细胞划痕试验
细胞划痕实验
细胞划痕实验它是检测细胞运动中一种成本极低又简单易行的体外试验方法。
原理：当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。
划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。
在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过比较图像以确定细胞迁移速率。
实验步骤：1.划线：先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。
每孔至少穿过5条线2.铺板：处于对数生长期的细胞，胰蛋白酶消化成单细胞悬液，接种于6孔培养板；细胞铺板6×105个细胞/孔，确保第二天细胞能够长满，每孔最终的培养基总量2mL；3.细胞培养37℃、5％CO2培养箱中培养24h4.划痕：第二天用*头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，*头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只*头)5.清洗：PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基6.拍照：4倍镜下进行拍照，保证划痕居中且垂直，注意背景一致，可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定但是！在此之前有个非常重要的步骤，选择细胞一定要注意：1.避免选择生长特别缓慢的细胞（例：内皮细胞）（内皮细胞）2.避免选择贴壁不牢的细胞（例：神经母细胞瘤）(神经母细胞瘤)3.避免选择堆积生长或长不满的细胞（例：巨噬细胞）(巨噬细胞）实验过程中出现的一些常见问题及解决方案：问题 1 ：细胞划痕时发现细胞没有长满，或是长的太满？解决1 ：铺板时的数量须根据细胞的形态、增殖速度、大小进行调节，细胞较小或增殖速度慢，铺板数量需多于6 ×105个细胞/孔；细胞较大或增殖速度较快则需少于6 ×105 个细胞/ 孔；问题2 ：细胞铺板时，前面铺的孔细胞密度稀，后面铺的孔细胞密度密？解决2 ：细胞铺板，细胞单细胞悬液混合后，铺板过程中需要边铺板边晃动管子，保证细胞在悬液中均匀分布；问题3 ：拍出来的照片背景颜色不一或亮度不一？解决3 ：在拍照前进行白平衡；固定曝光时间。
划痕实验原理和目的及操作流程
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细胞划痕实验实验报告
实验目的：细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移和侵袭能力检测方法。
本实验旨在通过细胞划痕实验评估细胞在不同条件下的迁移能力，为进一步研究细胞迁移的分子机制提供实验依据。
实验材料：1. 细胞：待测细胞系（如A549细胞）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养试剂：胎牛血清、青霉素、链霉素4. 划痕工具：一次性无菌划针5. 镜头：倒置显微镜6. 显微摄影设备：数码相机7. 数据分析软件：ImageJ实验方法：1. 细胞培养：将待测细胞系接种于6孔板，在37℃、5%CO2的条件下培养至对数生长期。
2. 细胞划痕：将细胞用胰酶消化后，用含胎牛血清的DMEM培养基重悬，接种于6孔板，使细胞密度达到70-80%。
用无菌划针在细胞层上划一条直线，用吸水纸吸去划痕周围的细胞。
3. 划痕修复实验：将细胞分为实验组和对照组。
实验组加入不同浓度的药物或处理因素，对照组加入等体积的DMEM培养基。
在37℃、5%CO2的条件下培养24小时。
4. 观察与拍照：用倒置显微镜观察划痕愈合情况，并用数码相机拍照记录。
5. 数据分析：使用ImageJ软件对划痕愈合区域的面积进行测量，计算划痕愈合率。
实验结果：1. 实验组与对照组的划痕愈合率存在显著差异（P<0.05）。
2. 随着药物浓度的增加，划痕愈合率逐渐升高。
3. 不同处理因素对划痕愈合率的影响存在差异。
实验讨论：细胞划痕实验是一种简单、快速、灵敏的细胞迁移和侵袭能力检测方法。
本实验结果表明，药物或处理因素对细胞迁移能力具有显著影响。
以下是对实验结果的讨论：1. 划痕愈合率与细胞迁移能力密切相关。
本实验中，划痕愈合率越高，表明细胞迁移能力越强。
2. 药物或处理因素对细胞迁移能力的影响可能与细胞骨架重组、细胞黏附、细胞外基质降解等因素有关。
3. 本实验结果表明，不同药物或处理因素对细胞迁移能力的影响存在差异，可能与药物或处理因素的分子靶点、作用机制等因素有关。
实验结论：本实验通过细胞划痕实验评估了药物或处理因素对细胞迁移能力的影响。
细胞划痕实验
细胞划痕实验
细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移实验方法，通过创造人工“划痕”来观察细
胞在愈合过程中的迁移和增殖情况，从而研究细胞间的相互作用、信号传导和细胞迁移的机制。
实验原理
在细胞划痕实验中，首先在细胞培养皿中种植一层细胞，在细胞形成单层后，
用刮刀等工具在细胞层中划一条“刀痕”，即人工划伤细胞层。
然后观察细胞在划痕
区的迁移和增殖情况，通过比较划痕前后细胞的变化，可以研究细胞迁移、增殖和愈合过程中的生物学机制。
实验步骤
1.预处理细胞：培养所需的细胞株，并保证细胞活性和纯度。
