;3means significance;33means extreme significance.2.3 无机盐的选择无机盐作为微生物生理活性作用的调节物对RCEF1081产虫草素有较大的影响.从表7、8直观及方差分析结果可知:各因素对RCEF1081虫草素产量的影响程度由大到小依次为F、B、D、C、E、A因素,其中F、B、D、C因素对虫草素的积累有极显著的意义(P<0.01),E因素有显著意义(P<0.05),A因素无显著意义;说明对虫草素产量影响程度依次为MnSO4.H2O、KH2PO4、FeSO4.7H2O、CaCl2、MgSO4・7H2O及K2HPO4,其中MnSO4.H2O、KH2PO4、FeSO47H2O、CaCl2为主效因素.根据各因素k的变化率可以看出各因素的最佳因素搭配为F1B2D1C2E3A3,即使用0.05%KH2PO4、0.01%MgSO4・7H2O、0.02%CaCl2可有效促进RCEF1081虫草素的生成.表7 以虫草素含量为指标的正交表及直观分析结果Table7 The orthogonal table and objective analysis of cordycepin production试验号A B C D E F虫草素含量(%)重复1重复2重复3平均虫草素含量(%)12212230.930.860.900.90±0.03 2133222 1.47 1.38 1.39 1.41±0.05 3311233 1.09 1.30 1.21 1.20±0.11 4313212 1.03 1.24 1.14 1.14±0.11 5212332 1.100.99 1.04 1.05±0.06 6121332 1.24 1.30 1.27 1.27±0.03 71121230.990.99 1.02 1.00±0.02 8213321 1.21 1.26 1.24 1.24±0.02 9123313 1.29 1.25 1.27 1.27±0.02 10332313 1.030.980.98 1.00±0.02 11231112 1.41 1.37 1.39 1.39±0.02 12222211 2.27 2.30 2.31 2.29±0.03 13323131 2.25 2.32 2.29 2.29±0.15 14331321 1.160.870.98 1.00±0.03 15111111 1.69 1.68 1.63 1.67±0.14 16322122 2.25 2.17 2.19 2.20±0.04 17132231 1.66 1.64 1.59 1.63±0.03 18233133 1.39 1.33 1.40 1.37±0.04 K124.9522.5622.4930.7126.4831.31K225.9933.7228.9428.2824.4727.93K326.7024.3526.3421.2826.6321.01k1 1.41 1.22 1.28 1.67 1.50 1.70k2 1.51 1.79 1.68 1.50 1.42 1.48k3 1.53 1.31 1.51 1.15 1.53 1.13R0.100.540.310.570.180.62李瑞雪,等:蝉拟青霉高产虫草素菌株液体培养工艺的研究表8 虫草素含量方差分析结果(完全随机模型)Table 8 Variance analysis of cordycepin production (total random model )方差来源Variance source平方和Mean deviation square sum 自由度Degree of freedom均方Mean square F 值F value 显著水平A 0.1205920.0612617.38536-B 2.518472 1.26863392.082533C 0.8563820.44476121.262633D 2.5062 1.2477360.1537433E 0.3827320.1807757.083183F 2.953572 1.50032425.8160133e0.12541400.003512.4 非营养性因素的影响结果2.4.1 培养时间的确定由图3可以看出在菌株生长的前4天,随着培养时间的增加,虫草素产量不断增加,第4天产量达1.1487mg/g ,到第5天仅略有提高,为1.1507mg/g ,此后产量开始下降,可能是因为培养基中的营养物质消耗殆尽,菌体衰亡而影响了次生代谢产物的产生.同时生物量在第4天也较高,为1.8417g/100mL ,故培养4天RCEF1081虫草素总产量达最高,由此确定4天为最佳培养时间.图3 培养时间对RCEF1081 图4 起始p H 值对RCEF1081虫草素含量的影响 虫草含量的影响Fig.3 Effect of time on cordycepin Fig.4 Effect of different p H production of RCEF1081 on cordycepin production of RCEF10812.4.2 起始p H 值的确定从图4中可以看出起始p H 值为6.0时,RCEF1081菌株的虫草素含量最高,为1.1449mg/g ,当p H 值为5.5～6.5之间时,菌株的虫草素含量均在1.0mg/g 左右,说明在这个范围内RCEF1081能够较好的利用营养物质并产生虫草素.