实验六 微生物的生理生化反应.
微生物实验六糖发酵实验-文档资料
四、实验方法和步骤
1、编号 用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌
名。 2、接种 取盛有葡萄糖发酵培养基的试管3支，按编号1支接种大肠杆
菌，另1支接种枯草芽孢杆菌，第3支不接种，作为对照。另 取乳糖发酵培养基试管3支，同样1支接种大肠杆菌，1支接种 枯草芽孢杆菌，第3支不接种，作为对照。 3．将上述已接种的葡萄糖和乳糖发酵试管和对照管置37℃温 室中培养24小时。 4．观察结果，并填表记录。
五、实验结果
糖类发酵
大肠杆菌 普通变形杆菌
对照
葡萄糖发酵
乳糖发酵
将实验结果填入下表。分别用产酸产气、产酸不产气、不产酸不产气 表示
六、思考题
假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发 酵试验应该出现什么结果？
感谢聆听！
产酸产气的鉴定
产酸的判断：指示剂溴甲酚紫(pH5．2为黄 色，pH6．8为紫色)，当发酵产酸时，使培 养基由紫色变为黄色。
产气的判断：倒置的德汉氏小管（有无气泡）
糖酵试验结果： 右侧为空白对照， 左侧为发酵产酸阳 性，但不产气，中 间为产酸、产气
三、实验器材
大肠杆菌，普通变形杆菌斜面各1支；盛有 葡萄糖发酵培养基的试管和乳糖发酵培养 基的试管各3支（内装有倒置的德汉氏小 管），试管架，接种环等。
微生物实验六糖发 酵实验
精品
实验六 糖发酵实验
一、实验目的
1、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中 的重要作用。
二、实验原理
糖发酵试验是最常用的生化反应【糖发酵实验， IMVIC实验（吲哚、甲基红、伏普、柠檬酸盐实 验）】，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多 数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们 在分解糖的能力上有很大的差异，有些细菌能分 解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气 体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产 酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产 酸并产气；伤寒杆菌能分解葡萄糖产酸不产气， 不能分解乳糖；枯草芽孢杆菌分解葡萄糖产酸产 气，不能分解乳糖，普通变形杆菌能分解葡萄糖 产酸、产气，但不能分解乳糖。
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
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对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规实验法。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体个原理如下：1、淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（1—枯草杆菌，5—大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2、明胶水解试验：穿刺接种于明胶培养基中的细菌，若能产生明胶酶利用明胶，则该培养基在4摄氏度条件下会处于液体状态，从而区别于正常条件下4摄氏度时固态的明胶培养基。
3、糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
4、IMVC实验包括四个试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细胞血检查。
①吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
②甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙算和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
③柠檬酸盐利用试验：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，而有些细菌则不能利用。
由于细菌不断地利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基PH由中性变为碱性，培养基中的指示剂有浅绿色变为蓝色。
④伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验 VP）：某些细菌在代谢过程中，能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，后者与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者乙醛化合生成乙酰甲基甲醇。
各种微生物生化试验方法原理
各种微生物生化试验方法原理通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。
1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。
（3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
（4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。
