大肠杆菌及其检验
检测大肠杆菌的方法
检测大肠杆菌的方法
检测大肠杆菌的方法包括以下几种：
1. 化学方法：使用化学试剂检测大肠杆菌的生长产物，例如检测β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）或亚硝酸盐的产生。
2. 免疫学方法：使用抗原抗体反应来检测大肠杆菌的存在。
可以通过免疫层析试纸、酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光染色等技术进行检测。
3. 分子生物学方法：使用DNA提取和PCR扩增技术，通过特定基因的检测来确定大肠杆菌的存在。
常用的是检测16S rRNA基因。
4. 血液培养法：将样品接种到含有适合大肠杆菌生长的培养基上，经过一段时间后观察是否有菌落形成。
5. 基于大肠杆菌特定生理和生化特征的传统方法：根据大肠杆菌在营养琼脂培养基上形成金属光泽、产生气泡、使用L-色氨酸作为唯一氮源，以及产生酸和气体等特征来进行初步检验。
这些方法可以单独或结合使用来对大肠杆菌进行检测，并能够提供快速、准确的结果。
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理1.检测原理：大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
2.仪器设备与器具：2.1 恒温培养箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接种针。
2.4 显微镜。
2.5 超净工作台。
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 灭菌釜。
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片3.培养基及试剂：3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.2 伊红美兰琼脂平板：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.3 乳糖发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.4 革兰氏染色液。
3.4.1 结晶紫染色液：结晶紫1g95%乙醇20ml1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2 革兰氏碘液：碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。
3.4.3 沙黄复染液：沙黄0.25g95%乙醇10ml蒸馏水90ml将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
3.5 生理盐水。
4.检验程序：检样稀释↓乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr ↓不产气产气↓大肠菌群阴性伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr报告↓ ↓革兰氏染色乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr ↓ ↓ ↓G+ G-，无芽孢杆菌产气不产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性报告大肠菌群阳性报告5.测定方法：5.1 检样稀释：5.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
鉴别大肠杆菌的方法
鉴别大肠杆菌的方法
首先，鉴别大肠杆菌的方法之一是通过培养基培养。
大肠杆菌在营养富集的培养基上生长迅速，因此可以通过在特定培养基上进行培养来鉴别大肠杆菌。
常用的培养基包括大肠埃希菌选择性培养基和大肠埃希菌选择性富集培养基。
在这些培养基上，大肠杆菌会表现出特定的形态和生长特征，有助于鉴别。
其次，大肠杆菌的鉴别方法还包括生化试验。
大肠杆菌具有一些特殊的生化特性，如产气、发酵葡萄糖和乳糖等。
因此，可以通过进行气体产生试验、糖发酵试验等生化试验来鉴别大肠杆菌。
这些试验可以通过观察细菌在特定条件下的反应来确定其是否为大肠杆菌。
另外，分子生物学方法也被广泛应用于大肠杆菌的鉴别。
通过PCR扩增特定基因序列，再通过电泳分析等技术手段来鉴别大肠杆菌。
这种方法具有高度的特异性和准确性，能够快速鉴别出大肠杆菌。
除了上述方法，还可以利用质谱分析、免疫学方法等现代技术手段来鉴别大肠杆菌。
这些方法在鉴别大肠杆菌中起着重要作用，为食品安全和公共卫生提供了有力的支持。
综上所述，鉴别大肠杆菌的方法多种多样，可以根据实际情况选择合适的方法进行鉴别。
在食品生产和公共卫生领域，及时准确地鉴别大肠杆菌对于预防食源性疾病和保障公共健康至关重要。
希望通过不断的研究和实践，能够提高大肠杆菌鉴别的准确性和效率，为食品安全和公共卫生工作做出更大的贡献。
【报告】大肠杆菌培养实验报告
【关键字】报告大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml 量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
大肠杆菌实验结果与分析
2、实验结果与分析2.1、细菌总数检测结果2.1.2、细菌总数的计算与报告根据菌落总数的计算方法：1、若只有一个稀释度平板上的菌落术在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平均菌落数载适宜计数范围内时，按下式计算：N=∑c/[(n1+0.1n2)d]式中：N—样品中菌落数；∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1—第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2—第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d—稀释因子（第一稀释度）为1.75x107；在浓度10—6(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为1.60x107；在浓度10—7(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为2.01x107。
