微生物限度检查记录(常规法)
无菌检查微生物限度检查方法学验证实例
供试液制备：取样品10瓶分别加0.1%蛋
白胨溶液30 ml溶解后，过滤。
7.活菌计数
活菌计数结果见表1。
10－4稀释
10－5稀释
10－7稀释
试验次数
1
2
1
21Βιβλιοθήκη 2金黄色葡萄球菌56
60
枯草芽孢杆菌
77
79
白色念珠菌
86
70
黑曲霉菌
80
76
铜绿假单胞菌
47
50
方法验证
直接接种法：取样品12支，分别接种8支硫乙醇酸盐和4支霉菌液体培养基2ml/支后，再按要求加入相应的阳性菌液（30-100个/ml），置规定温度培养3-5天，逐日观察结果。
仪器和滤器：HTY-2000A集菌仪，全封闭无菌试验过滤培养器（批号20050105）北京牛牛基因有限公司。
01
方法：中国药典2005年版无菌检查的验证实验
02
操作方法 菌液制备： 取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中, 生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中, 32.5±2.5℃培养18～24小时；
培养：硫乙醇酸盐流体培养基桶30-35℃培养；真菌培养基桶23-28℃培养。观察结果。
结果 细菌和真菌数计数结果分别见表1和表2。
表1 细菌数计数 表2 真菌数计数结果
*
菌 种
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
铜绿假单胞菌
生孢梭菌
计数(CFU)
22
26
36
39
62
66
58
54
45、 23
128、108
药品微生物限度检查实验记录
JL—5.6—17—2011药品微生物限度检查实验记录（口服）检品编号_____________________________ 室温_____℃湿度_____% 第___页检品名称_____________________________ 规格数量____________________________ 批号_____________________________ 包装____________________________ 生产单位_____________________________ 检验目的____________________________ 供养单位_____________________________ 检验日期____________________________ 检验依据《中国药典年版部》报告日期____________________________①供试液制备: ⒈常规法: 供试品称(吸)取_________g(ml) 0.9%无菌氯化钠溶液______ml②45℃水浴/振荡_____分钟②研钵法③匀浆仪_____r/分钟_____分钟⒉非水溶性: 供试品_______g(ml) 加乳化剂______g(ml)⒊抑菌性: 供试品_______g(ml) 0.9%无菌氯化钠溶液______ml处理方法: A.稀释法B.离心沉淀集菌法C.薄膜过滤法 D.中和法 E.沉降法计数测定方法: 平皿法（________ml/皿）薄膜法（冲洗量_______ml/膜）编号: _______________ 批号: _____________规定: 不得过__________cfu/g或ml 规定: 不得过_________cfu/g或ml规定: 不得检出规定: 不得检出规定: 不得检出活螨检查规定: 不得检出检验者: __________ 校对者: __________JL—5.6—17—2011 药品微生物限度检查实验记录（局部用药）检品编号_____________________________ 室温_____℃湿度_____% 第___页检品名称_____________________________ 规格数量____________________________ 批号_____________________________ 包装____________________________ 生产单位_____________________________ 检验目的____________________________ 供养单位_____________________________ 检验日期____________________________ 检验依据《中国药典年版部》报告日期____________________________③供试液制备: ⒈常规法: 供试品称(吸)取_________g(ml) 0.9%无菌氯化钠溶液______ml④45℃水浴/振荡_____分钟②研钵法③匀浆仪_____r/分钟_____分钟⒉非水溶性: 供试品_______g(ml) 加乳化剂______g(ml)⒊抑菌性: 供试品_______g(ml) 0.9%无菌氯化钠溶液______ml处理方法: A.稀释法B.离心沉淀集菌法C.薄膜过滤法 D.中和法 E.沉降法规定: 不得过__________cfu/g或ml 规定: 不得过_________cfu/g或ml 金黄色葡萄球菌检查铜绿假单胞菌检查规定: 不得检出规定: 不得检出梭菌检查白色念珠菌检查定: 不得检出检验者: __________ 校对者: __________。
