第二章 理化鉴别

（七）矿物药
朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。 1.朱砂（主含HgS） 主要采用铜片反应。 HgS+2HCl+Cu→CuCl2+Hg（白 △↑）+H2S 天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定。 2.石膏、牡蛎、海螵蛸等 此类药物均富含钙盐，主要采用草 酸铵反应 。 CaSO4+(NH4)2C2O4→CaC2O4（白）↓+(NH4)2SO4 CaC2O4溶于盐酸，难溶于醋酸。 CaC2O4+2HCl→CaCl2+H2C2O4 止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）、龙牡壮骨颗 粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）
不同规格的薄层板
铺制薄层板
（二）点样器材
为了增强药品定性鉴别的可比性，中国药典规
定采用定量点样。最常用的是微升毛细管（定容
毛细管），为了提高点样效率和质量，还可用点
样辅助设备，如点样支架、半自动或自动点样器 。
六、注意事项Leabharlann ① 试管反应一般使用2×10cm试管，取供试液1~2ml。加入 检测试液时，试管应稍倾斜，试液应沿试管内壁逐滴加入， 滴管下口不得触及内壁。 ② 加入反应试液后一般需振摇试管，使之与供试液混匀。振 摇时应缓缓摇摆振摇，不得上下振摇，手指不允许堵塞试管 口，若需层反应，则不得振摇试管。 ③ 一般需在白色背景下观察反应所产生的颜色或沉淀，若沉 淀为白色或类白色则需在黑色背景下观察。 ④ 如果反应需加热，一般在水浴中加热。用试管夹夹持试管， 内容物不得超过容积的 2/3，试管应倾斜 45度，试管口不得 闭塞，并不得朝向人。加热有机溶液绝对不允许使用明火热 源。 ⑤ 如果反应需无水条件，必须保持试管、蒸发皿等容器的干 燥，例如醋酐—浓硫酸反应。
第四节 荧光鉴别法 （Fluorescence）
一、原理 荧光鉴别法是利用制剂中某些成分，如 黄酮类、蒽醌类、香豆素类等在可见光或 紫外光照射下能产生一定颜色荧光的性质， 对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不具 荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化 学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。
二．特点 本法操作简便、灵敏，具有一定的专 属性。例如大黄和土大黄 ，前者显棕色 至棕红色荧光，而后者显亮蓝色荧光， 很容易区分。
3.易发生假阳性或假阴性反应
假阳性或假阴性反应克服方法如下：
①对样品进行预处理，除去干扰性成分，富集被检成分。 ②选用专属性较强的检测试剂。 ③必要时做阳性或阴性对照试验加以验证，保证其专属 性和灵敏度。
三、常用的一般化学反应 主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂 苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别 （一）生物碱 1. 碘化铋钾反应 产生红棕色沉淀 2. 碘化汞钾反应 产生类白色沉淀 3. 硅钨酸反应 产生白色沉淀 4. 苦味酸反应 产生黄色结晶性沉淀 需在酸性条件下进行。注意事先排除其它成分 的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应， 而具有专属性较强的其它反应。
（二）黄酮类化合物 最多使用的检识反应为盐酸—镁粉反应，呈紫 红色。大山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊 藿）、参茸保胎丸（黄芩）等。此外，黄芩提取 物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进行检识。 （三）蒽醌类化合物 主要应用碱液反应（Borntrager反应），阳性反 应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸 膏。
A B
W1 d1
W2
d2
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄 层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对 标准偏差(RSD) 应不大于3.0%；需显色后测量的相 对标准偏差应不大于5.0%。
（三）对照物的设臵
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的 单体）、对照药材和对照提取物三种。 对照物的设臵有四种方式： ①设臵一种或数种对照品 ②设臵对照提取物 ③设臵一种或数种对照药材 ④同时设臵对照品和对照药材 (“ 双对照” ) ，它要求
2.分离度
用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相
应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用 于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻 峰之间有较好的分离度，除另有规定外，分离 度应大于1.0。
分离度（R）的计算公式为： R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离； d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1 及W2为相邻两峰各自的峰宽；
五、应用实例（P59）
（一）元胡止痛片 （二）五味麝香丸
（三）热炎宁颗粒
第五节 薄层色谱鉴别法
（Thin Layer Chromatography TLC）
一、原理
基于相同物质在同一的色谱条件下，表现出相同的色谱 行为这一基本规律，在同一块薄层板上点加供试品和对照 物，在相同条件下展开，显色检出色谱斑点后，将所得供 试品与对照物的色谱图进行对比分析，从而对药品进行定 性鉴别。
样品色谱图中的主斑点应与对照品和对照药材色谱图中的
有关斑点相一致，从而大大提高了薄层色谱鉴别法的专属 性和整体性，可有效地检出药品是否使用了假冒药材.