2.细胞接种：将细胞接种在培养皿中，培养至细胞形成单层。
3.划痕操作：使用刮刀等工具在细胞层中划一条“刀痕”，注意操作要轻
柔并且一致。
4.图像记录：立即在划痕前后拍摄图像，并在不同时间点继续记录细胞
迁移和增殖的情况。
5.数据分析：根据不同时间点的图像，量化分析细胞迁移距离和细胞密
度等指标。
结果解读
通过细胞划痕实验，可以观察到划痕区域细胞的迁移、增殖及愈合情况。
通常，划痕后细胞会向划痕区域迁移，填补伤口，形成新的细胞层。
通过比较不同处理组的细胞迁移速度、距离和形态等指标，可以揭示细胞因子、信号通路等对细胞迁移的调控机制。
应用领域
细胞划痕实验在癌症转移、组织再生、损伤修复等研究领域具有广泛的应用。
在癌症转移研究中，可以通过划痕实验检测抗转移药物的疗效；在组织工程和再生医学中，可以评估生物材料对细胞迁移和愈合的影响。
细胞划痕实验是一种简单有效的细胞迁移实验方法，虽然存在一些局限性和技
术挑战，但在研究细胞迁移和增殖等问题上仍具有重要的应用意义。
细胞划痕实验
细胞划痕实验
一、实验原理
细胞划痕（wound healing）法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
二、实验步骤
1、所有要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min。
2、 1）先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线。
2）在空中加入约5×105个细胞（具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满），37℃培养箱培养。
3）第二天用10µl枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头要垂直，不能倾斜。
4）用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。
培养箱，按0、6、12、24h倒置显微镜观察，拍照。
5）放入37℃ 5% CO
2
三、注意事项
1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。
2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%），否则细胞增殖就不能忽略。
（也可用丝裂酶处理一小时）
3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
精品文档资料
资料。
简述细胞划痕实验步骤。
简述细胞划痕实验步骤。
细胞划痕实验是一种用于观察细胞形态、结构和功能的实验方法,常用于研究细胞的生长、分裂、代谢和信号转导等生理和病理过程。
下面是细胞划痕实验的基本步骤:
1. 准备材料:准备细胞培养物(如细胞样本、细胞培养液等)、划痕笔、显微镜、光学显微镜观察设备、盖玻片等。
2. 将细胞培养物制成涂片:将细胞培养物涂覆在盖玻片上,用刮刀或吸盘将细胞培养物涂得太厚,以免观察时产生失真。
3. 用划痕笔轻轻地在盖玻片表面划痕:将划痕笔的笔尖在盖玻片表面轻轻划痕,形成一条痕。
4. 用显微镜观察细胞划痕:将划痕部位放在显微镜视野下,观察细胞划痕的形态、颜色和形态结构等特征。
5. 分离细胞:使用分离器等设备,将划痕部位周围的细胞分离出来,用于后续的实验。
6. 细胞培养:将分离出来的细胞应用于后续培养和观察。
细胞划痕实验的步骤虽然简单,但其中涉及到的细胞形态、结构和功能等特征的变化,可以对细胞生理和病理过程的研究提供重要的线索和依据。
此外,细胞划痕实验还可以应用于其他许多领域,如药物研发、疾病诊断和治疗等。
细胞划痕实验
细胞划痕实验
一、实验原理
细胞划痕（wound healing）法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
二、实验步骤
1、所有要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min。
2、 1）先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线。
2）在空中加入约5×105个细胞（具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满），37℃培养箱培养。
3）第二天用10µl枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头要垂直，不能倾斜。
4）用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。
培养箱，按0、6、12、24h倒置显微镜观察，拍照。
5）放入37℃ 5% CO
2
三、注意事项
1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。
2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%），否则细胞增殖就不能忽略。
（也可用丝裂酶处理一小时）
3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
细胞划痕实验
细胞划痕实验细胞划痕实验是一种常用的生物实验方法，用于研究细胞迁移和迁移方向的变化。