微生物限度检验方法验证记录
微生物限度检验方法验证记录1.适用范围本方案适用于本公司各品种微生物限度检验方法的验证。
2.目的通过验证确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，确保该产品微生物限度检查结果的正确性。
3.职责项目责任人:负责验证方案的起草及具体实施。
验证管理员:负责验证工作的组织、协调及管理。
QA现场监控员:负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。
QC负责人:负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。
QC检验员:负责验证方案的起草与参与实施，并对所测数据准确性负责。
质量部经理:负责验证方案及报告的审核和批准。
4. 概述通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行实验，根据实验结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查;若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
5.检查和确认5.1微生物限度检验室，洁净级别1万级;超净工作台，局部100级(确认方法:审阅相关的验证资料)。
微生物限度检验室(洁净级别1万级)验证报告超净工作台(洁净级别100级)验证报告检查结论:验证资料完整，符合相应洁净度要求且在有效期内。
检查人: 日期:5.2与验证相关的文件(确认方法:检索)。
微生物限度检查法操作规程和检定菌传代操作规程净化工作台使用操作规程微生物限度检验室清洁消毒规程培养箱标准操作规程检查结论:验证所需资料齐全、完整，符合验证要求。
检查人: 日期:5.3检验用仪器设备(确认方法:检查、核对)。
符合3Q(IQ、OQ、PQ)要求。
5.3.1 培养箱型号: HP400S生产厂家: 武汉瑞华仪器设备有限公司校验有效期至: 年月日设定温度: 32.5?型号: PYX-280S-A生产厂家: KELI 科力仪器校验有效期至: 年月日设定温度: 25.5?5.3.4超级净化层流台型号: YJ-875生产厂家: 苏州市姑苏空调净化有限公司验证有效期至: 年月日检查结论: 符合要求检查人: 日期:5.4检验用菌种、培养基和试液(确认方法:检查、核对)金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003] 批号生产厂: 中检所枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501] 批号生产厂: 中检所大肠埃希菌[CMCC(B)44102] 批号生产厂: 中检所白色念珠菌[CMCC(F)98001] 批号生产厂: 中检所黑曲霉菌[CMCC(F)98003] 批号生产厂: 中检所β-内酰胺酶:2ml(大于200单位/ml)批号生产厂: 中检所硫乙醇酸盐流体培养基批号: 生产厂: 北京三药科技开发公司改良马丁培养基批号: 生产厂: 北京三药科技开发公司营养肉汤培养基批号: 生产厂: 北京三药科技开发公司改良马丁琼脂培养基批号: 生产厂: 北京三药科技开发公司检查结论: 符合要求检查人: 日期:6. 菌液制备(1)金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物1ml 9ml0.9%无菌NaCl溶液至_______含菌量_______CFU/ml [CMCC(B)26003] 第_____代 10倍系列稀释(2)枯草芽孢杆菌新鲜肉汤培养物1ml 9ml0.9%无菌NaCl溶液至_______含菌量_______CFU/ml [CMCC(B)63501]第_____代 10倍系列稀释(3)大肠埃希菌新鲜肉汤培养物1ml 9ml0.9%无菌NaCl溶液至_______含菌量_______CFU/ml [CMCC(B)44102]第_____代 10倍系列稀释(4)白色念珠菌新鲜改良马丁培养物1ml 9ml0.9%无菌NaCl溶液至_______含菌量_______CFU/ml [CMCC(F)98001]第_____代 10倍系列稀释(5)黑曲霉新鲜孢子洗脱液1ml 9ml0.9%无菌NaCl溶液至_______含菌量_______CFU/ml [CMCC(F)98003]第_____代 10倍系列稀释7. 实验方案7.1无抑菌活性的供试品供试液的制备7.1.1稀释剂:pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液7.1.2液体供试品:供试品10ml置锥形瓶中，加入90ml稀释剂，混匀，作为供试液(1:10)。
