血乳酸的测定与应用

4 实验方法与步骤
人一组，自由组合编组，选定一人担任小组长。 4-5人一组，自由组合编组，选定一人担任小组长。 查找国内外近十年有关运动训练中血乳酸变化的 文献资料并总结， 以小组为单位进行讨论， 文献资料并总结 ， 以小组为单位进行讨论 ， 拟定 实验的内容与指标。 实验的内容与指标。 根据拟定的实验内容与指标， 根据拟定的实验内容与指标 ， 讨论拟定运动实验 对象的训练方案： 运动方式、 对象的训练方案 ： 运动方式 、 运动强度与时间等 包括学会训练实验动物） （包括学会训练实验动物）。 详细制定实验步骤与方法， 严格按照实验步骤与 详细制定实验步骤与方法 ， 要求进行实验。 要求进行实验。
3 实验器材与试剂
⑴实验仪器 采血针、吸血管、移液管、 采血针 、 吸血管 、 移液管 、 聚苯乙烯微量 细胞培养板、酶联免疫检测仪 细胞培养板、
⑵ 试剂 辣根过氧化物酶羊抗兔IgG IgG； ①辣根过氧化物酶羊抗兔IgG； ② 包 被 液 ： 0.05 mol/L 碳 酸 缓 冲 液 （ pH 值 为 9.63 ） ： 15g 293g 蒸馏水稀释至100ml； 100ml Na2CO30.15g，NaHCO20.293g，蒸馏水稀释至100ml； ③ 稀释液（ PBS-Tween） ： NaCl8g ， KCl0.2g ， KH2PO4 0.2g ， 稀释液 （ PBS-Tween ） NaCl8 KCl0 12H TweenNa2HPO4·12H2O 2.9g ， Tween-20 ， 0.5ml ， 蒸 馏 水 加 至 1000ml ml； 1000ml； 洗涤液：同稀释液； ④洗涤液：同稀释液； 封闭液： 质量分数）BSA（ PBS配制 配制） ⑤封闭液：0.5%（质量分数）BSA（用PBS配制）； 邻苯二胺溶液（底物） ⑥邻苯二胺溶液（底物）： 配制： mol/L柠檬酸 柠檬酸（ g/100 ml） ml； 配制 ：0.1 mol/L柠檬酸 （ 2.1g/100 ml） ， 取 6.1 ml ； 0.2 Na2HPO4 12H g/100 ml） 邓邻苯二胺8 mol/L Na2HPO4·12H2O （ 7.163 g/100 ml ） ， 邓邻苯二胺 8 mg（溶解） 临用前加30 30% 体积分数） μl； mg（溶解）；临用前加30%（体积分数）H2O240 μl； ⑦ 终止液：2mol/L H2SO4。 终止液：
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5 实验参考方案
实验对象： 实验对象为运动人体科学专业学生10 10名 ⑴ 实验对象 ： 实验对象为运动人体科学专业学生 10 名 ， 采用功率自行车进行大强度运动训练建立运动实验模型： 采用功率自行车进行大强度运动训练建立运动实验模型： 采用半自动生化分析仪检测血液标本。 采用半自动生化分析仪检测血液标本。 运动训练方案： 运动模型的建模， ⑵ 运动训练方案 ： 运动模型的建模 ， 采用功率自行车进 行有氧运动训练（运动方案可自行设计） 持续运动5 行有氧运动训练 （ 运动方案可自行设计 ） 。 持续运动 5 分钟， 运动强度由心率控制， 分钟 ， 运动强度由心率控制 ， 为实验对象最大心率达 85-95％ 85-95％。 实验方法与步骤： ⑶ 实验方法与步骤： 包被抗原： 用包被液将抗原做适当稀释， 一般为1 ① 包被抗原 ： 用包被液将抗原做适当稀释 ， 一般为 1-10 μg/孔 每孔加200 μl， 温育1 μg/孔，每孔加200 μl，37 ℃温育1 h，或4℃冰箱放 16置16-18 h。
6 注意事项
设计运动方案时，应注意检索文献资料， ⑴ 设计运动方案时 ， 应注意检索文献资料 ， 注意运动 时间与强度的关系，注意研究对象的物种差异。 时间与强度的关系，注意研究对象的物种差异。 ⑵ 严格按照实验方法与步骤进行操作。 严格按照实验方法与步骤进行操作。 做好实验数据的统计分析。 ⑶ 做好实验数据的统计分析。 若对实验动物进行运动训练时， ⑷ 若对实验动物进行运动训练时 ， 要注意观察和判断 运动的情况与疲劳的程度： 运动的情况与疲劳的程度：动物停止跑动时应设法驱 赶动物。 赶动物。 ⑸ 做好实验数据的统计分析
