划痕实验

细胞划痕实验
细胞划痕实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。

实验材料：细胞样品
仪器、耗材：6孔板marker笔直尺枪头
试剂、试剂盒：无血清培养基、PBS
抗体：Hamster igG 3、λ抗体
实验步骤：
一.准备：
所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）
二.流程：
1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。

每孔至少穿过5条线。

2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。

3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。

4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。

5.放入37度5%CO2培养箱，培养。

按0，6，12，24小时取样，拍照。

注意的几个问题：
1、划痕前是不倒培养基的，划痕后再倒掉培养基加PBS清洗后加无血清培养基；
细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。

划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

因此是整个培养皿都加培养基的，观察部位是划痕而已。

2、通过算每个视野的划痕面积，可以通过image J 软件计算。

3、划痕法的意义在于，价格低廉，操作简单。

还有很重要的一点在于细胞外围环境简单单纯，容易控制。

（比如做加药的，可能会和血清的组分有反映，而且受血清批次的影响，造成误差。

如果是铺了ECM物质的，组分就更复杂了。

）
划痕法的不足也很明显，适用的细胞系很窄，一般只能用于上皮，纤维样细胞系。

因为
a.这些细胞本身有迁移能力，且较强。

b.细胞有极性，方便测量，观察。

c.细胞对无血清有较强的忍受力（至少24小时），因此很多肿瘤细胞系是不适合做划痕的，很多肿瘤细胞系在无血清培养下，12小时细胞凋亡就超过50%。

这也就是transwell发展的最大要求。

而一些上皮样细胞系甚至可以忍受高达72小时的无血清实验。

足以弥合划痕。

4、其实在伤口弥合中，fibroblast的向创口处迁移就是典型的侧向爬行。

但是其实癌细胞的迁移倒不是侧向爬行那么简单，我觉得应该是综合效应，而且要看是什么类型的肿瘤。

因为对于远端病灶的转移，显然是通过血液运输的。

这是一个细胞去黏附和再黏附的过程。

其实transwell也不能很好的模仿这个过程。

只是transwell+matrigel可以模仿肿瘤细胞融解基质，侵入到正常组织的这个过程。

也就是侵袭。

所以对于做cancer的来说，可能transwell会更好些。

但我觉得并不能就简单否定scar assay。

细胞的迁移作为细胞的一个正常生理活动，是表征细胞生理变化的一个重要指标。

这点是很主要的意义。