微生物限度、控制菌检查记录
产品名称
批号
数量
供货单位
取样量
检验日期
温度
湿度
报告日期
检验依据
供试液制备
取供试品（g），加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至ml，混匀，作为1:10的供试液；细菌检查：吸取本品1ml至5个平皿，每个平皿0.2ml；霉菌和酵母菌检查：吸取本品1ml至平皿
平皿号
细菌
培养基/批号
营养琼脂培养基/
供试品
阳性对照
阴性对照
结果
□检出□未检出（规定：）
备注
结论
本品按进行检验，结果。
检验人
复核人
2天
3天
3天
4天
4天
5天
5天
5
1天
1天
2天
2天
3天
3天
4天
4天
5天
5天
每组菌落总数
平均数
平均数
结果
（规定：）
结果
（规定：）
备注
结论
本品经按进行检验，结果。
检验人
复核人
控制菌检查记录
检验编号：
产品名称
批号
数量
供货单位
取样量
检验日期
温度
湿度
报告日期
检验依据
一、大肠埃希菌检查
供试品制备：取供试品（g/ml/cm2），加PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至ml，混匀，作为的供试液。
培养基信息：①营养肉汤培养基配制批号：②四硫磺酸钠亮绿培养基配制批号：
③胆盐硫乳琼脂培养基配制批号：④EMB配制批号：
培养温度：培养时间：培养箱编号：
营养肉汤预增菌（18～24h）
四硫磺酸钠亮绿增菌（18～24h）
(2020版)药品片剂微生物限度检查法验证记录
（2020版）药品片剂微生物限度检查法验证记录文件编号：XXX-XX-XXXXXX制药有限责任公司XX年XX月XX日XX片微生物限度检查法标准起草说明XX片由XXXXXXXX药材制成，有XXXXX作用。
根据其用药途径和处方，应进行需氧菌总数、霉菌数和酵母菌总数的测定及控制菌大肠埃希菌检查。
本品参照2015版药典进行过方法适用性验证没有发现抑菌性，所以确定需氧菌总数、霉菌数和酵菌总数及大肠埃希菌采用常规法测定。
经对所采用的方法适用性进行试验，符合《中国药典》2020版四部1105非无菌产品微生物限度检查的微生物计数法和1106非无菌产品微生物限度控制菌检查法与1107非无菌药品微生物限度标准，方法可行。
XX片微生物限度检查法标准正文微生物限度：按微生物限度检查法（《中国药典》2020版四部1105非无菌产品微生物限度检查的微生物计数法和1106非无菌产品微生物限度控制菌检查法与1107非无菌药品微生物限度标准。
取样品10克，加PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液稀释至100ml，制备成溶解均匀的1：10供试液。
需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数取本品1：10供试液1ml，注皿，平行制备平皿(2个平皿需氧菌总数和2个平皿霉菌与酵母菌总数)，按平皿法测定。
大肠埃希菌取本品1：10供试液10ml直接接至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，依法检查。
《中国药典》非无菌制剂项下标准规定：需氧菌总数103cfu/g ; 霉菌和酵母菌总数102cfu/g ; 不得检出大肠埃希菌(1g)。
XX片生物限度检查方法适用性试验1、样品名称：XX片批号XXX、XXX、XXX2、验证用菌种：铜绿假单胞菌CMCC﹙B﹚10104、、枯草杆菌CMCC﹙B﹚63501、金黄色葡萄球菌CMCC﹙B﹚26003、白色念珠菌CMCC﹙F﹚98001、黑曲霉CMCC ﹙F﹚98003 大肠埃希菌CMCC﹙B﹚44102.3．实验方法：《中国药典》2015版四部微生物限度方法适用性检查验证实验。
微生物限度检查法
在30～35℃培养箱内倒置培养48h， 取出检查。 3个平板生长的平均菌落 数不超过1个。
无菌室操作台或净化工作台要定期
检测其洁净度，应达到A级。净化工 作台中的高效及中效过滤器应根据 检测情况，必要时予以更换处理。
1.6消毒处理
无菌室应在每次操作
前、后均用消毒液擦拭操作台及
可能污染的死角。开动层流净化
4.1.4 乳酸、15%过氧乙酸（交替用于对洁净 室熏蒸消毒）
稀释剂和试剂 4.2.1 0.9%无菌氯化钠溶液 4.2.2 无菌聚山梨酯 -80（对含油性 供试品具有助溶作用） 4.2.4 pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲 液 4.2.5 pH6.8磷酸盐缓冲液 4.2.6 pH7.6磷酸盐缓冲液等
保存 供试品在检验之前，应保存在阴 凉干燥处，勿冷藏或冷冻，以防供 试品内污染菌因保存条件不妥引起 致死、损伤或繁殖。
2
2.1
2.2
供试品在检验之前，应保持原包 装状态，严禁开启。包装已开启的 样品不得作为供试品。
3检验量 即一次试验所用的供试品量（g、ml
或