分析数据可知，在浓度10—7(g/ml)的时候，细菌总数远大于其他两个梯度，这与常理不符。
那么有可能是实验过程中的错误导致，可能是稀释不够、密封不紧、没有进行无菌操作等因素有关。
2.2、大肠菌群检测结果2.1.1、初发酵各浓度梯度阳性管数统计附：检验原始记录检验原始记录检测记录与结果培养基配制：样品配制：1、 固体样品，无菌称取25g 样品加225ml 生理盐水，均质。
2、 液体样品，需稀释的，吸取25ml 于225生理盐水，混匀。
菌落总数：检验依据：GB/T4789.2-2008大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003注：“P ”表示阳性结果，“N ”表示阴性结果检验起止时间：2011年09月25日至2011年09月27日检测人:复核人：。
水中大肠杆菌的检测实验报告
1. 掌握水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 了解水中大肠杆菌污染的严重性及预防措施。
3. 培养实验操作技能，提高对水质监测的认识。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种条件致病菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在水质监测中，大肠杆菌常作为粪便污染的指示菌。
本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌的检测，通过观察菌落特征，确定水中大肠杆菌的存在。
三、实验材料1. 实验器材：无菌试管、移液器、培养箱、酒精灯、无菌棉签、试管架、培养皿、显微镜等。
2. 实验试剂：伊红美蓝培养基、无菌水、水样、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等。
四、实验步骤1. 水样采集：采集待检测水样，用无菌容器盛装，避免污染。
2. 水样稀释：将水样进行适当的稀释，以便在培养基上形成单菌落。
3. 接种：取适量稀释后的水样，用无菌棉签均匀涂布于伊红美蓝培养基表面。
4. 培养：将接种后的培养基放入培养箱中，在37℃条件下培养24小时。
5. 观察：观察培养基上的菌落特征，如菌落大小、形状、颜色等，判断是否存在大肠杆菌。
6. 鉴定：对疑似大肠杆菌的菌落进行进一步的鉴定，如革兰氏染色、生化试验等。
五、实验结果与分析1. 菌落观察：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌菌落呈深紫色（黑色），边缘整齐，有金属光泽。
2. 鉴定结果：经革兰氏染色和生化试验，证实所观察到的菌落为大肠杆菌。
1. 大肠杆菌是水质监测中的重要指标，其存在表明水质可能受到粪便污染，存在健康风险。
2. 本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌检测，操作简便，结果准确。
3. 在实际水质监测中，还需结合其他指标，如粪大肠菌群、耐热大肠菌群等，全面评估水质状况。
七、实验总结1. 本实验成功检测了水中大肠杆菌，掌握了水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 通过实验，提高了对水质监测的认识，增强了环保意识。
3. 在今后的学习和工作中，将继续关注水质问题，为保护水资源、保障人民群众健康贡献力量。
大肠杆菌检验方法的探究与分析
大肠杆菌检验方法的探究与分析大肠杆菌是一种广泛存在于自然界的细菌，它属于革兰氏阴性杆菌的一种。
大肠杆菌是人体内肠道的重要成分之一，但在一些状况下，它也可能是人体内病原菌的源头。
因此，对大肠杆菌进行检验与分析对于食品安全、环境卫生等领域具有重要意义。
一、大肠杆菌的检验方法大肠杆菌的检验方法主要包括传统的培养、镜检、酶反应试验等方法，以及现代的分子生物学方法。
1.传统培养方法传统培养方法是检验大肠杆菌的常规方法，主要包括快速检验方法和定量检验方法。
- 快速检验方法：将所需检验的物体样本加入选择性富培养基（如MacConkey琼脂）中，培养在37℃环境下，观察24小时后，如果出现鲜红色粘稠菌落，则判断为大肠杆菌阳性。
-定量检验方法：将样本按一定比例稀释后接种在含有葡萄糖和发酵试剂（如拉氏琼脂、EC琼脂）的培养基上，经过24-48小时培养，根据产生酸和气泡的数量判断大肠杆菌的数量。
2.镜检镜检是将样本放在显微镜下进行观察，主要观察大肠杆菌的形态和结构。
大肠杆菌具有革兰氏阴性细菌的特征，其形状为杆状，长度大约为2-3微米，直径为0.5-1微米。
3.酶反应试验大肠杆菌在酶反应方面具有一些特殊的代谢能力，通过检测特定酶的活性，可以初步确定是否为大肠杆菌。
常用的酶反应试验包括氧化-发酵试验、Urease试验、甘露醛试验等。
4.分子生物学方法分子生物学方法包括PCR（聚合酶链式反应）、基因测序等，这些方法可以检测大肠杆菌的特定基因序列，并通过序列比对和分析进行鉴定。
在大肠杆菌的检验与分析过程中，可以从以下几个方面进行探究和分析。
1.方法选择不同的检验方法适用于不同的实验对象。
传统培养方法适用于大量样本的检验，其操作简单，成本较低；而分子生物学方法适用于对个别样本进行准确鉴定，能够检测到数量很少的细菌。
在实际应用中，可以根据实验需要和条件，选择恰当的检验方法。
2.灵敏度和特异性大肠杆菌的检验方法需要具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测出目标细菌。
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性的厌氧菌，常常被用作指示性微生物来评估食品和水源的卫生质量。
以下是常见的大肠杆菌检验方法：
