免疫学检测原理
免疫学检测原理及临床应用
免疫学检测原理及临床应用免疫学检测是一种通过检测体内免疫系统的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断技术。
其基本原理是利用体内自身的免疫系统对外来物质（如细菌、病毒或人工合成物质）做出特异性反应，产生特异性抗体或细胞免疫反应，并将其检测出来。
免疫学检测可分为血清学检测和细胞免疫学检测两种。
血清学检测是指通过检测血清中特异性抗体的存在来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有ELISA、免疫荧光、免疫印迹等方法。
其基本原理是将目标抗原或建立细胞突变株制备成特异性抗原，与患者血清中的特异性抗体结合，用酶、荧光或其他标记物检测出来。
例如，ELISA是一种广泛应用的免疫学检测技术，用于检测抗体和抗原的相互作用。
它的原理是将抗原吸附到多孔板上，在体外将待测样本加入其中，样品中如有特异性抗体，则与抗原结合，未结合的抗体被洗掉，再加入标记抗体，标记物与抗原相互结合形成复合物，可以根据标记物的性质来检测复合物的形成。
细胞免疫学检测是指通过检测免疫细胞的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有淋巴细胞转化试验（LTT）、流式细胞术等方法。
其基本原理是将血液或其他体液样本中的免疫细胞与特异性抗原共同孵育，在体外激活免疫细胞产生抗体或细胞反应，使用流式细胞术分离、检测不同类型的免疫细胞。
例如，LTT可用于检测细菌或病毒等病原体感染及免疫功能异常等疾病。
其原理是将血液或其他体液样本加入培养基中，与特定抗原刺激后，在体外培养一段时间，测定培养物中的淋巴细胞增殖情况，反映细胞免疫应答功能的多样性和复杂性。
免疫学检测在临床实践中的应用非常广泛。
它被用来诊断多种感染性疾病，例如乙型肝炎、艾滋病、结核病等。
通过检测患者体内是否存在相应的抗体或细胞反应，可以确定疾病病原体是否存在以及疾病的严重程度。
此外，免疫学检测还被用于诊断自身免疫性疾病，例如狼疮、风湿性关节炎等。
通过检测患者体内是否存在特定的自身抗体，可以确定患者的疾病类型和严重程度。
免疫检测原理
免疫检测原理免疫检测是一种常用的生物学实验技术，通过检测抗体与抗原之间的相互作用来确定特定物质的存在。
这种检测方法通常用于诊断疾病、监测生物分子的表达水平以及研究生物分子相互作用等领域。
免疫检测的原理主要基于免疫学中的抗体-抗原相互作用原理，下面将详细介绍免疫检测的原理及其应用。
1. 免疫检测的原理免疫检测的原理基于抗体与抗原之间的特异性相互作用。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质，可以识别并结合特定的抗原分子。
当抗体与抗原结合时，会发生特定的免疫反应，形成抗原-抗体复合物。
免疫检测利用这种抗原-抗体相互作用来检测特定的生物分子。
常见的免疫检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光等。
2. ELISA检测原理ELISA是一种常用的免疫检测方法，其原理基于酶与底物之间的特异性相互作用。
在ELISA实验中，首先将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板上，然后加入特异性抗体或抗原，使其与待检测物相结合。
接着加入与特异性抗体结合的酶标记二抗，形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。
最后加入底物，酶与底物发生反应产生可测量的信号，通过测量信号强度来确定待检测物的存在量。
3. Western blot检测原理Western blot是一种用于检测蛋白质的免疫检测方法，其原理基于蛋白质的分子量和特异性抗体的结合。
在Western blot实验中，首先将待检测的蛋白质经电泳分离并转移到膜上，然后将膜与特异性抗体结合，形成蛋白质-抗体复合物。
接着加入与特异性抗体结合的辅助抗体，再加入底物产生可视化的信号，通过检测信号强度来确定待检测蛋白质的存在量。
4. 免疫检测的应用免疫检测在医学诊断、生物学研究和生物工程等领域有着广泛的应用。
在医学诊断中，免疫检测可以用于检测病毒、细菌和肿瘤标志物等，帮助医生诊断疾病。
在生物学研究中，免疫检测可以用于检测蛋白质表达水平、研究蛋白质相互作用等。
在生物工程中，免疫检测可以用于检测重组蛋白质的纯度和活性等。
免疫学检测技术基本原理及其应用课件