⑴设计本次实验方案 实验对象的选择（不同项目运动员）运动训练方式、强度、 ①实验对象的选择（不同项目运动员）运动训练方式、强度、 持续时间及取样时间的选择。 持续时间及取样时间的选择。 ②血乳酸的实验测定方法选择 可采用酶联免疫吸附法（enzyme可采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent ELISA），或放射免疫法（Radioimmuniassay,RLA） ），或放射免疫法 assay, ELISA），或放射免疫法（Radioimmuniassay,RLA） 测定。 测定。 确定实验数据的统计学处理方法。 ③确定实验数据的统计学处理方法。 ⑵全血乳酸检测试剂盒法 原理： NAD+为氢受体 LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸 为氢受体， 催化乳酸脱氢生成丙酮酸， ① 原理：以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸， NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物， 转化成NADH PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物 使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物， 呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。 530nm时与乳酸含量成线性关系 呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。 材料与试剂：采血针、吸血管、离心管、台式离心机、 ② 材料与试剂：采血针、吸血管、离心管、台式离心机、 超声清洗机、试管架、移液枪、TP头 水浴箱、 超声清洗机、试管架、移液枪、TP头、水浴箱、可见光分 光光度计、比色杯。 光光度计、比色杯。
实验十三
血乳酸的测定与应用
1 实验目的
⑴ 通过实验使学生掌握体内血乳酸的测定方法及该指标在运 动实践中的应用和意义，为体育教学和运动训练提供指导。 动实践中的应用和意义，为体育教学和运动训练提供指导。 进一步巩固离心机、可调微量移液器、 ⑵ 进一步巩固离心机、 可调微量移液器、 振荡器等仪器的基 本操作。掌握实验对象取材、 本操作。掌握实验对象取材、标本处理的方法与半自动生 化分析仪的操作方法。 化分析仪的操作方法。 通过综合设计型实验的实验设计与研究过程， ⑶ 通过综合设计型实验的实验设计与研究过程，提高学生的 学习兴趣，培养学生查阅文献资料、独立思考、创新思维、 学习兴趣 ，培养学生查阅文献资料、独立思考、创新思维、 动手操作、分析问题和解决问题的能力， 动手操作 、分析问题和解决问题的能力，使学生基本掌握 从事一般科学研究的方法。 从事一般科学研究的方法。
表3-17 全血乳酸检测试剂盒的操作 蒸馏水（ml） 蒸馏水（ml） 3mmol/L标准液 ml） 标准液（ 3mmol/L标准液（ml） 0.02 上清液（ml） 上清液（ml） 0.02 酶工作液（ml） 酶工作液（ml） 1 1 1 显色剂（ml） 显色剂（ml） 0.2 0.2 0.2 混匀，37℃水浴准确反应10分钟 水浴准确反应10 混匀，37℃水浴准确反应10分钟 终止液（ml） 终止液（ml） 2 2 2 混匀，530nm，1cm光径 蒸馏水调零， 光径， 混匀，530nm，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度 标准浓度为3mmol/L 稀释倍数为7 3mmol/L， 标准浓度为3mmol/L，稀释倍数为7倍 空白管 0.02 标准管 测定管
2 实验原理
乳酸是糖酵解供能系统的终产物， 乳酸是糖酵解供能系统的终产物 ， 又是有氧代谢系统的 重要氧化物质， 运动时乳酸主要在骨骼肌中生成， 重要氧化物质 ， 运动时乳酸主要在骨骼肌中生成 ， 然后 透过细胞膜进入血液， 透过细胞膜进入血液 ， 并随血液循环到达身体的其他组 织被代谢消除。 可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖， 织被代谢消除 。 可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖 ， 在供能体系中占有重要地位。与此同时， 在供能体系中占有重要地位 。 与此同时 ， 乳酸过多对酸 碱平衡的影响又成为负面效应，导致疲劳发生。 碱平衡的影响又成为负面效应，导致疲劳发生。 因此， 运动时乳酸的生成、 运动后乳酸的消除， 因此 ， 运动时乳酸的生成 、 运动后乳酸的消除 ， 以及运 动训练和体育锻炼中血乳酸指标的应用成为运动生物化 学研究的重要内容之一。 学研究的重要内容之一。 45安 静 时 ， 人 体 静 脉 血 里 的 乳 酸 物 质 的 量 浓 度 为 0.45mmol/L。剧烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强， 1.3mmol/L。剧烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强，