c㎡）。 除另有规定外，一般供试品的检验量为 10g 或10ml；膜剂为100c㎡；贵重药 品、微量包装药品的检验量可以酌减。 要求检查沙门菌的供试品，其检验量应 增加20g 或20ml（其中10g或者10ml 用于阳性对照试验）。
2
开启无菌室紫外杀菌灯和空气过 滤装置，并使其工作不低于30min。 操作人员用肥皂洗手，关闭紫外 杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋。 再用消毒液洗手或用乙醇棉擦手， 穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。
3
4
操作前先用乙醇棉球擦手，再用 碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦 拭供试品瓶、盒、袋等的开口处 周围，待干后用灭菌的手术镊或 剪刀将供试品启封。
微生物限度检查法
中华人民共和国药典2000版二部微生物限度检查法附录Ⅺ J 微生物限度检查法微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法,包括染菌量及控制菌的检查。
供试品应随机抽样。
一般抽样量为检验用量(2个以上最小包装单位)的3倍量。
检查的全过程,均应严格遵守无菌操作,严防再污染。
除另有规定外,本检查法中细菌培养温度为30~35℃,霉菌、酵母菌培养温度为25 ~28℃,控制菌培养温度为36℃±1℃。
检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。
培养基及其制备方法除另有规定外,培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。
1.营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法(附录Ⅺ H)2.玫瑰红钠琼脂培养基胨 5g 玫瑰红钠 0.0133g葡萄糖 10g 琼脂 15~20g磷酸二氢钾 1g 水 1000ml硫酸镁 0.5g除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装,灭菌。
3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨 10g 琼脂 15~20g酵母浸出粉 5g 水 1000ml葡萄糖 20g除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖,分装,灭菌。
4.胆盐乳糖培养基(BL)胨 20g 磷酸二氢钾 1.3g乳糖 5g 牛胆盐 1.3g氯化钠 5g (或去氧胆酸钠0.5g)磷酸氢二钾 4.0g 水 1000ml除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2, 煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,灭菌。
5.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基 100ml 曙红钠指示液 2ml20%乳糖溶液5ml 亚甲蓝指示液 1.3~1.6ml 取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液, 摇匀,倾注平皿。
6.麦康凯琼脂培养基(MacC)胨 20g 1%中性红指示液 3ml乳糖 10g 琼脂 15~20g牛胆盐 5g 水 1000ml氯化钠 5g除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
微生物限度检查记录(口服给药)培养基稀释法
微生物限度检查记录（口服给药）
检验编号： 检品名称： 批号 第 页 共 页
检验者 月 日~ 月 日 校对者： 月 日
培养基名称： 营养琼脂培养基 （批号： 生产单位 ）灵敏度
玫瑰红钠琼脂培养基 批号： 生产单位 ）灵敏度
供试液制备 常规法 取供试品 g(ml),加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 ml 。
①匀浆仪 转速 转/分钟 min ②研钵法 ③保温振摇法： ℃，保温 min,并适时振摇
细菌数：取本品1：10的供试液1 ml 注入2个平皿（0.5ml/皿），平行制备4个平皿
霉菌（酵母菌）：取本品1：10的供试液1 ml 注入1个平皿，平行制备2个平皿
检查方法：照《中国药典2005年版一部》（附录XIII C ）或二部（附录XI J ）微生物限度检查法检查
细菌数： ℃， hr 霉菌（酵母菌）总数： ℃， hr
控制菌检查 培养温度 ℃
大肠埃希菌检查：对照菌： 大肠埃希菌[CMCC （B ）44102] 沙门菌检查：对照菌： 乙型副伤寒沙门菌[ CMCC （B ）50094]
结论： 本品按《中国药典2005年版 部》检查微生物限度，结果 规定。