探讨免疫学检测技术在环境污染监测中的应 用，如检测水中的污染物。
生物医学研究
了解免疫学检测技术在研究领域的应用，如 免疫组织化学和流式细胞术。
食品安全监测
介绍免疫学检测技术在食品安全监测中的作 用，如快速检测食品中的有害物质。
免疫学检测技术的前景展望
展望免疫学检测技术未来的发展方向和应用 前景。
述
3 免疫学检测技术分
类
介绍免疫学检测的基本 原理，如抗原-抗体相互 作用和信号放大。
探讨不同类型的免疫学 检测技术，如免疫层析、 免疫荧光和酶联免疫吸 附实验。
免疫学检测技术的应用
临床诊断
探索免疫学检测技术在疾病诊断和监测中的 广泛应用，如病毒检测和肿瘤标志物。
生物工业
探索免疫学检测技术在生物工业中的应用， 如生物制药和工业发酵。
免疫学检测技术基本原理 及其应用课件
欢迎来到免疫学检测技术基本原理及其应用的课件！本课程将带您深入了解 免疫学检测技术的基本原理以及广泛的应用领域。让我们开始这段令人兴奋 的学习旅程吧！
免疫学检测技术基本原理1 来自疫学基础知识回顾回顾免疫学的基本概念 和原理，为后续的技术 解释提供基础。
2 免疫学检测原理概
免疫学检测技术的挑战与改进
1 技术难点
探讨当前免疫学检测技术所面临的挑战，如灵敏度、特异性和自动化。
2 改进方向
讨论改进免疫学检测技术的可能方向，如新的标记方法和数据分析技术。
免疫学检测方法及其原理
原理：利用抗原抗体特异性结合 的原理，通过酶催化底物产生颜 色反应，检测抗原或抗体的存在。
步骤：将抗原或抗体固定在固相 载体上，加入待测样品，再加入 酶标记的抗体或抗原，最后加入
底物，产生颜色反应。
优点：灵敏度高，特异性强，操 作简便，可定量检测。
应用：广泛应用于免疫学检测、 疾病诊断、药物研发等领域。
评估药物的疗效和安全性
03
检测方法：使用免疫细胞进 04
筛选结果：根据检测结果，
行药物筛选，如ELISA、流
选择具有治疗效果的药物进
式细胞术等
行进一步研究
科学研究
01
免疫学检测在科学
研究中的应用
02 免疫学检测在生物
医学研究中的应用
03
免疫学检测在生物
技术研究中的应用
04 免疫学检测在生物
制药研究中的应用
2 免疫学检测原理
抗原抗体特异性结合
抗原：能够引起免疫反应的物质，如病毒、细菌 等
抗体：由B细胞产生的，能够识别并结合抗原的 蛋白质
特异性结合：抗原与抗体之间具有高度特异性， 即一种抗原只能与一种抗体结合
结合原理：抗原与抗体结合后，形成抗原抗体复 合物，从而激活免疫系统，产生免疫反应
信号放大技术
免疫学检测方法及其 原理
演讲人
目录
01. 免疫学检测方法 02. 免疫学检测原理 03. 免疫学检测应用
1 免疫学检测方法
抗原抗体反应
01
抗原：能够引起 免疫反应的物质， 如病毒、细菌等
02
抗体：由免疫系 统产生的，能够 识别和结合抗原 的蛋白质
03
反应原理：抗原 与抗体结合，形 成抗原抗体复合 物，引发免疫反 应
免疫学检测技术基本原理
1:8
1:16
Ag
Ab
扩散
免疫学检测技术基本原理
15
免疫学检测技术基本原理
16
３、免疫电泳 （immuno electrophoresis)
+
-
标本先电泳
**** **** ****** **** ***** ***
两侧挖槽加Ab孵 育后出现肉眼可
见沉淀
免疫学检测技术基本原理
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免疫学检测技术基本原理
抗体直接结合所出现的凝集现象 ：
（1）玻片法—定性试验：已知 Ab 未知 Ag(?) ABO血型鉴定， 细菌种属抗原型别的鉴定
+
免疫学检测技术基本原理
10
（2）试管法—半定量试验： 诊断伤寒副伤寒的“肥达氏反应”
病人血清 倍比稀释
伤寒细菌悬液
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 对照
1、免疫荧光技术
（immunofluorescence techniques）
利用荧光素标记抗体或抗抗体以检测细胞表面或 细胞内抗原的技术。
免疫学检测技术基本原理
21
1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques）
直接法
间接法
免疫学检测技术基本原理
22
免疫学检测技术基本原理
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间接免疫荧光检测自身抗核抗体
免疫学检测技术基本原理