在该实验中，主要通过人为划伤细胞培养皿表面，观察细胞对划伤区域的反应和移动情况，从而研究细胞迁移的机制和影响因素。
实验原理细胞划痕实验通常在细胞培养皿中进行。
首先，培养一定密度的细胞群落，使其形成一层单细胞层。
然后使用细胞刮刀或其他工具在细胞层上人为划伤直线或网状形式的划痕，形成一个空白区域。
随后观察并记录细胞在划伤区域的移动情况，包括细胞迁移速度、方向及迁移方式等。
实验意义细胞划痕实验可以帮助我们更好地理解细胞迁移的调控机制。
通过这一实验，我们可以研究细胞间相互作用、细胞迁移的信号通路以及细胞迁移受到的外界因素影响等。
同时，该实验方法简单易行，成本较低，适用于许多不同种类的细胞，因此被广泛运用于生物学研究中。
实验步骤1.培养细胞至一定密度，将其种植在培养皿中形成单细胞层。
2.利用细胞刮刀在细胞层上以一定压力划伤直线或网状形式的划痕，形成空白区域。
3.使用培养基冲洗划伤区域，去除游离的细胞并促进细胞重新排列。
4.定时观察细胞在划伤区域的移动情况，记录细胞迁移速度、方向和迁移方式。
5.结合实验数据，分析细胞迁移的规律及影响因素。
结论细胞划痕实验是一种有效的研究细胞迁移的方法，通过这一实验可以揭示细胞迁移的调控机制和影响因素。
在实验过程中，不仅可以观察细胞的移动情况，还可以研究细胞间相互作用对迁移的影响。
因此，细胞划痕实验在生物学研究中具有重要的意义和应用前景。
希望通过深入研究和探索，可以进一步揭示细胞迁移的机制，为相关领域的疾病治疗和药物研发提供重要的理论支持和实验依据。
细胞划痕实验e
细胞划痕实验
一、实验原理
细胞划痕〔wound healing〕法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央局部的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
二、实验步骤
1、所有要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min。
2、 1〕先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线。
2〕在空中参加约5×105个细胞〔具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满〕，37℃培养箱培养。
3〕第二天用10µl枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头要垂直，不能倾斜。
4〕用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，参加无血清培养基。
培养箱，按0、6、12、24h倒置显微镜观察，拍照。
5〕放入37℃ 5% CO
2
三、考前须知
1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢参加，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。
2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清〔<2%〕，否那么细胞增殖就不能忽略。
〔也可用丝裂酶处理一小时〕
3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成假设干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
细胞迁移划痕实验1
细胞迁移实验技术—划痕实验一、基本原理细胞划痕(修复)法就是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上, 用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间(例如72ｈ),取出细胞培养板,观察周边细胞就是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组与实验组,实验组就是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
二、操作步骤1、先用ｍaｒkeｒ笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0、5～１cm一道,横穿过孔。
每孔至少穿过5条线。
２.在孔中加入约5×10５个细胞,具体数量因细胞种类不同而不同,接种原则为过夜后融合率达到100%。
3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。
4.PＢS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
5.放入37℃5％CO2培养箱,培养。
可按0,6,１2,24h时间点取样,拍照(具体时间依实验需要而定)。
6、统计方法:使用Iｍage Ｊ软件打开图片后,随机划取6至８条水平线,计算细胞间距离的均值。
三、注意事项:１、在用PBS 缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。
2、一般做划痕实验,都就是无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略。
3.按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。
细胞划痕实验原理