微生物限度检查记录2
一、供试液制备：1、液体供试品：取供试品 ml ，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 ml, 混匀，作为1：10供试液。
2、固体、半固体或黏稠性供试品：取供试品 g ，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 ml, 混匀，作为1：10供试液，必要时加适量的无菌聚山梨酯80。
3、需用特殊供试液制备方法的供试品：①肠溶及结肠溶制剂供试品：取供试品 g ，加PH6.8无菌磷酸盐缓冲液至 ml,振摇，使溶解，作为1：10供试液。
②具有抑菌活性供试品：取供试品 g 或 ml 加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 ml ，作为1：10供试液。
供试液处理方法：①培养基稀释法 ②离心沉淀集菌法 ③薄膜过滤法 ④中和法 二、检查法：①平皿法 ②薄膜过滤法大肠埃希菌检查 36±1℃ 24h结论：本品按《中国药典2005年版》微生物限度检查法标准检验，结果：检验员： 复核员：一、供试液制备：1、液体供试品：取供试品ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml, 混匀，作为1：10供试液。
2、固体、半固体或黏稠性供试品：取供试品g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml, 混匀，作为1：10供试液，必要时加适量的无菌聚山梨酯80。
3、需用特殊供试液制备方法的供试品：①肠溶及结肠溶制剂供试品：取供试品g，加PH6.8无菌磷酸盐缓冲液至ml,振摇，使溶解，作为1：10供试液。
②具有抑菌活性供试品：取供试品g或ml加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml，作为1：10供试液。
供试液处理方法：①培养基稀释法②离心沉淀集菌法③薄膜过滤法④中和法二、检查法：①平皿法②薄膜过滤法大肠埃希菌检查36±1℃24h结论：本品按《中国药典2005年版》微生物限度检查法标准检验，结果：检验员：复核员：一、供试液制备：1、液体供试品：取供试品ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml, 混匀，作为1：10供试液。
微生物限度检查记录版
表：2.1-024微生物限度检查记录（通用）1. 常规法：取供试品10為1,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。
2. 薄膜过滤法：取供试品10mi ,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。
吸取1:10的供试液10ml ,过滤，加0.1%无菌蛋白胨水溶液 300ml 分 三次冲洗，每次100ml ;冲洗后，将滤膜正贴于胰酪大豆胨固体培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基 上，每种培养基平行制备 2个平皿。
按平皿法测定其菌数。
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）、麦康凯液体培养基（配制批）麦康凯琼脂培养基（配制批号: ）供试液制备微生物限度检查记录、需氧菌总数检查30〜353〜5）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C,5〜7天）三糖铁琼脂斜面穿刺接种 （18〜24h ）三、控制菌检查 （30-35 C ）检验者:表：2.1-024号:结论本品经按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物限度检查法”进行检验，结果审核者:微生物限度检查记录（丸剂）供试液制备供试液。
胰酪大豆胨增菌 （18〜24h ）RV 沙门选择培养木糖赖氨酸脱氧胆酸分离培养（18〜48h ）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）麦康凯琼脂培养基（配制批号:）四、沙门菌检查 （30 °C 〜35C ） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号:）、三糖铁琼脂（配制批号：五、耐胆盐革兰阴性菌检杳胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：审核者：检验者: 表：2.1-024阴性对照阳性对照三、大肠埃希菌检查）、麦康凯液体培养基（配制批结果□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出/g）四、沙门菌检查（30°C〜35C）胰酪大豆东液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：、表: 2.1-024 微生物限度检查记录（蛇胆川贝液）三、大肠埃希菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）审核者：检验者:表：2.1-024 微生物限度检查记录（30〜353〜5天）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C, 5〜7天）1、 口服液体药用聚酯瓶：取数个试瓶，加入1/2标示容量的氯化钠注射液，将盖旋紧，振摇1分钟，即得供试液。