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2、免疫酶标技术： 免疫酶标技术：酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生 特异性结合
加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质 根据颜色可作出判断或测量光密度值
免疫学检测方法与操作规范
免疫学检测方法与操作规范免疫学检测方法一直是生物医学领域中的重要技术之一，广泛应用于免疫学研究、临床诊断和治疗监测等方面。
本文将介绍免疫学检测方法的基本原理、常用实验步骤以及操作规范，旨在为科研人员和实验室从业人员提供参考。
一、免疫学检测方法简介免疫学检测方法是通过检测人体免疫系统特异性抗原与抗体之间的相互作用来实现。
其原理基于人体免疫系统对外界病原体的免疫应答，通过检测抗原-抗体反应可以确定某种特定的抗原或抗体是否存在于样本中。
免疫学检测方法常见的类型包括ELISA（酶联免疫吸附测定法）、免疫印迹、流式细胞术等。
每种方法都有其特定的优势和适用范围，具体选择方法要根据实验目的和样本特点来确定。
二、常用免疫学检测方法及操作步骤1. ELISA方法ELISA是一种定性和定量检测抗原或抗体的常用方法。
其操作步骤包括：（1）涂底板：将包含目标抗原的溶液加入微孔板中，并在相应孔中加入阴性对照和阳性对照，孵育后洗涤；（2）加入特异性抗体：将标记有酶的特异性抗体加入孔中，并进行孵育和洗涤；（3）底物反应：加入酶底物，允许产生显色反应；（4）终止反应：加入终止液停止底物反应；（5）测定吸光度：使用酶标仪测定吸光值，计算样品中目标抗原或抗体的浓度。
2. 免疫印迹方法免疫印迹是一种用于检测特异性抗原和抗体的方法，常用于蛋白质的鉴定和定量。
操作步骤包括：（1）蛋白质分离：将待测蛋白经SDS-PAGE电泳分离；（2）膜转移：将分离后的蛋白转移到膜上，如PVDF或NC膜；（3）阻断：用蛋白阻断剂阻断膜上非特异性结合位点；（4）孵育抗体：使用特异性抗体孵育膜，结合目标蛋白；（5）洗涤：洗去未结合的抗体；（6）显色：加入特定底物进行显色反应；（7）图像分析：使用成像系统记录和分析显色结果。
3. 流式细胞术流式细胞术常用于分析和鉴定细胞表面标记物的表达情况，以及细胞在不同状态下的功能。
操作步骤包括：（1）细胞准备：对待测细胞进行处理，包括细胞培养、致死和洗涤等步骤；（2）标记抗体：使用荧光标记的特异性抗体孵育待测细胞，与目标表面标记物结合；（3）洗涤：洗涤去除未结合的抗体；（4）流式细胞仪分析：将标记后的细胞放入流式细胞仪中进行荧光检测和数据分析。
免疫学检验的基本原理与方法
免疫学检验的基本原理与方法免疫学检验是一种常见的实验室技术，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫学检验的基本原理和常用的方法，并探讨其在疾病诊断、病毒检测和药物研发中的应用。
一、免疫学检验的基本原理免疫学检验基于机体免疫系统的特性，利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来检测和定量分析抗原或抗体的存在。
其基本原理如下：1. 特异性识别：抗体可以识别并结合与之对应的抗原，形成特异性的抗原-抗体复合物。
2. 高度敏感性：免疫学检验可以检测极低浓度的抗原或抗体，提供高度敏感的结果。
3. 双重验证：通过采用一对互补的抗原和抗体，可以用于验证检测结果的准确性。
二、常见的免疫学检验方法在免疫学检验中，常用的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫荧光等。
下面将对这些方法进行具体介绍：1. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见且广泛应用的免疫学检验技术。
它利用酶标记的抗体与待检测样品中的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标记物复合物。
通过添加底物，酶标记物能够催化底物的反应，产生可测量的信号。
ELISA可用于定量或半定量测定目标物的浓度，并可应用于多种领域，如感染性疾病的诊断、蛋白质的定量等。
2. 免疫印迹（Western Blotting）免疫印迹是一种常用于检测特定蛋白质的免疫学技术。
该方法通过将复杂的蛋白质混合物经SDS-PAGE电泳分离后，将之转移到固体载体上。
然后，用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记的二抗与一抗结合，产生可见的信号。
