划痕实验

划痕实验

1.先用marker笔在孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔一定距离一道，横穿过孔。每孔至少穿过3条线

2.细胞被干预后（药物处理，转染，电转，感染）适当时间点（考虑上述处理因素起作用的时间），作活细胞计数（台盼蓝染色），把适量细胞接种至12孔板中，掌握为过夜必须长满（100%）；

3.如果是药物处理，要考虑是否继续加药处理，如果是转染，电转，感染，一般考虑不再进行第二次处理；

4.待细胞长满后，用枪头比着直尺（高压灭菌的钢尺），尽量垂至于背后的横线划痕，每隔一定距离划1道，共划3道，枪头要垂直，不能倾斜。

5.用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

6.37度5%CO2培养24小时，培养。按0，6，12，24，48小时取样，拍照。每个样品取9个视野量尺寸，并统计数据。

注意事项：

1. 一般做划痕实验，都是在无血清或者低血清状态下培养的，否则

细胞增殖就不能忽略；

2. 按照孔板背后的划线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，这就可以了解决前后观察的位置不固定问题。

3. 何时把处理后的细胞接种至12孔板？决定于处理因素起作用的时间；

4. 为何划线时细胞必须长满？细胞可能先其他地方迁移，不向划线处迁移；

5. 细胞接种至12孔板是否继续进行细胞干预？决定于处理因素起作用的时间；