1. 培养基方法：将样品接种在包含大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上，如大肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)和EC培养基等。
大肠杆菌能够利用琼脂中的乳糖发酵产生酸，导致培养基呈现红色或粉红色。
此外，EC 培养基还包含了可以检测大肠杆菌β-葡萄糖苷酶的亚甲基红试剂，如果大肠杆菌存在，则培养基呈现金属光泽。
2. 确认方法：对落有培养基上的鲜艳深色菌落进行进一步确认。
典型的确认方法包括革兰染色、目测观察形态特征、氧化发酵试验和测试产气杆菌酶试验。
3. PCR检测方法：利用聚合酶链反应(PCR)技术，从样品中扩增大肠杆菌特异性基因片段（如16S rRNA基因），然后通过凝胶电泳检测扩增产物。
4. 快速方法：如免疫层析试纸法和光学组织测定法。
免疫层析试纸法利用抗大肠杆菌抗体与大肠杆菌特异性抗原结合生成可视化结果。
光学组织测定法利用大肠杆菌的β-葡萄糖苷酶水解比色底物产生颜色变化。
这些方法都可用于检测大肠杆菌在食品和水源中的存在及其数量。
在进行检验时，应严格遵守相关的操作规程和实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告一、实验目的掌握大肠杆菌的检测方法，了解其在水质检验中的重要性。
二、实验原理1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种常见的肠道杆菌，是一类嗜热性、厌氧性以及革兰阴性杆菌。
该菌种常常是肠道菌群的组成部分，同时也是水污染的重要指示菌之一。
（1）标准培养基法经过富营养培养基的生长，大肠杆菌会形成显性和隐性的群体。
这种检测方法适用于水质样本、地球样品以及饮用水。
（2）膜过滤法样品通过过滤器滤过后，将过滤后的膜放入培养基上培养。
这种方法既适合于生物质量较小的样品，也适用于分析浓度高的样品。
（3）MPN法通过使用3组不同浓度的小管，并观察哪个浓度的小管有生长曲线的所有格子都被满足，来计算菌落形成单位的浓度。
可以适用于样品浓度较低的环境。
三、实验操作1. 实验材料大肠杆菌标准菌株、优化阳性对照菌株、培养基、蒸馏水、实验器材、滤纸、吸管、离心机、洗涤液和细胞硬度试剂。
2. 实验步骤（1）制备纯菌液：将大肠杆菌基配合缓冲液跳接种到营养琼脂平板上，并在37℃的恒温培养箱中培养过夜。
将菌落划入脱色水中，通过洗涤和离心的方式，获得纯化的细胞菌悬液。
（2）制备样品：将需要检测的水样分别过滤，过滤膜使用巨孔滤纸。
滤膜被慢慢放在脱色水上U型板中间的孔里，然后浸泡（3）培养过程: 将U型板接入温度为37℃的有氧培养箱内，在24 - 48小时内观察细菌进行生长，并做出相应的计数和检测。
四、实验结果与分析按照实验操作规程进行样品处理和培养后，确认样品中是否存在大肠杆菌。
如果在实验中产生的试样中出现了大肠杆菌生长，且其生长优于阳性对照；或者在某些水样中不能检测出大肠杆菌，说明该水质品质不满足相关规范的要求。
五、实验结论本实验通过不同的大肠杆菌检测方法，较为全面地了解了大肠杆菌的检测方法及其在水质检验中的重要性。
在实验的基础上，我们有理由相信，通过科学准确的操作，人们可以更好地保证饮用水的健全和安全。
食品微生物检验(大肠杆菌全部)
第三章大肠菌群测定一、大肠菌群检验( 一) 检验方法( 二) 培养基( 三 ) 检验时应注意事二、大肠菌群的卫生学意义大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
该菌群主要来源于人及温血动物粪便，一般多用来作为食品中的粪便污染指标。
过去我国在大肠菌群的检验方面经验不多，对该菌群的认识也不够充分。
1974 年全国修订食品卫生细菌检验方法座谈会和1976 年全国食品卫生标准会议建议以大肠菌群作为粪便污染指标菌，并提出进行有关大肠菌群方面的科研工作。
为此，我们成立了大肠菌群科研协作组，对犬肠菌群的检验方法( 包括快速检验方法) 及其卫生学意义进行了广泛的科学研究和实践，取得了一定成绩，为制订大肠菌群检验方法提供了科学依据。
在这次修订l976年版食品卫生检验方法的过程中，大肠菌群科研协作组又于1983 ～1985 年对大肠菌群检验方法进行了实验研究，并作了对比观察，同时对国内常用的大肠菌群快速检测方法也进行了研讨，为这次修订国家标准食品卫生检验方法微生物学部分中的大肠菌群测定提供了科学依据。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出来的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
其定义为：系指一群需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
有些科学工作者又用靛基质、甲基红、 V～ P、柠檬酸盐、硫化氢、明胶、动力和 44．5℃乳糖分解等试验，将这群细菌再分为大肠艾希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
不论分法如何，对大肠菌群的判定，均应以上述定义为基础。
一、大肠茵群检验( 一) 检验方法1．乳糖发酵试验。
以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在 l m J 以上者，用双料乳糖胆盐发酵管， lm1 及 1mI 以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。
大肠杆菌及其检验
3、EMB平板 EMB平板 EMB
取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平 板,36±1℃培养24±2h。 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型 菌落。 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌 落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可 疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼 脂斜面上,36±1℃培养18～24h。