免疫印迹可用于诊断疾病、检测蛋白质相对分子质量和检测表达水平等。
3. 免疫荧光免疫荧光是一种利用抗体对荧光染料标记的抗原进行特异性识别的免疫学技术。
该技术通过与荧光探针结合并激发荧光信号，来检测细胞或组织中特定抗原的定位和表达。
免疫荧光广泛应用于免疫组织化学、细胞信号转导、病毒感染等领域，可用于研究细胞和组织的结构、功能以及疾病的发生机制。
免疫检测技术的应用原理
免疫检测技术的应用原理1. 概述免疫检测技术是一种基于免疫学原理的检测方法，广泛应用于医学、生物学、农业等领域。
它通过检测目标物与特定抗体的结合反应，来确定样本中目标物的存在与否。
本文将介绍免疫检测技术的应用原理。
2. 抗原与抗体2.1 抗原抗原是指能够引发机体免疫系统产生免疫应答的分子。
抗原可以是蛋白质、多糖、脂质等物质。
在免疫检测中，常用抗原作为检测目标。
2.2 抗体抗体是由机体免疫系统产生的一种具有高度特异性结合能力的蛋白质。
抗体可以识别并结合抗原，并激活免疫反应。
在免疫检测中，常用抗体作为检测试剂。
3. 免疫检测方法3.1 免疫层析法免疫层析法是一种简单、快速的免疫检测方法。
它利用免疫反应在液体或固体介质中形成的免疫复合物的不同移动速度，进行目标物的检测。
常见的免疫层析法有胶体金层析法、膜层析法等。
3.2 免疫荧光法免疫荧光法是一种基于荧光信号的免疫检测方法。
它利用荧光染料或荧光标记的抗体与目标物结合，并通过荧光显微镜观察荧光信号的强度和位置来确定目标物的存在。
免疫荧光法具有高灵敏度和高特异性的优点。
3.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的免疫检测方法。
它利用酶和抗体的结合来实现目标物的检测。
ELISA可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等多种形式，常用于血清学检测、病原微生物诊断等领域。
4. 免疫检测的应用领域4.1 医学在医学领域，免疫检测技术广泛应用于疾病的诊断和治疗。
例如，通过检测血液中特定蛋白质的抗体水平，可以判断某些疾病的发生和进展情况。
免疫检测还可以用于药物的监测和疫苗的研发。
4.2 生物学在生物学研究中，免疫检测技术被广泛应用于蛋白质的定量和检测。
例如，通过ELISA技术可以测定蛋白质的浓度，进而研究蛋白质在细胞中的功能和调控。
4.3 农业在农业领域，免疫检测技术被用于检测农作物中的病原菌和有害物质。
免疫学检测技术的基本原理及其应用
免疫学检测技术的基本原理及其应用免疫学检测技术是一种通过测定机体中的抗体或抗原来进行诊断、监测或研究的检测方法。
其基本原理是利用人体免疫系统的特性，通过抗原与抗体的特异性结合来检测和定量分析抗原或抗体的存在与水平。
下面将详细介绍免疫学检测技术的基本原理及其主要应用。
一、免疫学检测技术的基本原理1.直接免疫检测方法：直接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体标记物直接反应，利用标记物发出的信号来检测目标物质。
常用的标记物有放射性同位素、荧光物质、酶和金等。
2.间接免疫检测方法：间接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体反应后，再经过第二抗体与标记物结合的方式来检测目标物质。
这种方法主要应用于寻找含有多重抗原决定簇的抗原。
二、免疫学检测技术的主要应用1.临床应用：免疫学检测技术在临床上应用广泛，例如用于检测病毒、细菌、寄生虫等病原体的感染，常见的如乙肝、艾滋病、流感等病毒的检测。
此外，免疫学检测技术还可用于检测肿瘤标志物、自身免疫性疾病、免疫功能检测等。
2.生物制药与生物工程：免疫学检测技术在生物制药与生物工程中有着重要应用。
例如，通过免疫学检测技术来检测和定量分析生物制药产品中的杂质和残留物，确保产品质量和安全性。
另外，免疫学检测技术还可用于基因工程草甘膦抗性作物的筛选和鉴定。
3.食品安全监测：免疫学检测技术在食品安全监测中起到重要作用。
通过免疫学检测技术可以检测食品中的有害物质或者过敏原，如重金属、农药、酒精、过敏原等，确保食品的质量和安全。
4.动物疫病监测：免疫学检测技术在兽医领域有着广泛应用。
例如，可以通过免疫学检测技术来检测动物体内的病原体感染，如猪瘟、狂犬病、禽流感等，及时采取措施进行防治。
5.环境监测：免疫学检测技术还可用于环境污染物的监测。
例如，通过检测水体、大气中的有害物质，判断环境中的污染程度和对人体的危害。
总结起来，免疫学检测技术基于抗原与抗体的特异性结合反应，可以应用于临床诊断、药物开发、食品安全监测、动物疫病监测和环境监测等多个领域。
