蝉拟青霉中虫草素提取工艺研究

Extraction condition of cordycepin in Paecilomyces cicadae
LI Rui-xue1, WANG Tai-chu1, HU Fei 2 , JIA Hong-ying1, WANG Wei1, FAN Mei-zhen 3*
(1.The Sericultural Research Institute, Anhui Academy of Agricultural Sciences, Hefei 230061; 2.The Plant Protection Research Institute, Hefei 230031; 3.Anhui Agricultural University, Hefei 230036)
*通讯作者 收稿日期：2012-08-16 基金项目： 安徽省农科院青年基金项目 (12B0617) ； 国家蚕桑产业技术体系项目 (CARS-22-SYZ09) ； 安徽省农科院创Байду номын сангаас团队项目 (11C0610)。 作者简介：李瑞雪(1982—)，女，山东济宁人，硕士，助理研究员，主要从事生物活性物质及桑树育种的研究工作。
蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)又名蝉棒 束孢霉(Isaria cicadae)，是我国传统中药材蝉花 (Cordyceps sobolifera)的无性型菌株。蝉拟青霉的 人工发酵菌丝体具有抗辐射、抗惊厥、镇静、镇 痛和解热作用 [1-2] ，而且蝉拟青霉对机体的毒性
甚微，具有很好的医疗保健应用前景。其主要化 学成分与天然冬虫夏草相似，有虫草多糖、甘露 醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸、必需氨基酸和不 饱和脂肪酸等[3-4]。 虫草素是虫草属多种真菌产生的一种重要的
提取物与应用
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2013年 第 38卷 第 2期
蝉拟青霉中虫草素提取工艺研究
李瑞雪1，汪泰初1，胡 飞2，贾鸿英1，王 伟1，樊美珍3* (1.安徽省农业科学院蚕桑研究所，合肥 230061；2.安徽省农业科学院植保研究所， 合肥 230031；3.安徽农业大学，合肥 230036)
Abstract: According to the extraction effects of different solvents, the physical and chemical characters tests of cordycepin, the optimal extraction condition was determined as follows: (1) centrifuging the fermenting matter with centrifugal machine and collecting the mycelium to dry by hot air at 50 ℃. (2) degreasing the fungus powder with petroleum ether according to fungus powder: the benzine=1:1’s quantity. (3) using 75% ethyl alcohol, 45 ℃ supersonic extracting cordycepin, and the extraction run four times with the raw material-water ratio at 1/20 and it lasted 40 minutes each time. Key words: Paecilomyces cicadae; cordycepin; extraction condition
摘要：通过比较不同提取方法及设计正交试验确定了蝉拟青霉中虫草素的最佳提取工艺：采取 管式离心机离心发酵醪，收集菌丝体50 ℃热空气烘干，按菌粉:石油醚=1:1的量用石油醚脱脂， 用布氏漏斗抽滤收集菌丝体烘干，最后用75%乙醇、45 ℃超声波浸提虫草素，提取4次，每次 提取40 min，料液比为1:20。 关键词：蝉拟青霉；虫草素；提取工艺 中图分类号：TS 284.2 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2013)02-0218-04
· 218 ·
食品科技
2013年 第 38卷 第 2期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
核苷类次生代谢产物，具有广谱的抗菌活性，通 常作为抗生素使用。经研究表明虫草素具有抗病 毒、抑制肿瘤、免疫调节、降血糖等作用，其中 治疗白血病已进入II期临床试验 ，除其药用外 又具有滋补、保健作用，越来越受到人们的广泛 重视。由于虫草具有很好的医疗保健功效，国内 外已开发出多种虫草产品，但这些虫草产品(包括 药品和保健食品)均未在宣传和包装上标明虫草素 含量。这一方面是产品的虫草素含量不高，另一 方面是开发者还未意识到虫草素是虫草产品的最 大“卖点”。 笔者在高通量的虫草素成分筛选中，首次发 现在蝉拟青霉的人工培养菌丝体中含有虫草素， 且含量相对较高，从众多菌株中筛选得出一株虫 草素含量相对较高的菌株-RCEF1081，曾对该菌 株的液体培养工艺进行了研究。为了更好地开发 利用虫草素资源，本研究通过比较不同提取方法 及正交试验对蝉拟青霉中虫草素提取工艺进行了 深入研究，为进一步开发利虫草素奠定了基础。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 菌种 蝉花无性型-蝉拟青霉RCEF1081菌 株：安徽农业大学微生物防治省级重点实验室。 1.1.2 培养基 1.1.2.1 SDAY培养基(固体斜面培养基) 葡萄糖40 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母浸出粉10 g/L，琼脂20 g/ L，蒸馏水定容。 1.1.2.2 液体摇瓶培养基 葡萄糖40 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母浸出粉10 g/L，蒸馏水定容。 1.1.3 试剂 虫草素(Cordycepin)标准品：美国 Sigma公司；甲醇：国产HPLC级；碳、氮源、无 机盐等生物试剂：国产化学纯；其他试剂均为国 产分析纯。 1.1.4 仪器 梅特勒电子天平：上海沪西分析仪 器厂；ZK15型电热超速离心机：Sigma公司； KH5200DB型数控超声波清洗器：昆山禾创超声 仪器公司；HZP-250型全温振荡培养箱：上海精 宏实验设备有限公司；电热鼓风干燥箱：南京实 验仪器厂；微量注射器：上海安亭微量进样器 厂；高效液相色谱系统：YOUNGLIN化学工作站 Autochro。 1.2 方法 1.2.1 菌丝体干燥方法试验 采用管式离心机进行