细胞划痕实验原理
细胞划痕实验是一种常用的试验方法，用于研究细胞迁移和侵袭能力。
该实验基于细胞的自身运动性，通过划破培养皿底部的细胞单层，形成一个人工缺口，观察细胞在缺口处的迁移能力。
实验步骤如下：
1. 培养细胞：将要进行实验的细胞在培养皿中培养至适当的数量和状态。
2. 制造划线：在培养皿底部使用细胞釉垫，或者使用刮背刀等工具轻轻在细胞单层上划出一条直线。
可以使用刻度尺或者标尺等仪器辅助。
3. 观察细胞迁移：在划线后，细胞会通过无线化的方式对划线区域进行迁移。
可以使用显微镜观察细胞在划线区域的迁移速度和方向。
4. 分析结果：根据观察结果，可以对细胞的迁移能力进行定量或定性的分析。
可以使用图像处理软件等工具对细胞迁移的面积、距离和速度等参数进行测量和统计。
细胞划痕实验的原理基于细胞的运动性和迁移能力。
通过在细胞单层上创造一个人工的缺口，观察细胞在缺口处的迁移情况，可以研究细胞迁移的机制和调控因素。
这个实验被广泛用于癌症转移、组织修复和生物材料评价等领域的研究。
伤口愈合细胞划痕实验
伤口愈合/细胞划痕实验新方法细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。
这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。
划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。
基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。
特点：1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。
2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。
3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。
4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。
传统实验方法实验步骤：1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一个视野）。
2. 细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。
3. 细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。
（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。
）4. 吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。
5. 加入无血清培养基，拍照记录。
6. 将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。
7. 根据收集图片数据分析实验结果。
Culture Insert方法1. 准备细胞，培养液，culture Insert。
2. 如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。
3. 每隔4-6小时拍照记录。
4. 根据收集图片数据分析实验结果。
实验原理示意图总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：除了保证划痕均一性的难题，相信各位同学觉得最难的还有后期实验结果的处理，这里给大家分享一个操作非常简单的在线软件，只需注册就可以免费使用，只要上传图片很快就能把实验结果发到注册邮箱，非常方便。
细胞划痕试验方法
细胞划痕试验方法细胞划痕试验呀，这可是个很有意思的实验方法呢！咱先得准备好细胞，就像厨师准备食材一样。
把细胞培养得好好的，让它们茁壮成长。
然后呢，在培养皿里给它们划出一道“伤痕”，这就像是在大地上划出一道沟渠。
你想想啊，这细胞们原本好好地在一起，突然有了这么一道“伤痕”，它们会怎么办呢？它们就会开始行动啦！就像我们遇到困难会想办法去克服一样。
接下来，我们就可以观察这些细胞是怎么一点点把这道“伤痕”给填满的。
它们会努力地移动、分裂，就像一支小小的修复队伍，努力地工作着。
这过程可神奇了呢！你能看到细胞们一个一个地行动起来，有的走得快，有的走得慢，就像一群小朋友在比赛跑步。
而且呀，不同的细胞可能表现还不一样哦，有的特别厉害，很快就能把“伤痕”填满，有的就稍微慢一些。
在做这个实验的时候，可不能粗心大意。
培养皿要干净，细胞的状态要好，不然就像做饭食材不新鲜一样，做出来的效果可就不好啦。
而且操作的时候也要小心，别把细胞给弄伤了。
这细胞划痕试验能让我们了解细胞的迁移能力，这可是很重要的哦！就好像我们要了解一个人的能力，得看他在面对困难时的表现一样。
通过这个实验，我们能知道细胞有多厉害，能不能很好地应对这种“受伤”的情况。
你说这细胞划痕试验是不是很有趣呀？它就像是一个小小的细胞世界的冒险，让我们能看到细胞们的精彩表现。
我们可以从中学到很多东西，了解细胞的特性和行为。
这可不是随便玩玩的哦，是很有意义的呢！所以啊，如果你对细胞感兴趣，对生命的奥秘好奇，那可一定要试试这个细胞划痕试验。
它会让你大开眼界，让你对细胞有更深入的认识和理解。
说不定你还能从中发现一些新的东西呢！怎么样，是不是迫不及待想试试啦？哈哈！。
细胞划痕实验技巧