免疫学检测原理及临床应用
• ANNEXIN V是种磷脂结 合蛋白，作为探针能识 别凋亡细胞。
• 细胞对细胞活性染料 （如PI）有拒染性。而 坏死细胞能被PI染色。
（二）淋巴细胞功能测定的体内试验
迟发型超敏反应皮肤试验 ●特异性: PPD皮试、过敏原皮试 ●非特异性: PHA 皮试、DNCB皮试
●流式细胞术(flow cytometry，FCM)
●磁分离技术
（三）淋巴细胞亚群计数
●免疫荧光技术（IF） ●补体依赖微量细胞毒试验 ●流式细胞术（FCM） ●花环试验
用FITC-抗IgM 单抗计数B细胞
二、淋巴细胞功能测定
3H-TdR渗入法
淋巴细胞增值试验 MTT法 形态学计数法
体外试验
是指一个抗体分子与整 个抗原之间的结合强度。
之间的结合强度。
High
Affinity Ab
Low
Affinity Ab
Keq =
104
106
Ag
Ag
Avidity Avidity
抗原抗体反应的基本检测方法
（一） 凝集反应 颗粒性抗原与相应的抗体结合，在一定条件下
形成肉眼可见的凝集块。 （二） 沉淀反应
细胞毒试验
51CR释放法 乳酸脱氢酶释放法
细胞凋亡检查法
分泌功能测定 体内试验：皮试
检测细胞因子分泌细胞 检测抗体形成细胞
二、淋巴细胞功能测定
（一）淋巴细胞功能测定的体外试验
1. 淋巴细胞增殖试验
●刺激物
* 非特异性：丝裂原PHA、Con A和PWM，抗CD2、 CD3单抗，同种MHC等
* 特异性：破伤风类毒素、PPD、白色念珠菌、肿瘤 细胞等
免疫学检测技术的基本原理
免疫学检测的应用领域
医学诊断
免疫学检测可以用于早期疾病诊断、感染病毒和细 菌的检测，以及血型鉴定等。
生物学研究
在生物学研究中，免疫学检测可用于研究蛋白质的 表达、细胞信号传导和免疫系统功能。
免疫学检测的优势和局ຫໍສະໝຸດ 性高灵敏度与特异性免疫学检测具有高度敏感性和特异性，可准确识别和定量多种分子。
操作简便
免疫学检测方法简单易行，不需要复杂的设备和操作步骤。
免疫学检测技术的基本原 理
免疫学检测技术是通过检测抗体和抗原之间的相互作用，来识别和量化特定 分子的方法。
常见的免疫学检测方法
酶联免疫吸附试验（ELISA）
常用于检测抗体和特定抗原之间的结合，可应 用于医学诊断和生物学研究。
免疫印迹（Western blot）
通过将蛋白质分离并与特异性抗体结合，检测 目标蛋白的存在和浓度。
免疫荧光染色
利用荧光标记的抗体来定位和检测细胞内的特 定抗原和抗体。
免疫组织化学
将抗体标记物应用于组织切片，用于研究细胞 和组织中特定抗原的表达。
免疫学检测的工作原理
1 抗原-抗体反应
免疫学检测基于抗原与抗体之间的特异性结合，形成可观察的信号。
2 特异性识别与结合
通过选择性地使用特定抗体来识别和结合目标分子，达到特异性检测的目的。
常用免疫学检验技术的基本原理
常用免疫学检验技术的基本原理免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。
由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）.由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体)。
免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。
最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。
这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。
单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比.利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。
免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开.然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。
然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体)的鉴别。
上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限.比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原(或抗体）的含量。