三、大肠杆菌的检验方法
1、样品制备 以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释 剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～ 2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研 磨的方法代替)。从制备样品匀液至稀释完毕, 全过程不得超过15min。
2、LST和EC初步筛选 LST和EC初步筛选
对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释 液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月 示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培 养48±2h。 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生, 用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤 管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管 在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
大肠杆菌及其检 验
一、大肠杆菌的生物学特性
1、简介 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科， 归属于埃希氏菌属，大肠杆菌为人和动物肠道中的 常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道 外感染。 2、形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革 兰氏阴性杆菌
3、培养特性 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺 盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能 生长，生长温度范围为15-46℃。
实验七大肠杆菌检测
1
1
750
140
2300
3
1
2
1200
300
3800
3
1
3
1600
3
2
0
930
150
3800
3
2
1
1500
300
4400
3
2
2
2100
350
4700
3
2
3
2900
3
3
0
2400
360
13000
3
3
1
4600
710
24000
3
3
2
11000
1500
48000
3
3
3
≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
细菌学检验程序
细菌总数
水样稀释或不稀释
倾注平板培养 37 ℃ 24小时
样品
大肠菌群
水样稀释或不稀释
第一步------ 初步发酵试验 （乳糖发酵）
37℃ 24小时
菌落计数 （取平均数报告）
第二步------ 平板分离培养 （转种鉴别培养基） 37℃ 24小时 革兰染色镜检
第三步------- 乳糖复发酵试验
①以无菌操作将检样1mL放于含有9mL灭菌生理盐水 或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做 成1：10的均匀稀释液。
②用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有 9mL生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀， 做成1：100的稀释液。
③另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释 液。
2
1
大肠杆菌检验法分析
大肠杆菌检验法分析大肠杆菌能产生B-葡萄糖醛酸昔酶，能把4-甲基散形酮-葡萄糖醛酸昔酶（MUG）分解为4-甲基散形酮，该分解产物在366 nm紫外光激发下，产生灰蓝色荧光，即为大肠杆菌阳性反应；如果没有产生灰蓝色荧光，则为阴性反应。
基于此，采用MUG试剂为底物制成培养基，以快速检查大肠杆菌，同时设空白对照组，并与部颁方法进行比较。
1检验方法1.1菌株大肠杆菌标准株（44102）由中国药品生物制品检定所提供，其余7株大肠杆菌由长春市药品检验所提供。
1.2供试品六味地黄丸、百合固金丸、益坤丸、牛黄上清丸、牛黄清胃丸、金匾肾气丸、银翘解毒丸、人参归脾丸、舒肝丸共9种，均由本院药房提供[1]。
1.3培养基肉汤、肉汤琼脂、胆盐乳糖（BL）增菌液、伊红美蓝（EMB）琼脂等，均按《药品卫生检验方法》制备。
MUG培养基：pH 7.6～7.8，MUG 0.075 g，氯化钙0.05 g，硫酸胺5 g，磷酸二氢钾0.9 g，硫酸锰0.005 g，硫酸氢二钠6.2 g，硫酸锌0.005 g，亚硫酸钠0.04 g，硫酸镁0.1 g，蒸馏水1000 mL，氯化钠10 g，琼脂（斜面培养基用）15 g。
制法：除MUG外，各成分溶解于1000 mL 水中，校正pH，加人MUG溶解后，每管分装5 mL，115℃灭菌15 min。
1.4菌液配制取经36℃培养18～24 h大肠杆菌肉汤培养物，稀释成10-7（含菌50～100个/mL）备用[2]。
1.5供试液制备按部颁方法制成1∶10供试液备用。
1.6部颁方法分别加供试液各10 mL于2瓶胆盐乳糖（BL）增菌液中，其中一瓶菌液（10-7）而混匀，同置36℃培养24 h，按部颁方法检查大肠杆菌，见表1。
1.7取上述2种培养物摇匀分别取0.2 mL，接种在MUG斜面培养基和MUG 液体培养基中，同置36℃培养，观察培养3、5、10、解h后的荧光反应，见表1。