当p H 值大于7.0时,虫草素产量有明显下降,说明在偏碱性条件下不利于虫草素的积累.p H 值为6.0时生物量也最高,达1.3235g/100mL ,故确定液体培养最佳起始p H 值为6.0.2.4.3 种龄、接种量、装液量及培养箱的转速对RCEF1081虫草素产量的影响种龄、接种量、装液量及培养箱的转速对菌株产虫草素也有较大的影响.从表9、10直观及方差分析结果可以看出,各因素对RCEF1081虫草素产量的影响程度由大到小依次为A 、B 、D 、C 因素,其中A 、B 、D 因素有显著意义(P <0.05),C 因素无显著性意义.根据各因素k 的变化率可以看出最佳因素搭配为A1B1D1C2,即以虫草素产量为指标,RCEF1081液体培养的最佳培养条件是:将培养2d 的液体母种以5%的接种徐州工程学院学报 2007年第10期量,接种到装有80mL液体培养基的250mL三角瓶中,在130r/min、25℃条件下培养4d.表9 以虫草素含量为指标的正交表及直观分析结果Table9 The orthogonal table and objective analysis of cordycepin production试验号A B C D虫草素含量(%)重复1重复2重复3平均虫草素含量(%)11111 2.20 1.98 2.10 2.09±0.11 21222 1.58 1.84 1.69 1.70±0.13 31333 1.37 1.09 1.27 1.24±0.14 42123 1.52 1.32 1.40 1.41±0.10 52231 1.46 1.19 1.34 1.33±0.13 62312 1.19 1.12 1.16 1.16±0.03 73132 1.42 1.44 1.45 1.44±0.02 83213 1.040.770.890.90±0.13 93321 1.29 1.16 1.24 1.23±0.06 K115.2315.2912.5614.39K212.3112.9913.7014.19K3107911.3212.1211.08k1 1.73 1.66 1.43 1.56k2 1.43 1.38 1.59 1.51k3 1.24 1.22 1.39 1.19R0.510.480.120.40表10 虫草素含量方差分析结果(完全随机模型)Table10 Variance analysis of cordycepin production(total random model)方差来源Variance source平方和Mean deviationsquare sum自由度Degree offreedom均方Mean squareF值F value显著水平A 1.2191220.6192753.676713B0.9710720.4891646.169793C0.0592720.03078 2.56306-D0.6504620.3238528.549073e0.21737180.011412.5 培养工艺优化前后虫草素产量比较在培养工艺优化前后两种条件下液体培养RCEF1081,分别测定虫草素含量,优化前为1.1507mg/g,优化后可高达2.7720mg/g,比优化前提高了144%.经DPS统计分析软件对结果进行分析可知,P<0.01,两者差异极显著.3 小结与讨论虫草素(3-脱氧腺苷)作为虫草及其无性型重要的生理活性成分,关于其研究报道较多,但主要集中在冬虫夏草、蛹虫草及其无性型发酵菌丝体.本研究首次发现蝉花无性型-蝉拟青霉中虫草素含量相对较高,为虫草素的开发又提供了一个新的药源.蝉拟青霉RCEF1081不像冬虫夏草等其它虫草无性型那样要求严格的、高营养的培养条件,其液体培养条件十分简单,生产原料来源稳定、价格低廉,发酵周期短,虫草素含量相对较高.因而蝉拟青霉作为虫草素的产生菌具有很好的开发前景.本研究发现植物蛋白适合蝉拟青霉的生长发育并能有效促进虫草素的生成,其中以豆粕和黄豆粉作氮源,尽管结果不是最好,但仍是较好的,从虫草素的工业生产降低生产成本来讲,是可选用的,拓宽了可用的氮源领域.通过正交试验确定最佳液体培养基配方为:麸皮3%,酵母粉4%,丝氨酸0.15%,KH2PO4 0.05%,MgSO4・7H2O0.01%,CaCl20.02%;最佳培养条件为:起始p H值6.0,装液量80/250ml(V/V),接种量5%(V/V),培养温度25℃,摇床转速130r/min,培养时间4d.优化后虫草素产量比优化前提高了144%.但可以看出在优化的液体培养工艺下菌株RCEF1081虫草素的产量还不是非常高,每克菌丝体大约可获得虫草素2.7毫克,所以还需要通过对其具体代谢途径的研究及添加合适的诱导物、刺激物来进一步提李瑞雪,等:蝉拟青霉高产虫草素菌株液体培养工艺的研究徐州工程学院学报 2007年第10期高虫草素的产量.参 考 文 献[1]陈祝安.虫草真菌蝉拟青霉的研究[J].真菌学报,1991,10(4):280-287.