该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。
免疫印迹法则首先通过电泳分离标准的已知抗原,然后将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上，浸于待测血清中。
免疫学检测原理
免疫学检测原理
免疫学检测是一种常用的生物学分析方法，用于检测体内的抗体或抗原。
其原理基于免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性相互作用。
免疫学检测通常分为直接和间接检测两种方法。
直接检测中，样品中的抗原与标记有特定抗体的探针结合，形成抗原-抗体
复合物。
这种复合物可以通过各种方法来检测，例如流式细胞仪、免疫组化等。
间接检测中，样品中的抗原与特定抗体结合后，再与标记有第二抗体的探针结合。
这种方法通常用于检测抗体。
在免疫学检测中，探针的选择很关键。
探针可以是放射性同位素、酶、荧光剂或荧光素等，这些标记物能够产生可检测的信号。
通过测量标记物的信号强度，可以确定样品中的目标抗原或抗体的存在和数量。
免疫学检测方法的选择取决于具体的实验要求以及所需要检测的抗体或抗原类型。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、西方印迹（Western blotting）和免疫组化等。
总的来说，免疫学检测是一种快速、敏感且特异的方法，被广泛应用于临床诊断、生物医学研究和药物开发等领域。
通过免疫学检测，可以获得关于免疫系统功能和疾病状态的重要信息，有助于了解疾病的发展机制和制定相应的治疗策略。
免疫学实验的实验原理应用
免疫学实验的实验原理应用1. 介绍免疫学实验是研究生物体对抗外来生物、化学物质或病原体的反应的一种重要方法。
它通过检测和分析免疫系统产生的抗体和细胞因子等来评估免疫功能。
本文将介绍免疫学实验的实验原理和主要应用。
2. 实验原理免疫学实验的基本原理是通过特定的抗原与免疫系统中的抗体结合产生反应，从而检测和研究抗体的产生和功能。
以下是常见的免疫学实验原理：2.1. 免疫沉淀技术免疫沉淀技术通过特异性抗体与待测抗原结合，形成免疫沉淀复合物，然后利用沉淀复合物的性质进行检测或纯化。
免疫沉淀技术主要包括单克隆抗体和多克隆抗体的应用。
2.2. 免疫染色技术免疫染色技术主要使用抗体与标记物结合的原理，通过标记物的特异反应产生颜色或荧光信号，用于检测待测物质的存在和定位。
常见的免疫染色技术有免疫组化染色和免疫荧光染色。
2.3. 免疫印迹技术免疫印迹技术是一种通过分析目标蛋白在凝胶上的特异性识别，进而定性和定量目标蛋白的方法。
免疫印迹技术主要包括Western blotting和ELISA等。
3. 实验应用免疫学实验在医学研究、生物工程、环境监测和农业等领域有广泛的应用。
以下是免疫学实验的主要应用：3.1. 诊断疾病免疫学实验常被用于疾病的诊断，例如通过检测特定抗体或抗原来确定某种病原体的感染。
例如，ELISA可以用于检测HIV感染，免疫荧光染色可以用于诊断肿瘤。
3.2. 药物开发免疫学实验可以用于药物的研发和评价。
例如，在药物开发过程中，可以使用免疫沉淀技术来纯化目标蛋白，进而设计新的治疗方法。
此外，免疫染色技术可以用于评估候选药物的效果。
3.3. 生物学研究免疫学实验在生物学研究中起到关键作用。
例如，通过免疫印迹技术可以确定蛋白质的表达水平和翻译后修饰的情况，通过免疫沉淀技术可以研究蛋白质间的相互作用。
3.4. 免疫治疗免疫学实验在免疫治疗中有重要的应用。
例如，通过免疫沉淀技术可以纯化单克隆抗体用于治疗某种疾病，通过免疫染色技术可以评估免疫治疗的效果。
理论课第二十一讲免疫学检测原理
4、细胞病变抑制法：原理：以VSV-WISH〔人〕、 VSV-L929
〔鼠〕系统，检测IFN对VSV易感细胞株的50%病变抑制效应 与标准品比对，断定活性单位
菌代谢释放氢摄入的NBT承受胞浆沉积黑色颗粒
10% NBT+
7
第七页，共22页。
3、巨噬细胞吞噬功能测定：原理：用斑蝥酒精浸出液贴敷法收 集人 ，用腹腔渗出法搜集鼠 ，体外进展鸡红细胞(有胞 核)吞噬实验，计算吞噬百分率、吞噬指数 4、巨噬细胞细胞毒测定：测定 对放射性核素51Cr、 125IUdR 标记靶细胞P815的杀伤活性
1、平皿黏附别离法 2、斑蝥敷贴法：原理：用斑蝥酒精浸出液贴敷前臂内侧皮肤， 诱发无菌皮炎，搜集皮泡渗出液中来自皮下组织的
3、硫基乙醇酸盐肉汤培养基小鼠腹腔搜集腹腔渗出