2讨论采用MUG液体培养基，较固体斜面培养基的实验反应灵敏，对认为染菌的检品，一般5～24 h能在紫外光（366 nm）下观察到很强的灰蓝色荧光，即为阳性反应，本次式样认为污染大肠杆菌的8只检品，MUC法均呈阳性，经部颁法确认无误。
大肠菌群的检验方法
大肠菌群的检验方法
大肠菌群是指人体肠道内的一类细菌群落，对人体健康有着重要的影响。
检验大肠菌群的方法主要包括以下几种：
1. 粪便培养法，通过采集患者的粪便样本，将其培养在含有特定营养物质的培养基上，利用培养基的选择性和差异培养特性，可以筛选出大肠菌群中的细菌，并对其进行鉴定和计数。
2. 分子生物学方法，包括PCR（聚合酶链式反应）、16S rRNA 基因测序等技术，通过检测特定基因序列或者DNA指纹图谱来确定大肠菌群的成分和数量。
3. 生化检测法，通过测定粪便中的各种生化指标，如pH值、氨氮含量等，来间接反映大肠菌群的代谢活动和数量。
4. 荧光原位杂交技术（FISH），利用荧光探针对大肠菌群中的特定细菌进行染色和检测，可以直观地观察其在肠道内的分布和数量。
5. 免疫学检测法，通过检测粪便中的特定抗原或抗体水平，来
间接反映大肠菌群的情况，如检测肠道病原菌的抗原或特定免疫球蛋白的水平。
总的来说，不同的检测方法各有优势，可以综合应用以获得更全面和准确的大肠菌群信息。
这些方法可以帮助医生评估肠道菌群的健康状况，指导治疗和调整饮食，对于维护肠道健康和预防疾病具有重要意义。
大肠杆菌的微生物学检查
从饮水中分离大肠杆菌①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。
③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。
用平板划线分离法进行分离。
④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。
培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。
⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。
大肠杆菌的微生物学检查细菌的分离鉴定肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。
血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。
其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。
37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。
采用一系列生化反应进行鉴定。
肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。
必要时检定肠霉毒素。
泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量≥100，000时，才有诊断价值。
卫生细菌学检查大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。
取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。
故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。
我国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。
我国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
实验二大肠菌群（M.R.N.）检验1 目的了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义学习并掌握大肠菌群的检验方法2 原理大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠杆菌群检验的实验原理
大肠杆菌群检验的实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人类和动物的肠道中。
大肠杆菌群检验是一种用于研究肠道菌群组成和功能的实验方法。
本文将从实验原理、样本采集、实验步骤、结果解读和临床应用等方面进行详细介绍。
实验原理：大肠杆菌群检验主要通过对肠道中细菌的DNA进行测序和分析来研究菌群组成和功能。
尤其是通过对16S rRNA基因序列进行分析，可以确定细菌的分类学信息，从而了解菌群的组成。
在这个实验中，主要使用PCR扩增和高通量测序技术。
1. 样本采集：在进行大肠杆菌群检验之前，需要采集肠道样本。
常见的采集方法包括粪便、肠黏膜组织和大肠黏膜刷取等。
样本采集要注意无菌操作，避免外源性细菌的污染。
2. 实验步骤：（1）DNA提取：首先需要提取样本中的DNA，这可以通过商业DNA提取试剂盒来完成。
提取的DNA浓度和质量要满足后续PCR扩增和测序的要求。
（2）PCR扩增：通过设计引物，选择16S rRNA基因的特异性区域进行扩增。
PCR反应体系中加入模板DNA、引物、dNTPs和DNA聚合酶。
PCR反应的温度和循环次数通过程序设定。
（3）PCR产物纯化：将PCR扩增产物纯化，去除引物和杂质。
可以使用DNA 凝胶电泳和商业纯化试剂盒来进行纯化操作。
（4）高通量测序：纯化后的PCR产物进行高通量测序，可以采用Illumina MiSeq 或Ion Torrent等测序平台。
测序后得到的数据包括原始测序片段和测序质量值。
3. 结果解读：经过测序平台生成的数据可以通过特定的分析流程进行处理和解读。
首先将原始测序片段进行质控和过滤，去除接头序列和低质量序列。
然后对质控后的测序片段进行聚类和分类，可以使用聚类算法（如CD-HIT和UPARSE）和数据库（如Greengenes和SILVA）来进行分类鉴定。
最后，通过比较分析菌群间的差异，在样本之间实施群落结构和功能的比较。
4. 临床应用：大肠杆菌群检验可以用于研究肠道菌群与人类健康和疾病之间的关系。
大肠杆菌的快速鉴定和穿刺培养实验的研究
大肠杆菌的快速鉴定和穿刺培养实验的研究1 前言大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。