2、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。
实验六细菌的生理生化试验教学
02
酶活性测定是了解细菌代谢途径的重要手段。
03
在实验中，我们对该细菌的几种关键酶进行了活性测定。通过分析酶活性，我 们发现该细菌具有较高的酶活性水平，这表明该细菌具有较为活跃的代谢状态 。这些结果有助于我们进一步了解该细菌的生化特性和代谢途径。
结果总结与讨论
总结
通过对生理和生化试验结果的综合分析，我们对该细 菌的生理生化特性有了更深入的了解。这些结果不仅 有助于我们更好地认识该细菌的生长、繁殖和代谢特 点，还为进一步研究该细菌的生物学特性和应用提供 了重要的参考依据。
糖发酵试验是鉴定细菌生化特性的重要手段。
生化试验一：糖发酵试验
在糖发酵试验中，我们观察到该细菌能够利用不同的 糖类作为碳源进行发酵。通过分析不同糖类的发酵产 物，我们可以了解该细菌对不同糖类的代谢能力和发 酵特性。这些结果对于进一步了解该细菌的生化特性 具有重要的意义。
生化试验结果与分析
01
生化试验二：酶活性测定
生理试验结果与分析
生理试验二：对数生长期的代谢产物
在细菌的对数生长期，其代谢产物具有一定的特点。
在对数生长期，我们观察到该细菌产生了一些具有特殊性质的代谢产物， 这些代谢产物可能对该细菌的生长和繁殖具有重要作用。通过对这些代 谢产物的分析，我们可以更深入地了解该细菌的生理特性。
生化试验结果与分析
实验六细菌的生理生化试验 教学
contents
目录
• 实验目的与简介 • 实验材料与试剂 • 实验步骤与操作 • 实验结果与分析 • 实验结论与建议 • 参考文献与拓展阅读
生理生化 特性，了解不同细菌 在生化反应中的差异。
通过实验结果分析， 能够对细菌进行初步 鉴定。
《细菌与人类健康》
实验六微生物的生理生化反应(精)
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的：掌握细菌鉴定中常规生理生化反应的原理与方法。
二、实验原理：由于各种细菌具有不同的酶系统，所以代谢时利用的底物不同，或利用相同的底物而代谢产物不同，因此可利用不同的生理生化反应来鉴别不同的细菌。
常规的鉴别肠杆菌科细菌的生理生化反应有：1、大分子物质水解试验，包括淀粉水解试验和明胶水解试验。
如果细菌能利用淀粉大分子作为碳源，则淀粉被水解后菌落周围遇碘呈蓝色，不能水解淀粉时加入碘菌落周围有透明圈。
明胶如果能被细菌分解作为碳源，培养后明胶溶解，否则不溶。
2、糖发酵试验。
有的细菌发酵分解某些糖产酸产气，有的分解糖只产酸不产气，故可利用分解糖的能力来鉴别细菌。
如果细菌糖酵解产酸，加入溴甲酚紫指示剂培养液PH降低颜色由紫变黄，如果产气，德汉氏小管闭口端产生气泡。
3、吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸盐试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，吲哚试验由于实验室原料中蛋白胨色氨酸含量太低不做。
1) 甲基红试验（MR）：由于不同细菌糖酵解产生丙酮酸后分解产物不同，有些细菌可将其分解为甲酸、乙酸、乳酸等多种有机酸，加入甲基红指示剂后PH降至4左右而使培养液成红色。
2) 伏-普试验（VP）：即检测细菌代谢是否经过2，3-丁二醇途径，该途径为：丙酮酸——乙酰乳酸——乙酰甲基甲醇——2，3-丁二醇，代谢中间产物乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰培养基中含胍基物质反应成红色复合物。
1) 柠檬酸盐试验，有些细菌以柠檬酸盐作为唯一碳源生成碳酸盐，培养基PH升高成碱性，加入溴麝香草酚蓝指示剂后培养基由绿；变为蓝色。
三、实验用品（1）菌种：枯草杆菌1、大肠杆菌5，产气杆菌7。
（2）培养基：糖发酵培养基（乳糖）、淀粉培养基平板、明胶培养基试管、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸盐培养基斜面。
（3）试剂:甲基红试剂、4%KOH、5%荼酚、碘液等。
（4）其他：恒温箱、接种针、酒精灯、标号笔等。
四、实验步骤：1、淀粉水解试验制淀粉固体培养基——倒平板——分区标记（菌种代号、组别、日期，下同）——接种——培养2天——观察（加碘液观察有无透明圈）。
实验六、细菌分解代谢系列实验
3、明胶液化试验
明胶是一种动物蛋白。明胶培养基本身低于 20℃时凝固，高于25℃则自行液化。某些细 菌能够产生蛋白酶将明胶水解成小分子物质， 因此培养后的培养基即使在低于20℃的温度 下，明胶也不再凝固，而由原来的固体状态 转化为液体状态。
三、操作步骤：
（一）淀粉水解试验：
(1)准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基 倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。
（二）油脂水解试验：
（1）将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中 熔化，取出并充分振荡（使油脂均匀分布）， 再倾入无菌平皿中，待凝固制成平板。
（2）划线接种于同一平皿的两边(其中一种是 金黄色葡萄球菌作为对照菌)。置于37℃恒温箱 培养24h，取出后观察平板底层长菌的地方， 如出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反 应为正反应。
（三）明胶液化试验：
（1）接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌 于明胶培养基中。