5
第五页，共22页。
二、淋巴细胞及亚群的检测
根据细胞外表标志鉴定淋巴细胞亚群及检测计数 1、T细胞检测
1〕间接免疫荧光法：原理：抗CD抗体与PBMC结合参加荧光
ABC上的亲和素(A)结合于抗体的生物素(B) ABC结合于标本
加底物显色检出着色阳性细胞
第二十页，共22页。
20
〔二〕酶联免疫吸附测定〔ELISA〕
酶标仪检测
非均相酶免疫测定：常用方法为以聚苯乙烯培养板和NC膜等
为固相载体
1、间接法：测抗体
抗原包被固相载体(Ag)参加待检抗体(Ab) Ag -Ab
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第二节 免疫分子的检测
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第二十一章免疫学检测原理
第一部分学习习题
一、填空题
1．抗原抗体反应的最大特点是_________。
2．颗粒性抗原与相应抗体结合后，可以发生_________反应；可溶性抗原与相应抗体结合后，在比例合适的情况下，可以发生_________反应。
3．细胞因子的检测可以分为_________、_________、_________三类。
二、多选题
[A型题]
1．抗原-抗体反应所不具有的特征是：
A．分子表面的可逆结合
B．具有高度特异性
C．出现肉眼可见的反应需要适当的比例
D．二者结合后，立即出现可见反应
E. 二者反应受电解质、酸碱度和浓度的影响
2．检测可溶性抗原不能用：
A．ELISA B．单向琼脂扩散
C．直接凝集反应 D．反向间接凝集反应
E．协同凝集试验
3.不属于抗原抗体反应的是：
A. 酶联免疫吸附试验（ELISA） B．锡克试验
C．抗球蛋白试验 D．放射免疫分析法（RIA）
E．E花环试验
4．乳胶妊娠诊断试验属于：
A．协同凝集反应 B．反向间接凝集反应
C．直接凝集反应 D．间接凝集反应
E．间接凝集抑制反应
5．下列免疫学测定方法敏感性最高的是：
A．沉淀反应 B．凝集反应 C．ELISA
D．放射免疫测定 E．补体结合试验
6．抗原抗体反应最适宜的PH值为：
A. 5—4.5 B．4.5—5 C．5—6
D．6—8 E．8—9
7．用免疫荧光技术间接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记：
A. 抗原 B相应抗 C．抗免疫球蛋白抗体
D．抗原-抗体复合物 E．抗C3抗体
8．用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是：
A. 酶标抗A抗体 B．未标记的抗A抗体
C．酶标抗原A D．未标记的抗球蛋白抗体
E．酶标抗球蛋白抗体
9．用免疫荧光技术直接法检测病原微生物时，荧光素应标记在：
A. 微生物上 B．抗人Ig抗体上
C．抗原-抗体复合物上 D.抗微生物抗体上
E．抗C3抗体上
10．诊断DTH的皮肤试验，在前臂内注射少量可溶性抗原后，观察时间为：
A．10分钟 B.30分钟 C.6小时
D．12小时 E.72小时
11．可以用于对抗原进行免疫组化定位的方法是：
A．Northern Blot B．Western Blot
C．溶血空斑试验 D．免疫荧光技术
E．混合淋巴细胞反应
12．不能刺激T细胞增殖分化的物质是：
A. 结核杆菌纯蛋白衍生物（PPD）
B.刀豆蛋白A（Con A） C．植物血
凝素（PHA）
D．细菌的脂多糖（LPS） E．美洲商陆（PWM）
13．用ELISA双抗体夹心法检测血清中甲胎蛋白（AFP），应选择的固相包被物是：
A．已知AFP B．酶标记AFP C．抗AFP抗体
D．酶标记抗AFP抗体 E．待检血清
14．能够定量测定待检物的免疫学试验方法是：
A．环状沉淀实验 B．单向琼脂扩散
C．抗球蛋白实验 D．补体结合试验
E．对流免疫电泳
15．用于检测细胞免疫功能的皮肤试验是：
A．青霉素皮试 B．锡克试验
C．结核菌素试验 D．破伤风抗毒素皮试
E．白喉抗毒素皮试
[B型题]
A．Western Bloting B．细胞毒实验
C．溶血空斑实验 D．E花环实验
E．PHA淋巴细胞转化实验
1．测T细胞数量
2．测定抗体生成细胞数
3．测定NK细胞杀伤活性
4．测定非特异性细胞免疫功能
A．测定Tc细胞的效应功能 B．IgG测定
C．SmIg测定 D．T细胞亚群测定E．淋巴细胞转化实验
5．PHA可用于
6．免疫比浊法可用于
7．流式细胞仪可用于
8．细胞毒实验可用于
[X型题]
1．ELISA
A．酶与相应底物作用产生颜色