细胞划痕实验技巧细胞划痕实验技巧包括准备实验材料、划痕的过程、实验数据和结果的采集与分析。
一、准备实验材料在进行细胞划痕实验前，我们需要准备一些实验材料：1. 细胞：可以使用肝细胞、骨骼肌细胞、培养细胞等。
2. 平皿：实验时使用平光滑的塑料或玻璃平皿，可以不使用铁皿，以防止污染。
3. 活化剂：应使用适当浓度的活化剂，如去离子水，无菌HEPES缓冲液，乳清等。
4. 钝刀：钝刀有助于保证实验的安全性，同时加强划痕效果。
5. 荧光显微镜：常用荧光显微镜可以方便的检测划痕的效果。
二、细胞划痕的过程1. 将培养皿放置在显微镜底下，使细胞进行缓慢均匀悬浮；2. 用钝刀在培养皿中央选取一个定位点，沿着这个定位点进行划痕；3. 划完痕后，添加活化剂，使细胞在划痕的区域悬浮；4. 通过荧光显微镜监测细胞的运动情况，计算划痕部位细胞的运动速度；5. 用称秤检测划痕部位外细胞的真实重量，以排除细胞悬浮运动的影响；6. 在 2-3 小时的观察周期之后，记录划痕部位细胞的外观特征，如拉伸、剪切、运动等；7. 用显微镜观察划痕部位细胞的结构特征，记录最终数据，如单位面积拉伸长度、排列程度、旋转数等。
三、实验数据与结果采集与分析1. 实验数据采集：实验结果通常采用图片或图表格式展示，采集数据细致全面，并尽可能具体；2. 实验数据分析：使用统计学分析、潜在函数拟合等方法对实验数据进行分析；3. 结果报告：从实验数据分析中抽取结论，结合实验评定，编写结果报告，确定实验的最终结果。
以上是细胞划痕实验技巧的概述，如果想要更加精准的进行实验，还需要根据划痕所需要的细胞种类、划痕细胞的活动情况、细胞结构特征等，进行具体的实验技巧指导。
细胞划痕率计算
细胞划痕率计算
细胞划痕率计算是通过观察细胞在培养皿上移动的痕迹来评估细胞的迁移能力和划痕愈合能力的实验方法。
下面是细胞划痕率计算的步骤：
1. 在培养皿中接种足够数量的细胞，让其形成单层。
2. 使用一个物体（如刮刀、吸头等）在细胞单层上划出一条直线痕迹。
3. 将细胞单层放入培养箱中继续培养。
4. 在划痕后的一段时间（如24小时）内，观察细胞的迁移和划痕的愈合情况。
5. 使用显微镜观察划痕线上新生成的细胞，并拍摄照片。
6. 在照片上测量划痕线上细胞迁移的距离。
7. 使用以下公式计算细胞划痕率：
细胞划痕率 = （初始划痕宽度 - 细胞迁移距离）/ 初始划痕宽度 × 100%
通过计算细胞划痕率，可以评估细胞的迁移和划痕愈合能力。
较高的细胞划痕率表示细胞迁移能力和划痕愈合能力较强，较低的细胞划痕率表示细胞功能可能存在问题。
细胞迁移实验干货--划痕小课堂
细胞迁移实验干货--划痕小课堂
细胞划痕是一种简单易行的检测细胞迁移的方法，实验成本低，操作方便，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。
当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。
划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。
想必这些大家都很清楚，就不过多阐述，但是作为有多年经验的实验者，在这里也有一些小小的经验，望与大家分享：1）划痕实验很重要的一个因素就是铺板量，不同细胞的大小不一样，铺板量不一样。
就像786-O细胞比较大，96孔板一般铺2-3万细胞/每孔，第二天细胞融合度达到90%以上；而RKO细胞比较小，96孔板一般需要铺7-8万/每孔，第二天细胞融合度差不多达到90%左右。
所以具体要根据细胞大小适当调整，细胞划痕铺板密度一般为70-90%之间。
密度过低，增殖因素可能会影响迁移能力，反之，对于细胞状态会有影响，以至于不能保证实验的客观真实性。
2）细胞的贴壁能力也很重要。
有的细胞贴的不牢，划痕之后不易清洗，只需轻轻换液即可；而有的细胞贴壁比较牢固，可以选择轻轻拍一下，洗去划掉的细胞再换液。
3）最后就是时间点。
细胞划痕实验基本从8h，16h，24h，36h，48h这几个时间点间进行选择，但是具体进行的时间点需要根据细胞的迁移能力进行调整；
对于细胞的迁移而言，为了保证实验的客观真实性，需要我们对细胞的生长特性特别熟悉，可以先安排预实验，来确定正式实验的条件，以保证正式实验顺利的进行。
细胞划痕试验
直尺20微升枪头（灭菌）无血淸培养基PBS准备：所有能火菌的器械都要火菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min （超净台内）流程：1。
先用marker•笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~lcm—逍，横穿过孔。
每孔至少穿过5条线。
2。
在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3。
第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4。
用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血淸培养基。
5。
放入37度5%co2培养箱，培养。
按0, 6, 12, 24小时取样，拍照。
NOTE6空板可以保证有相当葩离的平直划痕，我觉得挺不错的。
而且因为有5 条定位线，及划痕相交，这样就有10个可固定监测点，不作重复，误差也很小。
如果你连续监测24小时，你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果，而不是单纯的细胞迁移。