[2]王砚,赵小京,唐法娣.蝉花药理作用的初步探讨[J].浙江中医杂志,2001,36(5):219-220.[3]俞滢,顾蕾,陈启琪,等.蝉花的化学成份分析[J].杭州师范学院学报,1997,(6):61-63.[4]葛飞,夏成润,李春如等.蝉拟青霉菌丝体与天然蝉花中化学成分的比较分析[J].菌物学报,2007,26(1):68-75.[5]李祝,刘爱英,梁宗琦.虫草菌素的生物活性及检测方法[J].食用菌学报,2002,9(1):57-62.[6]陈畅,罗珊珊,张长铠,等.3种虫草抗氧化活性的研究[J].中国生化药物杂志,2004,25(4):212-214.[7]陈桂宝,罗梅初,刘实晶,等.蛹虫草的药理作用研究[J].中草药,1997,28(7):415-417.[8]Seldin D,Urbano SL A,McCaff rey R,et al.Phase Itrial of cordycepin and eoxycoformycin in Td T-positiveacute leukemia[J].Blood,1997,90(1):246.[9]温鲁,夏敏,宋虎卫,等.液体培养蛹虫草虫草素和腺苷的代谢量[J].微生物学通报,2005,32(3):91-94.[10]毛先兵,马开森.应用数理统计方法优化无机盐对蛹虫草生产虫草素的影响[J].重庆中草药研究,2004,(2):16-19. Studies on Liquid Culture T echnology of Cordycepin in Paecilomyces CicadaeL I Rui2xue,HU fei,C H EN An2hui,FAN Mei2zhen3(Anhui Agricultural University,Hefei230036,China)【Abstract】 In order to improve t he metabolism yield of cordycepin in t he st rains of Paecilomyces cica2 dae RCEF1081,we st udied t he liquid cult ure technology of it,t hrough determining t he content s of cordyce2 pin in t he mycelia of RCEF1081by H PL C.The result s showed t hat t he optimum medium component s were:bran3%,yeast4%,serine0.15%,KH2PO40.05%,MgSO4・7H2O0.01%,CaCl20.02%;t he optimum cult ure conditions were:initial p H6.0,cult ure medium amount80/250ml(V/V)flask,inocu2 lum5%(V/V),cult ure temperat ure25℃,shake rotation130r/min,fermentation period4day,t he to2 tal yield of cordycepin could reach as high as2.7720mg/g and was raised144%compared wit h t hat of be2 fore.Through t he statistical analysis,we can know t he difference is significant(P<0.01).【K ey w ords】 paecilo myces cicadae;cordycepin;piquid cult ure(责任编辑 崔思荣)。
蝉拟青霉中虫草素提取液的稳定性及酸碱溶解度探究试验
蝉拟青霉中虫草素提取液的稳定性及酸碱溶解度探究试验王萍;孙萍;王言玉【摘要】目的研究虫草素提取液的稳定性及酸碱溶解度，为虫草素的进一步开发利用奠定基础。
方法利用75％乙醇、45℃超声波浸提虫草素的提取液对虫草素的稳定性、在酸碱溶液中的溶解度等进行了研究。
结果虫草素对光的稳定性较差，光照可导致其分解；对温度的稳定性不高；维生素中，VA不利于虫草素的保存，VB、Vc、VE均有利于虫草素的保存；随着溶液碱性的增强虫草素的溶解度略微降低，溶液酸性越强虫草素越不易溶解。
结论通过对虫草素提取液稳定性的初步研究，以期为虫草素的进一步开发利用奠定基础。
【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2016(035)011【总页数】4页(P639-641,667)【关键词】虫草素;稳定性;溶解度;增强【作者】王萍;孙萍;王言玉【作者单位】临沂经济技术开发区市场监督管理局,山东临沂276000【正文语种】中文【中图分类】R927.11虫草素又称冬虫夏草素、虫草菌素，是多种真菌产生的非常重要的核苷类次生代谢产物，也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素，具有广谱的抗菌活性。
