细胞活体染色技术
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细胞活体染色技术
实验七
生物工程 周新宇
实验目的
学习细胞活体染色的方法。 观察动、植物活细胞内线粒体，
液泡系的形态、数量与分布。
2
实验原理
活体染色是利用某些无毒或毒 性较小的染色剂，在不影响细胞生 命活动的情况下显示细胞的天然构 造，更具真实性。活性染色又分为 体内活体染色和体外活体染色。
3
活体染色
blue)
5
詹纳斯绿B(Janus green B)
能够染活线粒体为蓝色，主要是由 于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染 料始终保持在氧化状态(即有色状态)， 在周围的细胞质内，这些染料被还原 为无色的色基(即无色状态)。
一定要注意，只有具有活性的细 胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧 化，从而使它显出颜色
12
⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色
取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块， 放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗 去血液。将肝组织洗净后吸去血液， 加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30 分钟，注意不可将组织块完全淹没。 染色后撕开组织块，这样溶液中就 会有一些细胞或细胞群。用吸管吸 取溶液，放在载玻片的Ringer氏液 中。垫两根短头发，加盖玻片，即 可镜检。用油镜观察活染色的线粒 体标本，要不断地来回转动细调焦 螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使 材料总是得到氧气，线粒体的染色 才显得非常清楚。
活体染色分为体内活染和 体外活染两种。前者是将 染料注射于生物体内，染 色后再取材观察。后者是 取材后，对离体的活细胞 进行染色。为保持离体细 胞的正常存活，染色时需 供给细胞以正常的温度， 渗透压，PH等。
4
较为常见的活体染色剂
詹纳斯绿B(Janus
green B)
中性红
台盼蓝(trypan
6
中性红
中性红是液泡系的特殊活体染 色剂，它可将不同发育时期的液 泡染成不同深度的红色，在细胞 处于生活状态下细胞质和核不被 染色，该染料对液泡系具有一定 专一性。
7
台盼蓝(trypan blue)
台盼蓝(trypan blue)是一种 偶氮类酸性染料，它可以通过 死亡细胞的质膜而使细胞着色， 但不能通过活细胞的质膜，故 可用台盼蓝鉴别活细胞与死细 胞。
8
实验用品
材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、 表面皿、载玻 片、盖玻片、吸管、收水纸等。 试剂：Ringer氏液 1／3000中性红溶液 1／5000詹纳斯绿B 台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等
9
实验方法
1. 液泡系的中性红活体染色
1．用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l-2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄 且均匀。
13
3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的 金属板上 ↓ 滴2滴1/5000 Janus green B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞 ↓
刮下的粘液状物放大载玻片的染液 滴中
↓
口腔黏膜上皮细胞及线粒体
染色10~l5min(注意不可使染液干 燥，必要时可再加滴染液)
14
人口腔上皮细胞的线粒体分 布
•在实验过程中 务必保持所取的 材料的活性。通 常，需要把生物 材料置于０℃～ ４℃的冰水浴低 温中，并且操作 要迅速。
15
4. 台盼蓝染色鉴定细胞死活
取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓
滴加1%台盼蓝1滴
↓ 盖上盖玻片于显微镜下进行镜检
16
17
thanks
18
2．在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5-10分钟。
3．吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成 什么颜色，
其形态、大小如何、分布位置。
10
液泡系的中性红染色点经观察
ຫໍສະໝຸດ Baidu
11
.线粒体的活体染色 ⑴ 用植物细胞观察线粒体的活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块
↓
于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检
实验七
生物工程 周新宇
实验目的
学习细胞活体染色的方法。 观察动、植物活细胞内线粒体，
液泡系的形态、数量与分布。
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实验原理
活体染色是利用某些无毒或毒 性较小的染色剂，在不影响细胞生 命活动的情况下显示细胞的天然构 造，更具真实性。活性染色又分为 体内活体染色和体外活体染色。
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活体染色
blue)
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詹纳斯绿B(Janus green B)
能够染活线粒体为蓝色，主要是由 于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染 料始终保持在氧化状态(即有色状态)， 在周围的细胞质内，这些染料被还原 为无色的色基(即无色状态)。
一定要注意，只有具有活性的细 胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧 化，从而使它显出颜色
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⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色
取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块， 放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗 去血液。将肝组织洗净后吸去血液， 加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30 分钟，注意不可将组织块完全淹没。 染色后撕开组织块，这样溶液中就 会有一些细胞或细胞群。用吸管吸 取溶液，放在载玻片的Ringer氏液 中。垫两根短头发，加盖玻片，即 可镜检。用油镜观察活染色的线粒 体标本，要不断地来回转动细调焦 螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使 材料总是得到氧气，线粒体的染色 才显得非常清楚。
活体染色分为体内活染和 体外活染两种。前者是将 染料注射于生物体内，染 色后再取材观察。后者是 取材后，对离体的活细胞 进行染色。为保持离体细 胞的正常存活，染色时需 供给细胞以正常的温度， 渗透压，PH等。
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较为常见的活体染色剂
詹纳斯绿B(Janus
green B)
中性红
台盼蓝(trypan
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中性红
中性红是液泡系的特殊活体染 色剂，它可将不同发育时期的液 泡染成不同深度的红色，在细胞 处于生活状态下细胞质和核不被 染色，该染料对液泡系具有一定 专一性。
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台盼蓝(trypan blue)
台盼蓝(trypan blue)是一种 偶氮类酸性染料，它可以通过 死亡细胞的质膜而使细胞着色， 但不能通过活细胞的质膜，故 可用台盼蓝鉴别活细胞与死细 胞。
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实验用品
材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、 表面皿、载玻 片、盖玻片、吸管、收水纸等。 试剂：Ringer氏液 1／3000中性红溶液 1／5000詹纳斯绿B 台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等
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实验方法
1. 液泡系的中性红活体染色
1．用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l-2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄 且均匀。
13
3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的 金属板上 ↓ 滴2滴1/5000 Janus green B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞 ↓
刮下的粘液状物放大载玻片的染液 滴中
↓
口腔黏膜上皮细胞及线粒体
染色10~l5min(注意不可使染液干 燥，必要时可再加滴染液)
14
人口腔上皮细胞的线粒体分 布
•在实验过程中 务必保持所取的 材料的活性。通 常，需要把生物 材料置于０℃～ ４℃的冰水浴低 温中，并且操作 要迅速。
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4. 台盼蓝染色鉴定细胞死活
取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓
滴加1%台盼蓝1滴
↓ 盖上盖玻片于显微镜下进行镜检
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2．在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5-10分钟。
3．吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成 什么颜色，
其形态、大小如何、分布位置。
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液泡系的中性红染色点经观察
ຫໍສະໝຸດ Baidu
11
.线粒体的活体染色 ⑴ 用植物细胞观察线粒体的活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块
↓
于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检