如果你要单纯的考虑细胞迁移, 你可以先用丝裂霉素（lug/ml）处理一小时，抑制细胞的分裂，这样你的结果就是细胞迁移的作用了。
照片拍完之后，可以用image J来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。
无血清的话，应该一个细胞周期内，增殖可以忽略吧。
而且我定点监测的话，差不多可以对应到每个细胞。
好像没有看见很明显的增殖现象。
丝裂爲素貌似很贵的说。
如果用这个还不如直接用transwell呢。
另，image J哪里有下载么？谢谢。
ImageJ下载网址: 无血清培养，确实细胞增殖可以忽略了，不过由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。
不知道是不是大多数文献都用无血清培养状态下作划痕实验呢？目前最好的方法还是transwell法一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（《2%）否则细胞增殖就不能忽略。
一般认为细胞周期是24小时，但对于一些特殊的细胞系来说，生长可能会快一点。
因此好像还没看见用带血清培养，短时间检测的。
细胞划痕实验技巧
技巧：1⃣️ 在用DPBS清洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。
2⃣️ 划痕实验为无血清或低血清(<2%)培养，否则细胞增殖不能忽略。
（无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会较慢）3⃣️ 划痕按6孔板背后划线的垂直方向，形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
4⃣️ 划痕实验铺细胞最好使用6 孔板，以保证有相当距离的平直划痕。
5⃣️ 划痕实验适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。
细胞划痕实验（wound healing）是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养平板的单层贴壁细胞上，用微量枪头在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
准备：细胞基础培养基、无菌DPBS、灭菌枪头、直尺、移液枪、maker笔（操作前超净台内紫外照射30min）操作步骤：1⃣️培养板划线：首先使用marker 笔在6 孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm 一道，横穿过孔。
每孔至少穿过5 条线。
划线时注意线不要太粗。
2⃣️细胞铺板：根据细胞体积大小和生长速度调整细胞数目，接种原则为过夜后细胞融合率达到100%。
细胞划线：24h细胞贴壁后用100ul枪头，抵着直尺垂直于细胞平面，垂直于平板背面的线在细胞层上进行划痕。
3⃣️细胞清洗：划痕完成后，使用无菌DPBS洗细胞3次，洗去不贴壁的细胞，即划线时划去的细胞，使划线后留下的间隙清晰可见，然后更换新鲜无血清培养基。
4⃣️细胞培养、观察：37℃5%CO2培养箱培养。
细胞划痕实验技巧
细胞划痕实验技巧细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移和细胞间相互作用的研究方法。
通过划破细胞单层，观察和记录细胞的迁移和相互作用，可以更好地理解细胞的行为和功能。
本文将介绍细胞划痕实验的技巧和注意事项，帮助研究人员进行准确、可靠的实验。
一、实验前的准备工作1. 培养细胞：选取与研究目标相符的细胞系，进行细胞的培养和扩增。
确保细胞处于良好状态，生长健康。
2. 制备培养皿：使用适当的培养皿，如96孔板、6孔板等。
在实验前，用70%乙醇擦拭培养皿表面，以确保无细菌污染。
3. 划痕工具准备：选择合适的划痕工具，如细胞刮刀、细胞划痕器等。
确保划痕工具干净、锋利，以获得清晰的细胞划痕。
二、细胞划痕实验步骤1. 培养细胞：将要研究的细胞均匀地培养在培养皿中，使其达到一定的密度和一致性。
2. 划痕：使用划痕工具在培养皿内划破细胞单层。
可以沿着直线或弧线方向进行划痕，划痕的宽度和长度可以根据研究需求进行调整。
3. 清洗细胞碎片：用无菌PBS缓冲液轻轻地冲洗细胞碎片，以清除划痕产生的碎片和细胞残留物。
注意不要过度冲洗，以免对细胞划痕结果产生影响。
4. 加入培养基：加入含有适当浓度的培养基，以维持细胞的生长和迁移。
可以根据研究目的添加不同的药物或因子，观察其对细胞迁移的影响。
5. 观察和记录：使用相差显微镜或倒置显微镜观察细胞的迁移情况，并及时记录观察结果。
可以使用计算机软件对细胞迁移距离、速度等进行定量分析。
三、实验注意事项1. 细胞密度控制：细胞密度过低会导致划痕不明显，过高则会影响细胞迁移。
需要根据具体细胞系的特点和实验目的，合理控制细胞密度。
2. 划痕工具选择：不同的细胞系和划痕方式可能需要不同的划痕工具。
在选择划痕工具时，要根据实验需要和细胞类型进行合理选择，以获得清晰的划痕结果。
3. 细胞迁移时间控制：细胞迁移的时间因细胞类型和实验目的而异。
可以根据研究的需要，在不同时间点观察和记录细胞迁移情况，以获取更完整的数据。
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三、实验结果 统计方法：使用Image J软件打开图片后，随机划取6至