微生物检验原始记录
微生物限度检验原始记录R-ZL-126-01样品名称：规格：检验依据：批号：收验日期：年月日报告日期：年月日检验过程：1、细菌、霉菌及酵母菌计数采用常规法，取供试品10g（天平型号：编号：），加Ph7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液（高压蒸汽灭菌器型号：编号：）至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
取供试液1ml，置直径90mm无菌平皿（电热恒温干燥箱型号：编号：）中，注入15-20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基（配制批号：）、玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）中，混匀，凝固，倒置培养（电热恒温培养箱型号：编号：）；霉菌培养箱型号：编号：）。
每种培养基至少制备2个平板。
阴性对照试验：取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。
细菌总数培养温度30-35℃培养时间72h 限度规定稀释倍数 10-1 10-2 10-3阴性对照结果报告平皿1平皿2平均菌落数霉菌、酵母菌数培养温度23-28℃培养时间120h 限度规定稀释倍数10-1 10-2 10-3阴性对照结果报告平皿1平皿2平均菌落数2、大肠埃希菌检验取胆盐乳糖培养基（配制批号：）（高压蒸汽灭菌器型号：编号：）3份，每份各100ml，1份加入供试液10ml(相当于供试品1g)，1份加入对照菌液作为阳性对照，第3份加入与供试液等量的稀释剂作为阴性对照。
均培养24小时（电热恒温培养箱型号：编号：）。
阴性对照应无菌生长。
必要时可延长至48小时。
取上述培养物0.2ml，接种至含5mlMUG培养基（配制批号：）（高压蒸汽灭菌器型号：编号：）的试管内，培养，于24小时在366nm紫外光下观察，（也可在5小时时进行观察，若无荧光则需延长培养，24小时时再进行观察），同时用未接种的MUG培养基作本底对照。
若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。
观察后，沿培养基的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
微生物限度检查法
微生物限度检查操作法一．检查项目：细菌数 霉菌数 大肠杆菌数 二．实验前的准备MUG （4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基）的配制 9‰氯化钠的配制 鲜肉汤的配制BL （胆盐乳糖）溶液的配制 虎红琼脂的配制 营养琼脂的配制 靛基质的配制三．操作方法 1．细菌数 霉菌数取样品适量，用开孔面积为20㎝2的消毒过金属模板压在样品的内层面上，将无菌棉签用9‰氯化钠沾湿。
在板孔的范围内檫抹5次，换1支棉签再檫抹5次。
每个位置用2支棉签共檫抹10次，共檫抹5个位置100㎝2。
每支棉签抹完后立即剪断，投入盛有30ml 氯化钠注射液的锥形瓶中，迅速摇晃一分钟，即得供试品。
1:10稀释级制备：用移液管取上述供试品液1ml ，注入含有9ml 氯化钠溶液的试管中，摇晃均匀。
1:100稀释级制备：用移液管取上述1:10稀释级1ml ，注入含有9ml 氯化钠溶液的试管中，摇晃均匀。
1:1000稀释级制备：用移液管取上述1:100稀释级1ml ，注入含有9ml 氯化钠溶液的试管中，摇晃均匀。
细菌培养：从上述3支不同稀释级的试管内分别取1ml 放入培养皿中，浇上配制好的营养琼脂摇晃均匀。
放置于温度36℃左右的生化培养箱内培养48小时。
霉菌培养：从上述3支不同稀释级的试管内分别取1ml 放入培养皿中，浇上配制好的虎红琼脂摇晃均匀。
放置于温度25℃左右的生化培养箱内培养72小时。
2．大肠杆菌数(1)在无菌室内菌种的接种用接种棒在酒精灯前转移一点到有5ml 配制好的鲜肉汤的试管中，使之研磨溶液，并振荡均匀。
将此接种好的鲜肉汤在36℃生化培养箱中放置24小时。
接种棒在使用前要在酒精前烧红，转移时呈S 形转移菌种。
用移液管取1ml 上述鲜肉汤菌种，注入有9ml 氯化钠溶液的试管中摇晃均匀。
得到10-1级，然后取此稀释级1ml ，注入有9ml 氯化钠溶液的试管中摇晃均匀，得到10-2级，依次进行上述操作，分别得到10-3、10-4、10-5、10-6、10-7级。