（四）TLC已广泛用于中药材及其制剂的检验，成为中药
鉴别的重要方法和鲜明特色。
（五）中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，少数
使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
除另有规定外，一般要求使用市售薄层板。
市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板两种。 常用的有硅胶薄层板、硅胶 GF254 薄层板、聚 酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。
2.自制薄层板
在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行处理和化学改 性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板， 除 另 有 规 定 外 ， 玻 板 可 用 10cm×10cm 、 10cm×15cm 、 20cm×10cm 、 20cm×20cm 不同规格的，最常用的固定相有 硅胶G 、硅胶GF254 、硅胶H、硅胶HF254等。其颗粒大小， 一般要求直径为10~40μm。薄层板采用湿法制备，即使用涂 布器将制好的固定相糊均匀涂布于玻板上。所用涂布器应能使 固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。涂布器有 手动、半自动、全自动等类型。
二、特点
（一）简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功
能，且采用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 （二）系统适用性试验。(05版药典新增) 1.检测灵敏度 2.分离度
3.重复性
1.检测灵敏度 主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品 溶液与稀释若干倍（10倍）的对照品溶液在规 定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展 开、检视，后者应显示清晰的斑点。
三、操作方法
取中成药的提取液点加于滤纸上或加入蒸发皿中， 臵紫外光灯（ 365nm ）下约 10cm 处观察所产生的荧 光。必要时可在供试品上加酸、碱或其它试剂，再观 察荧光及其变化。
四、注意事项
① 荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光。
② 供试液一般用毛细管吸取，少量多次点加在滤纸上，使 斑点集中且具有一定浓度。 ③ 紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外 光较长时间接触。
《中国药典》（2005）新增中成药 （116种）鉴别方法
鉴别方法 薄层色谱 高效液相色谱 气相色谱 分光光度法 一般化学反应法 荧光鉴别法 微量升华法 显微鉴别法 应用品种 114 4 3 0 2 0 0 29 适用于含药粉的剂型 主要鉴别挥发性成分 说 明
第二节 一般化学反应法
（ General Chemical Reaction）
第二章 中药制剂的理化鉴别 （Physicochemical Identification）
第一节 必备知识 第二节 一般化学反应法
第三节 升华鉴别法
第四节 荧光鉴别法 第五节 薄层色谱鉴别法 第六节 气相色谱鉴别法 第七节 高效液相色谱鉴别法
第一节 必备知识
一、理化鉴别的意义
中药制剂的理化鉴别是利用其药味(原料药)中的某种 或某类指标性成分的理化性质，通过化学分析方法和 仪器分析方法，检测有关成分在制剂中是否存在，进 而对所含药味与处方的一致性做出判断，达到鉴定药 品真伪之目的。
（五）香豆素、内酯类和酚类 常用的检识反应有： ① 氯亚氨基-2，6-二氯醌-四硼酸钠反应 （Gibbs反应），呈现蓝色。 ② 异羟肟酸铁反应 呈红色。 应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列 舒丸（牡丹皮）等。
（六）挥发性成分
主要使用香草醛—浓硫酸反应检识此类成分， 正反应呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭 （冰片）、牛黄解毒片（冰片）、养心定悸膏 （桂枝、生姜）等。
一、原理
一般化学反应法是利用检测试剂与制剂中的 指标性成分发生化学反应，根据所产生的颜 色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分或 某些药味的有无。由此可见，所谓一般化学
反应法即通常所说的显色反应和沉淀反应。
二．特点
1.一般化学反应法具有操作简便，适用性较强 等特点。
2. 其否定功能往往强于肯定功能 , 专属性较差。
（八）动物药
常含有较多的蛋白质或氨基酸、故鉴别此类药物，
常使用茚三酮反应，正反应呈红紫色。 例如：龟龄集（鹿茸、海马、等）、参茸保胎 丸（阿胶、鹿茸）等。
四、操作方法
（1）供试液的制备（见前述）
（2）操作方式 大多为试管反应 ，或在检测试纸上、或在蒸发皿（坩 埚）中进行反应
五、结果判断
将反应现象或结果与药品标准对照，若一致则符合 规定。若不一致则判定为不符合规定。
七、应用实例
1.千柏鼻炎片 6.安胃片
2.小儿清热止咳口服液
3.茴香橘核丸
7.天王补心丹
8.牙痛一粒丸
4.地奥心血康胶囊
5.养阴清肺膏
9.中风回春片
第三节 升华鉴别法
（Sublimation）
一、原理 本法是利用某些成分的升华性，在一定 温度下将其从制剂中升华分离出来，并以 升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴 别的依据。