8条水平线，计算细胞间距离的均值，测量划痕区域的像素 定量比较细胞迁移的速度。
其他结果分析工具：Wound Healing Image Analysis – WimScratch
http://dxy.me/UfYzii Image Pro Plus
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直尺20微升枪头（灭菌）无血清培养基PBS准备：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）流程：1。
先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。
每孔至少穿过5条线。
2。
在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3。
第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4。
用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
5。
放入37度5%co2培养箱，培养。
按0，6，12，24小时取样，拍照。
NOTE6空板可以保证有相当距离的平直划痕，我觉得挺不错的。
而且因为有5条定位线，与划痕相交，这样就有10个可固定监测点，不作重复，误差也很小。
如果你连续监测24小时，你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果，而不是单纯的细胞迁移。
如果你要单纯的考虑细胞迁移，你可以先用丝裂霉素（1ug/ml）处理一小时，抑制细胞的分裂，这样你的结果就是细胞迁移的作用了。
照片拍完之后，可以用image J 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。
无血清的话，应该一个细胞周期内，增殖可以忽略吧。
而且我定点监测的话，差不多可以对应到每个细胞。
好像没有看见很明显的增殖现象。
丝裂霉素貌似很贵的说。
如果用这个还不如直接用transwell呢。
另，image J 哪里有下载么？谢谢。
ImageJ 下载网址：/ij/download.html无血清培养，确实细胞增殖可以忽略了，不过由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。
不知道是不是大多数文献都用无血清培养状态下作划痕实验呢？目前最好的方法还是transwell法一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（《2%）否则细胞增殖就不能忽略。
一般认为细胞周期是24小时，但对于一些特殊的细胞系来说，生长可能会快一点。
因此好像还没看见用带血清培养，短时间检测的。
不过我会去试试看。
可能是个好方法。
划痕法的意义在于，价格低廉，操作简单。
还有很重要的一点在于细胞外围环境简单单纯，容易控制。
（比如做加药的，可能会和血清的组分有反映，而且受血清批次的影响，造成误差。
如果是铺了ECM物质的，组分就更复杂了。
）划痕法的不足也很明显，适用的细胞系很窄，一般只能用于上皮，纤维样细胞系。
因为1。
这些细胞本身有迁移能力，且较强。
2。
细胞有极性，方便测量，观察。
3。
细胞对无血清有较强的忍受力（至少24小时），因此很多肿瘤细胞系是不适合做划痕的，很多肿瘤细胞系在无血清培养下，12小时细胞凋亡就超过50%。
这也就是transwell发展的最大要求。
而一些上皮样细胞系甚至可以忍受高达72小时的无血清实验。
足以弥合划痕。
wuushark wrote:现在好多SCI杂志都不认这个实验了，要求做transwell了。
这个方法无法进行精确定量，前期做起来容易，后期数据处理比较麻烦，还得附图，SCI杂志照片之昂贵，远超过了transwell的价格。
Photoshop 6.0以前的版本有个直方图的功能可以直接反映选择区域的象素多少，用来做面积分析应当很好用，用于做划痕修复的实验应当也很好用，当然，有更专业的Image Pro Plus 的话PS就没必要了。
tacthgin wrote:本人正打算投稿呢，其中就包括划痕实验，能否请wuushark 指点一下哪些SCI杂志不认这个实验呢？我个人认为选择scratch assay 或者是transwell assay 是根据所研究的细胞系的特点来决定的。
上皮细胞，癌细胞，角质细胞，在生理状态下，形成单层或者复层上皮，当病理状态下，比如创伤愈合，细胞迁移的时候，以侧向运动为主，scratch assay 很好的模拟了这种运动形式，是很好的模型。
neutrophil, monocyte/macrophage, mesenchymal stem cell, 这类细胞在生理状态下并不形成monolayer, 病理状态下的细胞迁移是在细胞因子或趋化因子的影响下在基质中纵向运动，transwell assay 模拟了这种运动形式，是适合的模型。
非常同意，tacthgin战友的思想。
其实在伤口弥合中，fibroblast的向创口处迁移就是典型的侧向爬行。
但是其实癌细胞的迁移倒不是侧向爬行那么简单，我觉得应该是综合效应，而且要看是什么类型的肿瘤。
因为对于远端病灶的转移，显然是通过血液运输的。
这是一个细胞去黏附和再黏附的过程。
其实transwell也不能很好的模仿这个过程。
只是transwell matrigel可以模仿肿瘤细胞融解基质，侵入到正常组织的这个过程。
