细胞划痕-侵袭-步骤

划痕实验
1）先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。

每孔至少穿过5条线。

2）在孔中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。

3）第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。

4）用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

5）放入37℃ 5%CO2培养箱培养。

按0、24或48小时取样，拍照。

侵袭实验（Matrigel-TRANSWELL）
1）常规培养细胞；
2）Matrigel 4℃过夜解冻，用无血清预冷的DEME 按1:8 的比例稀释Matrigel；
3）将80ul稀释过的Matrigel 加入transwell小室，37℃孵育4h 使其成凝胶状；
4）0.25%胰酶-EDTA 消化细胞，用不含血清的培养液DEME 重悬细胞，使其浓度为6×105/m1；
5）用预温的无血清培养基轻轻洗涤已经凝固的Matrigel，并在Matrigel或上层小室上加入100ul细胞悬液；
6）下室加入700ul 含有10%胎牛血清的培养液DEME；
7）将transwell小室放入CO2细胞培养箱，37℃，5%CO2，孵育48h；8）取出小室，吸弃上室培养液，用棉签擦净微孔滤膜上室面未侵袭的细胞及Matrigel 胶，PBS 洗涤3 次；
9）4%多聚甲醛固定15 分钟，1% 结晶紫染色30 分钟，PBS 洗涤3 次；10）光镜下随机选择6 个视野进行计数，取平均值。