（2）培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下 不长，则应放在最适温度下培养。 （3）观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的 形状。 因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若 是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观 察，若明被被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再 凝固。
二、实验原理
1、乙酰甲基甲醇试验 a、实验目的：检测细菌分解葡萄糖的代谢产物 b、原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变 成乙酰甲基甲醇，然后被还原成2，3—丁二醇。 乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧 化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的 胍基作用生成红色化合物，此为乙酰甲级甲醇反 应。在试管中加入α—萘酚时，可促进反应出现。
细菌生理生化试验
细菌生理生化试验细菌生理生化试验微生物生理生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生理生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区分的微生物。
因此微生物生理生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物鉴定中常用的生理生化反应如下所示：(一) 糖、醇发酵试验原理：不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为紫（蓝）色。
培养基配制：一般细菌常用休和李夫森二氏培养基：蛋白胨：2g ，K2HPO4 :0.2g ，NaCl:5g ，糖（醇、糖苷）：1% ，水洗琼脂：5～6g，蒸馏水：1000mL，PH:6.8～7.0，溴百里酚蓝：1%水溶液3mL(先用少量的95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)。
先调PH后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制：(NH4)2HPO4:1g ，MgSO4:0.2g ，KCl:0.2g ，酵母膏：0.2g ，糖（醇、糖苷）：1%水洗琼脂：5～6g ，蒸馏水：1000mL ，溴甲酚紫：0.4%乙醇液2mL，PH:6.8～7.0。
先调PH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管，培养基高度约为4～5cm ，115℃灭菌20min。
测定的糖（醇、糖苷）类可以包括：葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖（1.5%）、半乳糖（1.5%）、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意：以上亦可用液体培养基。
接种和观察结果：用18～24h的幼龄菌种，用穿刺针接种于培养基中，适温培养1d，3d，5d后观察，颜色变黄为阳性，不变为阴性；有气泡产生为产气。
结果记录：产酸：+，产气：○，不产酸长气：- 。
(二) 淀粉水解试验原理：某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
实验六微生物的生理生化反应.
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握i 微生物（细菌）鉴定中主要生化反应的常规实验法二、实验原理（一）大分子物质（如淀粉、明胶）在常规条件下不被降解成小分子物质，但某些微生物细胞能分泌胞外酶，使大分子物质降解。
大分子物质在微生物分泌的胞外酶的作用下分解成小分子物质。
1. 淀粉水解实验根据淀粉遇碘变蓝的原理，向含有淀粉培养基中加入碘产生淀粉酶无色透明圈微生物细胞无淀粉酶蓝色2. 明胶水解实验产生明胶酶的，明胶培养基在4 度时成液体状微生物细胞无明胶酶时，在明胶培养基在4 度成固体状（二）糖发酵实验不同的细菌分解糖，醇的能力不同，有些细菌分解某些糖产酸并产气，有的分解糖仅产酸而不产气，因此，可根据其分解利用糖的差异作为鉴定菌种的依据之一。
在糖发酵实验中，用溴甲酚紫作为指示剂，PH6.8时为紫色，当PH< 5.2时变为黄色，若细菌分解糖产酸，则培养液由紫色变为黄色，有无气体产生，可以从德汗氏小管中观察。
（三）IMVC 实验IMVC 实验主要包括吲哚（indol test）试验、甲基红（methyl red test）试验、柠檬酸盐（citrate test）试验、伏-普（Voges-Prokauer test）试验，这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细菌学检查甲基红试验（M.R.试验）某些细菌在糖代谢过程中，分解培养基中的糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸，乙酸等，使培养基的PH 值降至4.5 以下。
酸的产生可由甲基红的变色来指示。
甲基红的变色范围是PH4.2-6.3，PH4.2 时为红色，PH6.3 时为黄色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少时，则培养基PH 值在6.3以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。