也就是侵袭。
所以对于做cancer的来说，可能transwell会更好些。
但我觉得并不能就简单否定scar assay。
细胞的迁移作为细胞的一个正常生理活动，是表征细胞生理变化的一个重要指标。
这点是很主要的意义。
(3).肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
(4).肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与肿瘤细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。
计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
．步骤2．1 Transwell小室制备2．1．1 无基质胶Transwell小室制备① 包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
② 水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。
另有tianjin_glioma战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3. 9ug/ul) 60-80µl (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝胶。
2．1．2 有基质胶的Transwell小室制备Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300µl预温的无血清培养基，室温下静置15－30min，使基质胶再水化。
再吸去剩余培养液。
2．2 制备细胞悬液① 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
② 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1－10×105，个人认为不要超过5×105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
2．3 接种细胞① 取细胞悬液100－200µl加入Transwell小室，不同公司的、不同大小的Transwell小室对细胞悬液量有不同要求，请参考说明书。
24孔板小室一般200µl。
② 24孔板下室一般加入500µl含FBS或趋化因子的培养基，不同的培养板加的量有不同要求，具体请参考说明书。
这里要特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
③ 培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。
时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
以我的课题为例，我使用的药物不仅会抑制肿瘤细胞侵袭力，还对细胞增殖有明显抑制。
我选择的药物浓度是用MTT筛选出的72h的IC50。
用这个浓度处理细胞，24h内对细胞增殖并无明显抑制，但24h后，抑制作用就开始出现了。
所以，用这个浓度来做Transwell，处理时间也必须限定在24h内，否则一旦药物抑制了细胞增殖或者诱导出凋亡，使处理组细胞数目少于对照组，那么就难以肯定穿过膜的细胞比对照组少，究竟是由于侵袭被抑制引起，还是处理后细胞数目本身就比对照组少而引起的了。
时间过长不可以，同样，过短也不行，因为细胞内会有一定量的MMPs储存，短时间内可能侵袭能力不会有太大改变。
同时从药物被吸收进去，进而发挥作用，影响MMPs表达，到最后释放到培养基中，还需要一个过程。
时间点的选择可尽量长点，也可选择多个时间点研究时间依赖效应，但前提是这个时间范围内细胞数目不能有明显变化。
另外，我看到细胞在小室内的形态不是正常培养贴壁的形态，而是圆形的，仍是悬浮时的形态，不过会聚集成团，所以看到细胞不正常贴壁也不要紧张，是正常现象在培养过程中，膜下会逐渐有少量小气泡产生，这是正常现象，可不予处理，但我遇到过培养一段时间后，膜下出现了大气泡，幸亏及时发现，否则后果将非常严重。
因此，个人建议，最好接种细胞后1－2h把培养板从培养箱里拿出来看看，确信没有大气泡产生。
2．4 结果统计检测穿过的细胞数有两种方法：2．4．1 直接计数法2．4．1．1 “贴壁”细胞计数这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。
通过给细胞染色，可在镜下计数细胞① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞② 染色：常用的染色方法有结晶紫染色、台肦蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色等。
个人推荐采用0.1%结晶紫染色，这种方法有如下优势：(1). 不需要固定细胞，直接染色即可。
(2). 配制简单方便。
(3). 染色后可以用33%醋酸脱色，将结晶紫完全洗脱下来，洗脱液可在酶标仪上570nm 测其OD值，间接反映细胞数。
个人认为这是结晶紫染色最大的优势所在。
因为，虽然经过准确的细胞计数，往往穿过膜的细胞数仍难以准确控制，可能某一批实验穿过的细胞会特别多，以致细胞成堆，这种情况下就难以计数了，这种情况下就可以用醋酸脱色后用酶标仪检测。