主要寄生在大肠内。
它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。
人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。
感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
因此快速、方便、灵敏的鉴定出大肠杆菌是食品行业的关键。
2、实验方法2.1鉴定实验2.1.1 M试验在无菌条件下，用小砂轮开启安瓶，取待检物0.2ml，接种至安瓶内用无菌棉将安瓶口封盖，置于36±1℃培养5小时~24小时，在365nm紫外灯光下观察有无荧光，同时用未接种的安瓶做对照。
呈现荧光为阳性，简称M阳性；不呈现荧光为M阴性。
样品瓶呈现明显的荧光，为M阳性；对照瓶不产生荧光。
见图一所示。
2.1.2 I试验观察后，沿培养管的管壁加入1-3滴靛基质试液，轻缓摇动，观察液面颜色。
液面出现玫瑰红环为阳性，简称I阳性；呈试剂本色，为I阴性。
样品瓶呈现玫瑰红环，为I阳性，对照瓶呈试剂本色。
见图二所示。
2.2 穿刺实验采用完全培养基，琼脂量在0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%进行穿刺实验琼脂量在0.5%以上的因为培养基硬度较大，限制了自由运动。
见图三所示琼脂加量左边为0.3%，右边为0.5%。
由图三可以看出，左侧试管中沿穿刺线向周围扩散生长，而右侧试管则边缘整齐。
这是因为大肠杆菌为周身鞭毛，其运动向周围扩散生长。
3 结果3.1 鉴定实验结果判断：M阳性、I阳性报告检出大肠杆菌。
通过实验证实M-I实验法对大肠杆菌的鉴定具有快速、方便、灵敏、假阳性少的优点，在食品致病菌快速检验领域具有广泛的应用前景。
3.2 大肠杆菌为周身鞭毛，将大肠杆菌穿刺接种于0.3%的琼脂半固体培养基中，它将沿穿刺线向周围扩散生长。
大肠杆菌的检验注意事项
大肠杆菌的检验注意事项大肠杆菌是一种存在于人和动物的肠道中的细菌，虽然在正常情况下不会对人体造成危害，但一旦进入食物或饮水中，可能引起食源性疾病。
因此，对大肠杆菌的检验显得十分重要。
以下是大肠杆菌检验注意事项。
1. 检验标本的采集：大肠杆菌的检验通常需要使用粪便和食物等标本进行检测。
在采集粪便标本时，应避免混入尿液，最好在清洁的容器中收集。
而对于食物等标本，需要注意避免污染和保存合适。
2. 仪器与设备的维护：对于进行大肠杆菌检验的仪器和设备，需要定期进行维护和保养，以确保其准确性和可靠性。
在使用前需要对仪器进行校准，并在使用过程中进行质控检验。
3. 检验环境的清洁：在进行大肠杆菌检验时，需要确保检验环境的清洁和卫生。
避免交叉污染，减少误差的发生。
4. 检验人员的培训：进行大肠杆菌检验的人员需要接受专业的培训，掌握操作技能和检验流程，了解常见的检验误差和处理方法。
5. 检验流程的规范：在进行大肠杆菌检验时，需要按照标准的检验流程进行，严格遵守操作规程，确保检验结果的准确性和可靠性。
6. 质控的执行：在进行大肠杆菌检验时，需要执行严格的质控程序，包括使用质控品进行校准和验证，监测每一批检验样本的质量控制结果，以及对异常结果的处理和追踪。
7. 结果的解释：对于大肠杆菌检验结果的解释需要慎重，需要结合临床病史和其他相关检验结果进行综合分析，避免误诊或漏诊的发生。
8. 结果的报告：对于大肠杆菌检验结果的报告，需要确保结果准确、清晰、及时，帮助临床医生进行诊断和治疗决策。
综上所述，对大肠杆菌的检验需要严格遵守操作规程和质控要求，确保检验结果的准确性和可靠性，为临床诊断和治疗提供可靠的支持。
大肠杆菌检测方法
大肠菌群及检验一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因.粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多.大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性.大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准.两个标准方法在检测程序上略有不同.（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气.分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
大肠杆菌检验方法的探究与分析
大肠杆菌检验方法的探究与分析摘要：目的：采用几种不同的方法对大肠杆菌进行检验，探究不同检验方法的影响有何不同。
方法：利用一次离心、二次离心、滤芯滤膜及双重滤膜法对呋喃唑酮片中大肠杆菌的情况进行检验。
结果：一次离心法、二次离心法、离心滤膜法与离心双重滤膜法4种检验方法中，离心双重滤膜法的检出效果明显优于其他几种检验方法，组间结果比较差异显著，具有统计学意义，P＜0.05。
结论：与其他几种检验方法相比，离心双重滤膜法大肠杆菌检出率较高，不仅操作过程胃肠简单，总体上检出率也比较高，值得临床推广应用。
关键词：大肠杆菌；检验方法；探究大肠菌群是格兰阴性菌的一种，经过发酵乳糖后会产生酸、气，人类和其他恒温动物的粪便是这种菌的主要存在场所，因此通过对大肠杆菌情况的检测可以判断药品或视频是否受到了粪便的污染，成为常规口服药物的常规检测项目之一。
呋喃唑酮片是治疗由大肠杆菌引起的肠炎的常见抗菌类药物，由于该药物具有一定抗菌性，因此常规检验方法是很难检测出该药物中是否存在大肠杆菌的[1]。
本次研究主要以呋喃唑酮片为主要研究对象，利用不同方法对大肠杆菌的情况进行检验，现在进行如下报道。
1资料与方法1.1基线资料呋喃唑酮片（厂家为贵州省科晖制药厂，规格为0.10g/片，国药准字H52020295），大肠杆菌CMCC、CMCB（孔径规格分别是3.0、1.2、0.45μm），由中国药品生物制品检定所提供混合纤维素酯微孔滤膜、伊红美蓝琼脂及大肠杆菌生化反应培养基。