B．抗原或抗体可以特异性吸附于固相载体上
C．可以用酶标测定仪作定量分析
D．蛋白酶是其标记酶
E．双抗体夹心法可以检测未知抗体
2．能测定抗原的实验包括
A．絮状沉淀试验 B．间接凝集试验
C．火箭电泳 D．酶联免疫吸附试验
E．荧光免疫技术
三、名词解释
1．酶联免疫吸附试验
2．放射免疫分析法
3．免疫荧光技术
4．凝集反应
5．直接凝集反应
6．间接凝集反应
7．对流免疫电泳
四、问答题
1、从外周血分离淋巴细胞的方法有哪些？
2、简述细胞毒试验的原理
3、简述细胞因子的检测原理
第二部分参考答案
一、填空题
1．特异性
2．凝集、沉淀
3．免疫学检测法、生物活性检测法、分子生物学检测法
[A型题]
1. D
2. C
3.E
4.E
5.D
6.D
7.C
8.B
9.D 10.E 11.D
12 .D 13.C
14．B 15.C
[B型题]
1.D
2.C
3.B
4.E
5.E
6.B
7.D
8.A
[X型题]
1.ABCD
2.ABCDE
三、名词解释
1．酶联免疫吸附试验（ELISA）：将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面上进行，用洗涤方法使固相上的抗原抗体复合物与液相中游离抗原或抗体分开。
用于抗原或抗体的定量检测。
2．放射免疫分析法（RIA）：用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫学检测。
常用于微量抗原或抗体的定量检测。
3．免疫荧光技术：用荧光素与抗体连接成荧光抗体、再与待检标本中的抗原反应，在荧光显微镜下观察抗原抗体反应的部位，用于抗原的定位检测。
4．凝集反应：颗粒性抗原（如细菌、细胞等）与相应的抗体结合后形成肉眼可见的凝集块。
5．直接凝集反应：将细菌或红细胞与相应抗体直接反应，出现细菌或红细胞凝集的现象。
6．间接凝集反应：将可溶性抗原包被（结合）在无关载体颗粒表面，再与相应抗体反应后，出现载体颗粒凝集的现象。
7．对流免疫电泳：在琼脂糖电泳凝胶的正负极端打孔，并分别加入抗体和抗原，在电场的作用下，抗体和抗原作定向扩散，其中抗体由于电渗作用，扩散方向为正极向负极，而抗原则由于电泳作用，扩散方向为负极向正极，在二着比例适当的位置出现沉淀线。
用于抗原或抗体的定性检测。
1. 从外周血分离淋巴细胞的方法有哪些？
答案
（1）依靠淋巴细胞物理特征的分离方法
* 葡聚糖-泛影葡酸（Ficoll）等密度梯度离心法，根据淋巴细胞的比重将其与其他血细胞成分分离。
* 尼龙绵分离法：根据B淋巴细胞粘附于尼龙棉的特性，将B细胞与T细胞分开。
（2）依靠表面标记的分离方法
* E花环分离法：T细胞表面的CD2是绵羊红细胞（SRBC）受体，能使T细胞与SRBC结合形成E花环，因花环形成后比重变大，采用密度梯度离心即可将T细胞从其他淋巴细胞中分离出来。
* 免疫磁珠分离法：将某种表面标记特异性抗体包被在磁性微珠上，与磁珠交联的抗体能够特异性结合具有这种表面标记的细胞结合，然后用强磁场可将具有这种表面标记的细胞分离出来。
* 流式细胞术分离法：利用各种荧光素标记的表面标记特异性抗体，使不同表面标记的细胞结合上不同的荧光素，借助荧光活化细胞分选仪（FACS）将各种细胞分离开来。
2. 简述细胞毒试验的原理
答案：
（1）对于可溶性物质（如抗体、补体、肿瘤坏死因子等）导致的靶细胞破坏，可以采用简单的染色法来进行检测，原理是当靶细胞破坏时，其胞膜完整性被破坏，当用染料（如台盼蓝、酚红、结晶紫等）染色时，损伤的细胞浆将会着色，而未受损的靶细胞因胞膜完整，会拒染。
结合光密度的测定，能够进行定量检测。
（2）对于效应细胞（如CTL、NK等）对靶细胞的损伤，可以采用同位素释放法、酶释放法来进行测定。
其原理如下：
* 51Cr释放法：用Na
251CrO
4
标记靶细胞，若效应细胞损伤靶细胞，51Cr将释放进
入上清，检测上清中的放射活性，即可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤活性。
* 酶释放法：靶细胞内具有多种酶，当靶细胞受损时，这些酶将从胞内释放至上清，通过上清中酶活性的检测，可以计算出效应细胞杀伤靶细胞的活性。
最常用的酶是乳酸脱氢酶。
（3）细胞凋亡检测法：某些因素能够诱导靶细胞发生凋亡，也是免疫应答杀伤靶细胞的一种形式。
凋亡是细胞内源性DNA酶被被激活，将染色体DNA酶解，使细胞发生程序性死亡。
可以采用DNA ladder法、TUNEL法等方法来检测靶细胞的凋亡事件，从而评估对靶细胞杀伤的效应。
3. 简述细胞因子的检测原理
答案：见“网络课件内容”。