微生物限度检查方法及其验证报告记录(修改)
微生物限度检查方法及其验证报告记录(修改)————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：文件编号：73021微生物限度检查方法及其验证报告目录1 样品相关信息1.1 基本信息2 主要仪器设备和试验耗材信息2.1 主要使用的仪器设备2.2 试验用培养基2.3 试验用试剂2.4 试验用菌种3 试验环境3.1 无菌室3.2 洁净工作台3.3 生物安全柜4 试验方案4.1 验证试验目的4.2 微生物限度检查方法草案5 方法验证试验5.1 菌液制备5.2 计数培养基适用性检查5.3 控制菌检查用培养基使用性检查5.4 供试液制备5.5 方法验证5.5.1 菌落计数方法验证试验5.5.2 控制菌检查方法的验证5.6 方法验证结论6 供试品微生物限度检查结果1 样品相关信息1.1 基本信息（三批）品名多烯酸乙酯软胶囊或蛹油α-亚麻酸乙酯胶丸规格0.25g/粒，30粒/瓶或0.3g/粒，30粒/瓶批号2 主要仪器设备和试验耗材信息2.1 主要使用的仪器设备仪器名称型号编号培养箱HH·BⅡ·360ZL-025 MJX-150ZL-042 SPX-150B ZL-046 JJ-5 ZL-026电子天平JY1001 ZL-013超净工作台JH-DCB ZL-028生物安全柜BSC-1100ⅡA2ZL-0292.2 试验用培养基2.2.1 对照培养基培养基名称批号生产厂家胰酪大豆胨琼脂培养基中国食品药品检定研究院胰酪大豆胨液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基麦康凯液体培养基麦康凯琼脂培养基RV沙门增菌液体培养基2.2.2 试验用培养基培养基名称配制批号胰酪大豆胨琼脂培养基胰酪大豆胨液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基麦康凯液体培养基麦康凯琼脂培养基RV沙门增菌液体培养基2.3 试验用试剂试剂名称配制批号含1%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液含0.05%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液0.9%氯化钠1%红四氮唑2.4 试验用菌种菌种名称菌种编号工作用菌种批号及代数信息大肠埃希菌CMCC（B）44 102 E3-02枯草芽孢杆菌CMCC（B）63 501 E3-02金黄色葡糖球菌CMCC（B）26 003 E3-02乙型副伤寒沙门菌CMCC（B）50094 E3-02 白色念珠菌CMCC（F）98 001 E3-02黑曲霉CMCC（F）98 003 E3-023 试验环境《中国药典》2015版规定，微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
28微生物限度检测原始记录
规 格 检验日期结论：活螨检验：供试品 用直接检查法， 活螨结论：产品名称 产品批号产品名称产品批号 控制菌检查 阳性对照菌 取沙门菌 新鲜营养肉汤（配制批号：）培养物1ml, 9ml0.9%无菌NaCI 溶液10倍递增稀释取供试品10g 直接接种至300ml 的营养肉汤（配制批号： ）中，混匀，培养18〜24小时。
取上述培养物1ml ，接种于10ml 四硫磺酸钠亮绿培养基（配制批号：）中，培养18〜24小时后，分别划线接种于胆盐硫乳琼脂培养基 （或沙门、志贺菌属琼脂培养基） 和麦康凯琼脂培养基（配制批号：）（或曙红亚甲蓝琼脂培养基）的平板上，培养18〜24小时（必要时可延长至 40-48小时）。
若平板上生长的菌落与下表所列的菌落形态特征相符或疑似，用接种针挑选 2-3个菌落分别于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养18〜24小时。
阳性对照试验 阳性对照试验方法同供试品的检查，对照菌加菌量为 10-100cfu 。
阴性对照试验 取稀释液10ml 照控制菌检查法检查。
结论：规 格 检验日期检测室净化工作台编号：SB02-020-02 阳性菌室净化工作台编号：SB02-020-01供试液制备：取本品用开孔面积为20cm2的消毒过的金属模板压在内层面上，将无菌棉签用0. 9%无菌氯化钠溶液，稍沾湿，在板孔范围内擦抹5次，换1支棉签再擦抹5次，每个位置用2支棉签共擦抹10次，共擦抹5个位置100cmt每支棉签抹完后立即剪断（或烧断），投入盛有30ml 0.9 %无菌氯化钠溶液的锥型瓶（或大试管）中。
全部擦抹棉签投入瓶中后，将瓶迅速摇晃1分钟，即得供试液。
供试品检查：平皿法：分别取100cm：30 ml、100cm：300 ml供试液各1ml，置无菌平皿中，注入15〜20ml温度不超过45C的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固，倒置于培养箱中培养。