经研究表明虫草素具有免疫调节、抗肿瘤[1]、抗病毒、抗白血病、降血糖和抑制mRNA翻译、抗菌消炎的作用，其中治疗白血病已进入Ⅱ期临床试验[4-7]，虫草素除其具有药用价值外，在护肝、润肺、保肾等方面也有一定保健作用，所以逐渐受到人们的重视。
虫草素有多种生理活性，针对不同的药理作用及不同的作用方式会和其他活性成分或营养因子搭配使用，这就需要了解虫草素的稳定性等性质，防止与其他成分混合搭配时失去其生理药理活性。
本文利用75%乙醇、45℃超声波浸提虫草素的提取液对虫草素的稳定性、在酸碱溶液中的溶解度等方面进行初步探究，希望能为虫草素在药用价值、保健美容等方面的开发利用奠定基础[2-3]。
1.1 试验材料1.1.1 试验菌种本试验所用的菌种为蝉花无性型—蝉拟青霉L666菌株，该菌株购于安徽农业大学微生物防治省级重点实验室。
HPLC法检测蝉拟青霉中N6-（2-羟乙基）-
蝉拟青霉（Paecilomyces cicadae ）是蝉花的无性型，含有多种氨基酸、蛋白质、多糖以及核苷类物质等活性物质，具有镇痛、降血糖、降血压、抗肿瘤等功效［1-4］。
N6-（2-羟乙基）-腺苷［N6-（2-hydroxyethyl ）adenosine ，HEA ］是第一种生物来源的钙离子拮抗剂［5］，同时也是肌力剂、放射保护剂和镇痛物质，为腺苷类衍生物，首次分离于虫草液体培养菌丝体［6］，具有镇静、镇痛、降血压、抗肿瘤、保护肾脏、降低炎症反应等多种功效［7-13］，其含量的高低是评价虫草质量的重要指标之一。
HEA 因具有效果显著的多种医疗功效而在医药和保健方面都具有较大的开发价值以及可观的市场前景，但目前而言，人们对收稿日期：2022-08-01基金项目：贵州省科技计划项目（黔科合平台人才【2017】5788号）作者简介：李慧雯（1992-），女，贵州贵阳人，实验师，主要从事农产品检测检验研究，（电子信箱）****************；通信作者，艾仁丽（1997-），女，贵州铜仁人，在读硕士研究生，研究方向为生物化学与天然活性产物研究，（电话）186****5771（电子信箱）*****************。
HPLC 法检测蝉拟青霉中N6-（2-羟乙基）-腺苷含量李慧雯1，艾仁丽1，谭艾娟2（1.贵阳市农业农村局乡村振兴服务中心品牌建设服务站，贵阳550009；2.贵州大学生命科学学院，贵阳550025）摘要：为了建立蝉拟青霉（Paecilomyces cicadae ）5704s 中N6-（2-羟乙基）-腺苷（HEA ）含量测定方法，以去离子水为溶剂，采用超声辅助水浴法提取HEA ，基于HPLC 法测定其含量。
经优化确定色谱条件为Agilent ZORBAX Extend-C 18色谱柱（250mm×4.6mm ，5μm ），流动相为甲醇∶5mmol/L 乙酸铵（含0.1%甲酸），梯度洗脱，检测波长为260nm ，流速为1.0mL/min ，柱温为25℃，进样量为10μL 。
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Extraction condition of cordycepin in Paecilomyces cicadae
LI Rui-xue1, WANG Tai-chu1, HU Fei 2 , JIA Hong-ying1, WANG Wei1, FAN Mei-zhen 3*
(1.The Sericultural Research Institute, Anhui Academy of Agricultural Sciences, Hefei 230061; 2.The Plant Protection Research Institute, Hefei 230031; 3.Anhui Agricultural University, Hefei 230036)
*通讯作者 收稿日期：2012-08-16 基金项目： 安徽省农科院青年基金项目 (12B0617) ； 国家蚕桑产业技术体系项目 (CARS-22-SYZ09) ； 安徽省农科院创Байду номын сангаас团队项目 (11C0610)。 作者简介：李瑞雪(1982—)，女，山东济宁人，硕士，助理研究员，主要从事生物活性物质及桑树育种的研究工作。
蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)又名蝉棒 束孢霉(Isaria cicadae)，是我国传统中药材蝉花 (Cordyceps sobolifera)的无性型菌株。蝉拟青霉的 人工发酵菌丝体具有抗辐射、抗惊厥、镇静、镇 痛和解热作用 [1-2] ，而且蝉拟青霉对机体的毒性
甚微，具有很好的医疗保健应用前景。其主要化 学成分与天然冬虫夏草相似，有虫草多糖、甘露 醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸、必需氨基酸和不 饱和脂肪酸等[3-4]。 虫草素是虫草属多种真菌产生的一种重要的
提取物与应用
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2013年 第 38卷 第 2期