1.2检测方法本次研究共利用4种方法进行检测：呋喃唑酮片、大厂杆菌CMCC调成测试液，首先，利用一次离心法，在测试液离心之后利用上清液检测大肠杆菌，其次，利用二次离心法，在测试液两次离心之后利用上清液检测大肠杆菌，第三，利用离心滤膜法，待测试液离心之后，利用0.45μm微孔过滤上清液，取出滤液后检测大肠杆菌，第四，利用离心双重滤膜法，利用0.45μm微孔过滤上清液，经过两次过滤之后取出滤液后检测大肠杆菌。
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大肠杆菌及其检验大肠杆菌的生物学特性•简介：大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。
附：肠杆菌科各属大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。
大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。
•形态与染色大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。
有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。
附：有动力是什么意思？请看动力试验。
革兰氏阴性杆菌是什么意思？请看革兰氏染色介绍。
大肠杆菌扫描电镜照片大肠杆菌透射电镜照片大肠杆菌分裂照片最新：大肠杆菌革兰氏染色照片•培养特性由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。
附：菌落形态有什么用处？菌落形态学生化反应大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。
IMViC试验为“+、+、-、-”。
即为典型大肠杆菌。
•抗原构造比较复杂，主要由菌体O抗原、鞭毛H抗原、夹膜K抗原组成。
•抵抗力该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。
在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。
对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。
致泻性大肠杆菌简介大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。
某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（enterovirulent E. coli ）。
一般包括四种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）致病性大肠杆菌（EPEC）出血性大肠杆菌（EHEC）侵袭性大肠杆菌（EIEC）。
（1）肠产毒性大肠杆菌（Enterotoxigenic E. coli,ETEC）：引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。
腹泻常为自限性，一般2～3天即愈。
营养不良者可达数周，也可反复发作。
致病因素是LT或ST，或两者同时致病。
有些菌株具有定居因子，常见者为O6：K15：H16、O25：K7：H42。
鉴定ETEC主要测定大肠杆菌肠毒素，血清型有一定参考意义。
（2）肠致病性大肠杆菌（Enteropathogenic E.coli,EPEC）:是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者可致死；成人少见。
细菌侵入肠道后，主要在十二指肠、空肠和回肠上段大量繁殖。
切片标本中可见细菌粘附于绒毛，导致刷状缘破坏、绒毛萎缩、上皮细胞排列紊乱和功能受损，造成严重腹泻。
EPEC不产生LT或ST。
有人报道，EPEC可产生一种由噬菌体编码的肠毒素，因对Vero 细胞（绿猴肾传代细胞）有毒性，故称VT毒素。
VT毒素的结构、作用与志贺氏毒素相似，具有神经毒素、细胞毒素和肠毒素性。
鉴定EPEC可根据临床表现与血清型。
(3)肠侵袭性大肠杆菌（Enteroinvasive E.coli,EIEC）:EIEC的多数菌株无动力，生化反应和抗原结构均近似痢疾杆菌，应予注意。
（4）肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）:引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素。
EHCO的主要菌型是O157：H7，还可有O26、OⅢ等。
附：肠出血性大肠杆菌O157:H7介绍。
此外，肠粘附性大肠杆菌（Enteroadhesive E.coli,EAEC）也可引起腹泻，但对其发病机理与血清型尚不了解。
EAEC不侵入肠上皮细胞，不产生LT或ST，也无VT毒素。
唯一特征是具有与Hep-2细胞（人喉上皮细胞癌细胞系）粘附的能力，故也称Hep-2细胞粘附性大肠杆菌。
表：引起急性腹泻的大肠杆菌大肠杆菌的检验方法SN 0169—92出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法GB/T 4789.6—1994 食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验以SN标准方法为例，进行说明。
样品制备：以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。
稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。
从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。
附：这是一种9管MPN法测定方法，什么是MPN法？LST和EC初步筛选：对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。
每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。
将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