伏普试验有些细菌可以分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸通过缩合和脱羧产生乙酰甲基甲醇。
在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，二乙酰可以与培养基中的蛋白胨中的精氨酸的胍基产生红色化合物。
微生物生理生化反应范文
微生物生理生化反应实验原理通过测定微生物细胞内某些酶类的有无、对某些底物的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物代谢的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，当吲哚遇到含有对二甲基氨基苯甲醛试剂，形成红色的玫瑰红吲哚，为吲哚反应阳性。
V-P反应也称乙酰甲基甲醇试验。
微生物发酵葡萄糖产生丙酮酸，2分子丙酮酸脱羧形成乙酰乳酸，继续脱羧形成乙酰甲基甲醇，后者在碱性条件下与胍类、肌酸类物质反应，形成红色化合物，为V-P反应阳性。
有些细菌发酵糖类产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，使发酵液变红色。
某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。
实验材料和方法：材料：培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖和蔗糖）、酚红半固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基；菌种：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus arueus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）；试剂：V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲酚紫指示剂、抗生素；仪器及用具：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅、试管、移液管、滴管、杜氏小管、记号笔等。
实验方法：1.V-P反应取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。
置于37℃恒温箱中培养48小时。
取出培养物，分别从中取出2.5mL培养液，再加入等量V-P试剂，充分震荡后放置在37℃培养箱中温育30min。
实验6-微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应1、实验目的探究菌株在碳源同化、氮源利用、乙醇发酵和抗生素效价分析等方面不同的生长特性，观察并简要分析不同微生物的生理生化特征及其形成机理。
2、实验过程简述2.1 培养基与试剂准备2.1.1碳源同化培养基准备碳源为葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、海藻糖、松三糖、可溶性淀粉、α-甲基葡萄糖苷的YNB 培养基，放入一根杜氏管。
2.1.2氮源同化培养基准备氮源为硫酸铵，尿素，蛋白胨，硝酸钾，无氮源YNB 的固体、液体培养基。
2.1.3 乙醇发酵用种子培养基：YPD 培养基2.1.4乙醇发酵用发酵培养基葡萄糖，酵母粉，蛋白胨，尿素，磷酸二氢钾，硫酸镁，氯化钙。
2.1.5抗生素效价测定用培养基：LB 培养基2.1.6青霉素：用pH 6.0 磷酸缓冲液配制，浓度为100 mg/ml，0.22μm 孔径过滤灭菌。
2.2 微生物的碳源同化和发酵1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200 μl 菌悬液，分别转接于含杜氏管的小试管中，静置培养48 h。
3、每24 h 观察记录生长和产气情况。
4、根据实验结果判断不同菌株对不同碳源的同化或发酵。
2.3 微生物的氮源利用1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200μl 菌悬液，分别转接于上述培养基小试管中，30℃或37℃静置培养48 h。
3、各取20μl 菌悬液，分别划线于不同氮源的固体平板上，待菌液被吸收后，培养皿倒置，静置培养48 h。
4、每24 h 观察记录生长情况，48 h 测定液体培养物的OD 600。
5、根据实验结果判断不同菌株对不同氮源的利用能力或偏好性。
2.4 酵母菌的乙醇发酵1、种子液培养：将酿酒酵母从菌种斜面上接一接种环至YPD 种子培养基中，30℃，200rpm，培养18 h。
2、乙醇发酵：按照10%（v/v）的比例将培养好的种子液接入100 ml 发酵培养基中，用无菌塑料布将封口密封，30℃，静置培养，每24 h 手摇1 次，发酵3-4 d。
实验六__微生物生理生化反应观察共31页文档
6、纪律是自由的第一条件。——黑格 尔 7、纪律是集体的面貌，集体的声音， 集体的 动作， 集体的 表情， 集体的 信念。 ——马 卡连柯
8、我们现—马 克思 9、学校没有纪律便如磨坊没有水。— —夸美 纽斯
Thank you
10、一个人应该：活泼而守纪律，天 真而不 幼稚， 勇敢而 鲁莽， 倔强而 有原则 ，热情 而不冲 动，乐 观而不 盲目。 ——马 克思
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
微生物的生理生化反应实验原理及步骤
实验六微生物的生理生化反应实验目的：1．证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
2．了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。
掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
3．了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。
实验原理：微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。
这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实：淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变为深红色，说明胞外存在着脂肪酶。
微生物可以利用各种蛋白质和氨基酸作为氮源外，当缺乏糖类物质时，亦可用它们作为碳源和能源。
明胶是由胶原蛋白经水解产生的蛋白质，在25℃以下可维持凝胶状态，以固体形式存在。
而在25℃以上明胶就会液化。
有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4℃仍能保持液化状态。
还有些微生物能水解牛奶中的蛋白质酪素，酪素的水解可用石蕊牛奶来检测。
石蕊培养基由脱脂牛奶和石蕊组成，是昏浊的蓝色。
酪素水解成氨基酸和肽后，培养基就会变得透明。
石蕊牛奶也常被用来检测乳糖发酵，因为在酸存在下，石蕊会转变为粉红色，而过量的酸可引起牛奶的固化(凝乳形成)。
氨基酸的分解会引起碱性反应，使石蕊变为紫色。
此外，某些细菌能还原石蕊，使试管底部变为白色。
尿素是由大多数哺乳动物消化蛋白质后被分泌在尿中的废物。
尿素酶能分解尿素释放出氨，这是一个分辨细菌很有用的诊断实验。
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实验六微生物的生理生化反应
一、实验目的
掌握i微生物（细菌）鉴定中主要生化反应的常规实验法
二、实验原理
（一）大分子物质（如淀粉、明胶）在常规条件下不被降解成小分子物质，但某些微生物细胞能分泌胞外酶，使大分子物质降解。
大分子物质在微生物分泌的胞外酶的作用下分解成小分子物质。
1.淀粉水解实验
根据淀粉遇碘变蓝的原理，向含有淀粉培养基中加入碘
产生淀粉酶无色透明圈
微生物细胞
无淀粉酶蓝色
2.明胶水解实验
产生明胶酶的，明胶培养基在4度时成液体状
微生物细胞
无明胶酶时，在明胶培养基在4度成固体状
（二）糖发酵实验
不同的细菌分解糖，醇的能力不同，有些细菌分解某些糖产酸并产气，有的分解糖仅产酸而不产气，因此，可根据其分解利用糖的差异作为鉴定菌种的依据之一。
在糖发酵实验中，用溴甲酚紫作为指示剂，PH6.8时为紫色，当P H﹤5.2时变为黄色，若细菌分解糖产酸，则培养液由紫色变为黄色，有无气体产生，可以从德汗氏小管中观察。
（三） IMVC实验
IMVC实验主要包括吲哚(indol test)试验、甲基红(methyl red test)试验、柠檬酸盐(citrate test)试验、伏-普(Voges-Prokauer test)试验，这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细菌学检查
甲基红试验（M.R.试验）
某些细菌在糖代谢过程中，分解培养基中的糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸，乙酸等，使培养基的PH值降至4.5以下。
酸的产生可由甲基红的变色来指示。
甲基红的变色范围是PH4.2-6.3，PH4.2时为红色，PH6.3时为黄色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少时，则培养基PH值在6.3以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。
伏普试验
有些细菌可以分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸通过缩合和脱羧产生乙酰甲基甲醇。
在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，二乙酰可以与培养基中的蛋白胨中的精氨酸的胍基产生红色化合物。
柠檬酸盐试验
有的细菌可以利用柠檬酸盐作为碳源，将其分解为二氧化碳，最后产生碳酸盐使培养基变碱。
指示剂可用溴麝香草酚蓝（PH<6时呈黄色，PH在6－7.6之间时为绿色，PH>7.6时呈蓝色）培养基中的溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色，则为阳性。
三实验材料
菌种：枯草芽孢杆菌（1号），大肠杆菌（5号），产气肠杆菌（7号）
培养基：淀粉培养基平板，明胶培养基试管（2个），葡萄糖发酵培养基（2个），葡萄糖蛋白胨水培养基（4个），柠檬酸盐培养基斜面（2个）
试剂：甲基红试剂，伏普试剂，碘溶液，KOH溶液，
四实验步骤
（二）将各培养基在37℃下培养2d。
（三）加试剂
1.在淀粉培养基平板上的菌落上滴加碘液。
2.甲基红实验：在培养基中加3滴甲基红试剂。
3.伏—普实验：在每个培养基内分别加5滴40%KOH溶液，然后加入 5滴5％a－荼酚溶液，用力振荡后放入37℃温箱中保温15—30min。
五实验结果
六思考题
大肠埃希氏菌和产气肠杆菌分解葡萄糖所生成的产物有所不同？
答：大肠埃希氏菌分解葡萄糖为丙酮酸，丙酮酸再进而分解产生甲酸、乙酸和乳酸等多种有机酸，产气肠杆菌也光分解葡萄糖为丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，乙醛再与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者与乙酰甲基甲醇。
由于分解葡萄糖所生成的产物不同，所以可以用甲基红实验和VP实验对它们进行鉴别。