同型半胱氨酸检测方法的研究进展

第47卷第10期2019年5月

广　州　化　工

Guangzhou Chemical Industry

Vol.47No.10

May.

2019同型半胱氨酸检测方法的研究进展*

肖　倩,杨　颖,甘家宝,张瑞云,刘春叶

(西安医学院药学院,陕西　西安　710021)

摘　要:同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)在细胞和组织的生长中起重要作用,人体Hcy水平与病理过程和人类疾病密切相关,实现准确㊁快速㊁高选择性地检测血尿中Hcy含量,对生命科学研究以及临床诊断具有重要的作用㊂对Hcy的检测方法进行了综述,分别对放射酶法㊁免疫法㊁HPLC法㊁质谱法㊁毛细管电泳法㊁微流控纸芯片法等的优缺点进行对比总结,为Hcy的研究和临床诊断提供了参考㊂

关键词:同型半胱氨酸;检测方法;微流控纸芯片

　中图分类号:R1　文献标志码:A文章编号:1001-9677(2019)10-0014-04

*基金项目:国家自然科学基金(No:81202492);陕西省大创项目(No:201825029);校级大创项目(No:2018DC-29)㊂

第一作者:肖倩(1996-),女,药学专业本科生㊂

通讯作者:刘春叶(1977-),教授,主要从事药物分析及质量评价㊂

Research Progress on Detection Methods of Homocysteine*

XIAO Qian,YANG Ying,GAN Jia-bao,ZHANG Rui-yun,LIU Chun-ye

(School of Pharmacry,Xi’an Medical University,Shaanxi Xi’an710021,China)

Abstract:Homocysteine is an essential amino acid that contains mercapto group,and it plays an important role in the growth of cells and tissues.Meanwhile,human Hcy level is closely related to the pathological process and human diseases.Therefore,accurate,rapid and highly selective detection of Hcy content in hematuria is of great significance for life science research and clinical diagnosis.The research progress on Hcy detection methods was discussed.The advantages and disadvantages of radio enzymic assays,immunoassay,HPLC method,mass spectrometer,capillary electrophoresis,paper-based microfluidic analytical devices were reviewed.The trends and future challenges of the method were summarized,which would provide references for the detection of Hcy in clinical research.

Key words:homocysteine;detection methods;paper-based microfluidic analytical devices

同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是含有硫分子的氨基

酸,主要来源于进食过程中的蛋氨酸,即甲硫氨酸去甲基化形

成Hcy㊂Hcy本身不参与蛋白质合成,也不进行编码,血液中

的Hcy含量是人体健康的重要指标,Hcy浓度增高,将使人体

的DNA不能很好地修复从而面临更高的疾病风险㊂此外,它

还会引起重金属和自由基等人体代谢废物在体内积聚,导致各

种炎症㊁细胞损伤㊂因此,检测Hcy在人体内的含量对上述疾

病的预防㊁诊断和治疗非常重要,本文对目前Hcy检测方法进

行㊂

1　放射酶分析法

放射酶实验(Radio enzymic Assays)[1],是最早测人类血清

Hcy的方法㊂1981年,Kredich[2]提出相关理论㊂1984年,Ueland P

M等[3]测定了大鼠㊁兔子组织提取液中的Hcy㊂1985年,Helga

Refsum等[4]测定了人血清中的Hcy含量㊂方法如下:清液加碱

液,调节pH至7,加有机还原剂二硫代苏糖醇(DTT),37℃

放置10min;利用活性炭不能吸附Hcy的特点,除去组织液中

的其他腺苷;最后,Hcy在水解酶的催化下和同位素标识的腺

苷发生反应,生成有放射性的s-腺苷半胱氨酸(SAH),用

HPLC进行定量㊂实验证实,血清中70%的Hcy可与血浆中的

载体蛋白组合㊂放射酶分析法敏感性和特异性比较好,但测量

范围小,样品处理过程繁琐,需要经过酶培养㊁蛋白质沉淀㊁

中和反应等步骤㊂但是,该方法可改进为采用薄层色谱或纸层

析代替HPLC进行检测[5],不需要昂贵的仪器,实验简单易

行㊂

2　免疫检测法

免疫检测法(immunoassay,IA)应用免疫学理论,以抗原或

抗体测定样品的含量㊂IA包含荧光偏振和酶免疫两种㊂

2.1　荧光偏振免疫分析法[6]

1995年,Mohammed T.Shipchandler[7]中使用的荧光偏振免

疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)原理检测

血浆/血清中的Hcy㊂FPIA测定原理:Hcy水解酶和同位素标

记的大量腺苷催化Hcy产生放射性SAH,加入SAH抗体(Ab)

和抗原(Ag),当待测试的SAH的浓度较高时,则该体系中抗

体可以全部反应,剩余未结合的SAH;若待测SAH浓度较低