附：LST肉汤、EC肉汤有些什么？EMB平板：取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。
检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。
如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。
用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18～24h。
附：怎样进行平板划线分离？平板划线示例EMB平板原理及照片生化试验：将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。
1 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。
附：靛基质试验原理及照片2 MR-VP培养基：在36±1℃培养48±2h。
以无菌操作移取培养物1 mL至13mm×100mm试管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。
将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。
如培养物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。
附：MR-VP试验原理及照片3 Koser氏枸椽酸盐肉汤：于36±1℃培养96h记录有无生长。
附：枸椽酸盐利用试验原理及斜面显色照片4 LST肉汤：于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。
5 革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。
大肠杆菌为革兰氏阴性。
大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下：━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━━━靛基质┃ MR ┃ VP ┃枸椽酸盐┃ 鉴定(型别) ━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━＋┃＋┃ －┃ －┃典型大肠杆菌－┃ ＋┃ －┃ －┃非典型大肠杆菌━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━＋┃＋┃－┃ ＋┃典型中间型－┃＋┃ －┃ ＋┃非典型中间型━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━－┃－┃＋┃＋┃典型产气肠杆菌＋┃－┃ ＋┃ ＋┃非典型产气肠杆菌━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━如出现上表以外的生化反应类型,表明培养物可能不纯,应重新划线分离,必要时做重复试验。
结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,IMViC试验为＋＋－－或－＋－－,再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN值。
致泻性大肠杆菌的检验（GB方法简介）增菌以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。
取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广口瓶内，于36±1℃培养6h。
挑取1环，接种于1管30mL 肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养18h。
分离将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36±1℃培养18～24h，观察菌落。
不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
附：麦康凯琼脂平板照片EMB平板原理及照片生化试验:自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KI)。
同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。
以上培养物均在36℃培养过夜。
TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌。
TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。
必要时做氧化酶试验和革兰氏染色。
附：三糖铁琼脂(TSI)原理及照片克氏双糖铁琼脂照片尿素酶试验原理及照片半固体培养基的作用？血清学试验假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希氏菌的琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌O157血清做玻片凝集试验。
当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。
如与某一个单价O血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。
证实试验：制备O抗原悬液，稀释至与Mac Farland3号比浊管相当的浓度。
原效价为1：160～1：320的O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。
稀释血清与抗原悬液在10mm×75mm试管内等量混合，做单管凝集试验。
混匀后放于50℃水浴箱内，经16h后观察结果。
如出现凝集，可证实为该O抗原。
附：致泻性大肠杆菌及O血清。
肠毒素试验（产毒素性大肠杆菌）（LT－不耐热肠毒素，ST－耐热肠毒素）1 酶联免疫吸附试验检测LT和ST。