阴性对照试验取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
微生物限度检查记录表
（18~24h）
RV沙门选择培养
（18~24h）
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐分离培养
（18~48h）
三糖铁琼脂斜面穿刺接种
（18~24h）
供试品
阴性对照
阳性对照
结果
□检出沙门菌□未检出沙门菌（规定：不得检出/10g）
五、耐胆盐革兰阴性菌检查
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配置批号：）、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配置批号：）
2天
3天
4天
5天
6天
7天
均值
结果
cfu/gml（规定：≦8000cfu/gml）
cfu/gml（规定：≦80cfu/gml）
三、大肠埃希菌检查
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配置批号：）、麦康凯琼脂培养基（配置批号：）
胰酪大豆胨液体培养基增菌培养
（30~35℃，18~24h）
麦康凯液体培养基选择培养
微生物限度检查记录（通用）
样品名称
检验编号
批号
规格
检品来源
数量
检验依据
消毒时间
紫外：
检验日期
完成日期
供
试
液
制
备
1.常规法：取供试品10gml，用胰酪大豆胨琼脂培养基稀释至100ml，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。
2.薄膜过滤法：取本品用开口面积为20cm2的灭过菌的金属模板压在内层面上，将无菌棉签用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稍沾湿，在板孔范围内擦抹5次，换1支棉签再擦抹5次，每个位置用2支棉签共擦抹10次，共擦抹5个位置,擦拭总面积为100cm2。每支棉签擦抹完后立即用灭菌剪刀将棉签头剪断，将剪下的棉签头投入盛有30mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的灭菌广口瓶（或大试管）中。全部擦抹棉签投入瓶中后，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
微生物限度检查记录表格
10^
10-4
阴性对照
10-1
10-2
阴性对照
1
2
平均
结果
cfu/g（规定：wcfu/g）
cfu/g（规定：wcfu/g）
大肠埃希菌检杳口培养条件：30〜35C18〜24h
胆盐乳糖培养基
（批号：）
MUG培养基
（批号：）
靛基质
（批号：）
EMB培养基
（批号：）
镜检、 生化试验
5h
24h
5h
24h
供试品
阴性对照
阳性对照
结果
□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出）
大肠菌群检查口培养条件：30〜35C
乳糖胆盐发酵培养基（18〜
24h）
EMB培养基（18〜24h）
（批号：）
乳糖发酵培养基（24〜
48h）
供
试
品
10-1
10-2
10-3
阴性对照
阳性对照
结果
个/g（规定：v个/
活螨检杳□
检杳方法
□直接法
□漂浮法□分离法
结果
□检出活螨
□未检出活螨
（规定不得检出）
结论
□符合规定
□不符合规定
（2
供试液制备
取供试品g，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml，混匀。
□研钵法□振摇法
细困、霉困和酵母困计数口
平皿
号
细菌数（30〜35°C3天）
营养琼脂培养基（批号：）
霉菌和酵母菌数（23〜28C5天） 玫瑰红钠琼脂培养基（批号：）
24h
供试品
阴性对照
阳性对照
结果
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湖南爱敬堂药业有限公司
微生物限度检查记录
检验编号：第页共页
实验条件温度：℃相对湿度： %
培养基名称：营养琼脂培养基（批号：生产单位）灵敏度
玫瑰红钠琼脂培养基批号：生产单位）灵敏度
供试液制备1.常规法取供试品 g(ml),加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 ml。
①匀浆仪转速转/分钟 min ②研钵法③保温振摇法：℃，保温 min,并适时振摇
检查方法：照《中国药典2010年版一部》（附录XIII C）或二部（附录XI J）微生物限度检查法检查
细菌数：℃， hr 霉菌（酵母菌）总数：℃， hr
控制菌检查培养温度℃
大肠埃希菌检查：对照菌：大肠埃希菌[CMCC（B）44102] 沙门菌检查：对照菌：乙型副伤寒沙门菌[ CMCC（B）50094]
活螨检查
大肠菌群检查
结论：规定检验者月日~ 月日校对者：月日。