蝉拟青霉中虫草素提取工艺研究
李瑞雪1，汪泰初1，胡 飞2，贾鸿英1，王 伟1，樊美珍3* (1.安徽省农业科学院蚕桑研究所，合肥 230061；2.安徽省农业科学院植保研究所， 合肥 230031；3.安徽农业大学，合肥 230036)
Abstract: According to the extraction effects of different solvents, the physical and chemical characters tests of cordycepin, the optimal extraction condition was determined as follows: (1) centrifuging the fermenting matter with centrifugal machine and collecting the mycelium to dry by hot air at 50 ℃. (2) degreasing the fungus powder with petroleum ether according to fungus powder: the benzine=1:1’s quantity. (3) using 75% ethyl alcohol, 45 ℃ supersonic extracting cordycepin, and the extraction run four times with the raw material-water ratio at 1/20 and it lasted 40 minutes each time. Key words: Paecilomyces cicadae; cordycepin; extraction condition
摘要：通过比较不同提取方法及设计正交试验确定了蝉拟青霉中虫草素的最佳提取工艺：采取 管式离心机离心发酵醪，收集菌丝体50 ℃热空气烘干，按菌粉:石油醚=1:1的量用石油醚脱脂， 用布氏漏斗抽滤收集菌丝体烘干，最后用75%乙醇、45 ℃超声波浸提虫草素，提取4次，每次 提取40 min，料液比为1:20。 关键词：蝉拟青霉；虫草素；提取工艺 中图分类号：TS 284.2 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2013)02-0218-04
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食品科技
2013年 第 38卷 第 2期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
核苷类次生代谢产物，具有广谱的抗菌活性，通 常作为抗生素使用。经研究表明虫草素具有抗病 毒、抑制肿瘤、免疫调节、降血糖等作用，其中 治疗白血病已进入II期临床试验 ，除其药用外 又具有滋补、保健作用，越来越受到人们的广泛 重视。由于虫草具有很好的医疗保健功效，国内 外已开发出多种虫草产品，但这些虫草产品(包括 药品和保健食品)均未在宣传和包装上标明虫草素 含量。这一方面是产品的虫草素含量不高，另一 方面是开发者还未意识到虫草素是虫草产品的最 大“卖点”。 笔者在高通量的虫草素成分筛选中，首次发 现在蝉拟青霉的人工培养菌丝体中含有虫草素， 且含量相对较高，从众多菌株中筛选得出一株虫 草素含量相对较高的菌株-RCEF1081，曾对该菌 株的液体培养工艺进行了研究。为了更好地开发 利用虫草素资源，本研究通过比较不同提取方法 及正交试验对蝉拟青霉中虫草素提取工艺进行了 深入研究，为进一步开发利虫草素奠定了基础。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 菌种 蝉花无性型-蝉拟青霉RCEF1081菌 株：安徽农业大学微生物防治省级重点实验室。 1.1.2 培养基 1.1.2.1 SDAY培养基(固体斜面培养基) 葡萄糖40 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母浸出粉10 g/L，琼脂20 g/ L，蒸馏水定容。 1.1.2.2 液体摇瓶培养基 葡萄糖40 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母浸出粉10 g/L，蒸馏水定容。 1.1.3 试剂 虫草素(Cordycepin)标准品：美国 Sigma公司；甲醇：国产HPLC级；碳、氮源、无 机盐等生物试剂：国产化学纯；其他试剂均为国 产分析纯。 1.1.4 仪器 梅特勒电子天平：上海沪西分析仪 器厂；ZK15型电热超速离心机：Sigma公司； KH5200DB型数控超声波清洗器：昆山禾创超声 仪器公司；HZP-250型全温振荡培养箱：上海精 宏实验设备有限公司；电热鼓风干燥箱：南京实 验仪器厂；微量注射器：上海安亭微量进样器 厂；高效液相色谱系统：YOUNGLIN化学工作站 Autochro。 1.2 方法 1.2.1 菌丝体干燥方法试验 采用管式离心机进行