洗涤： 倒尽板孔中液体， 200μl 洗涤液， 反复3 μl洗涤液 ② 洗涤 ： 倒尽板孔中液体 ， 加 200μl 洗涤液 ， 反复 3 次 ， 最后 将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。 将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。 加封闭液200μl，37℃温育1 200μl ③加封闭液200μl，37℃温育1h。 洗涤同② ④洗涤同②。 ⑤采集受试者运动前与运动后血液制成血清 加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200μl。 200μl ⑥加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200μl。 同时作稀释液对照。37℃温育12 12h 或室温放置2 同时作稀释液对照。37℃温育12h，或室温放置2 h。 洗涤同② ⑦洗涤同②。 加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG 每孔200μl， 37℃ 温育1 IgG， 200μl ⑧ 加辣根过氧化物酶羊抗兔 IgG ， 每孔 200μl ， 37℃ 温育 1h ， 或室温放置2 或室温放置2h。 洗涤同② ⑨洗涤同②。 加底物：邻苯二胺溶液加200μl，室温暗处5min。观察结果： 200μl ⑩加底物：邻苯二胺溶液加200μl，室温暗处5min。观察结果： 用酶联免疫检测仪记录A190 nm读数。 用酶联免疫检测仪记录A nm读数。 读数
血乳酸浓度显著升高， 血乳酸浓度显著升高， 而且在某些项目中两者的相关系 数很大，其增长情况与运动强度、氧债、 数很大 ， 其增长情况与运动强度、 氧债 、 训练程度等因 素密切相关， 素密切相关， 因而可直接用运动后血乳酸的浓度来评定 无氧代谢的能力， 400m跑后，血乳酸低于10 mmol/L表 无氧代谢的能力，如400m跑后，血乳酸低于10 mmol/L表 明无氧代谢能力差；达到14 14mmol/L表明无氧酵解能 明无氧代谢能力差 ； 达到 14-15 mmol/L 表明无氧酵解能 力强。 力强。 当今血乳酸不仅用来评定速度耐力水平， 当今血乳酸不仅用来评定速度耐力水平， 还用来评定有 氧代谢能力，控制运动强度，预测成绩等等。 氧代谢能力，控制运动强度，预测成绩等等。
实验报告（实验结果与分析） ⑷ 实验报告（实验结果与分析）内容 实验结果：实验结果为实验对象运动后， ① 实验结果 ： 实验结果为实验对象运动后 ， 血乳酸含量显著 升高，运动前血乳酸浓度为0 45mmol/L， 升高 ， 运动前血乳酸浓度为 0.45-1.3 mmol/L ， 运动后即刻 10mmol/L，两者差异具有统计学意义（P<0 05） 为10-15 mmol/L，两者差异具有统计学意义（P<0.05）。 实验结果分析：乳酸是糖酵解供能系统的终产物， ② 实验结果分析 ： 乳酸是糖酵解供能系统的终产物 ， 又是有 氧代谢系统的重要氧化物质， 氧代谢系统的重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生 可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖， 成，可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖，在供能体系中占 有重要地位，可直接用运动后血乳酸的浓度来评定无氧代谢 有重要地位， 的能力。 跑后，血乳酸低于10 mmol/L表明无氧代谢 的能力。如400 m跑后，血乳酸低于10 mmol/L表明无氧代谢 能力差；达到14 14mmol/L表明无氧酵解能力强 表明无氧酵解能力强。 能力差；达到14-15 mmol/L表明无氧酵解能力强。